高效液相色谱法测定泮托拉唑在健康人血中的浓度

2022-10-27

本品为泮托拉唑为一种人工合成的质子泵抑制剂, 主要用于治疗胃、十二指肠溃疡, 也可以治疗胃泌素瘤导致的溃疡。本文采用的HPLC外标法测定泮托拉唑血浆药物浓度, 方法简便, 重现性好, 可用于泮托拉唑人体药代动力学研究。

1 仪器与试剂

Waters1525液相色谱仪、Waters2487检测器 (美国) ;TL-16R台式高速冷冻离心机 (上海市离心机械研究所) , XW-80A旋涡混合器 (上海医科大学仪器厂) , 岛津AX200型电子天平 (日本) , SZ-Ⅲ型自动三重纯水蒸馏器 (上海嘉鹏科技有限公司) , PHS 3C精密p H计 (上海精密科学仪器有限公司) 等。

泮托拉唑钠对照品由国家药品生物制品检定所提供 (100575-200301含量:95.1%) 。乙腈 (美国Fisher公司生产, 色谱纯) , 磷酸二氢钠、磷酸氢二钠 (均为广州化学试剂厂, AR) , 磷酸 (广州化学试剂厂) , 纯化水 (自制) 。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

流动相:乙腈:磷酸盐缓冲液 (磷酸氢二钠1.25g, 磷酸二氢钠0.3g, 加纯化水至1000m L, 用磷酸调p H值至5.6) (33:67) , 色谱柱:依利特Spherisorb C8, 5um, 4.6mm×150mm, 柱温为30℃, 紫外检测波长288nm, 流速为1.2m L/min。

2.2 血浆样品处理

取肝素化血浆0.2m L, 加入乙腈0.3m L, 涡旋1min, 10000rpm/min, 温度25℃, 离心5min, 吸取上清液50uL定量环进样, 用峰面积进行定量分析。在上述色谱条件下, 泮托拉唑的出峰时间约为4.6min, 与血浆中内源性物质分离良好。

2.3 血浆标准曲线制作

用空白血浆配制相当于泮托拉唑浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ug/m L的样品, 按“血浆样品处理”项下操作, 记录对照品峰面积, 以泮托拉唑峰面积对样品浓度 (ug/ml) 作直线回归, 线性方程:Y=27705X-882.85, 线性范围为0.05~5.0ug/mL, 相关系数R2=0.9996。

2.4 方法精密度和回收率

配制含泮托拉唑0.1、1.0、5.0ug/mL血浆标准品数份, 分别于1d内每个浓度平行5份按血浆样品处理方法处理并测定, 评价本法测定血浆中泮托拉唑含量的回收率及日内精密度。连续3d配制并测定上述浓度样品, 考察方法日间精密度。3个浓度的萃取回收率在66.3%~73.6%之间, 方法的回收率均在96.40%~111.6%之内, 日内RSD<3%、日间中、高浓度RSD均<11%, 低浓度<20%。符合生物等效性研究的方法学要求。

2.5 稳定性考察

按照标准曲线制备方法, 制备低、中、高浓度样品数份, 分别置室温、冻存、冻融条件下存放不同时间后, 按“2.2”项下方法处理并测定, 考察样品放置稳定性, 并考察了处理完的溶液的室温稳定性, 结果表明泮托拉唑血浆样品在室温条件下至少能稳定12h;冻存条件 (-20℃) 下至少能稳定30d;在冻融4周期内含量没有下降。

3 讨论

本品为泮托拉唑为一种人工合成的质子泵抑制剂, 主要用于治疗胃、十二指肠溃疡, 也可以治疗胃泌素瘤导致的溃疡。口服后吸收迅速、完全, 单次口服40mg后, 2~3h左右即可达到血药浓度峰值, 其口服制剂的绝对生物利用度为77%。80%的代谢产物通过肾脏排出, 其余经胆汁进入粪便排出。泮托拉唑血药浓度检测方法国内外均有文献报道, 大多采用HPLC内标法[1~3], 本文用HPLC外标法测定人血浆中泮托拉唑浓度, 结果表明它与内源性杂质分离良好, 样处理简便, 完全可以满足临床药代动力学以及药物代谢的要求。

摘要：目的建立测定人血浆中泮托拉唑含量的高效液相色谱 (HPLC) 方法。方法色谱柱为依利特Spherisorb C8, 5um, 4.6mm×150mm, 柱温为30℃, 紫外检测波长288nm, 流速为1.2mL/min。流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液 (磷酸氢二钠1.25g, 磷酸二氢钠0.3g, 加纯化水至1000mL, 用磷酸调pH值至5.6) (33:67) 。结果标准曲线线性范围0.05～5.0ug/mL, Y=27705X-882.85 (R2=0.9996) 。日内RSD为0.73%～2.51%, 日间RSD为7.69%～10.63%。结论此法简便, 重现性好, 可用于泮托拉唑人体药代动力学研究。

关键词：泮托拉唑,高效液相色谱法,血药浓度