反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量（共9篇）

篇1：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

游离棉酚是棉籽中的.一种有毒化学物质.棉籽饼广泛用作动物饲养中的蛋白质补充剂,会间接导致人中毒.目前对棉酚的检测,主要是采用高效液相色谱法[1～3]、紫外分光光度法[4]检测棉籽[5]、植物油中游离棉酚[6]和总棉酚含量[7].本文采用C18柱和二极管阵列检测器,建立了测定肉样中游离棉酚的高效液相色谱方法.

作 者：崔晓明 解成喜 张丽静 靳智 作者单位：崔晓明,解成喜,张丽静(新疆大学理化测试中心,新疆,乌鲁木齐,830046)

靳智(新疆产品质量检验所,新疆,乌鲁木齐,830000)

刊 名：色谱 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY年，卷(期)：22(5)分类号：O658关键词：反相高效液相色谱法 游离棉酚 肉制品

篇2：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

关键词：塞来昔布片,高效液相色谱法,测定

塞来昔布是一种新一代的化合物, 具有独特的作用机制即特异性地抑制环氧化酶-2 (COX-2) [1,2,3,4,5,6]。塞来昔布常用于缓解骨关节炎的症状和体征、缓解成人类风湿关节炎的症状和体征、治疗成人急性疼痛、缓解强直性脊柱炎的症状和体征[7,8,9,10,11]。本文采用高效液相法对塞来昔布片中的塞来昔布的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器:

安捷伦1100高效液相色谱仪、安捷伦色谱工作站、安捷伦1100可变波长检测器、瑞士梅特勒-托利多MS精密天平 (梅特勒-托利多中国公司) 、PS3200超声波震荡器清洗机 (普洛帝中国服务中心) 、C1450-230V微型高速离心机 (北京晨曦勇创科技有限公司) 、EPED-E-EDI系列超纯水机 (南京易普易达科技发展有限公司) 、p HS-2C型精密酸度计 (上海精科雷磁厂) 、TU-1901双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) 、XSYF-D实验室废水处理设备 (北京湘顺源科技有限公司) 、德国优莱博TW20通用水浴槽 (上海沃珑仪器有限公司) 。

1.2 色谱柱:

安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 (218 mm×4.6mm, 5μm) 。

1.3 对照品:

塞来昔布。

1.4 试剂:

甲醇 (上海一基生物科技有限公司) 、乙腈 (北京精华耀邦医药科技有限公司) 、冰乙酸、三乙胺 (上海倍卓生物科技有限公司) 、磷酸二氢钾 (北京精华耀邦医药科技有限公司) 、磷酸 (上海倍卓生物科技有限公司) 、醋酸 (上海倍卓生物科技有限公司) 、盐酸 (北京精华耀邦医药科技有限公司) 。

1.5 试药:

塞来昔布片。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件。

依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下[12,13,14,15]。流动相:乙腈-水 (70:30) 为流动相, 检测波长:254nm, 流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按塞来昔布峰计算应不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备。

精密称取塞来昔布对照品适量, 置容量瓶中, 加甲醇制成每1m L含0.1mg的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液的制备。

取塞来昔布片, 研细, 精密称取 (相当于塞来昔布30mg) , 置圆底烧瓶, 加入80毫升甲醇, 回流提取半小时, 放冷, 过滤, 将滤液定容至100毫升。

2.4 专属性试验。

依照处方取除塞来昔布, 按样品制备工艺制成阴性对照样品, 研细, 精密称取 (相当于塞来昔布30mg) , 置圆底烧瓶, 加入80毫升甲醇, 回流提取半小时, 放冷, 过滤, 将滤液定容至100毫升, 依上述方法测定, 结果阴性试验没有干扰, 表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验。

精密称取塞来昔布对照品适量, 加甲醇使溶解, 制成浓度为0.2mg·m L-1的供试品溶液。照上述色谱条件, 精密吸取10μl, 连续进样6次, 记录峰面积。结果, RSD=0.95%, 表明本方法精密度良好。

2.6 对照品的线性考察。

精密称取塞来昔布对照品10.0mg, 置10ml容量瓶中, 加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 分别精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0m L, 置于5m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL, 注人液相色谱仪, 依照2.1项下的色谱条件测定, 记录色谱峰。以峰面积 (Y) 为纵坐标, 对照品进样量 (X) 为横坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。结果表明, 塞来昔布在0.04~0.5mg·m L-1范围内呈良好的线性关系。

2.7 重现性试验。

称取同一批的塞来昔布片样品6份, 按测定方法项下的方法制备供试品溶液, 测定含量, 并计算样品的RSD值, 结果RSD为0.95%, 结果表明此方法的重现性良好。

2.8 准确度试验。

精密称取已知含量的样品6份, 分别加入一定量的塞来昔布对照品, 上述方法进行测定, 计算回收率, 平均回收率分别为99.5%, RSD为0.88%。

2.9 样品稳定性试验。

取同一批塞来昔布片样品, 按2.3项下的供试品制备方法制备供试品, 将供试品置室温下放置, 分别于第0、1、2、3、4、5、8小时, 精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中, 记录色谱图。测定塞来昔布片中塞来昔布的RSD=0.89%。结果表明供试品8小时内稳定。

3 讨论

篇3：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

【关键词】RP-HPLC；牛黄上清胶囊；胆红素含量

牛黄上清丸是中医治疗湿热证的经典方剂之一，首载于明代李梃的《医学入门》，具有清热泻火、散风止痛之功效。可用于热毒内盛、风火上攻所致的头痛眩晕、咽喉肿痛、目赤耳鸣、口舌生疮等症[1]。

根据90版的《中国药典》所载牛黄上清丸剂，经改造所成的一个中药新药制剂——牛黄上清胶囊。其处方由牛黄、菊花等19味常用的中药材所组成，处方中的君药为人工牛黄，其主要有效成分主要为胆红素[2-3]。现在，对胆红素的含量测定方法主要有：紫外分光光度法、RP-HPLC和HPLC等。本研究对牛黄上清胶囊中所含的胆红素进行了含量测定，运用的方法为反相高效液相色谱法，以期为牛黄上清胶囊提供反相高效液相色谱法的质量控制标准。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪：Agilent1200泵。色谱柱：Hypersil BDS C18。

1.2试药牛黄上清胶囊（市售）；胆红素（批号：10077-200503，中国药品生物制品检定所提供）；研究中所用的水为超纯水，乙腈为色谱纯，各试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱使用Hypersil BDS C18柱（4.6mm ×250mm，5μm）；流动相为：二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液；流速为：1.0 ml·min-1；检测波长为：450nm。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液制备将胆红素对照品经过五氧化二磷干燥至恒重后，精密称取，置于100ml棕色量瓶中，加入二甲基亚砜-乙腈（7：3）溶液使其完全溶解，并将其稀释至刻度，摇匀后，制备成每1ml溶液含有胆红素40μg，即得。

2.2.2供试品溶液制备精密称取市售牛黄上清胶囊内容物0.3g，置于25ml的棕色量瓶中，加入二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液20ml，精密称定其重量，经超声处理10min后放冷，再次称定重量，用二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液补足其失重，摇匀后过滤，取滤液备用，即为供试品溶液。

2.2.3阴性样品溶液的制备量取牛黄上清胶囊的阴性对照品，制备方法参照供试品溶液方法来制备阴性样品溶液。

2.3线性范围考察精密量取对照品溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0和25.0ml，分别置于25ml棕色量瓶中，加入二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液稀释至刻度，摇匀后，即可获得6个浓度的对照品溶液。各浓度分别精密吸取10μl的溶液注入高效液相色谱仪中，依据正文中所述的条件测定峰面积，其中纵坐标表示峰面积积分值（A），横坐标表示进样浓度（C），做出标准曲线，其回归方程为A=6436422C-10755，r=0.9999。结果显示，胆红素在1.6μg/ml-40μg/ml之间浓度时呈现出良好的线性关系。

2.4专属性考察观察供试品溶液的反相高效液相色谱图，其胆红素峰的峰型对称、分离度好（计算得其理论塔板数为6971，对称因子为1.03，分离度为R=8.73）。

2.5精密度试验量取上文给出取线性条件下的4号对照品溶液，连续进样6次，根据文中色谱条件进行测定，结果显示RSD为0.87%。

2.6稳定性实验取市售牛黄上清胶囊内容物依法制备成供试品溶液，于室温下放置，分别在0，1，2，4，6小时时依法进行测定，每次进样10μl，记录峰面积。其峰面积峰RSD=0.79%，表明供试品溶液在6h内稳定。

2.7回收率实验采用加样回收的方法，取已知含量的牛黄上清胶囊（胆红素含量为3.012mg/g）内容物适量，大约为0.15g，之后再进行精密称定，记录数据后放置于棕色量瓶中，精密加入胆红素的对照品溶液10ml，之后再精密加入二甲基亚砜-乙腈（13.5：6.5）溶液10ml，同样的方法制备6分，依法测定，计算回收率，其平均回收率为98.94%，RSD=0.573%。

2.8含量测定取本次所购市售的牛黄上清胶囊，依照上述方法进行含量测定，测定6次，其平均胆红素含量为0.728mg/粒。

3讨论

人工牛黄为牛黄上清胶囊中的主要药物，而胆红素则是牛黄具有抗炎、解热和抗感染的主要有效成分之一，但由于牛黄上清胶囊质量标准中没有对胆红素进行相关的质量控制，且目前研究相对较少[4-6]，造成制剂中所投入的人工牛黄质量得不到行之有效的控制，制剂的疗效自然无法保证。

本研究选用反相高效液相色谱法来测定胆红素的含量，选用“Hypersil BDS C18色谱柱（4.6mm ×250mm，10μm）；二甲基亚砜-乙腈（7：3）作为流动相；452nm的检测波长；1.0 ml·min-1的流速”作为色谱，其选择性高、定量准确、快速、稳定性强，可作为其质量控制的有效方法。

注意在实验过程中应尽可能避光进行操作，以期能够减少因胆红素不稳定引起的实验误差。

参考文献

[1]心知.牛黄上清丸[J].家庭中医药，2012，10（10）：35.

[2]张培鸿，严智慧.陕西省人工培植牛黄的鉴定与主要化学成分分析[J].西北药学杂志，1987，2（4）：22-24.

[3]劉亚蓉，刘海青，吕东.中成药中药牛黄与人工牛黄的薄层鉴别[J].西北药学杂志，1995，10（6）：252-253.

[4]方建国，王文清，蒋平，等.反相高效液相色谱法测定体外培育牛黄中胆红素的含量[J].医药导报，2006，25（7）：694-695.

[5]杜晓曦，阳长明.从牛黄的检测谈中成药质量标准的研究[J].中药新药与临床药理，2004，15（1）：64-65.

篇4：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

1 仪器与试药

岛津LC-10AD高效液相色谱仪;LC-10A紫外检测器;N2000色谱工作站;TU-1810型紫外可见分光光度计,梅特勒-托利多AE 240双量程电子分析天平。

大黄酚对照品(批号:110796-200309,中国药品生物制品检定所);润肠片(批号:20060921、20061204、20070405),缺决明子和大黄的润肠片阴性样品均由我院提供。甲醇(色谱纯,天津科密欧化工有限公司)、磷酸(分析纯)、水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Kromasal ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm);检测波长:254 nm;甲醇-0.1%磷酸(85∶15)为流动相;进样量:20μl;流速:1 ml/min;柱温:20℃;理论塔板数:按大黄酚峰计算应不低于3 000。在上述条件下,大黄酚分离良好,空白无干扰。结果见图1。

2.2 对照品溶液制备

精密称取大黄酚对照品适量,加甲醇制成每毫升含大黄酚8μg的溶液,作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取本品20片,除去包衣,研细,取粉末约3.0 g,精密称定,置50 ml锥形瓶中,精密加甲醇25 ml,称定重量,加热回流30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液5 ml,置100 ml圆底烧瓶中,挥干甲醇,残渣加2.5 mol/L硫酸溶液20 ml,超声溶解,置水浴中加热回流1 h,冷却,用乙醚萃取4次,每次25 ml,合并乙醚液,并用水洗涤乙醚液至中性,弃去水液,低温挥干溶剂,残渣用甲醇转移至25 ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。

2.4 阴性对照品溶液制备

原处方比例缺大黄和决明子,按照制备工艺方法制备空白制剂。再按供试品溶液的制备方法制备缺大黄和决明子的阴性对照品溶液。依含量测定法处理和分析,空白样品色谱在大黄酚峰相应保留时间没有干扰峰。

2.5 线性关系考察

精密吸取大黄酚对照品溶液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、3.0 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,制成每毫升含大黄酚1.6、4.8、8.0、11.2、14.4、24.0μg的对照品溶液。精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪中,以对照品浓度(X)为横坐标,色谱峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,进行线性回归,得回归方程:Y=34 015X-19 451(r=0.999 7)。结果表明,大黄酚在1.6~24.0μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密量取“2.3供试品溶液制备”项下供试品溶液10μl,重复进样6次,测定大黄酚色谱峰峰面积,结果平均峰面积为1 277.62,RSD=0.33%,结果表明,精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一样品(批号:20070405),按“2.3供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取10μl,连续进样6次,测定大黄酚色谱峰面积,计算RSD。大黄酚的平均含量为0.306 5 mg/片,RSD=1.40%,结果表明,该法重复性良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取“2.3供试品溶液制备”项下供试品溶液10μl,分别于制备后0、2、4、6、8 h进样,测定大黄酚色谱峰面积,计算RSD。RSD=0.33%,表明供试品溶液放置8 h内基本稳定。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的润肠片样品(批号:20070405,0.774 8 mg/g)6份,精密称定。分别加入与样品中大黄酚量近相等的大黄酚对照品,按“2.3供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液,精密吸取上述样品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定大黄酚色谱峰峰面积,计算RSD。结果见表1。平均回收率为97.90%,RSD=1.40%,结果表明,该法回收率良好。

2.1 0 样品含量测定

取不同批号润肠片样品,研细,按供试品溶液制备方法处理,在上述色谱条件下分析,计算含量结果见表2。

3 讨论

由于决明子和大黄均含有大黄酚,故测定的大黄酚含量是两者总大黄酚的量。

试验曾比较过流动相的三种配比,甲醇-0.1%磷酸(8317)、甲醇-0.1%磷酸(85∶15)、甲醇-0.1%磷酸(87∶13),结果以甲醇-0.1%磷酸(85∶15)最好。

本文建立了采用HPLC法测定润肠片中大黄酚含量的测定方法,方法简便、快速、准确,重现性好,可以为润肠片的质量标准提供依据。

摘要：目的:建立润肠片中大黄酚的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasal ODSC18(250mm×4.6mm,5μm);检测波长:254nm;流动相为甲醇∶0.1%磷酸(85∶15)。进样量:20μl;流速:1ml/min;柱温:20℃。结果:大黄酚在1.6～24.0μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9997,平均加样回收率为97.90%。结论:本方法简便、准确,可用于润肠片的质量控制。

关键词：润肠片,大黄酚,高效液相色谱法,含量测定

参考文献

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:化学工业出版社,2005.

[2]焦正花.RP-HPLC法测定活血祛瘀糖浆中阿魏酸的含量[J].中药新药与临床药理,2003,14(60):194.

[3]张玉臣,刘学东,王永平,等.HPLC法测定大黄通便颗粒中大黄素和大黄酚的含量[J].中国药事,2005,3(19):30-31.

[4]孙业成.HPLC法测定牛黄清火丸中大黄素和大黄酚的含量[J].中国药师,2007,9(10):873.

[5]李亚荣,王舒.高效液相色谱法连翘败毒丸大黄素大黄酚含量测定[J].中国中医药杂志,2007,5(11):25.

[6]刘健豪,雷鹏.HPLC法测定十滴水中大黄酚的含量[J].中医药导报,2008,(4):74-74.

[7]卢仁宣,梁佐力,农克文,等.HPLC法测定胆乐片中大黄素和大黄酚含量[J].中成药,2009,2(31):328.

[8]魏尊喜.HPLC测定熊胆丸中大黄素、大黄酚的含量[J].中成药,2007,9(29):5.

篇5：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

磷酸二氢钾等量混合溶液（用质量分数为10%的磷酸调节pH值至2.8）（21∶79），检测波长为260 nm，

柱温为30 ℃，流速为1 mL·min-1。结果：士的宁进样量在13.60～68.00 μg·mL-1范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r = 0.999 9），平均加样回收率97.08%，RSD为1.63%（n = 6）；马钱子碱进样量在10.92～54.60 μg·mL-1范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r = 0.999 9），平均加样回收率为96.78%，RSD为1.80%（n = 6）。结论：该方法准确、重复性好、灵敏度高，可用于桂枝马钱片的质量控制。

【关键词】 桂枝马钱片；士的宁；马钱子碱；反相高效液相色谱法

Determination of the Contents of Strychnine and Brucine in Guizhi Maqian Tablets（桂枝马钱片）

with RP-HPLC

LOU Yu-xia

【ABSTRACT】Objective：To determinate the contents of strychnine and Brucine in Guizhi Maqian Tablets

（桂枝马钱片）with RP-HPLC（reversed phase high-performance liquid chromatography）.Methods：The chromatographic

column was Hypsil Gold C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）.The mobile phase was the balanced mix of acetonitrile-sodium heptanesulfonate（0.01 mol·L-1）and potassium dihydrogen phosphate（0.02 mol·L-1）（Phosphoric acid with 10% mass fraction was used to adjust the pH value to 2.8）（21∶79）.The detection wavelength was 260 nm，the column temperature was 30℃，and the flow rate was 1 mL·min-1.Results：The sample size of strychnine within 13.60～68.00 μg·mL-1 showed a good linear relationship（r = 0.999 9） with its peak area.The average recovery rate was 97.08% and the RSD was 1.63%（n = 6）.The sample size of brucine within 10.92～54.60 μg·mL-1 showed a good linear relationship（r = 0.999 9）with its peak area.The average recovery was 96.78% and the RSD was 1.80%（n = 6）.Conclusion：The method，with accuracy，good repeatability and high sensitivity，can be used for quality control of Guizhi Maqian Tablets.

【Keywords】 Guizhi Maqian Tablets（桂枝马钱片）；strychnine；brucine；RP-HPLC

桂枝马钱片是河南风湿病医院娄多峰教授的经验方，由桂枝、赤芍、制马钱子、甘草、生姜、大枣等药物组成，具有温经活血、通络止痛的作用，适用于类风湿关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、肩周炎、腰椎间盘突出症等疑难风湿病出现顽固疼痛者。制马钱子是处方中的主要药物，但有较大毒性，过量使用会引发严重的神经系统不良反应，如惊厥、抽搐、昏迷等。制马钱子所含的化学成分士的宁和马钱子碱既是有效成分，同时也是毒性成分，用量一定要精准。本研究在参考《中国药典》（2015版，

一部）[1]和相关文献[2-5]的基础上，针对桂枝马钱片中士的宁和马钱子碱2种成分，运用RP-HPLC法同时测定其含量，进而可以更好地控制其质量，为该药应用于临床时的安全性和有效性提供保障。

1 材 料

1.1 仪 器 2695型高效液相色谱仪（美国Waters，Empower工作站，2696 PAD检测器）；Mettler AE 240 电子天平（瑞士梅特勒公司）；SB-5200DT型超声波清洗器（宁波新芝有限公司）。

1.2 药品与试剂 桂枝马钱片（河南风湿病医院自制，生产批号140601、140602、140603，规格每片0.3 g）；对照品士的宁和马钱子碱（中国食品药品检定研究院，批号分别为110705-200306，含量97.0%；110706-200505，含量95.9%）；试验用甲醇、乙腈是色谱级；其余试剂是分析级；水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypsil Gold填料的ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美国热电）。流动相：乙腈- 0.01 mol·L-1庚烷磺酸钠与 0.02 mol·L-1磷酸二氢钾等量混合溶液 （用质量分数为10%的磷酸调节pH至2.8）（21∶79）。检测波长：260 nm。流速：1 mL·min-1。色谱柱温：30 ℃。进样量：10 μL。

nlc202309090143

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取马钱子碱5.46 mg、士的宁6.80 mg，放入50 mL的容量瓶内，加入三氯甲烷轻轻摇动使其溶解；再用三氯甲烷加到刻度线，摇匀作为对照品储备液。精确量取以上储备液3 mL，放入10 mL量瓶内，用甲醇定容，摇匀，即得對照品混合液（每毫升含有士的宁40.80 μg和马钱子碱32.76 μg）。

2.2.2 供试品溶液 取桂枝马钱片20片，充分研细，混匀，称取2 g，精确称定；置磨口锥形瓶中，加氢氧化钠试液5 mL，摇匀，放置30 min；加三氯甲烷25 mL，放置天平上称重；在水浴锅内加热回流2 h，取出后放冷到与室温相同；用三氯甲烷回补到起始重量，摇匀；在玻璃漏斗上铺少量的无水硫酸钠，过滤，不要初滤液；精确量取后面的滤液5 mL，放入10 mL的容量瓶内；加甲醇到刻度线，轻轻摇动，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取后续滤液即可。

2.2.3 空白溶液 依照桂枝马钱片的处方加工工艺，制成空白样品（缺少制马钱子），并按2.2.2项

下方法制成空白对照溶液。

2.3 空白样品干扰试验（专属性试验） 精确吸取按2.2项下方法制备的3种溶液各10 μL，按所选定的色谱条件测定，液相色谱图见图1。结果显示，分离度 > 1.5，理论塔板数按成分士的宁的峰进行计算不低于5000，空白溶液在化学对照品峰相同保留时间处没有出现色谱峰，表明方中其他中药材和辅料对目标成分的测定没有干扰。

2.4 线性关系考察 精密吸取上述对照品储备液1，2，3，4，5 mL，分别放置于5只10 mL容量瓶内，加甲醇到刻度线，轻轻摇动，即可。精密吸取上述5种溶液10 μL，进样，绘制标准曲线（横坐标：对照品进样溶液浓度。纵坐标：与不同浓度相对应的峰面积）。得出2种成分的回归方程分别为：士的宁Y = 139 70 X + 120 85（r = 0.999 9），马钱子Y = 18 220 X + 9287（r = 0.999 9）。结果表明士的宁进样浓度在13.60～68.00 μg·mL-1、马钱子碱进样浓度在10.92～54.60 μg·mL-1范围内与相应的峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度考察 取桂枝马钱片样品，制备成供试品溶液，精密吸取10 μL，按选定的色谱条件连续进样6次。结果2种成分峰面积的RSD（n = 6），士的宁为1.7%，马钱子碱为1.9%，证明本研究所用仪器有良好的精密度。

2.6 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别在制好后第0， 2，4，8，10，12小时，按所选定的色谱条件进行测定。结果2种成分峰面积的RSD

（n = 6），士的宁为1.5%，马钱子碱为1.5%，说明供试品溶液制备后12 h 内稳定。

2.7 重复性试验 取桂枝马钱片（生产批号140602）20片，研成细粉，平行取6份，每份约2 g，精确称定后，制成供试品溶液。按本研究确定的色谱条件测定，并进行含量的计算。结果2种成分含量的RSD（n = 6），士的宁为0.87%，马钱子碱为2.21%，证明本研究有良好的重复性。

2.8 样品中成分的含量测定 取3个不同批次的桂枝马钱片，按照上述方法制备成供试品溶液。在已选定的色谱条件下进样测定。每片含量计算，结果见表1。

2.9 加样回收率试验 取桂枝马钱片细粉（生产批号140602，含士的宁0.779 mg·g-1，马钱子碱

0.965 mg·g-1）6份，每份约3.5 g，精确称重后，分别置磨口锥形瓶中；每瓶中准确加入一定量的2种对照品，按2.2.2项下方法制备所需溶液；按选定的色谱条件，各吸取6 μL，进样测定，计算加样回收率。结果见表2。

根据制备工艺中制马钱子的加入量进行理论值推算，并参考本实验结果，暂定每片桂枝马钱片中制马钱子以士的宁（C21H22N2O2）计应在0.18～0.35 mg范围

内，以马钱子碱（C23H26N2O4）计应不少于0.20 mg。

3 讨 论

3.1 测定波长的选择 根据士的宁和马钱子成分峰的PAD吸收光谱，并参照《中国药典》（2015版，一部）马钱子项下规定的含量测定方法，选定260 nm

作为本研究色谱方法的检测波长。

3.2 流动相的选择 参照《中国药典》（2015版，一部）方法，采用乙腈- 0.01 mol·L-1庚烷磺酸钠与0.02 mol·L-1磷酸二氢钾等量混合溶液（用质量分数为10%的磷酸调节pH至2.8）系统为流动相。经过试验，当两者比例达到21∶79时，能满足系统适应性试验的要求。

3.3 提取方法的考察 在参考药典的基础上，取样品，加氢氧化钠试液放置，用氯仿回流提取制备供试液，进样测定；同时，曾采用将样品以石油醚脱脂后同法处理，进样测定，结果两者色谱图基本一致。表明没有脱脂预处理样品的必要，可能是因为本品处方较精简，干扰成分较少之故。

4 参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典（2015版）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：50.

[2]那微，张清波，张淑华，等.HPLC法测定骨筋丸系列品种中马钱子碱和士的宁[J].中成药，2012，34（4）：759-762.

[3]余良忠，文萍，刘丹，等.颈腰康片质量标准研究[J].中成药，2009，31（11）：1803-1804.

[4]陈大全，李小安，王昌利，等.反相离子对高效液相色谱法测定风痛宁胶囊中士的宁和马钱子碱含

量[J].中成药，2006，28（10）：1540-1542.

[5]梁晓东，唐迎雪，王加锋，等.HPLC测定马钱子配伍生地黄前后马钱子碱和士的宁的含量[J].中药材，2012，35（1）：79-82.

收稿日期：2016-06-15；修回日期：2016-08-10

篇6：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

1 仪器与试药

ULABO实验室温度控制器 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ; ver-tex高效液相色谱仪 (上海禾工科学仪器有限公司) ;PL ELS2100蒸发光散射检器 (江苏汉邦科技有限公司) ;JΜLABO TW系列通用水浴槽 (优莱博技术 (北京) 有限公司) ;上海仪电科仪L系列紫外可见分光光度计 (上海仪电科学仪器股份有限公司) ;奥豪斯Explorer专业型分析天平 (奥豪斯仪器上海有限公司) ;PI5100台式p H浓度计 (安莱立思仪器科技 (上海) 有限公司) ;SCQ-25-6声彦分体式超声波清洗机 (上海声彦超声波仪器有限公司) ;ELGA超纯水器 (上海澜锐仪器科技有限公司) 。硫酸小诺霉素对照品 (中国药品生物制品检定所提供) 。三氯醋酸 (北京振翔科技有限公司) 、甲醇 (烟台鑫康商贸有限公司) 、乙腈 (西格玛奥德里奇 (上海) 贸易有限公司) 、磷酸二氢铵 (上海一基生物试剂有限公司) 、冰醋酸 (安庆市万盛精细化工有限责任公司) 、三乙胺 (上海一基生物试剂有限公司) 。

2 含量测定

2.1色谱条件。色谱柱为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱 (规格4.6mm×250mm, 5μm) ;0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 为流动相;流速1.0m L·min-1;柱温:30℃[1,2,3,4,5,6]。

2.2供试品溶液的制备。精密量取硫酸小诺霉素样品适量置50m L量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理5分钟, 放置至室温, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45μm) 滤过, 即得。

2.3 对照品溶液的制备。精密称取硫酸小诺霉素对照品适量, 用甲醇配置成每 1m L 溶液中含硫酸小诺霉素 5.5μg。

2.4阴性干扰试验。在处方中去硫酸小诺霉素, 按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂, 制成阴性对照溶液, 用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制, 观察在与硫酸小诺霉素相同的保留时间处是否存在吸收峰, 结果表明:在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与硫酸小诺霉素相同保留时间处不存在吸收峰, 因此说明选定的条件测定硫酸小诺霉素无干扰, 具有较强的专属性。

2.5标准曲线的制备。制备浓度为1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10μg·m L-1的硫酸小诺霉素对照品溶液, 分别吸取上述对照品溶液10μL注入HPLC, 记录色谱图, 以峰面积积分值A (μg) 为横坐标, 进样量为纵坐标, 绘制标准曲线。试验表明, 硫酸小诺霉素对照品在1~10μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验。依照 2.3 项下方法制备对照品溶液, 精密吸取硫酸小诺霉素对照品溶液 10μL 重复进样 5 次, 测定峰面积积分值, 对照品峰面积积分值的RSD为0.93%。结果表明, 本方法具有良好的精密度。

2.7重现性试验。分别称取同批硫酸小诺霉素样品样品6份, 依照2.2项下方法制备供试品溶液, 按上述含量测定项下方法, 分别精密吸取上述供试品10μL注入HPLC, 测定含量, 并计算样品的RSD值为0.95%。结果表明, 此含量测定方法的重现性良好。

2.8稳定性试验。取硫酸小诺霉素样品样品, 依照2.2相下供试品溶液制备方法制备供试品溶液, 精密吸取上述溶液10μL, 分别在0, 4, 8, 12小时注入高效液相色谱仪, 进样测定, 供试品硫酸小诺霉素峰面积积分值的RSD为0.79%, 说明硫酸小诺霉素至少在12小时内稳定。

2.9回收率试验。采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分精密添加一定量的硫酸小诺霉素对照品, 按供试品制备所述方法制备供试品溶液, 测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为98.71%, RSD为1.36%。

3 讨论

本实验对超声波振荡时间也进行了考察。超声波振荡分别提取2、5、10分钟, 制备供试品溶液, 含量结果表明:三个时间提取无明显差异, 为保证缩短处理时间, 采用超声提取5分钟。分别考察0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (90:5:5) , 甲醇 - 水 - 冰醋酸 (13∶86∶1) , 甲醇 - 水 - 冰醋酸 (33∶66∶1) , 甲醇 -1%冰醋酸溶液 (28∶72) , 0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 不同比例的流动相, 结果以0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 为流动相为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用0.2mol/L三氯醋酸 - 甲醇 - 乙腈 (95:2:3) 为流动相为流动相。本文对硫酸小诺霉素样品中的硫酸小诺霉素进行含量测定的试验方法, 结果表明该法不受其它成分的干扰, 分离度好, 精密度、重现性佳, 回收率高, 可用于硫酸小诺霉素样品中硫酸小诺霉素的含量测定。

摘要：硫酸小诺霉素为氨基糖苷类抗生素, 主要用于大肠埃希菌、变形杆菌、肠杆菌属、克雷白杆菌、铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌引起的呼吸道、泌尿道、胆管、腹腔、败血症等。本文采用高效液相测定了硫酸小诺霉素样品中硫酸小诺霉素的含量, 固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱 (5μm, 4·6mm×250mm) , 0.2mol/L三氯醋酸-甲醇-乙腈 (95:2:3) 为流动相;硫酸小诺霉素在110μg范围内, 呈良好的线性关系。硫酸小诺霉素的平均回收率为98.71%, RSD为1.36% (n=6) ;此方法简便、准确、重现性好。可用于硫酸小诺霉素样品中硫酸小诺霉素的含量测定。

关键词：硫酸小诺霉素样品,硫酸小诺霉素,高效液相

参考文献

[1]黄波, 许树梧, 阎小华.高效液相色谱法测定小诺霉素的血药浓度[J].中国抗生素杂志, 1991 (3) .

[2]简载华, 余炉善, 肖达, 陈宜海, 马健雄, 史水英, 邓跃华.高效液相色谱法测定更乐霉素残留量试验[J].江西农业大学学报, 1992 (4) .

[3]黄波, 许树梧, 阎小华, 陈鲁原, 王登科.高效液相色谱法测定小诺霉素的血药浓度及药动学研究[J].中国医院药学杂志, 1992 (8) .

[4]孙长林, 莫卫民, 梁黎斌, 唐冰心, 周家仙.血清、尿液中小诺霉素的单扫描示波极谱测定[J].浙江工业大学学报, 1996 (2) .

[5]王明娟, 胡昌勤, 金少鸿.采用HPLC-ELSD法分析小诺霉素及其有关物质[J].药物分析杂志, 2002 (3) .

篇7：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

关键词： 反相高效液相色谱法；水溶性维生素；梯度洗脱；多维片；饮料

【中图分类号】R453.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）04-0523-01

维生素为维持生物体正常机能的必需物质，常作为营养强化食品的添加因子，它广泛存在于饮料?保健品?果蔬和谷类等加工品中，因此，维生素的检测对食品?保健品?冷饮等领域都有非常重要的意义.

本文选用廉价?低毒的醋酸-水/甲醇体系作为流动相，采用的梯度洗脱的方法，不仅成功的分离出五种水溶性维生素，更优化了高效液相色谱法分离测定的条件?本实验方法时间短?速度快，分离效果好，准确，灵敏度高；已成功应用于多维片和饮料中5中常见水溶性维生素的同时测定?

1.实验部分

1.1仪器和试剂

1.1.1仪器 日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪，附紫外检测器；配有两元梯度泵?色谱柱为Waters AtlantisC18（Waters公司） 150mm×4.8mm?

1.1.2试剂 维生素C（分析纯），维生素B1，维生素B2，维生素B6，烟酰胺：上海试剂二厂；醋酸（HAc），盐酸：天津市北方天医化学试剂厂；甲醇（分析纯）：天津市科密欧化学试剂开发公司?

本实验所用水为蒸馏水精纯水装置进行去离子处理，其它所用试剂除指名外均为生物纯（BR）?流动相A：0.2% HAc；流动相B：甲醇?均经0.45m滤膜过滤，超声脱气后使用?

1.2样品处理

1.2.1多维片

数片碾匀，准确称取0.100g 于25ml容量瓶中，加入0.01mol/L HCl 20ml，超声震荡30min，加水至刻度，混匀静置片刻，取上清液经0.45 m微孔滤膜过滤后进样?

1.2.2饮料

吸取一定量经0.45m微孔滤膜过滤后进样分析?

1.3色谱条件

流动相：A 0.2% HAC； B 甲醇?采用梯度洗脱：流动相A?B从进样时的A+B=100+0线性变化为7min时的A+B=60+40；保持5min；从12min开始至17min，再线性还原为A+B=100+0?流速1ml/min；进样体积10l?检测波长：0～4min为245nm，4～6min为290nm，6～17min为266nm?

2 结果与讨论

2.1标准曲线

维生素标准储备液：VC临用新配；VB1?VB6 ?烟酰胺标准储备液（1.00g/L，0.01mol/L HCl中）；VB2标准储备液（0.100g/L，0.01mol/L HCl中）?分别准确吸取上述储备液依次稀释成20.0g/ml?10.0g/ml?5.00g/ml?2.00g/ml（VB2为2.00g/m?l.00g/ml?0.500g/ml?0.200g/ml）的混合使用液，临用新配?按上述色谱条件，分别进样10l，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），用最小二乘法计算出相应的线性回归方程和相关系数，结果见表1 ?

2.2线性范围

对1～1000g/ml上述五种维生素的使用液进行进样检测，记录峰面积，并对浓度作回归，结果见表1?线性相关系数r在0.9963～0.9998，说明线性关系良好?

2.3 检出限

以2倍基线噪声作为方法的检出限，测五种维生素的检出限?结果见表1?

2.4精密度

采用20.0g/ml的混合液测方法的精密度，测定5次，记录峰面积，相对标准偏差为：VB1 2.53%，VC 1.77%，VB6 2.43% 1.79%，烟酰胺1.80%，VB2 3.27%?

2.5准确度

采用加标回收的方法评价方法的准确度?

结果表明，在多维片中，VB1的加标回收率为88.6%～102.3%，VC的加标回收率为82.5%～112.0%，VB6的加标回收率为99.4～103.5%，烟酰胺的加标回收率为92.1%～107.0%，VB2的加标收率为 82.5%～99.6%?

2.2.6重复性

取多维片若干，碾磨均匀，每次取0.1g，按照上述样品处理方法进行处理后进样，色谱分析，记录峰面积，共进行5次，计算相对标准偏差?

所得结果如下：VB14.40%，VC 5.34%，VB6 11.69%，烟酰胺 4.76%，VB2 6.95%?证明试验的重复性较好?

2.4样品测定

本文在市场上选取了几种添加了水溶性维生素的样品，包括功能性饮料，国内市场（多维片1）和国外市场（多维片2）上选购的多维片等?使用本文所述的实验方法，测定了3种样品中水溶性维生素的含量，结果见表2?

本文建立的多种水溶性维生素同时测定的高效液相色谱法，可一次性处理同时分析多种水溶性维生素，简单?快速?准确?分离效果好，适合于饮料和多维片中水溶性维生素的测定?

参考文献

[1]成志强，孙成军，黎源倩.反相高效液相法同时测定食物和多维片中8种可溶性维生素[J].分析化学，2001，29（9）：1068-1070

[2] 王雪梅，高素莲，于金文.HPLC测定新鲜草莓中的水溶性维生素[M].分析检验，1999，5：52-53

[3] 刘晓林，武谷，钟淮滨.HPLC法测定复合维生素B溶液中维生素B1?维生素B2?维生素B6和烟酰胺的含量[J].中国药事，2003，17（4）：241-242

篇8：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

1 仪器与试药

Agilent1100Series高效相色谱仪,丹皮酚对照品(由中国药品生物制品检验所提供)批号:110708-200506;供含量测定用。甲醇为色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18 (4.6×200mm,5μm);流动相:甲醇-水70:30);流速:1.0ml/min;柱温:35℃;检测波长:274nm;理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3500。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品适量,研碎,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率220W,频率25kHz)45分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液0.5、1、3、5、7、9、11μl注入液相色谱仪按上述条件测定,以对照品进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,数据见下表,结果表明丹皮酚在0.02～0.46μg范围内呈线性关系,符合外标法定量测定的要求。

2.5 精密度试验

精密吸取供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,连续重复6次,测定其色谱峰面积值,结果见下表:

结果表明所用仪器具良好的精密性。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液,按正文色谱条件测定,结果见下表:

结果表明24小时内供试品溶液的含量基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一供试品,依正文方法独立测定六次,结果见下表:

结果表明本法具良好的重复性。

2.8 回收率试验

精密吸取已知含量的供试品(吉林今宝药业051001,含量为2.38mg/g)6份,分别精密加入对照品溶液(5.37mg/500ml) 50ml,依法测定,计算回收率,结果见下表:

测得丹皮酚的平均回收率为98.2%,RSD=0.94%。结果表明本法回收率较好,准确度较高。

2.9 原料药材的含量测定

按《中国药典》2005年版一部牡丹皮的含量测定方法测定两批投料药材,吉林今宝药业含量2.6%,长春经开药业含量1.2%,结果均符合规定。

2.1 0 样品测定

依法测定四批样品,结果见下表:

如表所示,四批样品含量测定结果差异较大,根据《中国药典》2005年版一部杞菊地黄丸项下含量测定限度及实际样品测定值,暂定本品每g含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计,不得少于0.80mg。

3 讨论

实验结果表明,运用高效液相色谱法测定本品中丹皮酚的含量,简便、快捷、准确,具有重复性好,精密度高的优点,适用于杞菊地黄丸的含量测定。

摘要：目的:建立杞菊地黄丸中丹皮酚的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。结果:用高效液相色谱法测定丹皮酚含量方法简便可行性强。结论:方法简便,快速准确,可做为该制剂的含量测定方法。

关键词：杞菊地黄丸,高效液相色谱法,丹皮酚

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社.2005,468～469

篇9：反相高效液相色谱法测定肉样中游离棉酚的含量

(南京先声东元制药有限公司质量部江苏南京211800）【摘要】目的：建立反相高效液相色潽法测定人血清中头孢他美浓度的方法。方法：选用LiChrosorb 反相色谱柱(4．6 mm×200mm×5μm，Agilent Technologies)，以0.1％冰醋酸溶液-乙腈(75：25)为流动相，检测波长为265 nm，流速1.0ml／min，柱温为室温。结果：该方法下头孢他美的检出限为3.029ng/ml，在0.25μg/ml～10.0μg/ml浓度范围内线性关系良好，方法的重现性、重复性和稳定性良好。结论：利用反相高效液相色谱法测定头孢他美在人血清中的浓度具有高灵敏、线性范围广、重现性好的特点，可以将此方法用于监测头孢他美体内生物利用度情况。【关键词】反相高效液相色谱法;血清浓度;头孢他美 【中图分类号】R96【文献标识码】B【文章编号】1004-5511（2012）04-0270-02 头孢他美酯［1］为第三代口服头孢菌素类药物，口服后在肠道内代谢为头孢他美发挥抗菌作用。对绝大多数的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有较好的抗菌作用，对耐头孢菌素的沙雷菌属、柠檬酸菌属、肠杆菌属具有较强的抗菌活性，且对β-内酰胺酶稳定，为广谱抗生素。临床上应用广泛。本文对反相高效液相色谱法测定血清中头孢他美浓度的方法进行研究，为监测头孢他美血药浓度变化及体内生物利用度情况提供依据。1.仪器及方法1.1仪器与试剂:仪器：Agilent1200高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）试剂：冰醋酸：色谱纯（天津科密欧化学试剂有限公司）乙腈、甲醇：色谱纯（DIKMA TECHNOLOGIES INC）1.2色谱条件及系统适用性试验［2］:选用LiChrosorb 反相色谱柱(4．6 mm×200mm×5μm，Agilent Technologies)，以0.1％冰醋酸溶液-乙腈(75：25)为流动相，检测波长为265 nm，流速1.0ml／min，柱温为室温，进样量20μl。理论塔板数按头孢他美峰计应不低于4000。1.3对照品贮备液的制备:精密称取头孢他美酯对照品（中国食品药品生物检定研究院）32.52mg（约相当于头孢他美25.24mg），置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成1ml含头孢他美252.4μg的溶液作为对照品贮备液。1.4血样处理:精密量取血浆样品0.2ml，置lml离心管中，加6％高氯酸溶液0.2ml，置涡旋振荡器振摇lmin后，以10000转/min的转速离心10min，取上清液作为供试品溶液。2.结果2.1检出限:取对照品贮备液1 ml，定量稀释至信号峰的峰高与噪音峰峰高比值约等于3，即可。计算此时对照品溶液的濃度。经计算该方法下头孢他美的检出限为3.029ng/ml 。2.2线性试验:分别取对照品贮备液0.1ml、0.2ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别得含头孢他美0.2524μg/ml、0.5048μg/ml、1.2620μg/ml、2.5240μg/ml、5.0480μg/ml、10.096μg/ml的溶液，分别精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立平面直角坐标系、计算回归方程和r值。具体结果如下：2.3精密度试验:精密量取对照品贮备液4.0ml置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，由同一实验员在同一台高效液相色谱仪上，连续进样6针，记录峰面积，并计算相对标准偏差。结果表明：该方法具有较好的精密度，RSD%=0.26，具体结果如下：2.4溶液稳定性试验:去精密度试验项下的供试品溶液，分别于0min、20min、40min、60min、90min、120min时，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，并计算相对标准偏差。结果表明：该溶液2小时内稳定，RSD%=0.35，具体结果如下：2.5重复性试验:精密量取同一份含药血清标本作为供试品，精密量取6份，每份0.2ml，分别按照血样处理方法进行处理，得6份供试品溶液，分别量取20μl，注入高效液相色谱仪，采用外标法计算血清样本中含量。6份样品中头孢他美平均含量为2.22μg/ml，相对标准偏差（RSD）为1.88%。结果表明：反相高效液相色谱法用于测定血清中头孢他美的浓度，方法重复性较好。具体结果如下：2.6回收率试验:分别量取头孢他美对照品贮备液0.5ml、1.0ml和2.0ml，置100ml量瓶中，摇匀后，分别精密量取0.2ml于离心管中，加入0.2ml空白血浆，置涡旋振荡器振摇lmin后，以10000转/min的转速离心10min，取上清液作为供试品溶液。分别量取20μl，注入高效液相色谱仪，每个浓度重复测定3次，采用外标法计算血清样本中含量，测得值除以加入值计算回收率，并计算平均回收率和相对标准偏差。具体结果如下：2.7人体血药浓度测定:选取20名健康的自愿者采用盲法进行试验，其中10名空腹服用头孢他美酯胶囊（浙江震元制药有限公司）500mg，另外10名空腹服用相同外观的空白胶囊。与服药后2小时，抽取静脉血2ml，按照血样制备方法至的样品溶液，取各样品溶液20μl分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积。代入回归方程，计算此时自愿者体内的血药浓度。结果表明，该方法可以用于测量服药者的血液中头孢他美的含量，空白试验无干扰。具体结果如下：3.讨论

朱华等人［4］通过对不同剂型、不同生产厂家的盐酸头孢他美酯进行体外溶出度试验，发现一种药物制成不同剂型的药物制剂，其体外溶出度存在显著差异。不同生产厂家因其所使用的原辅料、处方、工艺各不相同使得相同剂型的同种药物体外溶出苏也必然不同。药物体外溶出度是在模拟体内环境的实验条件下进行的，是药物在体内变化情况的一种体现，可见不同剂型、生产厂家的盐酸头孢他美酯一定会出现不同的体内代谢过程。何周康等人［5］对头孢他美酯分散片在人体内的相对生物利用度及生物等效性进行了系统的研究，研究发现药物固有的药动学参数往往会因给药个体间的差异而出现明显的偏差。因此最为合理的给药方案一定是建立在用药后血药浓度监测的结果之上的。有学者经研究表明［6］常用的口服头孢菌素类药物的体内吸收、分布、代谢、排泄过程存在着较大的差异，应根据不同药物的药物动力学特点制定合理的给药方案，以达到最好的治疗效果。作为第三代口服类头孢菌素类药物，头孢他美因其较强的水溶性使得药物的吸收受到影响，将其制成脂溶性较好的头孢他美酯，有助于体内的吸收。药物吸收入血后代谢成具有生物活性的头孢他美，发挥药效。大部分头孢他美通过肾小球的被动滤过作用清除，少量通过肾小管排出体外。明确了药物的体内代谢过程，以及进行血药浓度监测的重要性后，就需要有准确有效的测量方法对患者体内的药物含量进行监测，以确定该药物在具体病例体内的代谢速率。本文对反相高效液相色谱法测定血清中头孢他美浓度的方法进行研究，为制定具体的给药方案提供了数据支持。参考文献［1］曾忠荣，1 756例头孢他美酯干混悬剂的使用分析［J］．中国医药导报，2008，5（17）：119-120．［2］鲜杨 ，龙恩武 ，袁浩宇，反相高效液相色谱法测定盐酸头孢他美酯胶囊中头孢他美含量［J］．中国药业，2010，19（7）：31-32．［3］邓晓彬 ，张献冲，RP-HP LC法测定人血浆中头孢他美浓度［J］．中国药房，2007，18（8）：586-587．［4］朱华 ，许建国 ，蒋丹，盐酸头孢他美酯片剂与胶囊剂体外溶出度比较［J］．抗感染药学，2009，6（3）：182-185．［5］何周康 ，阳利龙 ，祝文兵等，头孢他美酯分散片在人体内的相对生物利用度及生物等效性［J］．抗感染药学，2006，21（6）：541-543．［6］张明发 ，沈雅琴，常用口服头孢菌素的药动学及临床应用评价［J］．抗感染药学，2010，7（2）：78-83．