刍议血清制备方法对常规生化检测的影响

血液标本的采集和血清的分离在临床生化检测中至关重要, 是保证质量的第一个重要环节。用肝素抗凝血浆作常规生化指标检测, 样品可尽快分离, 减少样品放置所造成的误差, 但血清和血浆成分本身存在差异, 为了探讨分离胶储血管制备的血清, 肝素抗凝血浆同时用于生化指标的检测的可行性, 本文对分离胶储血管制备的血清、肝素抗凝血浆及常法血清的35项生化指标的检测结果作了统计分析, 报道如下。

1 材料与方法

(1) 仪器雅培C8000全自动生化分析仪。

(2) 分离胶储血管由湖南省浏阳市医用仪具厂生产。批号:20080711。

(3) 肝素钠中国江苏万邦生化医药有限公司生产, 每支2mL, 含12sooU肝素钠, 批号0803122。用前稀释1000U/mL。

(4) 血液标本采集选择51名志愿者和临床患者新鲜血液。按常规方法抽取静脉血9mL, 将5mL血液打人分离胶储血管中, 轻轻颠倒2～3次, 立放15min, 以转速为3500～3700r/min离心5min, 便可制得清澈、无混杂物的血清, 直接将分离出血清的储血管在全自动生化分析仪上进行检侧;另将2mL血液打人含有40U肝素钠试管中, 加血后肝素钠浓度为20U/mL, 采血完毕后, 立即分离出血浆;再将2mL血液打人试管中, 不抗凝, 放置37℃水浴30min, 然后离心分离血清。

(5) 试剂、标准品和质控品:检测PA的试剂由浙江伊利康生物技术有限公司提供;检测AFU、TBA、GSP项目试剂和标准品由郎道公司提供;其余项目的检测试剂均采用宁波美康公司试剂和系列定标液。质控品为朗道公司提供的2个水平质控品。

(6) 分析方法各项目均在雅培C8000全自动生化分析仪上检测。首先对测定的实验项目按质量控制程序进行日常校准, 并采用2个不同浓度水平质控品对各项目进行检测, 其批内CV<1.05%。检测项目包括:Na+、K+、Cl-、CO2CP、Ca2+、Mg2+、P3+、GLU、TG、CHOL、H D L-C、L D L-C、A P O A l、A P O B、B U N、C R E、U A、A L T、A S T、AKP、GGT、L D H、C K、C K-M B、TBIL、DBIL、T P、ALB、P A、T B A、CHE、F e、GSP、AFU、AMY共3 5项生化指标。

(7) 数据处理常规35项生化指标的检测结果分为3组:常法血清组、分离胶制血清组和肝素抗凝血浆组。各组之间结果比较采用多因素方差分析。再用Dunnett-t检验比较分析分离胶制血清组与常法血清组, 肝素抗凝血浆与常法血清组的结果。

2 结果

(1) 采用多因素方差分析比较各组之间生化指标测定结果。结果, 见表1。结果表明:3种不同方法制备的血清 (浆) 之间的各生化指标有28项差异无统计学意义, 有统计学意义的有K+、CO2CP、Ca 2+、GLU、LDH、T P、AFU7项生化指标结果。

(2) 用Dunnett-t检验比较分析分离胶储血管制血清, 肝素抗凝血浆分别与常法血清间的这7项生化指标结果。表1结果表明, K+:分离胶制血清高于常法血清;血浆低于常法血清。CO2CP:分离胶制血清高于常法血清;血浆高于常法血清。Ca2+:分离胶制血清低于常法血清;血浆与常法血清间差异无统计学意义。GLU:分离胶制血清高于常法血清;血浆高于常法血清。LDH:分离胶制血清与常法血清差异无统计学意义, 血浆低于常法血清。TP:分离胶制血清低于常法血清, 血浆与常法血清差异无统计学意义。AFU:分离胶制血清与常法血清差异无统计学意义;血浆与常法血清差异有统计学意义, 肝素抗凝血浆会造成AFU检测结果极度增高, 不能用肝素抗凝血浆检测AFU。

3 讨论

(1) 分离胶储血管内的分离胶主要由硅橡胶, 大分子碳氢化合物, 疏水胶等组成, 其密度在1.045～1.050之间, 血清密度约1.025～1.030, 血细胞密度约1.060～1.080, 在离心力的作用下, 分离胶将血清与血细胞隔开。分离的标本分为3层, 从上至下依次为血清层, 分离胶层和血细胞层。分离胶储血管中含有速凝剂, 能有效地促使血液快速凝固。抽血完毕后, 将储血管轻轻颠倒2～3次, 立放15min, 再以3500～3700r/min的转速离心, 便可得到无蛋白凝块或凝丝, 清沏的血清。用分离胶储血管分离出的血清样本不需吸出血清至样本杯, 直接将储血管放置于全自动生化分析仪上测定。本文观察到的分离胶制血清的C02CP高于常法血清, 其原因可能是由于将血液打人分离胶储血管后要立放15min离心制得血清, 常法血清37℃水浴30min才离心制备, 血清中C02CP随着标本存放时间延长而逐渐万降, 血清中C02逸散而使结果降低。分离胶制血清的GLU稍高于常法血清, 这是由于血清在室温或37℃水浴保存时间较长, GLU被细胞所利用。分离胶制血清K+高于常法血清, 分离胶制血清中的Ca2+、TP低于常法血清, 其原因有待进一步研究。

(, n=21)

注:t1分离胶制血清与常法血清比较, t2血浆与常法血清比较:△P<0.05有统计学意义, △△P<0.01有统计学意义

(2) 由于肝素抗凝血浆在采血完毕后, 就可立即离心制取, 可提高生化检验速度。且用血量较少, 只要满足临床上抗凝时的常用量为10IU抗凝0.5～1.0mL的全血便可。对于抽血困难或一天作多次生化指标检测的患者, 有时也采用肝素抗凝血浆进行生化指标检测。本实验室通常采用肝素钠作为抗凝剂, 由于血清和血浆成分的本身存在差异, 它不仅影响电解质结果, 而且影响某些项目的准确性, 甚至不能用于检测AFU。本文观察到的血浆的K+、LDH低于常法血清的K+、LDH, 这是由于常法分离血清在凝血和离心过程中, 血细胞受到挤压变形, 血细胞中高浓度K+、LDH不断地释放到血清所致。血浆中CO2CP稍高于常法血清, 是由于血浆是立即分离后进行检测的, 而常法血清需水浴30min, 血清中溶解的二氧化碳和碳酸盐不断释放出CO2, 使得常法血清的CO2CP低于血浆。血浆中的GLU稍高于常法血清, 也是由于常法制备血清过程中, 血细胞不断地从血清中摄取葡萄糖加以利用, 使得常法血清的GLU稍低于血浆。本文还观察到AFU不能用肝素抗凝血浆进行生化检测。这是由于肝素带有大量负电荷, 呈强酸性, 而检测AFU所用的试剂中含有碱性缓冲液仁, 肝素与检测AFU所用试剂形成不溶于水的盐类化合物, 反应液沉浊, 吸光度升高, 造成血浆AFU极度升高。

(3) 由于常规生化分析普遍采用的参考值大部分来源于常规血清, 虽然常规血清不一定是可靠的参考体系。临床实验室在同时采用分离胶储血管制备的血清及肝素抗凝血浆作常规生化指标检测等, 有必要对不同方法制备血清 (浆) 进行各项生化指标的对比实验, 只有通过对检测结果的比较分析才能判断它是否适合于临床检验工作质量要求, 从而保证检验结果的准确性和可靠性。

摘要：目的 观察不同方法制备的血清 (浆) 对常规生化指标检测结果的影响。方法 在全自动生化分析仪上, 对分离胶储血管分离的血清, 肝素抗凝血浆的35项常规生化指标进行测定, 并对检测结果与常规分离的血清进行比较和分析。结果 分离胶储血管制备的血清, 肝素抗凝血浆与常法血清的绝大多数生化指标测定结果具有良好的可比性, 肝素抗凝血浆不能用于AFU (a-L岩藻糖昔酶) 的检测。结论 为了保证检验结果的准确性和可靠性, 在用分离胶储血管制备的血清和肝素抗凝血浆进行各项生化指标的检测时, 应对各项生化指标进行比较, 才能判断其是否适合临床检验工作质量要求。

关键词：分离胶制的血清,肝素抗凝血浆,常法血清

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