脑脊液标本的细菌学检验操作规程

脑脊液标本的细菌学检验操作规程（精选9篇）

篇1：脑脊液标本的细菌学检验操作规程

单位及实验室名称 项 目

汉源县人民医院检验科 脑脊液标本的细菌学检验操作 编号：LAB/SOP/HY/微-007 日期：2010年5月3日

版本：第一版，第0次修订

第1页，共3页

一、【标本采集】

脑脊液的采集由临床医师以无菌操作腰穿采取脑脊液3-5ml，置于无菌试管内立即送检。如做厌氧菌培养，则需将注射器针头封口，立即送检。

二、【检验方法】

1、一般细菌的培养

（1）一般细菌培养主要适用于脑脊液内的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和大肠杆菌等的分离培养。

（2）用无菌接种环挑取混浊脑脊液或经离心的沉渣，非别接种于血平板和普通肉汤培养基。经35℃培养，观察有无细菌生长。若有细菌生长，挑取可疑菌落，并涂片染色镜检。根据菌落特征、细菌形态、染色特点得出初步印象，再进一步鉴定，然后做出报告。若血平板无细菌生长，肉汤有细菌生长，则移种于血平板分离培养，按上述方法鉴定。如血平板、肉汤均无细菌生长，再延长培养数天，仍无细菌生长时，即可报告：“经培养×天无细菌生长。” 2.脑膜炎奈瑟菌的培养

以无菌方法取脑脊液，经3000r/min，离心30min，取沉淀物立即接种于事先预温的巧克力或血平板上，置于5%-10%CO2环境中，经35℃ 培养18-24小时后，观察结果。若发现平板上有光滑、湿润、透明、边缘整齐、粘性的中等大小的菌落，经革兰染色为阴性双球菌者，可做出初步报告：“有脑膜炎奈瑟菌生长”。经纯培养后做糖发酵、氧化酶试验、自凝试验、血清玻片凝集试验、乳胶凝集以做出最后的鉴定。3.新型隐球菌的培养

以无菌方法采取脑脊液标本，经离心沉淀后，取其沉淀物接种于沙保弱氏斜面或血平板培养基上，分别置于37℃及25℃培养。数日后可见有白色或淡褐色酵母样的菌落（如培养较久、菌落则变为湿润、粘液状），如果此时菌落用墨汁染色法染色镜检，可见有出牙的细胞及短芽管（培养时间过长则芽管可消失，荚膜形成）。杆菌菌落及染色镜检特征，可做出初步报告：“真菌培养有新型隐球菌生长。”必要时再做生化反应及动物试验等进一步鉴定。

三、【检验程序】 脑脊液

↓ ↓ ↓ 离心涂片染色 分离培养 结核杆菌检查 镜检 ———————— ——————

↓ ↓ ↓ ↓

厌氧环境培养 普通及

5%-10%CO2培养

罗氏培养基培养 取沉淀物

涂片抗酸染色

↓ ↓35℃18-24h ↓35℃3-4W

————————————————

↓

菌落观察

↓ ↓ ↓ 生化反应 → 血清学检查 ← 自动化鉴定

↓

药敏试验

↓

报告结果

作者：肖德慧

时间：2010-5-3 3

篇2：脑脊液标本的细菌学检验操作规程

汉源县人民医院检验科 血液及骨髓标本的细菌学检验操作 编号：LAB/SOP/HY/微-001 日期：2010年5月3日

版本：第一版，第0次修订

第1页，共3页

一、【标本采集】

1.血液采集：（1）以无菌方法采血，采出的血液标本立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使之充分混匀，以防止凝固。（2）采血量：增菌液与血液标本比例为5-10：1，成人一次采血8-10ml，婴幼儿1-5ml。

2.骨髓标本：（1）采集部位及时间：一般用骨髓穿刺针从髂骨采集骨髓标本，最好在用药前，发热患者要在发热初期或高热期采集标本。（2）标本采集要严格无菌操作，增菌与运送同血液标本。

二、【检验方法】

1.培养：标本接种于肉汤增菌液后，立即置35℃孵箱内孵育，每天观察培养液内有无混浊、沉淀菌膜、色素颜色变化等。肉汤出现变化 怀疑菌种 混浊 革兰氏阴性杆菌 均匀混浊，有绿色荧光 绿脓杆菌 上面澄清，下面沉淀 链球菌 自下而上溶血现象 溶血性链球菌 肉栋样凝固 葡萄球菌

表面有灰白菌膜 枯草杆菌或类白喉杆菌 2.检验：对有细菌生长迹象的血培养瓶应及时做如下检验

（1）以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰氏染色镜检，一旦有细菌生长可向临床作初步报告。

（2）同时转种于血平板或其它培养基进行分离培养。

（3）根据菌落特征及菌体染色镜检形态，进行常规生化反应，同时做药敏试验。

三、【检验程序】

血液、骨髓

↓

增菌培养（需氧及厌氧）

↓

———————————————————————————— ↓ ↓ ↓ 涂片染色镜检 分离培养 直接药敏试验 ∣ ↓

（35℃ 4-6小时）初步报告

↓

↓ ↓ 需氧培养及CO2环境培养 厌氧培养（血平板

等分离培养基）

（血琼脂平板和巧克力平板）∣——————————菌落观察—————————∣

↓

↓ ↓ 涂片、革兰氏染色镜检

纯培养

↓

———————————————————

↓ ↓

血清学检查→确定报告←生化反应试验、药敏试验

四、【结果报告】

1.根据增菌液培养结果直接直接涂片、染色、镜检确属致病菌时可向临床做初步报告，最后根据细菌鉴定结果及药敏试验及时向临床报告。

2.培养7天无菌生长时，可报告为“经7天培养无细菌生长”。对于亚急性心内膜炎患者标本应培养1个月，才能做出报告。

3.菌血症、败血症的诊断标准：（1）两次培养均出现同一细菌（可排除污染）；（2）发病2周后血中抗体滴度增高。

作者：肖德慧

篇3：血液和骨髓标本的细菌学检验分析

1 标本采集

在出现临床症状后尽快抽血做培养。对间歇性发热, 应该在寒战或估计体温高峰时间到来之前采血, 因为细菌流入血流与寒战发作通常间隔1 h, 在发热时血液中可能没有细菌。但事实上, 血培养通常在寒战或发热后进行。由于细菌很快会从血流中清除, 因此在寒战或发热后应尽快抽取血培养。原则上在未使用抗菌药物之前抽取, 对已用药物而又因病情不能停药的患者, 也应在下次用药前采血[1]。

样本采集必须在治疗前且要因人而异、因病而异, 掌握最佳的采集时间、部位、频率和血容量。双瓶接种, 有10%菌血症常常不是单一微生物引起, 厌氧菌血症占菌血症的5%~15%;长期使用抗菌药物患者血中可呈现L型细菌;免疫低下患者可发生真菌血症, 所以推荐每次送检血液培养至少作两种血培养瓶的培养 (两套) 。需氧和厌氧或需氧和L型培养。所用培养瓶必须仔细检查有无变色或浑浊, 变色和浑浊表示有污染可能, 应立即与临床细菌室联系, 更换后再作处理。严格防止标本次序混乱, 按一人一瓶一单原则, 每做一患者培养立即将化验单边条贴在培养瓶上或将可撕条码贴在相应化验单上, 同时应在化验单上标明准确采样时间;严禁多个患者同时采样, 流水操作的工作方式, 因为采样错误将会导致医生错误诊断, 甚至危及患者的生命。

2 标本处理

采血后的血培养瓶或采集管应立刻送到临床微生物实验室。如因某种原因不能立即送检时, 应将已接种血标本的培养瓶放在室温, 切勿放冰箱存放。因为某些培养菌在冰箱温度中会死亡, 使培养阳性率下降。

3 细菌培养

3.1 伤寒杆菌的培养

疑似伤寒时, 则应将血液注入胆汁肉汤培养基内, 于37℃温箱培养。每日或隔日移种血琼脂平板。如有可疑细菌生长时, 按沙门菌检查法进行鉴定。如无细菌生长, 至第5~7天即可报告阴性。

3.2 脑膜炎球菌的培养

将疑似脑膜炎患者的血液接种肉汤培养基或含0.2%葡萄糖的肝浸汤中, 也可作血平板倾注培养。如无生长, 连续观察5~7 d, 作出结论。

3.3 厌氧菌的培养

将血液接种疱肉培养基或硫乙醇酸盐肉汤中, 置37℃培养。有细菌生长时, 划种血琼脂平板2个, 分别作厌氧及普通培养, 对比两个平板上的生长情况, 对分离出的厌氧菌进行鉴定。

3.4 布氏杆菌的培养

将血液接种肝浸汤或胰脲肉汤, 放37℃及10%CO2下培养, 每3天向固体培养基移种一次。若无细菌生长, 培养1个月始能报告阴性。

3.5 真菌的培养

应当注意, 血液的细菌学检验 (主要是培养检查) , 对菌血症和败血症的诊断和治疗具有重要的意义。因此, 血液内培养出任何一种细菌或多种细菌 (复数菌感染) 时, 特别是当前条件致病菌的感染有日渐增加的趋势, 更应结合临床仔细加以分析, 不可草率作出污染或致病菌的结论。

4 结果的报告

手工血培养系统肉眼观察微生物生长的可视信号尤为重要, 一旦出现如前所述信号, 立即行革兰染色并立即口头报告患者的主治医生, 报告的日期和时间以及接受报告人的姓名应记录在患者的报告单上。仪器血培养系统当仪器出现报警应立即取出培养瓶, 涂片革兰染色并立即口头报告患者主治医生, 报告的日期和时间以及接受报告人的姓名应记录在患者的报告单上[2]。标本转种时, 注意吸取明显的沉淀物或颗粒物, 可用吸液管轻轻地吸取肉汤的深处, 让管尖从瓶底移出肉汤表面。若患者抽血前已用抗生素, 在转种的培养皿上滴上阳性肉汤, 停几分钟, 然后再分区画线, 这会使抗生素吸收到琼脂内, 画线区内的细菌易生长。手工培养法, 无论何时发现肉汤浑浊, 一定要做及时转种培养。

参考文献

[1]徐英春.临床细菌学血培养操作规范.中华检验医学杂志, 2004, 27 (2) :124-126.

篇4：脑脊液标本的细菌学检验操作规程

[关键词] 新生隐球菌性脑膜炎；脑脊液；墨汁染色；革兰染色；隐球菌抗原乳胶凝集试验；真菌培养

[中图分类号] R378.1+5   [文献标识码] B   [文章编号] 2095-0616（2012）08-83-02

检验科常用的新生隐球菌的检测方法有墨汁染色、革兰染色、隐球菌抗原乳胶凝集实验和真菌培养。通过这4种方法的应用，对其阳性率进行比较，以提高检验水平。现将笔者所在医院2011年2～11月确诊新生隐球菌（CM）的55例脑脊液（CSF）标本用以上4种方法进行检验的情况作以比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

55例患者均为AIDS合并CM，其中男36例，女19例，年龄29～62岁。以上患者病史、症状、体征、辅助检查结果均符合CM表现；体温37.5～39.0℃39例，＞39℃2例；进行性头痛47例，伴嗜睡、昏迷等意识障碍者21例。

1.2 实验室检查

55例患者入院后分别抽取CSF 3管，第1管做真菌培养和生化检验，第2管作做细胞学检验和墨汁染色，第3管做隐球菌抗原乳胶凝集实验。CSF标本中无色清晰46例，微混9例。墨汁染色选用印度墨汁或国产优质墨汁，将CSF标本离心后取沉淀物直接染色镜检，在黑色背景下可见到透亮的菌体和宽厚荚膜；真菌培养用沙保弱培养基，将标本接种后放置于37℃孵育箱中，2～5 d后观察菌落并做酚氧化酶试验、尿酶试验等鉴定试验；革兰染液由贝索公司提供，涂片染色后菌体呈孢子样；乳胶凝集实验采用美国IMMY公司生产的新生隐球菌乳胶凝集抗原检测试剂盒，利用快速乳胶凝集反应对标本中隐球菌的荚膜多糖抗原进行定性检测，试验室温下即可观察结果，反应环中凝集颗粒的多少和大小与反应的阳性程度成正比，结果读数划分等级从阴性到4级，阳性对照应在2级（轻微小团块或块状）以上，而阴性对照应小于1级（乳状背景下细小颗粒）。

2 结果

55例患者CSF检查结果：墨汁染色阳性42例，革兰染色阳性38例，真菌培养阳性49例，乳胶凝集试验阳性52例。4种检验方法结果见表1。

3 讨论

新生隐球菌是有荚膜的、类似酵母的霉菌，又称溶组织酵母菌。广泛存在于被鸟类粪便污染的土壤中，尤以鸽粪中检出最多[1]。目前由于临床上抗生素、免疫抑制剂、肿瘤放、化疗的广泛应用和HIV的流行特别是AIDS患者的不断增多，使CM患者明显增多。CM是由新生隐球菌所导致的临床最常见的中枢神经系统感染（CNS）[2]。在AIDS患者中隐球菌也是最常见的CNS感染的原因。赵建华等[3]报道12例AIDS机会性感染的患者中隐球菌脑膜炎有6例。在HIV感染人群中CM的发病率是每年0.04%～12.00%；西欧、中欧、大洋洲的中位发病率最低；每年全球大约957 900人患CM，约624 700人死亡[4]。CM的临床症状一般是非特异性的，患者可以表现为脑膜炎的症状，也可以表现为脑膜脑炎的症状。大量资料说明，CM的早期明确诊断是降低患者死亡率和判断预后的关键。

目前医学上缺乏快速、敏感而又特异的检验方法是CM误诊的重要原因。墨汁染色方便快捷，取CSF离心后的沉淀物用负染法找到有宽阔透明荚膜的隐球菌就能确诊，是诊断CM最直接的方法。文献报道墨汁染色首次检出阳性率仅54%～74%[5]。在发病初期，墨汁染色镜检需多次反复检查才能找到隐球菌。隐球菌在革兰氏染色后呈现孢子样，大小不等，透明或半透明，胞核染紫色或淡紫色，荚膜因富含多糖而不着色，这一特点也将细胞与隐球菌区别开来。隐球菌抗原乳胶凝集实验在隐球菌感染早期的诊断具有重要意义。一定程度上，抗原滴度与感染程度成正比，增高的滴度反映感染程度和简单预后，减低的滴度说明患者治疗有效[6]。但在患者抗原滴度低、早期感染、高滴度的前带影响等情况时，结果会呈现假阴性；而在风湿因子存在下或试验操作不当时结果会出现假阳性。隐球菌培养是确诊CM的“金标准”，在玉米-吐温80培养基上培养3～5 d后涂片镜检，可见圆形、厚壁孢子[7]。

本研究数据显示真菌培养和乳胶凝集实验阳性率较高，墨汁染色和革兰染色阳性率相对较低，但每种方法又有自己的特点和不足之处。实际工作中，为提高早期诊断阳性率，对同一份标本应联合使用3种以上方法检测，使结果互相印证，从而为临床提供有力证据。

[参考文献]

[1] 刘运德.微生物学检验[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2003：371-373.

[2] Collazos J.Opportunistic infections of the CNS in patients with AIDS：diagnosis and management[J].CNS Drugs，2003，17（12）：869-887.

[3] 赵建华，韩雄.艾滋病中枢神经系统机会性感染的特征[J].中风与神经疾病杂志，2003，20（4）：373.

[4] Park BJ，Wannemuehler KA，Marston BJ，et al.Estimation of the current global burden of cryptococcal meningitis among persons living with HIV/AIDS[J].AIDS，2009，23（4）：525-530.

[5] 赵明伦.颅内感染性疾病[M].青岛：青岛出版社，1990：300-302.

[6] Lu HZ，Bloch KC，Tang YW.Molecular techniques in the diagnosis of central nervous system infections[J].Curr Infect Dis Rep，2002，4：339-350.

[7]周庭银.临床微生物学诊断与图解[M].第2版.上海：上海科学技术出版社，2007：126-127.

篇5：细菌检验标本的采集

1、血液和骨髓标本的采集

（1）、急性脑膜炎、骨髓炎、关节炎、细菌性肺炎和肾盂炎发热患者，应在抗生素治疗或更换前，从不同部位采集血液标本，做2次血液培养（应在抗生素治疗前完成），立即送到实验室。

（2）、疑似心内膜炎患者，急性病例，在抗生素治疗或改变前1-2小时，从各个不同部位采血3次做血液培养。

2、脑脊液标本的采集

CSF采集后，置于无菌试管中。15分钟内运送实验室，绝不可冷藏。每种检验需要最小量：细菌培养≥1ml，真菌≥2ml，抗酸杆菌≥2ml。

3、尿标本的采集

（1）、中段尿采集，清洁外阴及尿道口周围（女性瓣开大小阴唇，男性翻开包皮冲洗拭干），自然排尿，让尿流不间停，截留中段尿，置于无菌大口容器或尿运送杯中，不少于1ml。

（2）、滞留尿管集尿，常规是≤2小时送交实验室。

4、下呼吸道标本的标本处理

告诉病人先用冷开水漱口清洗咽喉，咳出痰液，置于无菌广口容器中，常规培养≤2小时送交实验室立即接种。

5、粪便标本的采集

（1）、常规性培养，直接留置粪便标本于清洁、干燥广口容器中或转移至Cary-Blair保存运送。

（2）、直肠拭子，无菌拭子插入肛门2-4cm，在肛门括约肌外柔和地旋拭子，可在拭子上明显见到粪便，插入Cary-Blair系统管运送。患者不能自行采集。

6、眼、耳、鼻、喉标本的收集

（1）、眼结膜标本，预先沾湿拭子，在结膜上滚动采集标本。标本在15分钟内送达实验室。

（2）、眼角膜标本采集，在麻醉下，用刮留学在溃疡或创伤边缘刮取碎屑，直接接种在培养基平板上培养和涂片。眼部感染所获取的标本量很少，建议医师取样后直接接种于平板上培养和涂片。（3）、口腔咽部标本，先用一个拭子揩去溃疡或创面浅表分泌物，第二个拭子采集溃疡边缘或底部，常规培养≤2小时运送实验室。

（4）、患有外耳炎患者，需要深部耳拭子，因为浅表拭子可能遗漏链球菌引起的蜂窝织炎。

（5）、鼻标本留取，用一根无菌棉拭子，伸进侧鼻孔约2.5cm，下鼻黏膜接触，轻轻地旋转拭子，蘸取黏膜上分泌物，缓慢抽出。置于运送培养基或将拭子直接送检。

7、脓液标本的采集

（1）、开放脓肿，用无菌盐水或70%乙醇擦去表面渗出物，用拭子深入溃疡基底或边缘部，采集二个拭子，分别做培养和革兰染色。

（2）、闭锁脓肿用注射器抽取，刺入无菌橡皮塞中送检。

8、生殖系统标本的采集

阴道、子宫颈陷凹、子宫内膜、生殖道创伤、前庭大腺、羊水膜及前列腺等分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。淋病奈瑟菌检查时，不论男女尿道及子宫均需用拭子插入尿道及子宫3cm深取样送检，要避免受阴道分泌物污染拭子。

9、抗凝血检验标本的采集

（1）、血常规（血液分析）标本的采集

清除患者恐惧心理，EDTA-K2专用抗凝管，顺畅采静脉血1ml，立即颠倒混匀8次，及时送检（＜2小时出结果）。

（2）、凝血试验（如血凝四项、D-二聚体）

0.109ml/L枸橼酸钠与血液1:9比例抗凝，用专用真空采血管，采静脉血至2ml，立即颠倒混匀8次，及时送检，＜2小时出结果。采血时尽可能缩短止血带使用时间，不要用力拍打血管，避免产生气泡，采血不顺畅要重抽。

（3）、血沉（红细胞沉降率）标本的采集

0.109ml/L枸橼酸钠抗凝剂与血液1:4比例抗凝（比例要准确），颠倒混匀8次，及时送检，采血后＜3小时内测定。

（4）、糖化血红蛋白标本的采集

EDTA-K2抗凝管，静脉血2ml，颠倒混匀8次，及时送检。（5）、血气分析标本的采集

向病人解释动脉采血目的和方法，消除其恐惧心理，常规消毒皮肤（直径5-7cm），注射器抽吸肝素0.5ml湿润注射器内壁（余液全部弃去），以最快速度抽取鲜红动脉血液3-5ml，将注射器针头斜面刺入软木塞内（隔绝空气），将标本连同化验单及时送检。

（6）、脑利钠肽（brain natriuretic peptide）

BNP采用EDTA抗凝（建议用塑料材料的样品试管），抽静脉血2ml，颠倒混匀8次，立即送检，4小时出结果或及时分离血浆放-20c可保存两天。

10、临床体液常规检验标本采集（1）、尿液标本的采集和处理

1）尿标本应避免经血、白带、精液、粪便等混入。还应注意避免烟灰、手纸等异物混入。

2）、标本留取后，应及时送验，以免细菌繁殖、细胞溶解等。3）、标本送验时应注意避光。

4）、尿液常规筛查尽量不要使用防腐剂，在标本收集后2小时之内送检。5）、标本需防腐时（24小时定量）

①甲醛，每100ml尿加入400g/l甲醛0.5ml，用于管型、细胞检查。②甲苯，每100ml尿加入甲苯0.5ml，用于尿糖、尿蛋白的防腐。（2）、粪便检查

1）、一般检验留取指头大小（约5g）新鲜粪便即可，放入干燥、清洁、无吸水性的有盖容器内送检，标本容器最好用内层涂脂的硬纸盒。

2）、检查蛲虫卵需要用软黏透明纸试子，在清晨排便前由肛门四周试取标本，也可用棉试子试取，但均须立即镜检。

3）、检查阿米巴滋养体，应于排便后迅速送检，立即检查。冬季需采取保温措施。4）、一般检验不应采取尿壶或便盆中的粪便标本。（3）、脑脊液检查

标本收集后应立即送检，不能超过1小时。将CSF分别收集于三个无菌试管（或小瓶）中，每管1-2ml；第一管做细菌培养，必须留于无菌小试管中；第二管做化学或免疫学检查；第三管做一般性状检查和显微镜检查。

（4）、浆膜腔积液检查

1）、由穿刺取得的标本为防止细胞变性、出现凝块或细菌破坏溶解等，送检及检查必须及时。

2）、为防止凝固，最好加入100g/L乙二胺四乙酸二钠或二钾（EDTA钠盐或钾盐）抗凝，每0.1ml可抗凝6ml浆膜腔积液，及时完成细胞涂片检查。3）、PH测定应用肝素抗凝专用采样器。（5）、滑膜液检查

微生物培养应置于灭菌消毒试管，显微镜镜检应用肝素抗凝标本，每毫升约用肝素钠25单位，血液标本应与滑膜液标本在同一时间内收集。收集后立即送检。

（6）、精液检查

1）、在3个月内检查2次至数次，二次之间间隔应＞7天，但不超过3周。2）、采样前至少禁欲3天，但不超过7天。3）、采样后1小时内送到检验科。

4）、用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套内的精液。5）、应将射精精液全部送验（冬天注意保温）。6）、尽可能用手淫法。（7）、前列腺液标本收集

临床医师作前列腺按摩术后，采集标本于清洁玻片上，立即送检，培养标本按细菌标本处理。

（8）、阴道分泌物标本采集

1）、取阴道分泌物、用生理盐水涂片。

篇6：脑脊液标本的细菌学检验操作规程

1 资料与方法

1.1 一般资料:

选取本院收治的2015年1月份至2015年5月份收治的慢性支气管炎患者200例作为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组各100例患者。其中观察组患者中,男性64例,女性36例,平均年龄(62.2±2.1)岁,改进方法采集痰标本196次;对照组患者中,男性58例,女性42例,平均年龄(63.5±2.2)岁,常规自然咳痰法采集痰标本199次。

1.2 方法

1.2.1 痰标本采集前准备:

在对观察组和对照组的慢性支气管炎患者进行痰标本采集,首先要建立医患沟通,医生充分了解患者的病情,然后将痰标本采集的目的和痰培养的重要性告知患者,并开展相应的教育活动,让患者明确痰与唾液之间所存在的区别,采集痰标本过程中需要患者积极配合,并指导患者正确操作。

1.2.2 痰标本采集方法

1.2.2. 1 对照组采用自然咳痰法采集痰培养标本:

对照组患者采用自然咳痰法采集痰培养标本,需要在护士的指导下完成。清晨起床要用清水漱口3-4次,用力从气管深部咳出痰。护士用无菌容器盛装在一个小时之内送去检测。

1.2.2. 2 观察组采用改进痰培养标本采集:

观察组采用改进痰培养标本采集,首先是患者清晨起床后刷牙,用清水漱口3-4次。护士向患者针对取痰标本的重要性进行讲解,并指导患者用力从气管深部咳出痰,吐到无菌容器内。护士将痰液加入试管中,加入10～20ml的灭菌盐水,经过8～10s的震荡,将管底沉淀的脓痰用接种环沾出,放入另一个试管当中。同样的痰提取步骤重复操作2～3次,然后将脓痰接种在培养基上,在一个小时之内送去检测。

1.2.3 评价标准:

所采集的痰标本的合格率和阳性率。

1.2.4 对于合格的痰培养标本的评价方法:

将所采集的标本送到实验室接受检验。医学检验师对标本涂片,格兰染色后在显微镜(10×10)下观察白细胞的特征和扁平上皮细胞的特征。将经过检测的痰培养标准分为三个级别,即合格标本、可接受标本和不合格标本。合格标本:在显微镜下所观察到的白细胞超过25个,鳞状上皮细胞低于10个;可接受标本:在显微镜下所观察到的白细胞低于25个,鳞状上皮细胞超过10个,且低于25个,其中细菌类型低于3种。不合格标本:在显微镜下所观察到鳞状上皮细胞超过25个。对于这种不合格的痰标本,要求从新送检,直到经过检测合格后才可以进行细菌培养。

1.3 统计学处理:

采用SPSS 18.0统计学软件对观察组和对照组的痰标本检验结果进行统计分析,组间采用χ2检验。

2 结果

从所采集的标本合格率上来看,观察组的100件痰标本中,合格标本56件,可接受标本13件,痰标本可用率为69%;对照组的100件痰标本中,合格标本26件,可接受标本17件,痰标本可用率为43%。比较观察组和对照组,χ2=33.74,P<0.01;从所采集的痰培养标本的阳性率来看,观察组培养阳性数为77件,阳性率为77%,对照组培养阳性数为38件,阳性率为38%。

3 讨论

对于呼吸道感染患者进行疾病诊断,要提高病原菌判定质量,就要重视痰培养标本采集工作。针对于目前痰培养阳性率低于30%的状况,要将病原菌确定下来是非常困难的,严重影响了用药。这就需要在采集谈标本和进行技术处理的过程中,要确保标本合格,以获得具有参考价值的细菌培养结果,有利于对患者的临床治疗[2]。传统的痰标准采集方法是自然咳痰。由于痰液经过口腔后,会被口腔中的寄居菌会对痰液造成污染,使得痰培养的阳性率较低。采用改进痰培养标本的采集方法,就是通过与患者之间建立沟通,提高患者对痰标本采集的认知程度,并自愿配合护士完成痰标本采集。在痰标本采集之前,护士要将有关知识传递给患者,并认真地指导患者正确咳痰。要避免口腔中的唾液或者鼻涕混入到痰液中。在护士的指导下,患者可以减少无效的咳嗽,由此而降低了口腔寄居菌污染,提高所采集的痰标本质量[3]。

针对于所采集的标本,要使用试管多次震荡提取,通过2～3次的洗涤,降低正常菌群污染率。痰标本的送检要及时,以确保痰液中没有原始菌繁殖或者死亡,保证细菌培养质量,为临床选择药物提供依据。

摘要：目的:通过对比常规自然咳痰法所采集的痰培养标本与改进后的痰培养方法,分析培养标本的采集方法对细菌学检验结果的影响。方法:选取本院收治的2015年1月份至2015年5月份收治的慢性支气管炎患者200例作为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组各100例患者。观察组采用常规的自然咳痰法采集痰培养标本;对照组采用改进后的痰培养方法。结果:从所采集的标本合格率上来看,观察组为69%;对照组为43%;从所采集的痰培养标本的阳性率来看,观察组为77%,对照组为38%。结论:运用常规的自然咳痰法采集痰培养标本的合格率和阳性率都低于改进后的痰培养方法,采集痰培养标本采用改进后的方法,对于提高细菌学检验质量起到一定的促进作用。

关键词：自然咳痰法,改进痰培养标本采集,细菌学检验,检验质量

参考文献

[1]李伟峰,罗道宝,屈艳红,等.痰标本质量与培养结果的关系[J].中国误诊学杂志,2007.7(24):5783-5784.

[2]朴春子.痰培养标本的采集方法对细菌学检验结果影响分析[J].临床研究,2013(51):158-159.

篇7：痰标本在细菌学检验中的应用分析

关键词痰标本细菌学检验

在感染疾病的病原菌中，细菌L型是细菌细胞壁部分缺损或完全丧失而造成的，细菌胞壁的缺失可以是自发的，也可以是人工诱导的，但人工诱导的频率远比自发为高。痰标本在琼脂培养基上，菌落呈“油煎蛋”样式^[1]。本实验旨在筛查临床痰标本中结核分枝杆菌L型细菌的存在情况，论述了痰标本在细菌学检验中的应用效果，为进一步研究结核分枝杆菌L型细菌的形成提供思路，现报告如下。

资料与方法

实验对象：2009年6月～2012年5月送检于检验科的300例痰标本。

培养基配制：罗氏培养基的配制：基础液，谷氨酸钠1.8g、磷酸二氢钾1.2g，枸橼酸镁0.3g，葡萄糖0.3g，硫酸镁0.1g，丙三醇6ml、蒸馏水300ml。上述溶液加热充分溶解，加入土豆粉6g，摇匀加热5分钟。冷却到40～50℃时，加入500ml全卵液，加入已经高压灭菌的2%孔雀绿10ml，摇，静置后进行分装。呈斜面放置于干燥箱85℃，1.5小时。冷却后，培养基斜面颜色鲜艳，表面光滑无气泡，4℃保存。

痰标本的细菌培养：取痰标本，以1：3的比例加入消化液，漩涡振荡，3000转/分，离心15分钟，加入适量PBS重悬沉淀，取300ml分别接种于Middlebrook MGIT 7H9液体、7H9L、7H9B半同體培养基、923TBB和923TBL液体培养基中，37℃静置培养。消化液的配制：4%NaOH 50ml，2.9%枸橼酸钠50ml，N-乙酰-L-半胱氨酸0.5g当天配制，24小时内使用。染色涂片后光学显微镜下镜检。

结果

细菌培养结果：痰液经预处理后接种于Middlebrook MGIT 7H9液体、7H9L、7H9B半同体培养基、923TBB和923TBL液体培养基，培养结果显示1例标本在923TBL液体培养基浑浊，有细菌生长，在7H9L半固体蔗糖培养基中有油煎蛋样的菌落出现，而在罗氏培养基、923TBB和7119B培养基中没有菌落生长。

涂片镜检分析：1例标本菌株的煎蛋样菌落经抗酸染色可见大小不等的短杆状的细菌。

病历分析：患者，男，19岁，汉族。患者于2010年10月曾患“颈淋巴结核”抗痨治疗好转，2011年10月患者无诱因出现咳嗽，以干咳为主伴少量白色稀薄液，X线左肺上中野见斑片状阴影，边界模糊，CT左肺斑片状密度不均一影。入院检查：痰检三次均为阴性，医师根据影像学结核胸片病灶形态以临床症状，考虑为继发性肺结核。常规：粒细胞百分比71.7%（30～90），淋巴细胞绝对值1.3×109（2～10），入院后给予抗炎，抗痨支持治疗：INH 0.4g，1次/日，RFP 0.4g，1次/日，PZA 1.5g，1次/日，SM 0.759g，1次/日症状，缓解，无药物不良反应，痊愈后出院。

讨论

细菌细胞壁缺陷型（细菌L型），在某种情况下细胞壁肽聚糖结构可遭破坏，或当其合成受到抑制时，革兰阳性菌细胞壁几乎完全缺失，原生质仅被一层胞膜包绕，一般呈球形，称原生质体^[2]。革兰阴性菌经溶菌酶处理后，因其细胞壁中肽聚糖含量较少，且可保留某些或全部的外膜保护，内部渗透压又比革兰阳性菌低，故形成一种对低渗环境具有一定抵抗力的圆球体，或称原生质球^[3，4]。

痰是病理产物，主要是肺、支气管和气管内的炎性分泌物。咳嗽的患者采集痰标本，主要目的是为了检查，进行病原菌的鉴定，并有助于诊断和治疗。我们知道，肺结核患者痰中能否找到L型细菌，除痰中含菌量大小外，正确留取痰标本的方法是：在留痰之前先用清水漱口数次，以清除口腔内的食物残渣及部分杂菌。留取的痰应是用力咳嗽后自气管内咳出的痰，然后盛于痰盒内送检。不要将唾液或鼻涕吐入痰盒，以免影响查痰结果。初次就诊需查痰，医生要求送3个痰标本：即时痰：就诊当时咳出的痰；夜间痰：前1天晚间咳出的痰；清晨痰：起床后深咳吐出的痰，其中以清晨第1次咳出的痰效果最好^[5]。应采集12～24小时内的痰液。测定24小时痰量或观察分层情况时，容器可加少量石炭酸防腐。用于细菌培养的标本，必须无菌采集，并先用无菌水漱口，以避免口腔内正常菌的污染。为了防止痰液污染，用过的标本应灭菌后再处理^[6]。本文通过痰检验结果显示，本文1例患者是多次抗痨治疗，抗痨药物中异烟肼对细胞壁的合成有抑制作用，这给L型细菌的形成提供了条件，但是经过痰涂片抗酸染色没有发病病原菌，通过将痰液消化处理，接种于培养L型细菌的7H9高渗半固体发现了L型细菌。

总之，用高渗半固体培养基可以从临床痰标本中分离出结核分枝杆菌L型菌株，表明痰标本在细菌学检验中仍有一定的价值。

参考文献

1祝秉东，于红娟.结核病学基础与临床[M].兰州：兰州大学出版社，2009：369-375.

2中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志，2008，18（1）：28-31.

3Chiodini RJ，Van Kruiningen HJ，Thayer WR，et al.Spheroplastic phase of mycobacteria isolated from patients with Crohn’S disease.J Clin Microbiol，2009，24（3）：357-363.

4朱明利，张永乐，张立诚，等.肺结核患者结核菌L型感染及其荧光定量PCR检测的意义[J].中国实验诊断学，2008，12（5）：632-635.

5卢润生，蒋绍双，李定越.结核菌L型培养基的改进[J].四川医学，2004，25（7）：735-736.

篇8：脑脊液标本的细菌学检验操作规程

资料与方法

2013年8-10月收治下呼吸道感染患者260例作为本次研究的对象, 男180例, 女80例, 年龄21~74岁, 平均55.2岁。260例患者中使用呼吸机120例, 选择进行气管插管或切开并应用呼吸机80例, 留置导尿管60例。

方法:1采集细菌标本:在检测过程中, 所有患者在早晨用清水漱口3次, 然后用力将痰咳出, 将痰液采集到无菌痰盒中, 2 h内送检, 以采集的痰液标本连续>2次的培养并且培养出同样的病原细菌及属于生长优势为阳性反应。2耐药分析:对标本进行细菌鉴定, 使用的鉴定系统为ATB-Expression细菌鉴定体系, 质控的菌株是肺炎克雷伯菌ATCC700603、大肠埃希菌AROC25922和铜绿假单胞菌ATOC27853, 进行的药敏试验按照2005年版CLSI推荐的纸片扩散法操作流程和结果判断。

结果

本次研究对象为260例临床患者, 得到164例临床标本细菌检验细菌构成的情况, 细菌检验的结果为铜绿假单胞菌42例, 大肠埃希菌29例, 肺炎克雷伯菌22例, 产碱假单胞菌16例, 其他真菌18例, 其他37例, 主要的病原菌为铜绿假单胞菌 (25.61%) 、大肠埃希菌 (17.68%) 、肺炎克雷伯菌 (13.41%) 。见表1。

对主要的两种细菌铜绿假单胞菌和大肠埃希菌进行药物体外的药敏试验, 结果显示, 头孢哌酮/舒巴坦和头孢他啶对这两钟病原菌的耐药性较好, 头孢唑啉和氯霉素对铜绿假单胞菌和大肠埃希菌的耐药性则相对较差。见表2。

讨论

目前, 下呼吸道感染类疾病已经成为受到普遍关注的一类疾病问题, 随着临床上各种具有侵入性的应用操作, 这也给病原微生物入侵机体提供了一个非常便利的条件, 导致细菌出现变异, 机体临床耐药菌株的增加。进行细菌检验是目前临床实验室检验的一种常用方法, 对于临床上确定患者感染的致病菌种是非常有帮助的, 是临床上作为诊断疾病和临床医生指导用药的重要依据和标准。而在进行细菌检验的过程中, 对患者的痰标本进行细菌检验是最为常见的, 作为细菌检验的痰标本是来自于下呼吸道的分泌物, 正常人的下呼吸道是无菌的, 正常情况下是不可能检验出致病菌的, 而痰液的排出是必须要经过上呼吸道, 所以容易受到上呼吸道的正常菌群的影响, 对检验结果容易造成偏差, 所以会有相当一部分的痰标本是唾液或者是唾液与正常菌群的混合物[4]。

某些致病菌已经逐渐成为了主要的致病菌, 其中铜绿假单胞菌、大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌为前3位的致病菌, 引起这种情况可能与目前临床上过多地使用抗生素和治疗方法过于依赖抗生素有很大的关系, 这应该引起我们的足够重视。

近几年来, 时间和地区的差异性导致下呼吸道感染的病原菌的菌种在临床上存在着很大的临床差异, 各个地区的病原菌的耐药性也不完全相同[5], 所以我们对下呼吸道感染的患者一定要进行药敏试验, 并且根据药敏试验的结果及抗生素药物的敏感性有针对性地进行有效的治疗及制定治疗方案, 把握正确的治疗时机和进行合理用药。

通过对铜绿假单胞菌和大肠埃希菌的体外药敏实验分析, 可以看出头孢他啶和头孢哌酮/舒巴坦的耐药性较好, 而相对的头孢唑林和氯霉素的耐药性则差一些。一般来讲, 铜绿假单胞菌及大肠埃希菌的耐药机理比较复杂, 非常容易发生较高的耐药性[6], 在预防方面, 临床医生要非常谨慎地使用抗生素对患者进行治疗, 患者也不要随意购买和使用抗生素类药物, 对于一些常见的疾病, 不要非常依赖于抗生素进行治疗。

综上所述, 通过本次研究可以了解到目前主要的感染类疾病的致病菌为铜绿假单胞菌和大肠埃希菌, 并且不同的抗生素的耐药性也不相同, 在临床的使用上要非常谨慎。

摘要：目的:通过对下呼吸道感染临床标本260例进行细菌检验, 以探讨控制下呼吸道感染的问题。方法:2013年8-10月收治下呼吸道感染患者260例, 对所有患者的痰液进行分离及细菌培养和耐药性分析。结果:260例患者一共分离得到164份病原菌, 其中前3位的分别是铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦相对于头孢唑啉和氯霉素的耐药性要相对好一些。结论:本次研究的结果中经过细菌标本的检验, 结果多为铜绿假单胞菌和大肠埃希菌, 并且不同的抗生素的耐药性不同, 临床使用药物应非常谨慎。

关键词：临床标本,细菌检验,结果分析

参考文献

[1]郭海阁.240例临床标本细菌检验结果分析[J].中国伤残医学, 2013, 21 (12) :216-217.

[2]梁栋.510份痰液标本的细菌培养及药敏分析[J].中国医药指南, 2013, 11 (33) :184-185.

[3]张永旭.对比不同临床标本微生物检验的阳性率结果[J].中国医药指南, 2013, 11 (30) :417-418.

[4]邓为之.浅析提高细菌检验标本合格率的有效方法[J].求医问药, 2013, 11 (3) :192.

[5]杨肇立, 周文, 陈旭, 等.痰液标本细菌学检验若干问题的探讨[J].检验医学与临床, 2007, 4 (9) :836-838.

篇9：脑脊液标本的细菌学检验操作规程

关键词：细菌检验,标本采集

在医学检验中, 细菌检验是十分重要的诊断和治疗依据, 检验结果可较好地说明患者的病情状况[1]。目前, 大部分临床实践证明, 标本的采集、运送、处理等因素对细菌检验结果的正确性会造成一定的影响。本研究选取我中心于2010年1月-2011年12月接受的各类细菌检验标本9950例, 其中4625例标本采用常处理规方法检验, 而5325例标本采取规范的标本采集、运送、处理及质量反馈制度进行检验, 获得了满意的检验效果, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

我中心2010年1月-2011年12月接受的各类细菌检验标本9950例, 将其分为观察组和对照组, 其中观察组采取规范的标本采集、运送、处理及质量反馈制度检验5325例标本, 其中1804例痰液标本, 1468例脓肿及创伤组织标本, 698例血液标本, 569例尿液标本, 492例生殖道分泌物标本, 294例粪便标本。对照组采用常处理规方法检验4625例标本, 其中1555痰液标本, 1483例脓肿及创伤组织标本, 638例血液标本, 438例尿液标本, 298例生殖遭分泌物标本, 213例粪便标本。

1.2 检验方法

对照组由患者自行采集标本再转交给采样人员, 采样人员在1 h内将采集标本统一送检验室进行检验。观察组在患者采集标本过程中采样人员会从旁协助, 同采集过程严格按照无菌操作标准执行。针对尿液标本的采集留取了早晨洁尿标本, 若患者为男性, 在尿液采集过程中应当上翻包皮, 患者若为女性, 在尿液采集过程中应当用清水清洗尿道并分开大阴唇采取尿液, 同时最好留取约10 m L中短尿液, 置入专用无菌容器中, 及时送往检验室检验。在血标本采集中, 应注意采集时间, 需在患者发热高峰期或发热2 h前, 且未给予抗生素治疗前采集。在生殖标本采集过程中, 不要使用棉拭子取样, 最后选择专门的涤纶拭子进行采集, 同时尽量减少触碰阴道壁。标本采集完成后, 按照不同标准准备相应的容器, 待装纳完毕后由专门的采样人员送检。若采样人员怠慢未致使检验时间拖延, 则会降低标本的检验结果, 若未及时将脓性标本送检, 则会降低细菌的活性或致使细菌死亡, 而检验结果会呈现假阴性。在检验标本送往检验室后, 检验室工作人员应及时进行分类检验, 标明各类标本, 从而避免了标本结果混乱情况, 也保证了检验数据的准确性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件处理, 计数资料采用t检验, 组间对比采用χ2检验, 以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

对照组标本中合格率为93.41优于观察组的合格率98.43, 经对比两组差异有统计学意义 (P<0.05) , 见附表。

3 讨论

细菌检验主流程包括患者填写申请单、采集样本、运送标本、处理标本、分离致病菌、致病菌的培养、致病菌的鉴定, 同时包括进行药物敏感试验和检验人员填写检验结果等[2]。在一系列的细菌检验流程中影响检验结果准确性的主要采集样本、运送标本、处理标本, 若在这一过程中处理不当很容易导致检验试验失败[3]。因此在检验过程中要注意: (1) 为保证检验标本的质量, 必须严格按照无菌原则操作; (2) 在标本采集过程中采集量都有规定, 不可过少或过多; (3) 得到标本后为避免标本随着时间的变化而变质, 应及时送检室, 不可怠慢。若痰液标本搁置时间过长容易干涸, 尿液标本搁置时间过长会腐烂, 其中的细胞也会随之破坏; (4) 为提高检验科工作人员的专业技术应给予进行专业培训, 从而保证患者可得到有效的指导, 提高标本取样治疗[4]。

本研究中, 对照组总合格率为93.41%优于观察组的98.43%, 这说明在细菌检验过程中实施规范的标本采集、运送、处理及质量反馈制度, 可提高细菌检验的准确, 从而保证诊断的可靠性以及治疗的有效性。据国内相关研究报道, 在4672例细菌标本在进行常规检验后, 总合格率为93.39%, 而5223例细菌标样本实施规范的标本的采集、运送、保存以及处理制度后, 总合格率为98.32%, 后者明显高于前者[5]。这与本研究结果相似, 同时也说明实施规范的标本的采集、运送、保存及处理制度对保证检验结果的准确性。

综上所述, 确保细菌检验的真确和可靠性, 必须对标本的采集、运送、保存以及处理方法进行有效的改善和实施, 才能提高诊断和治疗的有效率。

参考文献

[1]邓为之.浅析提高细菌检验标本合格率的有效方法[J].求医问药 (学术版) , 2013, 11 (3) :192.

[2]温娅丽, 郑红菊, 刘东华, 等.痰标本不同采集时机细菌检出率的误差分析[J].国际检验医学杂志, 2011, 32 (12) :1353-1354.

[3]陆德胜.细菌检验标本的质量分析及体会[D].中国医药导报, 2010, 7 (36) :149-150.

[4]李学群.改进痰培养标本采集方法对细菌学检验质量的影响[J].护理与康复, 2010, 9 (3) :253-254.