高效液相色谱法分析测定复硝酚钠中三种组分

2022-09-11

复硝酚钠是由邻硝基苯酚钠、对硝基苯酚钠、5-硝基愈创木酚钠及其他助剂按一定比例混合加工而成, 是一种强力细胞赋活剂, 能迅速渗透到植物体内, 提高细胞活力, 属于广谱型植物生长调节剂, 具有促进植物生长、生根、发芽, 保花坐果, 提高产量等作用。目前有关复硝酚钠相关检测的报道还比较少[1]。本文采用高效液相色谱法同时对复硝酚钠样品中三种组分进行分析测定, 简单易行, 同柱同条件分析, 降低了分析成本和分析时间。

一、实验部分

1. 仪器与试剂

Waters2695液相色谱仪, 2998二极管阵列检测器, Empower数据处理软件。5-硝基愈创木酚钠 (枣红色片状晶体) , 对硝基苯酚钠 (黄色片状晶体) , 邻硝基苯酚钠 (红色针状晶体) 标准品, (99.0%, 均由国药集团化学试剂有限公司提供) ;复硝酚钠样品 (山东梁山鼎圣生物工程有限公司提供) ;甲醇 (色谱纯) ;超纯水 (自制) ;磷酸 (分析纯, 天津科密欧化学试剂有限公司) 。

2. 色谱条件

Symmetry RC18色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;2998二极管阵列检测器, 检测波长为254nm, 柱温25℃, 进样量为10μL, 流动相为甲醇+水=60+40 (V/V) 溶液, 流速0.8m L.min-1。

3. 试验方法

1—5-硝基愈创木酚钠、2—对硝基苯酚钠、3—邻硝基苯酚钠

(1) 标准溶液配制分别称取5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠标品各0.20 g (均准确至0.0002 g) 于3个100 m L容量瓶中, 用水溶解并定容。准确移取上述溶液2 m L于10 m L容量瓶中, 逐滴滴加磷酸溶液至溶液由橙红色变为浅黄色 (p H值约为4.5) , 用流动相定容, 用0.45μm微孔滤膜过滤, 备用。

(2) 试样溶液的配制称取复硝酚钠样品0.60 g于100 m L容量瓶中, 加水超声溶解并稀释至刻度。准确移取上述溶液2m L于10m L容量瓶中, 逐滴滴加磷酸溶液至溶液由橙红色变为浅黄色 (p H值约为4.5) , 用流动相定容, 用0.45μm微孔滤膜过滤, 外标法定量。标样色谱图如图1。

4. 计算

将测得的两针试样溶液和两针标样溶液 (峰面积变化小于0.5%) 中的5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠的峰面积分别进行平均, 用外标法分别计算欲测组分质量分数X, %, 按下式计算:

式中:A标—标样溶液中, 邻硝基苯酚钠 (对硝基苯酚钠、5-硝基愈创木酚钠) 峰面积;

A样—试样溶液中, 邻硝基苯酚钠 (对硝基苯酚钠、5-硝基愈创木酚钠) 峰面积平均值) 峰面积值;

m标—邻硝基苯酚钠 (对硝基苯酚钠、5-硝基愈创木酚钠) 标样的质量, g;

m样—试样的质量, g;

P—标样中邻硝基苯酚钠 (对硝基苯酚钠、5-硝基愈创木酚钠) 的质量分数, % (m/m) 。

二、结果与讨论

1. 检测波长选择

对三种组分标准溶液 (0.4mg.m L-1) 采用二级管阵列检测器进行全波长 (190~470nm) 扫描, 发现波长254nm处均有较强的吸收, 因此选择254nm作为测定波长。

2. 线性相关性测定

分别配制5个不同浓度的5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg.m L-1, 按实验操作条件分别测定, 以样品浓度为横坐标, 以峰面积为纵坐标, 得工作曲线。结果表明样品峰面积与浓度呈现良好的线性关系, 其线性相关系数分别为0.9929、0.9921、0.9931。

3. 方法精密度

在相同的色谱条件下, 对0.4mg.m L-1的5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠混合标准溶液进行5次平行测定, 测得其相对标准偏差分别为0.47%、0.49%和0.35%。

取同一样品溶液分别于1天内每隔1小时测一次, 5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠的日内相对偏差 (n=5) 分别为0.38%、0.50%、0.49%。

结论

试验结果表明, 采用本方法分析复硝酚钠样品, 其中5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠的百分含量分别为10.93%, 35.89%, 30.06%。复硝酚钠样品中有效成分能达到有效、稳定分离, 节省分析时间, 可应用于工业生产中对产品质量的控制。

摘要：目的本文介绍了高效液相色谱法同时测定植物生长激素复硝酚钠的3种组分, 5-硝基愈创木酚钠、对硝基苯酚钠和邻硝基苯酚钠含量的方法。方法以C18色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm) 为分离柱, 以甲醇+水=60+40 (V/V) 做流动相, 在254nm波长处测定。结果复硝酚钠样品中有效成分能达到有效分离;三种组分的线性相关系数分别为0.9929、0.9921、0.9931。对方法精密度进行试验;测得其相对标准偏差分别为0.47%、0.49%和0.35%。

关键词：复硝酚钠,高效液相色谱,含量