川乌配法半夏急性毒性实验观察

真方白丸子为元代《瑞竹堂方》所裁, 主要药物有川乌头、白附子、半夏、天南星、天麻及全蝎等。主治中风病之半身不遂, 于明代中叶失传。目前该方被发掘出来后即受到学术界的看重, 已成为目前治疗中风急性期中经络的一个主要方剂[1]。但该方中主药川乌头、白附子、半夏等不仅系有毒药物, 且其中还存在传统的中药“十八反”配伍禁忌-川乌反半夏。本实验的目的是观察真方白丸子中的川乌配半夏对小鼠所产生的反应、死亡情况等, 测定川乌配半夏半数致死量 (LD50) ;若其毒性极小, 无法测出LD50, 则测定其在最大允许浓度和最大体积下的最大耐受剂量 (MTD) , 为拟订临床使用安全剂量提供实验依据。现将川乌配半夏对小鼠的急性毒性实验结果报道如下。

1 器材

1.1 药物由泸州市中医医院制剂室提供

按照川乌与法半夏在真方白丸子中的配伍比例, 单独将2味药制成混合粉剂供实验应用, 以下简称川乌配半夏方。

1.2 实验动物

清洁级昆明小鼠, 周龄4周, 体重 (20±2) g。购自泸州医学院实验动物中心。合格证号:川实动证第17号。动物实验在泸州医学院普通级实验室进行, 温度:22～25℃。

2 实验方法与结果

2.1 川乌配半夏方急性毒性预实验

2.1.1 实验目的

找出药物的0%和100%死亡率剂量。

2.1.2 实验动物

小鼠。

2.1.3 实验方法

取10只清洁级昆明种小鼠, 采用灌胃给药法, 按照成人服用剂量作为参考, 通过体表面积计算公式换算出小鼠所需剂量。根据川乌配半夏方能配制的最大浓度和小鼠的最大给药体积 (0.5mL/10g) 给药, 观察小鼠24h内以及7d后死亡情况和毒性反应。

2.1.4 实验结果

(1) 等效剂量。按体表面积换算法, 川乌配半夏方小鼠等效剂量是0.45g/kg。 (2) 24h内和7d内均没有出现小鼠死亡, 因此不能计算0%和100%死亡率剂量。

2.2 川乌配半夏方LD50的测定

由于在预实验中没有出现小鼠死亡情况, 因此未进行LD50的测定。

2.3 川乌配半夏方最大耐受剂量 (Maximum tolerated dose, MTD) 的测定

2.3.1 实验目的

计算小鼠最大耐受剂量。

2.3.2 实验动物

小鼠。

2.3.3 实验方法

根据川乌配半夏方所能配制的最大浓度和小鼠的最大给药体积 (0.5mL/10g) ;将20只昆明种小鼠 (雌雄各半) , 按最大剂量, 最大灌胃浓度在1d内3次灌胃给药, 每次间隔6h, 观察给药后7d内小鼠的反应、死亡情况, 给药后第8天处死小鼠, 观察内脏器官的变化情况, 计算小鼠口服给药的MTD。

2.3.4 实验结果

川乌配半夏方按照22.5g/ (kg·次) -1给药, 连续3次, 所得最大耐受剂量为67.5g/kg (相当于成人150倍剂量) , 给药后7d小鼠精神状态良好、毛色光滑、饮食、粪便正常, 未出现任何毒性反应和小鼠死亡, 第8天处死动物观察内脏各器官无明显改变。

3 实验结果

口服给予川乌配半夏方未能测出LD50;测得川乌配半夏方MTD为67.5g/kg (相当于成人150倍剂量) , 给药后未发现急性毒性反应, 表明川乌配半夏方是安全的。

4 讨论

真方白丸子为治疗中风病的专方, 方中主要药物川乌头等不仅有毒性, 而且川乌与半夏还属于传统“十八反”中的配伍禁忌。但川乌与半夏是否能相配使用, 古今一直存在争议。孙氏对405首半夏与乌头相配的古方进行了分析, 认为传统的“十八反”与临床情况并不一致[2]。目前最新版的药典也未再提“十八反”, 而只是用“不宜”来提示配伍注意事项, 但真的将其配伍应用后, 尤其是在真方白丸子中的配伍应用, 其毒性如何, 只凭临床观察, 没有动物毒理实验支撑, 缺乏足够的说服力。本实验结果表明, 川乌配半夏方给药后7d小鼠精神状态良好、毛色光滑、饮食、粪便正常, 未出现任何毒性反应和小鼠死亡, 第8天处死动物观察内脏各器官无明显改变。说明川乌配半夏方对小鼠未出现严重的毒副反应, 未显示明显的中毒靶器官。测定得川乌配半夏方的MTD为67.5g/kg (相当于成人150倍剂量) , 表明在真方白丸子中川乌配半夏及临床拟用剂量应是安全的。

摘要：目的 观察真方白丸子中的川乌配半夏两药对小鼠的急性毒性作用, 为临床科研选择提供实验依据。方法 测定川乌配半夏方半数致死量 (LD50) ;若其毒性极小, 无法测出LD50, 则测定其在最大允许浓度和最大体积下的最大耐受剂量 (MTD) 。结果 由于在预实验中没有出现小鼠死亡情况, 因此未进行LD50的测定。按照22.5g/ (kg·次) -1给药, 连续3次, 所得MTD为67.5g/kg (相当于成人150倍剂量) , 给药后7d小鼠精神状态良好、毛色光滑、饮食、粪便正常, 未出现任何毒性反应和小鼠死亡, 第8天处死动物观察内脏各器官无明显改变。结论 小鼠灌胃给药川乌配半夏方的MTD是67.5g/kg, 相当于成人150倍剂量, 表明在真方白丸子中川乌配半夏及临床拟用剂量应是安全的。

关键词：川乌,法半夏,急性毒性试验,最大耐受剂量 (MTD)

参考文献

[1] 周仲瑛.新世纪中医内科学[M].北京:中国中医药出版社, 2007 (2) :309.

[2] 孙世发.十八反药物半夏与乌头同方应用的文献理论探讨[J].湖南中医药学报, 1999, 5 (12) :40～41.