氨苄西林钠细菌内毒素检查法的研究

2023-02-21

氨苄西林钠为广谱半合成青霉素, 对溶血性链球菌、肺炎链球菌和不产青霉素酶葡萄球菌具较强抗菌作用, 临床上应用于敏感菌所致的呼吸道感染、胃肠道感染、尿路感染、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎、败血症等。本研究参照2005年版《中华人民共和国药典》附录细菌内毒素检查法, 应用鲎试剂对氨苄西林钠注射液细菌内毒素进行检查, 探讨氨苄西林钠的细菌内毒素的检查方法。

1 实验材料

1.1 试药

鲎试剂 (TAL) :灵敏度 (λ) 0.25EU/m, 规格:0.1mL/支, 批号20070909, 湛江安度斯生物有限公司。

细菌内毒素工作标准品 (WSE) :10EU/支, 批号:2007-10, 中国药品生物制品检定所。

细菌内毒素检查用水 (BET水) :2mL/支, 批号:0710240, 中国药品生物制品检定所。

注射用氨苄西林钠 (样品) :原料药批号:A07110807, A07114807, 规格0.5g, 哈药集团制药总厂, 试验前热原检查均符合规定。

1.2 仪器

电热恒温水槽:SSW型, 上海博迅实业有限公司医疗设备厂。

漩涡混合器:WH—1型, 上海沪西分析仪器厂。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核

按照2005年版《中华人民共和国药典》细菌内毒素检查法规定, 进行鲎试剂的标示灵敏度复核, 结果符合规定, 见表1。

2.2 细菌内毒素限值 (L) 的确定

根据公式L=K/M, 本品为注射剂, K=5EU/ (kg·h) ;《中国药典》规定本品热原检查剂量为M=25mg/ (kg·h) 。本品内毒素理论限值L=0.2 E U/m g。

2.3 供试品的测试浓度C的计算

根据公式:C=λ/L=0.25/0.2=1.25mg/mL, 即取本品稀释至1.25mg/m L, 为有效检测浓度, 但需进行干扰试验确定。

2.4 样品干扰预实验

为确定氨苄西林钠对鲎试剂实验不造成干扰的浓度, 在干扰实验前进行干扰预实验。用细菌内毒素检查用水 (BET) 将氨苄西林钠分别稀释成5.00mg/mL、2.50mg/mL、1.25mg/mL共3种浓度, 将细菌内毒素工作标准品 (WSE) 稀释至4.0λ浓度, 然后各取其量, 使样品液中含细菌内毒素2.0λ浓度的2.500mg/mL、1.250mg/m L、0.625mg/mL的稀释液, 每一浓度平行做2支, 另设2支细菌内毒素检查水 (BET) 阴性对照, 结果见表2。

由上表可见, 通过干扰预实验结果初步可知氨苄西林钠在1.25mg/mL时对鲎试剂实验不造成干扰。

2.5 样品干扰实验

按2005年版《中华人民共和国药典》细菌内毒素检查供试品干扰实验项进行实验。取2批氨苄西林钠注射液样品用细菌内毒素检查用水 (BET) 稀释至1.25mg/mL, 用该溶液和细菌内毒素检查用水 (BET) 分别将细菌内毒素工作标准品 (WSE) 稀释为含内毒素0.500EU/mL、0.250EU/mL、0.125EU/mL、0.060EU/mL的溶液, 与灵敏度为0.25EU/mL的鲎试剂反应, 每一浓度重复4管, 并进行阴性对照, 计算出用细菌内毒素检查用水 (BET) 制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值 (Es) 和用供试品稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值 (Et) , 结果见表3。

由上表可见, 0.5λ

2.6 供试品细菌内毒素检查与热原检查

(1) 供试品细菌内毒素检查。按2005年版《中华人民共和国药典》附录[1]细菌内毒素检查法, 用灵敏度为0.25EU/mL的鲎试剂, 对将2批氨苄西林钠注射液样品进行细菌内毒素检查, 结果均为阴性, 符合药典对其有效性的规

表1鲎试剂灵敏度的复核实验结果定。具体结果见表4。

(2) 供试品热原检查。取供试品, 依《中国药典》2005年版进行热原检查, 结果示, 2批供试品的细菌内毒素检查结果与热原检查结果一致, 具体见表5。

3 讨论

氨苄西林钠注射液的细菌内毒素限值定为0.2EU/mg是较为合理的, 和热原检查控制量相一致, 能保证临床用药安全。

以上实验结果表明, 用灵敏度为0.25EU/m L的鲎试剂, 对2批供试品进行细菌内毒素检查, 并同时进行2批供试品的家兔热原对比试验, 均符合药典对其有效性的规定。卢静华等[3]认为, 热原检查可用细菌内毒素检查代替家兔法, 检查时只要将其稀释, 选择相应灵敏度的鲎试剂即可进行。

在干扰实验前之所以要进行干扰预实验的目的是初步判断氨苄西林钠对细菌内毒素检查不构成干扰的浓度, 如果预实验在1.25mg/mL时无法排除干扰, 可以考虑使用更高灵敏度的鲎试剂进行实验。这样既可以避免干扰试验的盲目性, 同时又节省了大量的时间和鲎试剂, 降低了成本, 提高了工作效率。

摘要：目的通过试验确定注射用氨苄西林钠细菌内毒素的检测方法。方法根据《中华人民共和国药典》 (2005年版) 二部细菌内毒素检查法要求进行实验。结果氨苄西林钠注射液的内毒素 (L) 限值应为0.2EU/mg, 该药稀释至1.25mg/mL浓度时对细菌内毒素检查无干扰。结论氨苄西林钠注射液采用细菌内毒素检查法是可行的。

关键词：氨苄西林钠,细菌内毒素,鲎试剂,干扰实验