p21和p16基因在早期食管癌中的表达

我国是食管癌的高发国, 由于患者到医院就诊时大多已经是中晚期, 治疗效果较差, 如果能够早期诊断、早期治疗, 预后将可大幅改善。而食管癌癌变过程中具体有哪些基因的变化, 结果尚不明确。本实验拟通过对早期食管癌及异型增生组织中p21和p16表达的检测, 探讨二者在食管癌发生中的作用及其相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

19例食管早期癌、20例异型增生以及10例正常食管黏膜标本均为河南省医学科学研究所2001~2004年对林州市食管癌高危人群普查内镜活检标本。其中男性25例, 女性24例。组织学类型:早期癌均为鳞癌。所有标本经10%甲醛固定, 石蜡包埋切片;抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中杉公司。

1.2 方法

免疫组织化学S-P法:切片常规脱蜡水化, 高压抗原热修复, 其余步骤按试剂说明书上进行。p21的抗体稀释度为1:100, p16的抗体稀释度为1:125, 用已知阳性切片作为阳性对照, 用PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 结果判定

细胞核或细胞浆内见均匀一致的棕黄色颗粒为阳性, 根据阳性细胞的数量进行结果判定:无阳性细胞为阴性 (-) , 阳性细胞数<25%为弱阳性 (+) , 阳性细胞数在25%~75%之间为阳性 (++) , 阳性细胞数>75%为强阳性 (+++) 。

1.4 统计学处理

采用Fisher’s精确概率检验, 检验水准α=0.05。

2 结果

p21和p16阳性反应主要位于细胞浆。p21在早期癌、异型增生和正常食管黏膜中的阳性率分别为63.2% (12/19) , 80% (16/20) , 100% (10/10) , p21在早期癌中与正常食管黏膜相比表达降低 (P<0.05) , 见表1;p16在早期癌、异型增生和正常食管黏膜中的阳性率分别为57.9% (11/19) , 80% (16/20) , 100% (10/10) , 见表2。p21和p16二者各自在早期癌与异型增生、异型增生与正常黏膜之间的差别均无统计学意义 (P>0.0 5) 。

3 讨论

p21基因定位于6p21.3, p21也称为野生型p53的激活片段1 (WAF1) , 其DNA有3个外显子, 编码产物为Mr21000的蛋白质, 称为p21, C末端与PCNA结合, N末端与cyclin E.ckd结合, 发挥细胞周期调控的作用。p21基因是近年来发现的CDKI家族中的重要成员, 在许多肿瘤的发生发展中扮演着抑癌基因的角色[1~2]。p16基因定位于9p21, 它是CDK4/CDK6的抑制因子, 在细胞增殖的调控中, p16蛋白与cyclin D1竞争与CDK4/CDK6的结合, 发挥负性调节作用, 共同完成对细胞增殖周期的调控。在肝癌[3]和食管癌[4]等许多肿瘤中都存在p16表达缺失。

注: (1) 与 (3) 相比P<0.05, (1) 与 (2) 相比P>0.05, (2) 与 (3) 相比P>0.05

注: (1) 与 (3) 相比P<0.05, (1) 与 (2) 相比P>0.05, (2) 与 (3) 相比P>0.05

注:P>0.05

本实验应用免疫组织化学法检测19例食管早期癌、20例异型增生和10例正常食管黏膜标本中p21和p16的表达情况, 结果显示p21和p16基因在早期癌中的表达均低于正常食管黏膜 (P<0.05) 。在异型增生中就存在这两个基因表达的异常, 但是与正常组织相比差别没有统计学意义, 可能是因为异型增生还不是质变。以上这些都提示p21和p16基因的异常在食管癌的早期发生中可能起重要作用, 是食管癌发生中的早期事件。p21和p16在早期癌中表达的相关性分析, 未发现两基因的表达之间存在显著性相关。总之, 两者都参与食管癌的发生过程, 而两者具体如何参与食管癌的发生以及两者是否存在相互作用, 还有待于进一步深入研究。

摘要：目的 探讨p21和p16基因在食管癌发生中的作用及其相关性。方法 应用免疫组织化学S-P法检测p21和p16基因在19例食管早期癌、20例异型增生以及10例正常食管黏膜标本中的表达。结果 p21和p16基因在早期癌中的表达均低于正常食管黏膜 (P<0.05) 。结论 p21和p16基因与食管癌的发生有关, 他们的变化是食管癌发生中的早期事件。

关键词：p21p16,食管早期癌,免疫组织化学

参考文献

[1] Qi zL, HuoX, XuXj, et al.Relationship between HPV16/18E6 and 53, 21WAF1, MDM2, Ki67and cyclin D1expression in esophagealsquamous cell carcinoma:comparative study by using tissue microarray technology[J].Exp Oncol, 2006, 28 (3) :235～240.

[2] Guo W, Cui YJ, Fang SM, et al.Association of polymorphisms of p21cip1and p27kip1genes with susceptibilities of esophageal squamous cell carcinoma and gastric cardiac adenocarcinoma[J].2006, 25 (2) :194～199.

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[4] Nakamura T, Ide H, Eguchi R, et al.Concomitant analysis of p16/INK4, cyclin D1, and retinoblastoma protein expression in esoph-ageal squamous cell carcinoma[J].Hepatogastroenterology, 2003, 50 (53) :1321～1326.