关于粮食专用检测仪器高效液相色谱仪进样操作的探讨

随着现代检测技术的飞速发展, 高效液相色谱仪广泛应用在医药、食品、粮食等领域。高效液相色谱仪只要求样品能配成溶液, 不受样品挥发性的限制, 流动相可以选择的范围很宽, 固定相的种类繁多, 还可以分离热不稳非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。高效液相色谱仪检测的精准性在粮食行业的应用更是起到了举足轻重的作用。在粮食的检测国家标准中对高效液相色谱的进样注意事项并没有明确说明, 进样方法的正确与否对检测结果影响很大。笔者结合小麦粉中过氧化苯甲酰 (面粉增白剂) 的测定-高效液相色谱法 (GB/T22325-2008) 与自身实践进行了总结, 愿与各位专家、同行共同探讨手动进样操作时的注意事项, 为粮食面粉增白剂的精确检验和粮食安全做出贡献。

1 进样器的选用

美国SP8800型高效液相色谱仪进样器必须选用针头是平头的, 长度为5厘米左右的微量进样器, 过长的微量进样器针头进样时容易弯曲;过短的微量进样器针头进样时待测液不能全部进入检测, 所以选择微量进样器时针头的长短一定要注意。另外不能用尖头的微量进样器。如果采用了尖头的微量进样器, 进样时就容易扎伤或扎坏进样阀的密封装置。造成进样阀的密封装置密封不严, 待测样液流失, 严重影响检测结果。另外也容易堵塞微量进样器, 严重的也容易堵塞色谱柱。从而造成微量进样器和色谱柱损坏, 产生不必要的经济浪费。

2 进样阀的清洗

手动进样阀清洗比较麻烦, 首先用微量进样器吸取甲醇 (色谱纯) 注入进样阀清洗三次, 然后用微量进样器吸取流动相液清洗进样阀三次 (每次时间1分钟左右) 。用微量进样器吸净排液管中的洗液, 然后再用吹风机吹干进样阀。这时要注意风的温度和风量, 一般用微风20℃左右即可。风的温度过高或过低会给进样阀的密封装置造成损害, 影响密封效果, 从而直接影响检测结果。

3 进样前的准备

首先要对事先配制好的流动相液进行过滤, 根据实际需要选择不同型号的滤膜。滤膜分水相和有机相, 水相滤膜是过滤水溶解液的, 有机相是过滤有机溶剂的, 两者绝对不能混用。如果混用就会造成过滤操作失败, 水溶解液和有机溶剂中的杂质过滤不出去, 进样时容易堵塞微量进样器和色谱柱, 还可能使色谱柱压力急剧增高, 影响高效液相色谱仪的正常工作, 从而影响检测结果的准确性。小麦粉中过氧化苯甲酰 (面粉增白剂) 的测定-高效液相色谱法 (GB/T22325-2008) 中规定用0.45μm的滤膜过滤流动相。滤膜的孔隙大小选择非常重要, 孔隙大了不能把流动相中的杂质滤除;孔隙小了可能把流动相中的有效成分截留, 不能充分发挥其作用。过滤完成后要对流动相进行脱气操作, 一般采用超声脱气, 脱气时间至少20分钟。看脱气效果如何, 不行可适当延长脱气时间, 直至起跑脱尽为止。如果不脱尽气泡就进样, 会造成出峰效果不佳, 峰畸形, 直接影响检测结果。

其次进样前先用甲醇 (色谱醇) 清洗微量进样器5~10次, 然后用待测样液润洗3次以上。对于标准曲线制备时进样除上述操作外, 还要注意待测样液浓度的变化, 待测样液浓度依次递增变化时, 微量进样器正常清洗即可。如果待测样液浓度依次递减时, 一定要注意, 先用甲醇 (色谱醇) 清洗微量进样器10次以上, 再用待测样液润洗6~10次, 确保待测样液浓度不变化, 不交叉污染, 检测结果的准确性。

最后进样前要冲洗高压泵和色谱柱。待SP8800型高效液相色谱仪开机正常后, 先用甲醇 (色谱醇) 调节流量为1.0m L/min进行冲洗, 观察泵的压力变化, 一般情况下不要超过2000。如果压力高了, 应及时停机, 检查线路、高压泵和色谱柱, 看看是否有堵塞的地方。如果堵了, 要及时清除;如果没堵, 重新开机, 重新调节流量进行冲洗, 一般用甲醇 (色谱醇) 30分钟以上。冲洗正常后再用流动相进行冲洗, 冲洗20分钟左右, 直到准备指示灯亮为止, 然后准备进样。

4 进样时的操作

SP8800型高效液相色谱仪调试正常后, 取下进样口的保护针, 开始进样。手平稳的持微量进样器取适量待测样液, 排除针中气泡, 水平插入进样阀。不能来回摆动或抖动, 防止针头碰壁或碰伤进样阀。针头插到位后推动针柄进样。此时不能将针拔出, 如果拔出首先是待测样液会顺进样口外渗, 其次是空气会迅速进入, 待测样液挥发, 检测结果就不准确。注射完后迅速、平稳地扳下进样阀扳手, 一秒钟内完成此操作为宜, 以保证进样量的准确。扳下的速度越快进样的压力就大, 压力越大待测样液就全部进入样品定量管, 保证检测结果准确。

5 进样完成后操作

进样完成后待色谱工作站检测出峰后, 将进样阀扳手复位, 才能取下微量进样器清洗干净, 待用。

6 进样完成后的维护

进样完成后对高效液相色谱仪的保养非常重要, 特别要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中, 储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液, 每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净, 防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要, 任何样品都要尽可能地去除杂质, 完全溶解, 尽量减少对色谱柱的污染, 以延长色谱柱的使用寿命, 同时避免注射过浓的样品溶液, 以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱必须作好标记, 用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。这样的维护对进样有很大的好处, 一定要记住。

摘要：笔者结合小麦粉中过氧化苯甲酰 (面粉增白剂) 的测定-高效液相色谱法 (GB/T22325-2008) 与自身实践进行了总结, 愿与各位专家、同行共同探讨手动进样操作时的注意事项, 为粮食面粉增白剂的精确检验和粮食安全做出贡献。

关键词：粮食,检测仪器