Fas-L在宫颈癌中的表达及其临床意义

宫颈癌的发生率居妇科恶性肿瘤第一位, 在发展中国家尤为多见, 近年来, 其发病呈年轻化趋势, 目前认为增殖和凋亡之间平衡失调是宫颈癌发生的重要病因。凋亡配体Fas-L可通过与其细胞表面受体Fas结合, 诱导细胞凋亡。本研究旨在了解凋亡配体Fas-L与宫颈肿瘤的发生发展之间存在的关联, 并进一步探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集广东省东莞寮步医院及广州医学院附院2008~2009年间妇科门诊宫颈活检及住院手术患者的宫颈组织存档蜡块68例所有患者术前均未接受放化疗及免疫治疗, 切除的组织标本均经HE染色且病理专家证实。

宫颈癌组:共40例, 患者年龄32~78岁, 平均52.3岁。根据1988年国际妇科病理协会 (ISGP) 肿瘤病理分级方案和2000年国际妇产科联盟 (FIGO) 修订的临床分期方案进行病理分级和临床分期, 其中鳞癌32例、腺癌8例。组织学分级:G1级10例、G2级22例、G3级8例。临床分期:I、II期27例, III、IV期13例;34例宫颈癌术中行淋巴结活检, 阳性12例, 阴性22例。

宫颈上皮内瘤变组:共18例, 患者年龄27~57岁, 平均年龄44.1岁。

对照组正常宫颈组织:12例, 年龄29~66岁, 平均年龄42.5岁。

1.2 试剂与方法

兔抗人Fas-L多克隆抗体及免疫组化S-P试剂盒均购于北京中杉生物工程有限公司。试剂盒包括: (1) 正常动物非免疫血清; (2) 内源性过氧化物酶阻断剂; (3) 生物素标记的鼠抗兔Ig G; (4) 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶。实验步骤参照说明书进行。

1.3 结果判定

Fas-L阳性表达为分布于细胞质的棕黄色粗颗粒物质;组织学定位 (基底层, 中间层, 表层) 。Fas-L采用Gatalica等[1]的半定量方法, 将染色强度 (I) 分为4级:无染色为0分, 浅黄色1分, 棕黄色2分, 棕褐色3分;在高倍镜下 (400倍) 随机计数5个视野, 计算阳性细胞占同类细胞的比例 (P) :未见阳性细胞为0分, 阳性表达细胞数25%以下为1分, 26%~50%为2分, 50%~75%为3分, >75%为4分;计算宫颈细胞组织学评分 (H) :H=I×P, 0分为阴性 (-) , 1~4分为弱阳性 (+) , 5~8分为中度阳性 (++) , 9~12分为强阳性 (+++) 。

1.4 统计学方法

两样本或多样本间比较用χ2检验, 当1

2 结果

2.1 3种组织中Fas-L的表达

Fas-L阳性表达为细胞质出现的棕黄色粗颗粒物质。Fas-L在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织 (CIN) 和宫颈癌组织中的阳性表达率分别为33.33%、55.56%和80%, 其阳性率在不同组间有显著性差异 (P<0.01) , 且呈正相关关系 (Rs=1, P<0.05) , 见表1。

2.2 3种组织中Fas-L的染色模式

Fas-L在正常宫颈及CIN组织中, 主要见于基底层和中间层细胞, Fas-L染色阳性标本中, 遍布整个上皮层的染色情况随着病变加重而逐渐增多;Fas-L染色遍及整个上皮层的染色模式在正常宫颈组织和轻度CIN病变组织中无法见到;宫颈癌组织中, FasL阳性染色出现在中间层细胞的几率明显高于正常宫颈组织及CIN组织 (P<0.01) , 见表2。

注:c2检验:与正常组比较*P<0.05, **P<0.01, 与CIN组比较**P>0.05

注:正常宫颈组织、CIN和宫颈癌组织Fas-L表达的χ2检验, *P<0.01

2.3 宫颈癌组织中Fas-L的表达与临床及病理因素之间的关系

在宫颈癌组织中Fas-L阳性表达率随着组织学分级的升高而升高, 呈正相关关系 (Rs=1, P<0.05) , 且G1、G2、G3间差异有显著性 (P<0.01) ;有淋巴结转移者Fas-L阳性表达率明显高于无淋巴结转移者 (P<0.05) ;Fas-L阳性表达率与患者年龄、临床分期、组织类型无关, 见表3。

3 讨论

人类乳头瘤病毒 (human papilloma virus, HPV) 感染是导致宫颈细胞内瘤变和侵袭性宫颈癌的重要因素, HPV亚型产生的蛋白E6和E7可能通过分别抑制肿瘤抑制蛋白P53和PRB的活性, 从而阻碍正常的细胞循环, 即P53依赖性的细胞凋亡, 因此导致正常细胞周期失去控制, 细胞增殖与凋亡失去平衡, 最终发生宫颈上皮细胞癌变[2]。目前认为增殖和凋亡之间平衡失调是宫颈癌发生的重要致病因素, Fas-L属于凋亡配体, 当与其细胞表面的同源受体Fas结合, 即可诱导细胞凋亡。

凋亡配体的表达与细胞凋亡和增殖之间尚缺乏明确的联系, 本研究观察到在宫颈癌变过程中Fas-L表达模式的变化:在宫颈病变的不同时期 (正常宫颈、CIN、宫颈癌) Fas-L的表达都有着明显的变化, 随着宫颈上皮组织恶化程度的升级, Fas-L的阳性表达率也随之增加, 染色浓度也随之增强, 这提示了死亡配体Fas-L在宫颈上皮恶变过程中担任着重要的角色。

Hahne[3]等应用免疫组织化学方法进行研究发现, 所有黑色素瘤组织中, Fas-L均呈阳性, Fas染色则均呈阴性, 而浸润的淋巴细胞却大多呈Fas阳性;应用TUNEL法对凋亡细胞进行染色发现, 凋亡细胞均为浸润的淋巴细胞;这一现象在不同组织类型中被加以证实, 因此Fas-L被认为是凋亡受体途径诱导免疫细胞凋亡的关键死亡诱导因素。增殖细胞主要见于子宫颈上皮中间层, 本研究发现, Fas-L在CIN I、CIN II病变中, 主要表达于中间层及基底层细胞, Fas-L在此层表达, 可以快速诱导侵入此层的Fas阳性T细胞和粒细胞凋亡, 以达到保护的目的;Fas-L在CIN III和宫颈癌组织中表达增高, 则可通过大量杀伤淋巴细胞, 使恶变细胞得以逃避免疫监视。

Fas-L在激活的T细胞和NK细胞中表达, 并通过激活Fas受体杀伤表达此受体的病毒感染细胞, 一旦HPV感染的肿瘤细胞表面Fas表达下调, 他们便可逃避免疫防御, 反之, 肿瘤细胞表面Fas-L表达可导致Fas敏感的入侵淋巴细胞死亡[4]。本研究中, 有淋巴结转移者Fas-L表达率明显高于无淋巴结转移者, 所有表现转移的宫颈腺癌皆表达Fas-L, 其原因可能是高表达Fas-L的肿瘤细胞通过主动表达Fas-L, 对Fas阳性淋巴细胞进行杀伤, 使转移到他处的肿瘤细胞逃脱免疫监视, 同时消弱机体的免疫力, 因而使其更具有侵袭力和转移力。关于宫颈癌Fas-L阳性表达与患者生存时间之间的联系尚未正式公布, 本研究也未发现两者之间存在的关联, 但是有报导指出, 癌组织中FasL高表达的患者与Fas-L低表达的癌症患者相比生存时间明显缩短[5], 认为Fas-L在临床上可作为宫颈癌预后评估指标之一。

摘要：目的 研究凋亡配体Fas-L (Fas ligand) 在宫颈癌中的表达及其与宫颈肿瘤发生发展之间存在的关联。方法 采用免疫组织化学法检测12例正常宫颈上皮组织、18例宫颈上皮内瘤变 (CIN) 组织和40例宫颈癌组织中Fas-L蛋白的表达。结果 宫颈癌组织中, Fas-L染色多见于整个病变全层;在正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中Fas-L的阳性表达呈明显递增趋势 (P<0.01) ;与宫颈癌组织学分级呈正相关关系 (Rs=1, P<0.05) 。结论 Fas-L可能在宫颈癌的发病过程中起到一定的作用。

关键词：宫颈肿瘤,凋亡,Fas-L

参考文献

[1] Gatalica Z, Lele SM, Rampy BA, et al.The expression of Fhit pro-tein is related inversely to disease progression in patients with breast carcinoma[J].Cancer, 2000, 88 (6) :1378～1382.

[2] Parkin DM, Bray F, Ferlay J, et al.Esimating the world cancer burden:Globocan2000[J].Int J Cancer, 2001, 94 (2) :153～155.

[3] Hahne M, Rimokli D, Schroter M, et al.Melanoma cell expressing of Fas (Apo-1/CD95) ligand:implications for tumor immune escape[J].Science, 1996, 274 (5291) :136～31366.

[4] 姜青明, 张徽.Fas/FasL系统与肿瘤[J].医学综述, 2006, 12 (23) :1433～1435.

[5] Reesink-Peters N, Hougardy BM, van den Heuvel FA, et al.Death receptors and ligands in cervical carcinogenesis:an immunohis-tochemical study[J].Gynecol Oncol, 2005, 96 (3) :705～713.