木本植物内源激素含量检测中高效液相色谱法的应用研究

2022-09-11

对于本木植物内源激素来说, 属于植物自身合成的微量有机物质, 有效调节生理过程, 与植物基因表达、调控代谢过程等之间的关系是紧密联系、密不可分的。在检测木本植物内源激素含量过程中, 必须要高度重视高效液相色谱法这一应用问题, 节省诸多时间、物力以及财力, 缓解工作压力, 并确保检测结果的准确无误, 是其他方法无法超越的, 进而将木本植物内源激素的研究提升至全新高度和深度, 彰显出高效液相色谱法的应用优势。

一、高效液相色谱法检测的相关概述

在上个世纪70年代中, 就已经通过高效液相色谱 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 的方式分析植物中的内源激素。此种方式具有高灵敏度, 具有选择性、重复性良好的特征, 其分析也较为迅速。在现阶段的发展中, 在社会经济的高速发展中, 随着人口数量的极具增加, 对于粮食的需求有着更为迫切的需求。因此, 对于植物内源激素的研究报道多数都是对可以在短期中获得一定经济效益的草本类植物作为重点, 而对于木本类的植物研究则相对较少。木本类植物具有组织多年生、结构复杂的特征, 有着较为显著的单宁以及黄酮醇香豆酸等次生代谢物多的特征, 在进行木本植物的内源激素的定量测定过程中, 要选择合适的内源激素提取方式以及色谱条件, 这也是文章论述的重点。

二、木本植物内源激素含量检测中高效液相色谱法的具体应用

(一) 样品的分离纯化

1. 样品的预处理

高效液相色谱法对保留时间的分辨率有所限度, 而预处理的要求也相对较高。在进行木本植物的样品预处理中, 其具有较为显著的特点, 其具体如下:

第一, 样品量相对于草本植物来说, 木本植物木质化程度较高, 其含水率也相对较低, 必须要大量的采集样本。第二, 通过快速采集以及固定的方式可以减少激素损失。在采集中将天平带到采集地点中, 在样品采集之后承重处理, 通过塑料薄膜密封处理, 也可以通过棉纱包装处理, 快速的投入到液氮罐或者干冰保温瓶中速冻, 在实验室中通过超低温冰箱保存待测。

2. 提取植物激素

在进行植物激素的提取过程中, 一般状况之下都是通过在植物鲜样中加入80%的甲醇对其进行研磨, 反复三次之后提取样品。而为了获得充分的IAA等内源激素, 就要尽可能的去除杂质, 进行三次离心处理。在提起率较高的基础之上, 要控制提取的时间, 避免其出现分解作用, 在提取的时候要不断的搅拌, 确保提取效率的稳步提升, 并将提取时间保持在合理范围内。

3. 分离和纯化植物激素

植物激素的分离与纯化主要就是对样品中的干扰物质进行处理, 通过溶剂萃取内源激素测定的方式去除色素、有机酸等物质。

一般状况, 主要通过溶剂萃取法、层析法以及Sep-Pak C18小柱预分离法进行处理。因为木本植物与草本植物来说其结构更为复杂, 含有较多的干扰物质, 木本植物的激素分离以及纯化的要求也较为严格, 可以综合实际状况, 通过这三种方式组合应用。其中, 对于溶剂萃取法来说, 有机溶剂萃取, 需要对不同溶质在各种溶剂中进行利用, 以此来得出不同的溶解度。对于极性较小的有机溶剂来说, 比如石油醚和正己烷等, 以此来作为植物组织色素的重要萃取剂。其中, 可以讲石油醚和乙酸乙酯结合在一起, 需要将甲醇提取液部分进行浓缩, 在添加等体积的石油醚, 至少要萃取两次, 随即在利用等体积乙酸乙酯萃取, 进而分离弱碱性细胞分裂素和弱酸性生长素等。

(二) 加强对分离效果的影响分析

第一, 在流动相方面。在对多种植物的内源激素进行测量的过程中, 其会产生峰位重迭过度密紧、拖尾以及双峰等问题。对此, 要选择最佳的流动相组。要综合色谱柱、检测器以及分离对象的实际状况对其进行综合考量分析, 增加流动相以及固定相自身的极性差别。甲醇、水、醋酸体系流动相在对木本植物进行分离中效果显著, 而相关学者在此基础之上增加了适当的乙腈, 通过梯度洗脱的方式进行处理, 可以对于一些较为复杂的样品进行处理, 其分离效果也较为显著, 可以在根本上行缩短样品的分析时间。

第二, 在酸度方面。由于流动相的PH值对植物激素的离解产生了极大的影响, 对于也影响着分离度。根据相关研究结果可以了解到, 要想确保良好的分离效果, 流动相的PH值要控制在3.0左右。而且也能够给予IAA、ABA等之间的分离提供一定的保证, 具有重大的意义。

第三, 在波长方面。在检测不同激素在不同波长下的吸光度, 得出最为适宜的内源激素波长就是254nm。对于切换波长法来说, 具有较多的优势, 可以使各种待测组分分别选择最为适宜的检测波长, 并避免出现较多的干扰物质, 控制其出峰。在对多组分体系检测过程中, 尤其是在待测物质组分较为复杂的情况下, 通过切换波长法的应用, 可以讲一些组分对待测物质测定的干扰率降至最低。而且还可以确保检测灵敏性的稳步提升, 降低多组分体系定量检测的难度性。

此外, 在英语切换波长法过程中, 要对切换时间进行合理控制。如果切换时间选择不合理, 极容易出现基线漂移现象。针对切换波长法的时间变换, 要结合各个待测组分的保留时间来进行。在切换波长时, 还要对各物质响应的起始时间进行深入分析。

(三) 加强新型检测手段的应用

现阶段, 通过HPLC测定方法对枣树、茶树、苹果以及杨树等木本植物中的内源激素较为完善, 可以对生长素、赤霉素以及脱落酸等常见的植物激素进行定性定量的检测。而一些细胞分裂类似的激素物质种类繁多, 其整体结构较为复杂, 在不同种类中具有特异性的特征, 要通过特异提取以及纯化的方式进行处理才可以实现精确定量检测, 对此, 在实践中要对其进行单独的分离检测处理。

在植物内源激素的检测中仪器联用是现阶段的主要发展趋势, HPLC与MS的联用可以提升分离效果, 精准度也相对较高。随着.高效液相色谱法的不断发展, 在木本植物中进行植物激素的检测也较为成熟。仪器联用以及新型的检测器开发是今后的主要发展趋势, 在植物激素的结构分析、生物合成等检测中有着较为重要的价值与作用。

三、结束语

综上所述, 在木本植物内源激素含量检测过程中, 要加强高效液相色谱法的应用, 可以确保良好的应用效果。所以, 要加强新型手段和方法的应用, 比如溶剂萃取法和层析法。还要对流动相、流速以及波长等进行深入分析, 以此来分析分离效果, 进而促进木本植物内源激素含量检测工作的顺利进行。

摘要：在本木植物内源激素含量检测中, 高效液相色谱法得到了广泛应用和推广, 发挥着不可比拟的作用, 可以将高效液相色谱法的重复性和迅速性等特点充分发挥出来, 这已经得到了诸多相关专业人士的高度重视。通过高效液相色谱法的应用, 对于检测木本植物内源激素含量具有极大的帮助, 可以确保检测结果的准确性和科学性, 充分反映出木本植物内源激素含量, 具有现实性的指导意义。本文主要以木本植物内源激素含量检测中高效液相色谱法的应用为论点, 希望为相关行业人士提供些许帮助。

关键词：高效液相色谱法,木本植物内源激素含量,检测研究