肺肿瘤临床病理分型与变异型P53关系的研究

肺癌是我国高发的恶性肿瘤之一, 其转移率和死亡率较高, 严重危害了患者的健康。P53基因是最重要的抗癌基因, 是突变率最高的抑癌基因, 其功能失活在肺癌的发生和发展过程中起着非常重要的作用[1]。相关文献报道, 约50%～60%的非小细胞肺癌和80%小细胞肺癌有P53突变[2]。为探讨P53基因与肺肿瘤临床病理分型的关系, 现对我院肺癌患者96例的肺癌组织中的P53基因表达进行检测, 报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该组患者96例, 均为我院住院的肺癌患者, 经病理学或细胞学证实为原发性支气管肺癌, 留取标本前均未进行过肺癌化疗和放疗。其中男62例, 女34例, 年龄30～82岁, 平均年龄62岁。其中腺癌30例, 鳞癌42例, 未分化癌24例, 根据1985年国际抗癌联盟 (UICC) 第四届肺癌会议对肺癌T N M分期修正标准进行T N M期。其中Ⅰ～Ⅱ期38例, Ⅲ～Ⅳ期28例。有淋巴结累及转移 (包括同侧肺门、支气管周围、对侧肺门和纵隔淋巴结等) 64例, 未转移32例。另良性肺部疾病20例, 包括慢性阻塞性肺疾病、肺结核、肺脓肿和肺间质纤维化等, 男11例, 女9例, 年龄20～75岁, 平均年龄55岁。

1.2 方法

肺癌96例患者经纤维支气管镜做支气管镜肺活检取肿瘤组织, 距肿瘤约1.5cm处支气管肺组织 (癌旁组织) 和良性肺疾病20例, 取病变较重的一侧支气管肺活检。标本均做P53基因检测、病理检查。PCR-SSCP检测P53基因第5～8外显子, E5、E6、E7、E8, 引物由上海夏华生物公司合成, 操作步骤按说明书进行, 预变性95℃2min后, 按95℃40s, 63℃45s, 72℃30s延伸72℃5min, 参数循环35个周期, PCR扩增产物4℃保存。反应完成后, 取5μL反应液用1.5%的琼脂糖电泳观察PCR产物的扩增情况, 如在预期位置有清晰的扩增带, 则可进行下一步的SSCP电泳。若扩增带很弱或无带, 则采用巢式PCR, 每次均设置阴性对照。

1.3 结果判定统计学处理

每次电泳都以正常肺组织扩增产物作对照, 出现条带的增多、减少或位置的变动, 即判定该样品存在P53基因突变, 为阳性。用SPSS 11.0统计软件。记数资料采用均数±标准差表示, 组间计量资料采用t检验, 计数资料比较用χ2检验, P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

(1) 肺癌组织和良性P53基因突变检出率比较。肺癌组织P53基因的检出率为47.9% (46/96) , 高于癌旁组织16.7% (16/96) , 也高于良性肺疾病支气管肺组织的5% (1/20) , 差异有极显著性, χ2=23.65, 36.58, P<0.01。E5突变为24例次, E5突变为13例次, E7突变为8例次, E8突变为14例次, 其中有3例, 检测出有外显子突变。 (2) 2组患者P53基因肿瘤细胞阳性率、联合检出率。肺癌患者癌组织活检标本中肺癌组织P53基因的检出率为47.9% (46/96) , 肿瘤细胞的阳性率为81.3% (78/96) , 联合检出率为87.5% (84/96) ;良性肺疾病三者的检出率为5% (1/20) , 0% (0/20) , 5% (1/20) , 差异有极显著性, χ2=31.97, 14.57, 27.54, P<0.01。 (3) 肺癌临床分期与P53基因突变的关系。肺癌Ⅰ～Ⅱ患者与Ⅲ～Ⅳ患者的P53基因点突变, 差异极显著性, P<0.01, 见表1。

3 讨论

肺癌是世界上最长见的恶性肿瘤之一, 虽然当今科学医疗技术有了突飞猛进的发展, 但是肺癌的早期诊断、复发和转移的早期发现仍然是当前临床工作面临的难题。P53基因是最重要的抗癌基因, 肺癌的P53基因突变率居人类各肿瘤之首。国内外关于P53基因与肺癌临床分期的关系已有很多报道, 但结果不一致, 大多数的研究结果认为如果检测出P53蛋白蓄积预示着肺癌患者肿瘤侵袭力强, 预后差[3]。本文结果表明P53基因在肺癌组织中的表达高于正常组织, P<0.01, 且该基因的表达与肺癌的临床分期有密切的关系, 肺癌Ⅲ～Ⅳ患者比Ⅰ～Ⅱ患者P53基因点突变要高, 差异极显著性, P<0.01。因此, P53基因突变在肺癌中发生率较高, 可成为肺癌的血清标志物, 且P53抗体多数属于IgG, 少数属于IgM, 其理化性质非常稳定, 能够在-80℃长期保存, 对抗体活性无影响。良好的稳定性, 其取材方便, 有利于术后动态监测, 具有一定的临床价值, 有广泛的临床应用前景[3]。检测P53基因突变有利于判定肺癌的临床分期。

摘要：目的 检测P53基因在肺癌组织中的表达, 探讨其与肺肿瘤临床病理分型的关系。方法 应用聚合酶链反应-单链多肽性-银染法检测 (PCR-SSCP) 检测在我院2007年6月至2008年6月住院接受治疗的肺癌患者96例的肺癌组织中的P53基因表达。用同样的方法检测20例良性肺部疾病的患者以作对照。结果 在98例肺癌患者中P53的检出率为47.9% (46/96) , 与良性疾病患者的检出率5% (1/20) 差异有显著性, P<0.01, 且P53基因的表达与临床分期有关。结论 P53基因突变在肺癌中发生率较高, 可成为肺癌的血清标志物, 检测P53基因突变有利于判定肺癌的临床分期。

关键词：肺癌,P53基因,临床分型,突变

参考文献

[1] 苏春康, 李晓莉.血清及胸水P53抗体检测对肺癌的临床诊断意义[J].保健医学研究与实践, 2010, 7 (1) :35～37.

[2] 陈余清, 蔡映云, 刘黎.肺癌患者肺组织和痰标本P53基因突变检测及其临床意义[J].中华结核和呼吸杂志, 2002, 25 (11) :667～669.

[3] 王剑, 高大庆, 傅翠梅.肺癌P53基因突变检测及临床意义[J].肺瘤研究与临床, 2000, 12 (1) :6～7.