非小细胞肺癌组织磷酸化蛋白p27和钙网蛋白的水平研究

2022-12-29

目前, 肺癌的新发病和死亡人数均逐年增加, 已成为我国常见的恶性肿瘤。非小细胞肺癌是肺癌中的常见类型, 其包括鳞癌、腺癌及大细胞肺癌等, 深入了解非小细胞肺癌的发病机制具有重要的意义[1,2]。多项研究指出, 磷酸化蛋白p27和钙网蛋白 (CRT) 对肿瘤的发生发展及生物学行为的维持具有重要的意义[3,4], 但两者在非小细胞肺癌组织中的研究较少, 为探讨非小细胞肺癌组织磷酸化蛋白p27和钙网蛋白 (CRT) 的水平及其临床意义, 该研究2010年2月—2012年2月采用免疫印迹法 (Western blot) 检测癌组织中两者的蛋白水平及其与临床病理学参数的关系。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取新鲜或采用液氮储存的非小细胞肺癌组织标本72例及其对应的癌旁正常组织, 其中男39例, 女33例, 年龄范围为33~74岁, 平均年龄为 (57.2±12.7) 岁, ≤60岁者34例, >60岁者38例;腺癌44例, 鳞癌28例;高分化17例, 中分化31例, 低分化2 4例;Ⅰ期28例, Ⅱ期17例, Ⅲ期27例;无区域性淋巴结转移43例, 有区域性淋巴结转移29例;22例有吸烟史, 50例无吸烟史。

1.2 方法

将非小细胞肺癌组织及其对应正常癌旁组织 (距离癌组织5 cm) 置于冰上, 加入预冷的蛋白裂解液, 充分匀浆后, 12 0 0 0 r/min离心5 min, 收集上清液, 采用卡马斯亮蓝法进行蛋白定量, 充分混合等体积的上清液与上样缓冲液, 经SDS-PAGE电泳后, 采用半干转法进行转膜, 5%的脱脂奶粉封闭1 h, 分别以p27 (1∶50 0) 和CRT (1∶2 0 0) 的鼠抗人一抗孵育 (4℃过夜) , 采用T B S T充分洗膜3次 (5 m in/次) , 加入兔抗鼠二抗 (1∶5 0 0 0) , 室温1 h, 行ECL法曝光及胶片显影, 内参为GAPDH, 采用image pro plus 6.0软件分析光密度。最终结果表示为与GA PDH条带的光密度比值。

1.3 评价指标

分析非小细胞肺癌组织及对应癌旁正常组织的p2 7和CRT蛋白水平, 非小细胞肺癌组织中两者的相关性及与不同临床病理特征 (性别、年龄、吸烟、病理类型、TNM分期和淋巴结) 的关系。

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0软件进行统计学分析, 蛋白水平以“平均数±标准差”的表示并行t检验, 采用Person相关检验分析两者的相关性, 检验水准a=0.05。

2 结果

2.1 两组的p27和CRT的水平比较

非小细胞肺癌组织中的p27低于癌旁正常组织, 而CRT水平却高于癌旁正常组织, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 见表1、图1。

注:与癌旁正常组织比较:aP<0.05。

A:癌旁正常组织;B:癌组织

2.2 非小细胞肺癌组织中两蛋白水平与临床病理参数的关系

两蛋白在不同T NM分期及淋巴结转移情况上的分布差异有统计学意义 (P<0.05) , 且ⅢA (TNM分期) 和有淋巴结转移的p27水平较低, 而CRT水平较高。

2.3 两蛋白水平的相关性

非小细胞肺癌组织中p27和CRT蛋白水平呈负相关 (r=-0.663, P<0.05) 。

注:与对应项比较:aP<0.05。

3 讨论

p27是一种蛋白激酶抑制因子, 具有负性调节细胞周期的作用, 可抑制细胞的增殖, 在肿瘤的发生发展中起作用[3]。p27可与调节细胞周期的Cyclin E结合, 抑制Cyclin E/CDK2复合体的活性, 阻止细胞由G1期进入S期, 进一步达到抑制细胞生长的效果[5]。CRT是细胞内常见的Ca2+结合蛋白, 主要存在于内质网和肌浆网中, 该蛋白的主要生理作用为调节肿瘤抗原的呈递, 通过增强肿瘤细胞对放射的敏感性, 抑制肿瘤细胞的生长[6]。以上两蛋白在肿瘤细胞的发生发展中起重要作用, 因此研究非小细胞肺癌组织中两蛋白的水平具有重要意义。

该研究发现:非小细胞肺癌组织中p 2 7的水平较低, C R T水平较高, 与癌旁正常组织相比差异有统计学意义 (P<0.05) , 提示非小细胞肺癌组织中两指标异常表达, 可能在非小细胞肺癌的发生发展中意义重大。主要原因为p27为抑癌基因, 可抑制肿瘤的发展及生物学行为的发挥, 因此肿瘤组织中其水平为低表达, 减弱其对肿瘤生长的限制。CRT本身具有抑制血管生成, 干扰肿瘤生长的效果, 但非小细胞肺癌组织中其表达水平却较高, 可能为机体的代偿反应, 进一步通过促进免疫来达到杀伤肿瘤细胞的效果。进一步分析得出两者在不同TNM分期及淋巴结转移情况上的分布有差异, 提示两者的分布与肺癌的临床病理学特征有关, 因此提示两者可用于病情评估。

综上所述, 非小细胞肺癌中p2 7水平较低, CRT水平较高, 且与TNM分期及淋巴结转移有关, 有可能成为非小细胞肺癌诊断、治疗及预后预测的重要指标。

摘要：目的探讨非小细胞肺癌组织磷酸化蛋白p27和钙网蛋白 (CRT) 的水平及其临床意义。方法采用免疫印迹法 (Western blot) 检测72例非小细胞肺癌组织及对应癌旁正常组织的p27和CRT蛋白水平, 分析其蛋白水平与临床病理特征的关系。结果非小细胞肺癌组织中p27水平低于癌旁正常组织, 而CRT水平却高于癌旁正常组织 (P<0.05) , 两种蛋白在不同TNM分期及淋巴结转移情况上的分布差异有统计学意义 (P<0.05) , 且ⅢA (TNM分期) 和有淋巴结转移的p27水平较低, 而CRT水平较高, 且总体上p27和CRT的蛋白水平呈负相关 (r=-0.663, P<0.05) 。结论非小细胞肺癌中p27水平较低, CRT水平较高, 且与TNM分期及淋巴结转移有关。

关键词：非小细胞肺癌,肺癌组织磷酸化蛋白,钙网蛋白,临床意义