Cx43、ILK蛋白的表达与卵巢上皮性肿瘤生物学行为的关系

近来研究表明, 间隙连接蛋白 (connexin, Cx) 43、整合素连接激酶 (Integrin-linked, ILK) 与肿瘤的形成和发展关系密切。我们采用免疫组织化学S-P法检测正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤和卵巢癌组织中Cx43, ILK的表达。

1 临床资料

1.1 标本

收集6家医院病理科存储蜡块标本, 卵巢肿瘤标本139例, 其中良性肿瘤37例, 交界性肿瘤33例, 卵巢癌69例 (浆液性癌29例, 粘液性癌22例, 子宫内膜样癌18例) 制成5µm厚切片待检。正常卵巢标本取自22例子宫平滑肌瘤手术切除标本。

1.2 免疫组织化学染色

采用链菌素生物素-过氧化物酶法 (S-P法) , S-P试剂盒。结果判定:表达部位均在细胞浆, 以细胞浆呈清晰棕色为表达阳性。高倍镜下 (放在200倍) 随机选取4个不同视野, 计数细胞总数及阳性细胞数, 按阳性细胞所占百分比计分:阳性细胞率≤25%为1分;阳性细胞率>25%且≤50%为2分;阳性细胞率>50%且≤75%为4分。染色强弱程度计分:阴性1分;弱染色2分;中等强度染色3分;强染色4分。根据二者的乘积判断结果:≤4分为 (-) ;>4分且≤8分为 (+) ;>8分且≤12分为 (++) ;>12分且≤16分为 (+++) 。统计分析时 (-) 为阴性表达, (+) 、 (++) 和 (+++) 均为阳性表达。

1.3 结果统计分析

采用χ2检验。

2 结果

2.1 Cx43、ILK蛋白在卵巢上皮性肿瘤的表达

卵巢癌与正常卵巢组织、良性和交界性卵巢肿瘤比较, Cx43蛋白表达下降, ILK表达增强, 均有显著差异 (P<0.01) , 后三者之间无统计学意义, 见表1。

2.2 Cx43、ILK蛋白表达与卵巢癌组织学类型和病理分级的关系

Cx43蛋白表达在不同组织学类型和分化程度的卵巢癌中无显著差异 (P>0.05) ;ILK的表达中, 粘液性癌与浆液性癌和子宫内膜样癌比较有显著差异 (X=6.298, P<0.05) , 后两者之间无统计学意义。在不同分化程度的卵巢癌中, ILK表达显著差异, 见表2。

2.3 Cx43、ILK表达与卵巢癌分期的关系

69例卵巢癌中, 按FIGO标准分期且临床和病理资料完整者56例。Cx43在不同分期的卵巢癌均有表达, 而Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率 (38.7%, 12/31) 低于Ⅰ～Ⅱ期癌 (68.0%, 17/25) , 两者差异有显著意义 (X=4.757, P<0.05) 。ILK在Ⅰ～Ⅱ期癌的表达阳性率 (64.5%, 20/31) 低于Ⅲ～Ⅳ期癌 (88.0%, 22/25) , 差异显著 (X=4.073, P<0.05) 。

3 讨论

Cx43是分子量为43KD的含有378个氨基酸的单肽[1], Cx43表达减少或缺失可造成卵巢癌等多种细胞间隙连接及其连接通迅结构和功能异常, 影响细胞间传递信号和能量、调控细胞的生长、增殖分化和形态发生等内环境的稳定, 为肿瘤细胞恶性转化、增殖提供必要条件, 并与多种肿瘤的发生、发展及转移相关[2～4]。本研究结果表明, 卵巢癌Cx43蛋白表达阳性率显著低于正常卵巢、良性和交界性肿瘤 (P<0.01) 。而不同类型卵巢癌组织中Cx43蛋白阳性率无明显差异 (P>0.05) 。提示不同类型的卵巢上皮癌可能都存在Cx43蛋白下降。另外不同分期的卵巢癌中Cx43在Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率低于Ⅰ～Ⅱ期癌 (P<0.05) , 即晚期卵巢癌Cx43蛋白表达阳性率下降更显著, 由此可以推论Cx43失活不但在卵巢癌的发生中起一定作用, 而且对其发展也有一定作用。

研究发现, ILK能通过介导细胞与ECM的跨膜信号转导, 调控整合蛋白、生长因子介导的信号转导以及Wnt信号通路[5～8], 调节细胞的生长增殖、分化、调亡、粘着和侵袭[9～11]。ILK的表达和活性增加时, 细胞显示高度的侵袭表型, 表明ILK是一个癌基因。本研究结果显示, ILK在卵巢癌表达阳性率高于正常卵巢、良性和交界性肿瘤 (P<0.01) , 在粘液性癌的表达与浆液性癌和子宫内膜样癌比较, 差异显著 (P<0.05) 。由此说明ILK在不同类型卵巢癌的发生过程中所起的作用可能不同。在肿瘤的发生发展过程中, 细胞的癌变是多基因、多步骤在时间和空间上协同作用的结果。ILK的表达阳性率Ⅲ～Ⅳ期癌的表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期癌 (P<0.05) 。

通过对卵巢癌组织中Cx43、ILK蛋白表达比较, 可能在卵巢癌进展中ILK的表达的增加伴随E-cadherin表达的下降, 导致细胞-细胞间粘着的丧失和ECM相互作用的减弱, 使上皮细胞间粘附、连接抑制, 细胞易于脱落, 连接通迅不利于建立, 抑制了Cx43的表达, 使周围一些调节细胞生长、分化的信号不易于通过;而Cx43表达缺失, 细胞GJIC功能下降, 不利于Ca2+等第二信使物质通过, 使E-cadherin表达下降或缺失, 从而促使肿瘤的生长和转移, 二者协同促进了卵巢癌的进展, 这可能也是导致上述负相关的原因。在卵巢癌的发生进展过程中, Cx43和ILK是否存在类似的关系或作用, 有待进一步研究。

摘要：目的 Cx43、ILK蛋白在不同类型、不同分期的卵巢上皮性肿瘤的表达情况。方法 采用S-P法免疫组化染色观察Cx43、ILK蛋白在37例卵巢良性肿瘤、33例卵巢交界性肿瘤和69例卵巢上皮癌的表达情况。结果 在卵巢癌中Cx43蛋白表达阳性率降低;ILK表达阳性率增高。Cx43蛋白表达与组织学类型无关;而ILK在粘液性癌表达阳性率与浆液性癌和子宫内膜样癌比较, 差异显著。Cx43蛋白和ILK在不同分化程度卵巢癌中的表达无显著差异。Cx43蛋白在Ⅰ～Ⅱ期癌表达阳性率均高于Ⅲ～Ⅳ期癌, ILK在Ⅲ～Ⅳ期癌表达阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期癌。结论 Cx43表达缺失及ILK的过度在卵巢癌的发生和发展中可能都起重要作用。

关键词：卵巢肿瘤,免疫组织化学,Cx43,ILK

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