梅毒血清检测医学论文

2022-04-18

[摘要]目的探讨rTpN15-17-47-ELISA、RPR和TPPA三种用于梅毒血清抗体检测方法的敏感性和特异性。方法三种方法分别检测50份无梅毒病史健康人血清、11例类风湿关节炎(RA)、5例肾病综合征(NS)及122例确诊梅毒患者血清标本中梅毒抗体,对各方法的检测结果进行比较。下面小编整理了一些《梅毒血清检测医学论文(精选3篇)》,希望对大家有所帮助。

梅毒血清检测医学论文 篇1:

梅毒血清固定患者外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平变化及意义

【摘要】 目的:探究梅毒血清固定患者外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平变化及意义。方法:选取2016年8月-2019年9月本院收治的梅毒血清固定患者38例为固定组,梅毒治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验转阴患者27例为转阴组,以及进行体检健康者33例为健康对照组。采用流式细胞仪双标法检测三组外周趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平,采用双抗体及夹心ELISA法检测三组IL-12、IL-10水平,觀察分析三组外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平的变化及意义。结果:固定组外周血CCR3表达明显高于转阴组与健康对照组(F=255.441,P<0.05),而CCR5、CXCR3表达均低于转阴组与健康对照组(F=70.674、218.128,P<0.05);转阴组与健康对照组外周血细胞CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3比较,差异均无统计学意义(P>0.05);固定组IL-10水平明显高于转阴组与健康对照组(F=48.205,P<0.05),IL-12比转阴组与健康对照组低,但差异无统计学意义(F=1.173,P>0.05);ROC曲线显示,外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平对梅毒血清固定的AUC依次为0.838、0.797、0.592、0.908、0.503、0.660。结论:外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平对梅毒血清固定有着一定的诊断价值,对梅毒血清固定患者的病情发展起着很重要的作用。

【关键词】 梅毒 血清固定 外周血 趋化因子受体 细胞免疫 细胞因子

[

[Key words] Syphilis Serum fixation Peripheral blood Chemokine receptor Cellular immunity Cytokine

First-author’s address: Shenzhen Maternity & Child Healthcare Hospital Affiliated to Southern Medical University, Shenzhen 518028, China

doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2020.24.009

梅毒是由梅毒螺旋体所引起的一种慢性传播疾病,其主要传播方式是通过性接触及血液传播[1-2]。而梅毒血清固定还可称为血清抵抗,指的是梅毒患者进行规则治疗6~9个月后滴度无明显下降或2年后血清反应仍然没有转阴,目前没有有效的治疗方法,这给患者造成巨大的心理压力。近年来研究发现,梅毒血清固定与机体的免疫系统有着较大的关系[3-4]。本研究通过检测健康者、血清试验转阴以及血清固定患者的外周血趋化因子受体和IL-12、IL-10水平,观察梅毒血清固定患者相对于健康者与转阴患者各指标的变化,分析其对梅毒血清固定患者的影响。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年8月-2019年9月本院收治的38例梅毒血清固定患者为固定组,27例梅毒治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验转阴患者为转阴组,以及33例进行体检健康者为健康对照组,本次研究患者均确诊梅毒。梅毒血清固定纳入标准:血清固定前已经经过驱梅治疗未出现症状;快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)持续阳性,早期持续时间≥1年,晚期持续时间≥2年。排除标准:神经梅毒;男性患者(因本院男性患者少,不便收集标本);伴有其他免疫系统疾病、严重系统性疾病;感染其他性病等。本研究征得院医学伦理委员会批准,研究对象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 外周血趋化因子受体检测 FITC标记的CD4单抗以及相应同型对照抗体、PE标记的CCR3单抗、CCR5单抗及相应的同型对照PE-IgG、PE-IgG2A购于美国eBioscience公司;APC标记的CXCR4、CXCR3单抗以及其同型对照APC-IgG2A购于美国Abcam公司;流式细胞仪为美国BD公司产品。流式细胞仪双标法检测外周血CD4+ T细胞表面CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平的表达。采集三组研究对象空腹外周血5 mL,并即刻送检。步骤如下:(1)分别取用5个离心管标记为A、B、C、D、E,其中A管作为阴性对照;(2)B管加入FITC-CD4单抗(0.5 μg)+PE-CCR3单抗(0.5 μg);(3)C管加入FITC-CD4单抗(0.5 μg)+PE-CCR5单抗(0.5 μg);(4)D管加入FITC-CD4单抗(0.5 μg)+APC-CXCR4单抗(0.5 μg);(5)E管加入FITC-CD4单抗(0.5 μg)+APC-CXCR3单抗(0.5 μg);(6)各管分别加入100 μL的新鲜抗凝全血,混匀,经过避光孵育、裂解、离心、弃上清液后,各管加入1%多聚甲醛溶液150 μL固定后,上机检测。统计三组外周血CD4+T细胞CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3的表达率。

1.2.2 血清IL-12、IL-10水平检测 使用双抗体夹心ELISA法检测三组血清IL-12、IL-10水平。步骤如下:(1)将标准品IL-12稀释成800、400、200、100、50、25、0 pg/mL(标本用标本稀释液1︰1稀释);(2)将不同浓度标准品及标本(50 μL/孔)分别加入抗人IL-12单抗包被的相应孔中,封板胶纸封住反应孔,放置在微量震荡器上震荡、37 ℃ 孵育60 min(洗涤液洗板3次并用吸水纸拍干);(3)每孔加入80 μL的链霉亲和素-HRP,胶纸封住反应孔,室温震荡、37 ℃孵育30 min(洗板3次);(4)每孔同时加入底物A、B各50 μL,小心轻振荡使其混匀,37 ℃温育10 min(避免光照);(5)当取出酶标板后,立即快速加入50 μL的终止液,之后应该马上对其测定结果。在450 nm波长处测定各孔的OD值。以標准品的OD值,对其绘制标准曲线,依据标本的OD值在曲线上找出其浓度。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析,计量资料用(x±s)表示,三组比较采用单因素方差分析,多重对比采用LSD-t检验;计数资料以率(%)表示,比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料比较 固定组38例,均为女性;年龄20~52岁,平均(31.89±7.12)岁;梅毒程度:Ⅰ期8例,Ⅱ期30例;梅毒血清反应素试验滴度1︰1患者8例,1︰2患者13例,1︰4患者16例,1︰8患者1例。转阴组27例,均为女性;年龄21~50岁,平均(32.36±6.47)岁。健康对照组33例,均为女性;年龄22~55岁,平均(33.12±6.23)岁。三组一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

2.2 三组外周血趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3表达率比较 固定组外周血CCR3表达比转阴组与健康对照组高,而CCR5、CXCR3表达均低于转阴组与健康对照组(P<0.05);三组外周血CXCR4表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);转阴组与对照组外周血细胞CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3 三组IL-12、IL-10水平比较 固定组IL-10水平比转阴组与健康对照组高(P<0.05),IL-12比转阴组与健康对照组低,但差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

2.4 外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平对梅毒血清固定的诊断价值 ROC曲线分析显示,外周血趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3以及IL-12、IL-10水平对梅毒血清固定的AUC依次为0.838、0.797、0.592、0.908、0.503、0.660,部分诊断准确性一定,见图1、2和表3。

3 讨论

梅毒是临床中常见的一种性传播疾病,近年来在我国的发病率大幅度升高。临床中,一些梅毒患者在接受规范的驱梅治疗后,检验外周血快速血浆反应素环状卡片实验(RPR),发现还是一直呈现出阳性,导致出现血清固定的病症[5-6]。而今梅毒血清固定的现象已经非常普遍,占梅毒患者的较大一部分比例[7-8]。梅毒血清固定对患者来说危害是非常大的,相关研究指出,血清固定会造成患者的内脏器官、神经系统等受到不同程度的损伤,还会传播给下一代,甚至会导致胎儿在围生期死亡等危险情况出现[9-10]。许多研究已指出,梅毒血清固定与机体的细胞免疫功能有着密切的关系[11-13]。

趋化因子是一类在淋巴细胞募集中具有非常重要作用的蛋白质超家族,趋化因子受体则是一类介导趋化因子与G蛋白相偶联的受体[14],其表达是趋化因子发挥作用的一个比较关键的决定因素。趋化因子及其受体能够精确的调节免疫系统的各种反应,在机体的生理病理过程中起着很重要的作用[15-16]。此次研究结果发现,固定组与转阴组及健康对照组比较,外周血趋化因子受体CCR3水平显著增高(P<0.05),而CCR5、CXCR3水平均显著降低(P<0.05);转阴组外周血趋化因子受体与健康对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。表明机体的正常免疫功能对于梅毒血清反应素试验转阴来说,是一个比较重要的条件。机体免疫功能低下,会造成对梅毒螺旋体免疫应答异常,导致部分梅毒螺旋体避过机体的细胞免疫,不能及时清除所有的梅毒螺旋体,从而感染出现血清固定[17-18]。

正常情况下健康者身体中,血清细胞因子IL-12、IL-10是处于一个相对比较动态平衡的状态,它们能对人体细胞免疫系统的稳定进行调节与维持。但当患者出现梅毒血清固定后,使得IL-12、IL-10水平发生变化,造成免疫系统的稳定性发生改变[19]。此次研究中,三组IL-10水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),且梅毒血清固定组IL-10水平显著高于转阴组与健康对照组。此研究结果与关杨等[20]研究一致。而三组IL-12水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。由此可见,梅毒血清固定使机体IL-10水平上升,进而抑制T细胞功能并阻碍Th1介导的细胞免疫应答,从而使得机体中的保护性清除TP的细胞免疫功能降低,从而导致免疫失去平衡。同时当梅毒患者接受正规驱梅治疗后,机体内梅毒螺旋体得到清除,细胞免疫功能就能慢慢地恢复到正常水平。

本研究通过外周血趋化因子受体、IL-12、IL-10水平的ROC曲线,了解各指标对梅毒血清固定的诊断价值,结果显示趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3以及IL-10水平在梅毒患者机体中起着重要的作用。在临床中对梅毒患者的治疗,在原有的常规抗生素驱梅治疗,还需要配合一些免疫调节剂来增强机体的免疫功能,降低梅毒血清固定的发生率。由于此次研究对象数量不多,研究结果可能会有一定的不足,故今后还有待进一步增加研究对象深入研究分析。

参考文献

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(收稿日期:2020-01-08) (本文编辑:程旭然)

作者:骆冬兰

梅毒血清检测医学论文 篇2:

不同梅毒血清学诊断方法的临床检测与效果评价

[摘要]目的 探讨rTpN15-17-47-ELISA、RPR和TPPA三种用于梅毒血清抗体检测方法的敏感性和特异性。方法 三种方法分别检测50份无梅毒病史健康人血清、11例类风湿关节炎(RA)、5例肾病综合征(NS)及122例确诊梅毒患者血清标本中梅毒抗体,对各方法的检测结果进行比较。结果 rTpN15-17-47-ELISA对所有健康人血清、RA患者及NS患者血清检测结果均为阴性,对梅毒患者血清标本检测阳性率为97.5%,与TPPA(96.7%)相似(P>0.05),且均高于RPR(80.3%)。结论 本研究中建立的以重组融合蛋白质rTpN15-17-47为抗原的ELISA有望成为高度敏感和特异的梅毒患者血清学筛查方法。

[关键词]梅毒螺旋体;rTpN15-17-47-ELISA;血清学诊断

Clinical Evaluation of Different Serological Methods for Diagnosis of Treponema Pallidum

WU Ying1 HU Yujie2 SUN Aihua2

1.Zeguo Branch of Taizhou Combination of Chinese Traditional and Western Medicine Hospital,Zhejiang Province,Taizhou 317500,China;2.Zhejiang Medical College,Hangzhou 310053,China

[Key words] Treponema pallidum;rTpN15-17-47-ELISA;Serological diagnosis

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)感染引起的主要人类性传播性疾病(STD)之一[1],因临床表现多样容易造成误诊、漏诊。目前梅毒的实验室诊断主要依赖血清学方法,快速血浆反应环卡片试验(RPR)是目前国内最常用的梅毒临床筛选试验,方法简便、快速,用于梅毒初筛,但特异性不强。明胶凝集试验(TPPA)为代表的特异性的梅毒确诊试验,方法敏感、特异,但需以培养的梅毒螺旋体为特异性抗原,梅毒螺旋体培养困难、成本高,使TPPA难以普及成为梅毒筛选试验[2,3]。本研究利用孙爱华教授建立的以重组蛋白rTpN15-17-47为包被抗原的ELISA并检测122份梅毒血清标本,并对方法的敏感性和特异性进行临床评价。

1 材料与方法

1.1 血清标本来源

梅毒患者血清122份(临床已确诊)由浙江省台州地区多家医院提供,收集上述血清标本医院已进行RPR和TPPA检测。11例RA和5例NS无梅毒病史者血清标本、50例无梅毒病史正常体检者血清标本来自浙江省台州市中西医结合医院。上述标本采集时均获得患者或体检者的知情同意。

1.2 ELISAs建立与应用

紫外分光光度法测定重组蛋白rTpN15-17-47(孙爱华教授前期研究结果)浓度。50μg/mL rTpN15-17-47包被96孔板,37℃温育2h后放置冰箱4℃过夜。次日洗涤3次,用8%BSA封闭。根据预试验结果,50份正常对照血清标本1︰800稀释后为一抗。二抗为HRP标记羊抗人IgG(Jackson Immuno Research),显色底物为TMB,测定终止反应后各孔OD450值,计算得正常血清OD450均值和SD值。1︰800稀释的梅毒患者、RA及NS无梅毒病史者血清用我们建立的rTpN15-17-47-ELISA检测,若被检标本OD450值≥阴性对照OD450均值+3SD者为阳性。

1.3 RPR和TPPA检测

按试剂盒说明书对上述梅毒患者血清、RA及NS无梅毒病史者血清标本和健康人血清标本进行检测并进行结果判定。

1.4 统计学处理

采用STATA8.0统计学软件中的χ2检验,对不同检测方法检测阳性率进行比较,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同方法检测梅毒患者血清阳性率

检测上述50份健康人血清标本的OD450均值和SD值分别为0.25和0.04,故阳性判断参考值为OD450值≥0.37。根据上述阳性判断参考值,122例梅毒患者血清标本用rTpN15-17-47-ELISA检测阳性率为97.5%(119/122)。RPR和TPPA对上述血清标本检测阳性率分别为80.3%(98/122)、96.7%(118/122)。见表1。

2.2 不同梅毒血清学检测方法比较

rTpN15-17-47-ELISA检测梅毒血清患者的阳性率为97.5%,与TPPA检测阳性率96.7%比较差异无统计学意义(χ2=0.15,P>0.05),但rTpN15-17-47-ELISA和TPPA检测阳性率均明显著高于RPR阳性率80.3%(χ2=18.37和16.14,P<0.05)。TPPA是目前临床实验室采用的梅毒确诊试验,RPR和rTpN15-17-47-ELISA检测结果与TPPA比较,符合率分别为83.1%和99.2%,未见TPPA阴性而RPR检测结果阳性情况,但另有2份梅毒患者血清标本TPPA阴性而rTpN15-17-47-ELISA结果阳性。见表2。

3 讨论

梅毒血清学试验有非Tp抗原试验和Tp抗原试验两大类,非Tp抗原试验常见的前者如RPR及甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)等,常用于梅毒患者筛查和疗效监测,由于采用心磷脂作抗原、特异性较差,故有RA等少数疾病患者可出现RPR检测假阳性[3]。Tp抗原试验特异性高,但是需制备大量Tp抗原。目前Tp人工培养物主要依赖于Nichols株接种兔睾丸传代和繁殖,产量很低,生产成本高[2]。利用基因工程手段合成重组蛋白具有Tp人工培养物相同的抗原性,不仅缩短获得抗原的时间,且极大降低了生产成本。

TpN15、TpN17、TpN37、TpN44.5和TpN47被认为是最有临床应用前景的梅毒螺旋体外膜蛋白抗原,利用生物工程获得上述外膜蛋白的重组蛋白作包被抗原建立的ELISAs检测血清抗体方法已有不少研究报道,但多为单一外膜蛋白为基础建立的ELISAs,单一重组抗原灵敏度和特异性较低[3,4]。也有少量实验室建立二个或多个外膜蛋白通过多次包被增加方法的敏感性,由于多个抗原需各自表达与提纯不仅增加了制备费用也可能造成更多的误差,不利于方法标准化和推广应用[4-6]。

本研究中,我们梅毒螺旋体主要外膜蛋白TpN15、TpN17和TpN47通过生物工程手段构建的融合抗原TpN15-17-47为包被抗原,建立检测梅毒血清抗体的ELISA检测临床确诊梅毒患者血清标本。由于同时具备三个主要抗原,提高了方法的敏感性,检测结果也表明建立的rTpN15-17-47-ELISA方法检测梅毒血清标本与确诊试验TPPA无显著性差异,显著高于目前临床常用筛选试验RPR,同时建立的融合抗原TpN15-17-47可以保证多个抗原一次表达,能有限降低检测成本。rTpN15-17-47-ELISA有望成为快速、廉价、敏感性和特异性较高的梅毒患者血清学筛查方法。

[参考文献]

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(收稿日期:2011-06-27)

作者:吴颖 胡瑜洁 孙爱华

梅毒血清检测医学论文 篇3:

二种梅毒血清学检测方法比较

【摘要】目的 比较常用的二种梅毒血清学检测方法的阳性率,为临床诊断与治疗提供参考。方法应用梅毒甲苯胺不加热血清实验(TRUST)、酶联免疫吸附实验(ELISA)二种梅毒血清检测方法。对梅毒患者的血清34份和非梅毒患者166份进行检测。结果共检测标本200份,其中TP-ELISA、TRUST阳性率性分别为24%、16%。结论 选用2种方法进行梅毒检测,将减少漏诊、误诊率,在梅毒的确诊、预后及药物疗效方面都有很重要意义。

【关键词】梅毒 TRUST ELISA

血清学检测是诊断梅毒的重要依据之一,不同的检测方法都有特殊的临床价值,实验室如何更好的选用检测方法避免误诊,漏诊等问题是非常必要的,医院利用TRUST、ELISA检测分析梅毒呈阳性的血清样本及正常对照血清,以探讨2种方法对梅毒的辅助诊断价值。

1资料与方法

1.1资料

本资料为开远市人民医院2012-2013年手术和输血前筛查的200份血清标本。

试剂 TRUST试剂为上海荣盛生物药业有限公司产品,TP-ELIST为上海科华生物工程股份有限公司产品。

1.2方法

TRUST、TP-ELIST均按照操作说明书进行操作,并在有效期内使用,使用ELISA检测200例手术和输血前血清标本,检出阳性的标本再用TRUST试剂盒进行重复检测,对每项结果的阳性数与阴性数进行统计得出结论。

2结果

二种方法检测结果比较 200份血清标本中经TP-ELISA、TRUST方法检测梅毒患者血清阳性率分别为24%(48/200)16%(32/200)。本例X2=11.25>3.84,故P<0.05,按a=0.05水准,拒绝H0,接受H1差别有统计学意义,可以认为,两方法检出率不同,结合实际资料可认为酶标法检出率较高

3讨论

梅毒侵入人体后,经过2-3周潜伏期(称第一潜伏期),即发生皮肤损害(典型损害为硬下疳)这是一期梅毒。发生皮肤损害后,机体产生抗体,从兔实验性梅毒的研究证明,梅毒初期的组织学特征是单核细胞侵润,在感染的第6天,即有淋巴细胞浸润,13天达高峰,随之巨噬细胞出现,病灶中浸润的淋巴细胞以T细胞为主,此时,梅毒螺旋体见于硬下疳中的上皮细胞间隙中,以及位于上皮细胞的内陷或吞噬体内,或成纤维细胞、浆细胞、小的毛细血管内皮细胞之间及淋巴管和局部淋巴结中。由于免疫的作用,使梅毒螺旋体迅速地从病灶中消除,在感染的第24天后,免疫荧光检测未发现梅毒螺旋体的存在。螺旋体大部分被杀死,硬下疳自然消失,进入无症状的潜伏期,此即一期潜伏梅毒。潜伏梅毒过去主要用血清试验来检测,

梅毒是由梅毒(苍白螺旋体)引起,在不同感染时期,机体产生的抗体也不同,一期梅毒抗体主要是LgM型,二期梅毒抗体有LgM、LgG型,三期梅毒抗体主要是LgG型。由于梅毒患者在不同分期梅毒抗体出现早晚有差异,故临床实验室应用时检测梅毒患者特异性血清反应素与非特异性抗体,以避免梅毒患者漏诊。TP-ELISA是利用基因重组工程合成梅毒特异性抗原包被在微孔上,检测血清中的梅毒特异性抗体是诊断梅毒螺旋体感染的依据之一,但其检测的是梅毒LgM和LgG的混合抗体,梅毒LgG抗体治愈后相当长的时间内仍然存在较高的阳性率,甚至终生阳性,因此,TP-ELISA阳性只能说明正处于感染期或既往感染,不能作为疗效监测手段。[1]用ELISA方法可用来初筛梅毒,TRUST阳性率较低,不适合筛查。临床应该同时检测非特异性抗体脂质抗原的血清反应素和特异性螺旋体进行确诊。

参考文献

[1]技术监督局,中华人民共和国卫生部.梅毒诊断标准及处理原则[M].北京:标准出版社,1996:1-9.

[2]叶顺章,邵长庚.性病诊疗与预防[M].北京:人民卫生出版社.2002:653-656.

[3]疾病预防制约中心.性传播疾病临床诊疗指南[M].上海:上海科学技术出版社,2007.

[4]黄殷.苄星青霉素治疗早期梅毒的疗效浅析硕士论文[J].热带医学,2008,

作者:梅鲜艳 杨波

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