NF-ΚB和Bcl-2在胃癌组织中的表达及意义

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一。胃癌的发生, 发展是一个多因素, 多基因作用的复杂过程。有关细胞信号转导和调控异常与肿瘤发展关系的研究越来越受到人们的关注, 细胞信号通路的改变可能是导致胃粘膜上皮癌变的关键因素, 可能对于从分子水平认识胃癌的发病机制, 具有重要的价值。NF-ΚB信号通路是目前研究与胃癌发生发展有关的信号转导通路之一, Bcl-2作为细胞凋亡抑制基因是NF-ΚB通路关键的下游靶基因。本文应用免疫组化技术检测NF-ΚB和Bcl-2在胃癌中的表达情况, 探讨2者的关系及在胃癌发生发展中的实际意义。

1 资料与方法

1.1 标本来源

标本选自黑龙江省医院2008年10月至2009年12月间胃癌根治标本63例。其中男35例, 女28例。年龄37~81岁, 平均年龄61.6岁。所有病人术前均未接受化疗或放疗。

1.2 免疫组化染色

应用免疫组化两步法。一抗为兔抗人NF-ΚBP65单克隆抗体 (1∶200) , 鼠抗人Bcl-2单克隆抗体 (1∶200) , 所用试剂均购于福州迈新生物技术有限公司。

1.3 结果判定

每组实验均设有阳性和阴性对照。阳性对照为迈新公司提供的已证实有相应产物表达的切片染色。阴性对照为操作过程中用PBS液代替一抗。

NF-ΚB65和Bcl-2均于细胞浆显色, 细胞呈黄色或棕黄色为阳性细胞。将阳性细胞及总细胞计数, 计算出阳性率。阳性细胞数<10%为阴性, 阳性细胞数≥10%为阳性。

1.4 统计学方法

计数资料的χ2检验分析和双变量直线相关分析。

2 结果

2.1 临床病理学资料

63例胃癌标本按Lauren分型:其中肠型22例, 弥漫型41例;组织学分型:高、中分化25例, 低分化38例;伴有淋巴结转移40例, 无淋巴结转移23例;癌组织浸润浆膜48例, 未浸润浆膜15例。

2.2 NF-ΚB的表达与临床病理特征的关系

NF-ΚB在胃癌中的表达率为42.86%;在不同的发病年龄组、性别以及Lauren分型组间, 差异无显著意义 (P均>0.05) ;而在不同的分化程度、浆膜侵犯及淋巴结转移组内差异有显著意义。NF-ΚB表达率:低分化组 (55.26%) 高于高分化组 (24.0%) ;侵润浆膜组 (50.0%) 高于未侵润浆膜组 (20.0%) ;伴有淋巴结转移组 (52.5%) 高于不伴淋巴结转移组 (26.09%) (P均<0.05) , 见表1。

2.3 Bcl-2的表达与临床病理特征的关系

Bcl-2在胃癌组织中的表达阳性率为53.97%;而且表达与胃癌的Lauren分型、浸润深度及淋巴结转移情况无关, 与癌组织的分化程度有关, 组间差异有显著性 (P<0.05) , 见表2。

2.4 胃癌组织中NF-ΚB的表达与Bcl-2的表达的关系

NF-ΚB与Bcl-2在胃癌中的表达呈正相关 (r=0.56) , 见表3。

3 讨论

NF-ΚB是一种具有多向调节功能的转录因子, 广泛参与许多基因的转录调控。常以p50/p65异源二聚体的形式存留于胞浆, 当受到内毒素、活性氧、细胞因子等作用后, NF-ΚB激活并入核与相应靶基因结合, 调控多种基因的表达, 与肿瘤的发生发展、浸润转移及肿瘤耐药问题密切相关[1]。它的活化已成为白血病、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌等恶性肿瘤的标志[2]。文献报道[3], 其与肿瘤的关系主要是通过上调促细胞存活基因表达、抑制促凋亡因子或持续活化生长信号而促进细胞增殖、逃避凋亡。Wang等[4]首次采用免疫组化法测得人胰腺癌组织中存在NF-ΚBp65的激活。王维等[5~6]应用免疫组化方法检测了41例胃癌和25例相应非癌组织中NF-ΚB的表达, 显示正常胃粘膜、肠型化生、不典型增生及胃癌组织中, 阳性率渐次升高, 并且在低分化、进展期、有淋巴结转移及浸润至浆膜的胃癌组织中, 增高尤其明显。本组实验中NF-ΚB在胃癌中的表达率为42.86%;在不同的分化程度、浆膜侵犯及淋巴结转移组内差异有显著意义。NF-ΚB表达率:低分化组 (55.26%) 高于高分化组 (24.0%) ;侵润浆膜组 (50.0%) 高于未侵润浆膜组 (20.0%) ;伴有淋巴结转移组 (52.5%) 高于不伴淋巴结转移组 (26.09%) (P均<0.05) 。说明NF-ΚB在胃癌细胞和组织中表达激活与胃癌的发展、转移密切相关, 并在某种程度上决定着患者预后。

Bcl-2是一种凋亡抑制基因, 它通过抑制细胞凋亡而延长细胞寿命, 从而增加了肿瘤发生的机会并促进肿瘤的发展[7]。许多研究表明, Bcl-2的高表达与胃癌的发生密切相关。本组研究显示, Bcl-2在胃癌组织中的表达阳性率为53.97%;而且表达与胃癌的Lauren分型、浸润深度及淋巴结转移情况无关, 与癌组织的分化程度有关, 组间差异有显著性 (P<0.05) 。提示, Bcl-2基因表达可能与胃癌发生的前期过程有关, 与肿瘤进展无关。

本次研究显示:NF-KB与Bcl-2的阳性表达呈正相关 (r=0.56, P<0.05) 。已经证实Bcl-2启动因子上存在着NF-KB特异性结合为点, 被认为是NF-KB下游的一个重要靶基因[8~9], 且在Bcl-2家族中抗凋亡的Bcl-2和Bcl-xl启动区有KB序列, 而促凋亡成员没有, 肿瘤细胞内高活性NF-KB只促进抗凋亡成员的表达, 打破Bcl-2家族成员形成的凋亡调控平衡, 从而抑制肿瘤细胞的凋亡。另有试验阻断NF-KB信号通路并下调NF-KB下游抗凋亡蛋白Bcl-2的表达, 可使细胞停滞于G1期, 抑制癌细胞增殖, 促进细胞凋亡。IKBa是NF-KB的抑制蛋白在维持活化的NF-KB信号通路中起着不可替代的作用, 而Bcl-2可以通过促进IKBa的降解来活化NF-KB信号转导途径从而发挥抗凋亡作用[10]。以上充分验证了NF-KB和Bcl-2在胃癌中的表达及具有相关性的可能性, 进一步说明了NF-KB有可能通过参与细胞凋亡而在胃癌的发生发展过程中起重要作用。

很多研究表明NF-KB在正常细胞或癌前阶段中的作用与其在恶性转化中的作用明显不同, 在癌症早期NF-KB不仅不会发挥促癌作用, 还可以抑制肿瘤的发生, 但是当肿瘤细胞积累了更多的突变, 是抑癌基因失去作用, NF-KB的作用就会发生根本性的变化, 它会强烈诱导大量促进肿瘤发生发展和转移的基因表达。因此胃上皮细胞中过量表达的Bcl-2会通过抑制细胞凋亡而使过多突变的细胞积累下来, 从而在激活和促进NF-KB信号通路过程中起作用。

可以推测在肿瘤向恶性转化的过程中NF-KB和Bcl-2都共同发挥了作用, 造成组织细胞的增值和凋亡失衡, 恶性肿瘤细胞逃避调亡而迅速增大。因此, 如果能利用基因方法抑制NF-KB的活性, 可能会对胃癌的治疗开辟新的途径。

摘要：目的 探讨NF-ΚB和Bcl-2在胃癌组织中的表达及意义。方法 应用免疫组化二步法对63例胃癌组织中NF-ΚB和Bcl-2的表达情况进行检测。结果 NF-ΚB的表达与胃癌的分化程度、浸润深度及是否有淋巴结转移有关, 而与肿瘤的组织学分型无关。胃癌组织中NF-ΚB和Bcl-2的表达正相关。结论 NF-ΚB有可能通过参与细胞凋亡而在胃癌的发生发展过程中起重要作用;NF-ΚB在胃癌中的阳性表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及浸润深度有关。如果能用基因方法抑制NF-ΚB的活性, 可能为胃癌的治疗开辟新的途径。

关键词：胃癌,NF-ΚB,Bcl-2

参考文献

[1] Baldwin ASJr.Series introduction:the transcription factor NF-kappaBand human disease[J].J Clin Invest, 2001, 107 (1) :3～6.

[2] 钟霞.NF-κB的活化与肿瘤的研究进展[J].医学理论与实践, 2001, 14 (11) :1102～1104.

[3] 於亮亮, 于皆平, 冉宗学.核因子与大肠肿瘤细胞凋亡及增生的关系[J].世界华人消化杂志, 2002, 10 (3) :309～312.

[4] Wang W, Abbruzzese JL, Evans DB, et al.The nuclear factor-kappa B RelA transcription factor is constitutively activated in human pancreatic adenocarcinoma cells[J].Clin Cancer Res, 1999, 5 (1) :119～127.

[5] 王维, 罗和生, 余保平.人胃癌及癌前病变中NF-kappaB和c-myc蛋白的表达与意义[J].肿瘤防治研究, 2002, 29 (4) :285～287.

[6] 王维, 罗和生, 余保平.胃癌及癌前病变中核因子-kappaB和端粒酶逆转录酶的表达与意义[J].中国癌症杂志, 2002, 12 (4) :289～292.

[7] Folkman J.Angiogenesis and apop tosis[J].Semin Cancer Biol, 2003, 13 (2) :159.

[8] Chiao PJ, Na R, Niu J, et al.Role of Rel/NF-kappaB transcription factors in apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells[J].Cancer, 2005;95 (8) :1696～1705.

[9] Ricca A, Biroccio A, Del Buralo.Bcl-2over-expression enhance NF-κB activity and induces mmp-9transcription in human MCF7 (ADR) breast-cancer cells[J].Int J Cancer, 2000, 86 (2) :188～196.

[10] Ghosh S, Karin M.Missing pieces in the NF-kappaB puzzle[J].Cell, 2002, 109 (Suppl) :81～96.