急性冠脉综合征患者血中Th17细胞的变化及其意义

急性冠脉综合征 (ACS) 是临床医疗过程当中较为常见的急症。ACS发病特别急, 死亡率很高, 已严重危害人类的健康。目前认为ACS的主要病理基础是动脉粥样基础上斑块突然破裂、糜烂继发血小板聚集形成血栓导致冠状动脉堵塞, 而引起急性的心肌缺血。以不稳定心绞痛 (UA) 与急性心肌梗死 (AMI) 为主要类型。辅助性T细胞 (Th细胞) 是T细胞中特别重要一类细胞亚群, 最新研究显示, 一种新型的CD4+效应T细胞T H17细胞跟动脉粥样硬化的发生密切相关。为研究急性冠脉综合征患者外周血中Th17细胞的表达及临床意义, 20 09年3月—2011年12月, 本研究检测了急性冠脉综合征患者的外周血中Th17细胞, 研究Th17细胞与ACS的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

观察该院的冠心病住院治疗患者70例, 包括不稳定心绞痛组 (UA) 32例, 急性心肌梗死组 (AMI) 21例, 稳定性心绞痛组 (SA) 17例。还有同时期内在我院行健康体健的健康者50例做为对照组。两组一般资料等比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 病例入选标准纳入标准

(1) 患者资料符合ACS的诊断标准; (2) 年龄≥18岁; (3) 在研究前1周内未使用药物治疗者。排除标准: (1) 排除肺栓塞、主动脉夹层等疾病; (2) 排除合并脑卒中、感染性疾病、自身免疫性疾病; (3) 排除严重肝肾功能不全患者; (4) 排除高热以及应用免疫抑制剂或激素者。

1.3 人外周血单个核细胞的分离

住院第二日清晨, 所有入选患者应用肝素抗凝管空腹抽取静脉血5 m L, 然后按照说明分离外周血单个核细 (PBMC) 。

1.4 流式细胞术检测

在R PM I16 4 0培养液 (含有胎牛血清) 中重悬PBMC, 先后加入佛波酯 (50μg/L) 、莫能霉素 (0.67 ml/L) 和离子霉素 (50 0μg/L) , 培养4 h条件为温度37℃, CO2含量50 m l/L, 后使用PB S液冲洗1次, 细胞浓度调整为2×106m L-1。加入CD4-Percp抗体, 孵育30 min温度为4℃;再用PBS液洗1次, 固定/破膜细胞后用1 m L破膜/洗液洗涤2次, 再次重悬, 均匀的分至对照管和检测管, 再加入IL-17-PE和同型对照抗体, 避光条件下孵育30分钟;再用破膜/洗液洗2次, 后流式细胞仪检测。

1.5 统计方法

使用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析, Th17细胞频率以 (±s) 表示, 用单因素方差分析来进行组间比较, 用q检验进行多均数间两两比较。

2 结果

分析T h 17细胞频率结果示, U A和A M I组T h 17细胞频率较S A组和对照组患者显著升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。如表1所示。

注:与对照组、S A组比较, aP<0.05。

3 讨论

ACS起病较急、较严重, 是临床中较为常见的综合征, 主要由心肌急性缺血引起, 包括AMI和UA, 主要病理基础是斑块不稳定而破裂, 导致急性临床事件。最近的研究表明[1,2], ACS患者斑块破裂时T淋巴细胞的激活参与其中, T淋巴细胞释放的细胞因子先引起的内皮损伤然后再直接导致斑块破裂。T淋巴细胞是一个异质性细胞群体, 有许多亚型, 而辅助性T细胞 (Th细胞) 是T细胞中非常重要的一个亚群。特别是可分泌IL-17的Th17细胞亚群, 其分泌的IL-17可促进动脉粥样硬化形成并能引起斑块破裂。该研究通过流式细胞术检测ACS、SA及正常对照组患者T h17细胞比例, 发现不同的冠心病患者T h17细胞所占比例不同, T h17细胞比例在ACS患者的表达明显高于SA及对照组患者。说明Th17的细胞对于斑块的破裂可能有触发作用, 会加重斑块局部的炎症反应, 降低斑块的稳定性, Th17在ACS的发生中起着很重要的作用。究其原因, 还需研究Th17细胞的功能。

Th17细胞主要分泌促炎症因子IL-17, 同时还分泌其他一些细胞因子如IL-6、IL-21、IL-22等[3]。IL-17是促炎症细胞因子, 可促使机体局部组织产生致炎因子, 还可以对炎症反应进行微调, 引起中性粒细胞等致炎细胞的浸润和最终导致组织破坏, 具有强大的致炎性。另外, 多种细胞的增殖分化都有IL-17的参与, 其中参与中性粒细胞的增殖、趋化、分化和成熟, 对树突状细胞的成熟起协同刺激作用, 并能促进T细胞的活化。IL-17刺激内皮细胞、上皮细胞、和成纤维细胞产生粒细胞集落刺激因子、基质金属蛋白酶和前列腺素等, 能够促进人成纤维细胞间黏附分子的生成。并且IL-17与IL-22具有相互协同的作用, 能够相互增强炎症反应而造成局部组织损伤。IL-17可促进AS的形成在动物实验中也得到证实。Hashmi[4]等研究发现, 给Apo E-/-小鼠喂养高脂饮食15周后, 检测其血浆与组织的的IL-17含量, 发现IL-17水平较正常同龄小鼠明显升高, 实验组小鼠主动脉中的Th17细胞所占比例较正常小鼠明显升高。把抗IL-17的中和性抗体给Ap o E-/-小鼠注射一周后, 可以观察到大动脉根部的斑块面积明显减少, 在斑块内的巨噬细胞数目也明显减少。另外, 有研究表明TH17细胞通过释放IL-17细胞因子, 促进平滑肌细胞、巨噬细胞等分泌基质金属蛋白酶, 降解细胞外基质, 促使斑块稳定性降低, 进而导致动脉粥样斑块破裂。目前, 对于Th细胞功能分化的分子机制研究较少, 许多详细的环节具体原理和有待深入研究, 为更好地治疗ACS提供新途径、新思路。

目前认为, 动脉粥样硬化是一种慢性炎症反应过程。本试验更加一步证实ACS的发生、发展与Th17细胞活化有关, 所以系统免疫状态的变化和炎性环境的改变都对斑块的稳定性起着重要的作用。

摘要：目的 研究急性冠脉综合征患者外周血中Th17细胞的表达及临床意义。方法 采用流式细胞术检测稳定性心绞痛 (SA) 17例, 不稳定心绞痛 (UA) 组32例, 急性心肌梗死组 (AMI) 21例, 健康体检者50例外周血中Th17等细胞的表达水平。结果 UA和AMI组患者较SA组和对照组Th17细胞频率显著升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。结论 急性冠脉综合征患者Th17细胞表达水平较高, 检测外周血中Th17含量有助于急冠脉综合征的明确诊断。

关键词：急性冠脉综合征,Th17,炎症

参考文献

[1] Nakajima T, Schulte S, Warrington KJ, et al.T2 cell mediated lysis of endothelial cells in acute coronary syndromes[J].Circulation, 2002, 105 (5) :570-575.

[2] Valgimigli M, Agnoletti L, Curello S, et al.Serum from patients with acute coronary syndromes displays a proapoptotic effect on human endothelial cells:a possiblelink to pan-coronary syndromes[J].Circulation, 2003, 107 (2) :264-270.

[3] Ouyang W, Kolls JK, Zheng Y.The biological functions of Thelper 17 cell effector cytokines in inflammation[J].Immunity, 2008, 28:454-467.

[4] Hashmi S, Zeng Q T.Role of interleukin-17 and interleukin-17-induced Cytokines interleukin-6 and interleukin-8 in unstable coronary artery disease[J].Coron ArteryDis, 2006, 17 (8) :699-706.