鼻咽癌起病隐匿、早期症状不典型, 且易发生淋巴结转移, 能否早期诊断是决定其预后的关键因素, 目前有关其发生和转移的分子机制尚未完全阐明。MCM2在DNA复制过程及细胞周期中起着重要作用。许多研究显示微染色体维持蛋白 (minichromosome maintenance protein) 表达阳性是细胞具有增殖能力的标志, 细胞已退出增殖周期则不表达, 意味着其已分化成熟或进入了G0期, 这对肿瘤的早期诊断和预测提供了一个新的极好的标记物。我们采用免疫组织化学 (S-P) 法检测75例鼻咽部不同病变组织标本的MCM2蛋白表达情况, 研究细胞增值与鼻咽癌发生、发展的关系, 探讨其在鼻咽癌早期诊断中的价值。
l资料与方法1.1一般资料
选取我院病理科2002~2007年活检石蜡标本共75例。经病理证实为:鼻咽癌60例 (均为鳞状细胞癌) 、鼻咽正常黏膜15例。60例鼻咽癌标本均为未经放化疗的活检标本。男47例、女13例;年龄29~71岁, 平均48.6岁。根据UICC1997年TNM分型分期标准进行临床分期:Ⅰ期12例、Ⅱ期11例、Ⅲ期25例、Ⅳ期12例, 伴有淋巴结转移48例、无淋巴结转移12例。
1.2试剂
浓缩型鼠抗人MCM2单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司, 工作浓度为1∶150;鼠免疫组化二步法试剂盒 (K IT29801) 、DAB显色试剂盒均购自福州迈新公司。
1.3方法
石蜡块4μm厚连续切片, 按鼠免疫组化二步法试剂盒说明书进行免疫组化操作, 抗原修复采用高压加热法, 用已知鼻咽癌阳性切片作阳性对照, 阴性对照采用PBS液代替一抗, 均做HE染色对照。
1.4结果判定
MCM2阳性表达是指细胞核染成棕褐色或棕黄色。并计算MCM2标记指数:选5个背景最清晰、阳性细胞最密集区域 (低倍镜下) , 计算每个区域100个细胞中阳性细胞数 (高倍镜下) , 取5个区域阳性细胞数平均值为标记指数, 进行评级, 0~5%为阴性、6%~25%为I级、26%~50%为Ⅱ级、51%~75%为Ⅲ级、75%~100%为Ⅳ级。
1.5统计分析
统计分析采用SPSS 11.0统计软件包作χ2检验, 检验水准取α=0.05。
2 结果
2.1 MCM2在不同鼻咽部组织中的表达特征
MCM2在正常鼻咽部黏膜中基本不表达, 或仅在黏膜基底层有增殖能力的少数细胞中表达;在鼻咽癌中其表达分布多呈弥散性分布, 失去规律。MCM2蛋白在正常鼻咽部黏膜、鼻咽癌组织中的阳性率分别为13.3% (2/15例) 、81.7% (49/60例) , 鼻咽癌中MCM2的表达明显高于正常鼻咽部组织 (P<0.01) 。
2.2 MCM2表达与鼻咽癌主要临床病理参数间的关系
M CM 2在高、中、低分化鼻咽癌的表达率分别为:5 8.3%、80.0%、95.7%, 在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期的表达率分别为:65.2%、91.9%, 在有、无颈部淋巴结转移患者中的表达率分别为:85.4%、66.7%, 其差异均有显著性 (P<0.05) 。
3 讨论
许多研究证实MCM2是真核细胞DNA复制起始的许可因子, 是启动DNA复制的重要因子, DNA复制完成即从染色体脱离, 这对DNA复制起始的调控十分重要, 保证了染色体在每一个细胞周期只复制1次。而且只有在处于增殖活动周期的细胞中MCM蛋白才表达, 这提示其可作为肿瘤细胞的特殊标记物。我们应用MCM2单克隆抗体检测不同鼻咽部组织标本, 统计分析显示, 鼻咽癌中MCM2的表达明显高于正常鼻咽部组织 (P<0.01) , 低分化的鼻咽癌其表达增强、增多, 标记指数也高于高分化者, 有显著性差异 (P<0.05) , 这提示低分化的鼻咽癌中MCM2量较多, DNA复制起点也多, 细胞着色也就愈深, 故细胞核中MCM2阳性表达强度可反映出细胞DNA复制的活跃程度[1]。这符合肿瘤增殖与分化的一般规律。根据其标记指数及表达特点, 能较好地区分不同分化程度的肿瘤组织和正常组织, 表明MCM2可作为鼻咽癌可靠的肿瘤标记物, 这对鼻咽癌的早期筛选有很大帮助。能更好指导临床上鼻咽癌的早期诊断、监测复发等。
同时, 本结果还提示鼻咽癌各临床分期及有无淋巴结转移间MCM2表达强度亦有明显差异性 (P<0.05) , Ⅲ、Ⅳ期的鼻咽癌的标记指数明显高于Ⅰ、Ⅱ期, 有淋巴结转移的标记指数也明显增高, 可见MCM2与鼻咽癌病程密切相关。随肿瘤分化的降低与临床分期的进展, MCM2表达率升高且标记指数也逐步升高。这表明MCM2标记指数能较好地反映鼻咽癌的临床病理特征和细胞增殖分化水平, 可作为判断鼻咽癌恶性程度的指标, 并能使鼻咽癌组织学分期更客观。
综上所述, 鼻咽癌的发病机制涉及MCM2的异常, 其能较好地反映癌细胞的增殖规律, 可鉴别非癌细胞和癌细胞, 与鼻咽癌的发生及临床进展密切相关。
摘要：目的 探讨微染色体维持蛋白2 (MCM2) 与人鼻咽癌发生和发展的关系。方法 应用免疫组织化学 (S-P) 法检测60例鼻咽癌、15例鼻咽正常黏膜标本中MCM2的表达水平。结果 人鼻咽癌组织中MCM2阳性率为81.67%, 显著高于鼻咽正常黏膜组织13.33% (P<0.01) 。结论 MCM2能很好的反映鼻咽癌细胞的增值状态, 对判断人鼻咽癌的发生和发展及预后具有一定的临床意义。
关键词：鼻咽癌,微染色体维持蛋白2
参考文献
[1] Maiorano D, Lutzmann M, Mechali M.MCM proteins and DNA replication.Current Opinion in Cell[J].Biology, 2006, 18 (2) :130～136.
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