高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

高效液相色谱法分析海水中的氯霉素（精选17篇）

篇1：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

高效液相色谱-串联质谱测定海水中氯霉素残留量

应用高效液相色谱-串联质谱法测定海水中的氯霉素残留量, 流动相为V(甲醇)∶V(水)=80∶20. 采用负电喷雾离子源, 在多反应性监测模式下采集信号, 定性离子对为321/121、 321/152、 321/176, 定量离子对为321/152. 本方法的线性范围是0.1～100 μg/L, 相关系数为0.9993, 仪器检出限为0.01 μg/L, 回收率在81.7%～121.0%之间. 该方法适于海洋环境监测.

作 者：叶赛 胡莹莹 张奎文 那广水 姚子伟 王菊英 马德毅 YE Sai HU Ying-ying ZHANG Kui-wen NA Guang-shui YAO Zi-wei WANG Ju-ying MA De-yi 作者单位：叶赛,胡莹莹,YE Sai,HU Ying-ying(国家海洋环境监测中心,国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室,大连,116023;大连海事大学环境科学与工程学院,大连,116026)

张奎文,ZHANG Kui-wen(国家海洋环境监测中心,国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室,大连,116023;大连水产学院生命科学与技术学院,大连,116023)

那广水,姚子伟,王菊英,马德毅,NA Guang-shui,YAO Zi-wei,WANG Ju-ying,MA De-yi(国家海洋环境监测中心,国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室,大连,116023)

刊 名：分析试验室 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYSIS LABORATORY年，卷(期)：200726(2)分类号：O657.63关键词：氯霉素 海水 高效液相色谱-串联质谱法

篇2：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

高效液相色谱法测定硫酸安普霉素有关物质

建立了硫酸安普霉素有关物质测定的`高效液相色谱法.硫酸安普霉素有关物质经磺酸基键合硅胶柱分离,茚三酮溶液衍生后,568 nm处测定.结果显示,测得的硫酸安普毒素8种有关物质得到良好分离.对硫酸安普霉素及其制剂测定结果表明,该方法适合硫酸安普霉素有关物质的测定.

作 者：吴宁鹏 班付国 周红霞 郭芙蓉 WU Ning-peng BAN Fu-guo ZHOU Hong-xia GUO Fu-rong 作者单位：河南省兽药监察所,郑州,450008刊 名：中国兽药杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF VETERINARY DRUG年，卷(期)：43(11)分类号：S859关键词：硫酸安普霉素 有关物质 高效液相色谱法 柱后衍生

篇3：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

目前, 牛奶中常用的氯霉素检测方法有微生物学方法[2]、放射免疫法[3]、色谱法[4]和酶免疫分析法[5]等。该文利用高效液相色谱法检测牛奶中氯霉素残留, 以期建立一种快速、简便的牛奶中氯霉素残留的检测方法。

1 材料与方法

1.1 试验仪器

高效液相色谱仪 (岛津LC-15C) ;紫外分光光度计 (岛津UV-1800) ;超声波清洗器KQ2200 (昆山市超声仪器公司) ;旋转蒸发仪RE-3000A (上海亚荣) ;涡旋混合器XW-80A (海门其林贝尔) ;0.45μm有机微孔滤膜。

1.2 试验试剂

氯霉素标准品 (合肥博美, 纯度≥98.0%) 、甲醇 (色谱纯) 、乙腈 (色谱纯) 。水为试验室自制超纯水。

1.3 标准品配制

精密称取氯霉素标准品10 mg置于10 m L容量瓶中, 用甲醇溶解并准确定容至刻度, 摇匀, 配成质量浓度1.0 mg/m L的储备液, 置于4℃冰箱中保存, 使用前再用甲醇稀释成相应的质量浓度。

1.4 牛奶试样配制

取不含氯霉素的牛奶样品, 准确添加一定量的氯霉素标准储备液, 配制成1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的供试样品。

1.5 供试样品提取

准确称取10 m L左右牛奶供试样品, 置于50 m L具塞离心管中, 加入乙腈定容, 涡旋振荡提取1 min, 超声提取10 min, 以5 000 r/min离心10 min, 上清液转移至100 m L蒸发瓶中, 重复提取2次, 合并上清液, 上清液用旋转蒸发仪35℃旋转蒸发至近干, 用甲醇定容至10 m L, 经0.45μm滤膜过滤, 试液供液相测定[6]。

2 结果与分析

2.1 高效液相色谱条件的建立

取氯霉素储备液经稀释后, 用石英比色皿在紫外分光光度计上扫描, 结果见图1。可以看出, 氯霉素在278 nm处有最大吸收波长。因此, 选择氯霉素检测波长为278 nm。

色谱柱, 岛津Shim-Pack VP-ODS (150.0×4.6 mm, 5μm) ;流动相, 甲醇-水溶液 (体积比为40∶60) ;流速0.8 m L/min;波长278 nm;柱温30℃;进样量10μL。

2.2 液相色谱标准曲线

标准溶液系列:取一定量的氯霉素储备液, 稀释成浓度分别为1、5、10、15、20、25、30 mg/L的系列标准溶液, 绘制标准曲线, 结果见图2。

在1~30 mg/L范围内氯霉素标准曲线的回归方程为Y=0.202 7x+0.375 3, 相关系数R2=0.999 1。

2.3 方法回收率与精密度

按1.4方法配制牛奶试样, 按1.5处理方法进行提取, 测定氯霉素含量, 计算回收率, 每个水平进行3次重复试验, 结果见表1。样品平均回收率在85.33%~97.20%, 相对标准偏差 (RSD) 为5.18%~10.63%。

3 结论与讨论

在使用高效液相色谱法检测牛奶中氯霉素的过程中, 存在以下问题:一是检测结果易受到牛奶中所含蛋白质、脂肪、糖类、维生素、无机盐、水分等的影响。二是牛奶中的营养物质会污染仪器, 降低仪器的使用寿命。在检测牛奶中氯霉素含量的方法中, 常用的提取剂有乙酸乙酯和乙腈[6]。该试验采用乙腈作为萃取溶剂, 经提取浓缩后用甲醇溶解, 然后进行测定, 其方法的平均回收率为85.33%~97.20%。方法简便、快速, 加标回收率和精密度良好, 能够满足实际应用需要[7]。

摘要：建立了高效液相色谱检测牛奶中氯霉素残留的方法。用乙腈提取氯霉素, 提取液浓缩后用甲醇溶液溶解, 在波长278 nm处用高效液相色谱仪测定氯霉素。该方法氯霉素浓度为130 mg/L时, 样品平均回收率为85.33%97.20%, 相对标准偏差 (RSD) 为5.18%10.63%。该方法适于牛奶中氯霉素残留的检测。

关键词：高效液相色谱,氯霉素,牛奶,检测

参考文献

[1]毕建玲.氯霉素分子印迹聚合物的制备及其在食品残留分析中的应用[D].武汉:华中科技大学, 2008.

[2]宋杰, 宋燕青, 王勇鑫, 等.微生物法在检测牛奶中氯霉素残留的应用[J].河北师范大学学报, 2005 (1) :85-87, 91.

[3]宋巍巍, 丁明星, 张挪威, 等.伏安免疫法检测牛奶中氯霉素残留[J].分析化学, 2007 (12) :1731-1735.

[4]陈少芸, 严成钊, 柴平海, 等.食品中氯霉素残留检测方法应用的探索——高效液相色谱法[J].食品工业, 2004 (2) :35-37.

[5]古丽沙依拉·斯坦别克.酶联免疫法测定牛奶中氯霉素应注意的事项[J].新疆畜牧业, 2013 (08) :46-48.

[6]张杰, 许家胜, 刘连利.高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留[J].化学研究与应用, 2013 (4) :593-595.

篇4：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

关键词:高效液相色谱;盐酸林可霉素预混剂;含量测定

中图分类号:S859.79+6 文献标识码:B 文章编号:1007-273X(2012)10-0004-02

盐酸林可霉素(Lincomycin Hydrochloride)又称洁霉素,化学式C18H34N2O6S,为林可胺类药物,属窄谱抗生素。作用机理为抑制细菌细胞蛋白质的合成,有较好的抗革兰氏阳性菌作用,特别是对葡萄球菌、溶血性链球菌和肺炎链球菌有较强的抑制作用,但其作用效果不及青霉素类和头孢类[1]。临床主要用于敏感菌引起的各种感染,如呼吸系统、免疫系统、皮肤及泌尿系统等组织的感染。用作饲料添加剂时可促进肉鸡和育肥猪生长,提高其饲料利用率。随着兽药行业的发展,其监督制度日益完善,为了适应兽药生产单位质量自控与监督检验机构逐渐增加的监督检验任务的需要,本试验利用高效液相色谱(HPLC)检测原理,建立了快速、准确的用高效液相色谱(HPLC)法测定兽药盐酸林可霉素预混剂中林可霉素含量的方法。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

2 结果

2.1 适应性试验结果

适应性试验结果表明林可霉素与林可霉素B两峰完全分离,相邻之间的分离度为4.35(表1)。色谱峰峰形较好,两峰系统适应性良好(图1)。积分基线在同一水平,表明其积分稳定,样品主峰保留时间与标准品主峰保留时间一致,说明所测物质相同。由于样品是预混剂,物质成分复杂,杂质峰容易影响主物质峰,此方法中样品主峰与杂质峰分离较好(图2)。空白溶液中主峰出峰时间无杂质峰和溶剂峰,表明流动相及溶剂对本方法无干扰。

3 结论

本试验建立了高效液相色谱(HPLC)法测定兽药盐酸林可霉素预混剂中林可霉素的含量。试验结果表明,样品溶液与对照品溶液出峰时间一致,积分稳定,林可霉素峰与林可霉素B峰分离度达到规定要求,与杂质峰完全分离,系统稳定性好。该方法测出样品峰面积的对数与浓度呈良好的线性关系,平均回收率为97.9%,相对标准偏差(RSD)为1.0%。采用本法检测与国内现行的《进口兽药质量标准》所采用的抗生素微生物测定法(生物效价法)相比,检测结果相对一致,且本法具有快速、简便、准确、稳定性和重现性好、能够批量检验等优点。适用于实际生产、质量监督等过程中对盐酸林可霉素预混剂中林可霉素含量的测定,为该产品的质量控制与分析提供了有力的技术保障。

参考文献:

[1] 中国兽药典委员会.兽药使用指南化学药品卷[S].北京:中国农业出版社,2005.

[2] 中华人民共和国农业部.进口兽药质量标准[S].北京:中国农业出版社,1999.

篇5：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

高效液相色谱法同时检测水产品中螺旋霉素与泰乐菌素药物残留

建立了同时检测水产品中螺旋霉素与泰乐菌素药物残留的分析方法.在碱性条件下采用乙酸乙酯提取,提取液挥干后溶于酸性缓冲液中,经正己烷去脂、HLB SPE小柱净化后,采用高效液相色谱进行分析.采用Meck Purospher STAR RP18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)及乙腈和pH 2.5磷酸缓冲溶液的.混合液作梯度淋洗进行分离.分别在232 nm及287 nm对螺旋霉素及泰乐菌素进行紫外检测.方法在1～200 ng之间呈线性相关,相关系数在0.999 8以上,平均回收率为82.2%～89.0%,相对标准偏差为6.24%～9.83%,对螺旋霉素、泰乐菌素的检出限分别为0.005 4 mg・kg-1与0.031 mg・kg-1.

作 者：杨方 李耀平方宇 刘正才 YANG Fang LI Yao-ping FANG Yu LIU Zheng-cai  作者单位：福建出入境检验检疫局,福州,350001 刊 名：理化检验-化学分册  ISTIC PKU英文刊名：PHYSICAL TESTING AND CHEMICAL ANALYSIS PART B:CHEMICAL ANALYSIS 年，卷(期)： 43(4) 分类号：O657.7 关键词：高效液相色谱   溶剂萃取   固相萃取   螺旋霉素   泰乐菌素   水产品  

篇6：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

高效液相色谱法测定糠醛废水中的糠醛含量

采用HPLC方法,以Symmetry 5 μm C18(3.9 mm×150 mm)为色谱柱,在流动相V(甲醇)∶V(水)=70∶30,流速1.0 mL/min下,采用双波长紫外检测器,利用外标法在275 nm下测定糠醛废水中糠醛的含量.此法相对标准偏差RSD＜4.84%(n=6),r=0.999 9,实际样品的平均加标回收率为96.9%～112.5%.

作 者：康春莉 唐晓剑 于宏兵 林学钰 Kang Chunli Tang Xiaojian Yu Hongbing Lin Xueyu  作者单位：吉林大学环境与资源学院,吉林,长春,130012 刊 名：工业水处理  ISTIC PKU英文刊名：INDUSTRIAL WATER TREATMENT 年，卷(期)：2007 27(6) 分类号：O657.7 关键词：糠醛   高效液相色谱   废水处理  

篇7：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

对织物涂层整理剂中微量甲醛的高效液相色谱分析方法进行了系统研究,对衍生条件和色谱分离方法进行了探讨,实现了对涂层整理剂中微量甲醛的准确定量.该方法线性关系良好,回归方程为y=3.892 9x+10.123(r=0.999 93),线性范围为8.0～400 mg/kg,加标回收率在93.2%～106.6%范围,不同浓度样品相对标准偏差在1.6%～6.8%之间.

作 者：赵婷 赵梅 温正如 许伟 ZHAO Ting ZHAO Mei WEN Zheng-ru XU Wei 作者单位：赵婷,赵梅,温正如,ZHAO Ting,ZHAO Mei,WEN Zheng-ru(浙江传化股份有限公司,浙江,杭州,311215)

许伟,XU Wei(陕西科技大学资源与环境学院,陕西,西安,710021)

篇8：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

关键词：氯霉素,高效液相色谱法,含量测定

氯霉素泡腾片为《中国人民解放军医疗机构制剂规范》中收载的外用制剂, 属于抗生素类药物, 临床上主要用于阴道炎及宫颈糜烂。本品现行质量标准为《中国人民解放军医疗机构制剂规范》[1], 该标准规定本品每片含氯霉素 (C11H12Cl2N2O5) 应为标示量的85.0%~115.0%, 含量测定采用紫外分光光度法。《中国药典》2010年版颁布后, 氯霉素原料药的含量测定方法采用高效液相色谱法, 为提高氯霉素泡腾片的质量标准, 有效控制产品质量, 本研究参考《中国药典》2010年版及文献方法[2,3,4], 拟建立高效液相色谱法测定氯霉素泡腾片中氯霉素的含量。研究结果表明本方法操作简便, 专属性好, 精密度高, 可作为氯霉素泡腾片的含量测定方法。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪;BT25S电子天平 (赛多利斯) ;UNICO-2102C型紫外分光光度计 (上海UNICO仪器有限公司) ;PHS-3E型p H计 (上海雷磁) 。

甲醇、乙腈为色谱纯 (上海星可高纯溶剂有限公司) ;庚烷磺酸钠为色谱纯 (天津市科密欧化学试剂有限公司) ;三乙胺、磷酸二氢钾为分析纯 (北京化工厂) 。氯霉素 (中国食品药品检定研究院, 批号:130555-201203) ;氯霉素二醇物 (中国药品生物制品检定所, 批号:130436-200704) ;对硝基苯甲醛 (中国药品生物制品检定所, 批号:130562-200902) ;氯霉素泡腾片 (解放军总医院第一附属医院自制, 批号130903、130904、130905) 。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil 100-5 C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液 (取磷酸二氢钾6.8 g, 用0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000 m L, 再加三乙胺5 m L, 混匀, 用磷酸调p H值至2.5) -乙腈 (70∶30) ;柱温:室温;检测波长:274 nm;流速:1.0 m L/min;进样量:10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 氯霉素二醇物对照品溶液的制备

精密称定氯霉素二醇物对照品10 mg, 置50 m L量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取1 m L, 置于10 m L量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为氯霉素二醇物对照品溶液。

2.2.2 对硝基苯甲醛对照品溶液的制备

精密称定对硝基苯甲醛对照品10 mg, 置50 m L量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取1 m L, 置于10 m L量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为对硝基苯甲醛对照品溶液。

2.2.3 氯霉素对照品溶液的制备

精密称定氯霉素对照品12.5 mg, 置25 m L量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取1 m L, 置于10 m L量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为氯霉素对照品溶液。

2.2.4系统适用性溶液的制备

分别精密量取氯霉素二醇物对照品, 对硝基苯甲醛对照品及氯霉素对照品的母液各1 m L, 置于10 m L量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀既得。

2.2.5 阴性溶液的制备

按处方比例称取混合辅料550 mg, 加50%甲醇适量, 搅拌溶解, 转移至25 m L量瓶中, 用50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 过滤, 精密量取续滤液1 m L置10 m L量瓶中, 用50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为阴性溶液。

2.2.6 样品溶液的制备

取本品适量 (约相当于氯霉素2.5 mg) , 置50 m L量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液体作为样品溶液。

2.3 系统适应性试验

精密量取氯霉素二醇物对照品溶液、对硝基苯甲醛对照品溶液、氯霉素对照品溶液、系统适用性溶液、辅料溶液及样品溶液各10μL, 按“2.1”项下色谱条件测定, 在此色谱条件下辅料无干扰, 氯霉素二醇物、对硝基苯甲醛和氯霉素分离度均大于2.0, 系统适用性良好。见图1。

A.氯霉素、氯霉素二醇物及对硝基苯甲醛混合对照品 (1.氯霉素;2.氯霉素二醇物;3.对硝基苯甲醛) ;B.氯霉素对照品 (1.氯霉素) ;C.空白溶剂;D.阴性溶液;E.氯霉素泡腾片样品 (1.氯霉素)

2.4 线性关系考察

精密称取氯霉素对照品10.39 mg, 置50 m L量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为线性储备液;分别精密量取1、1.5、2、2.5、3、3.5 m L置10 m L量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 作为线性供试液。分别精密量取上述供试液10μL, 注入液相色谱仪, 记录色谱图。以浓度C (μg/m L) 为横坐标, 以峰面积A为纵坐标进行线性回归, 计算回归方程为A=16.35C+8.987 (r=0.9995, n=6) 。结果表明, 氯霉素在20.7~72.6μg/m L范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取“2.2.3”项下的对照品溶液, 按“2.1”项下色谱条件, 连续进样6次, 测定峰面积平均值为851.28, RSD为0.03%, 表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批号 (批号:130903) 样品, 分别按照“2.2.6”项下方法制备供试品溶液, 按“2.1”项下色谱条件, 重复测定6份样品, 结果样品含量测定RSD是0.41% (n=6) , 重复性较好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.3”项下的对照品溶液, 分别放置0、8、12、24、48 h后, 按“2.1”项下色谱条件测定, 结果室温下氯霉素泡腾片主峰面积48 h内基本不变, RSD值为0.15%, 满足测定要求。

2.8 回收率试验

分别精密称取对照品适量 (相当于氯霉素40、50、60 mg) , 置100 m L的量瓶中, 按处方比例加入辅料, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 分别精密量取1 m L溶液, 置于10 m L量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 分别制得浓度为80%、100%、120%的供试品溶液。取供试品溶液按“2.1”项下色谱条件测定各水平的回收率。结果平均回收率为100.10%, RSD值为0.93%, 符合含量测定要求。见表1。

2.9 样品含量测定

取3批样品 (批号:130903、130904、130905) 按照“2.2.6”项下方法制备样品溶液, 按“2.1”项下色谱条件测定, 结果氯霉素的含量均值分别为101.40%、101.54%、100.67%, 符合规定。见表2。

3 讨论

原含量测定标准采用紫外分光光度法, 氯霉素二醇物在检测波长处有较强吸收, 干扰氯霉素的含量测定;按照《中国药典》2010年版中氯霉素的含量测定方法检测, 杂质对硝基苯甲醛的出峰时间较晚, 因此选择提高有机相的比例来获得良好的检测效率, 同时氯霉素色谱峰与杂质峰良好分离[5,6]。

由于氯霉素泡腾片含有崩解剂等药用辅料, 考虑辅料对氯霉素含量测定的干扰, 参考《中国药典》2010年版二部氯霉素原料药的检测波长 (277 nm) , 本试验分别制备氯霉素溶液和空白辅料溶液在190~500 nm扫描紫外吸收光谱, 结果氯霉素在274 nm处有最大吸收, 空白辅料在231 nm处有最大吸收, 而在274 nm处基本没有吸收, 所以本法选择274 nm作为检测波长。

本文参考氯霉素片质量标准[7]和文献方法[8,9,10], 对流动相进行优选, 确定适合的流动相并依据《药品质量分析方法验证指导原则》[7]附录194-195对本方法进行验证, 结果表明本方法操作简便, 专属性好, 精密度高, 可作为氯霉素泡腾片的含量测定方法。

参考文献

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[3]王艳丽, 何德云, 赵晓娟, 等.HPLC法测定消痤搽剂中氯霉素和水杨酸含量[J].解放军药学学报, 2013, 29 (1) :47-48, 68.

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[7]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:中国医药科技出版社, 2010.

[8]陈红君, 干志彬, 沈鸣, 等.HPLC法同时测定双氯达克乳膏中2种主药及防腐剂的含量[J].中国药房, 2013, 24 (29) :2765-2767.

[9]张囡.HPLC法测定复方氯霉素乳膏中氯霉素和丙酸倍氯米松含量[J].中国药房, 2012, 23 (13) :1223-1224.

篇9：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

关键词：液相色谱法 氯霉素残留 检测

中图分类号：TS207 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）02-0018-01

1 氯霉素的危害

氯霉素的本质是抗生素，长期滥用不仅不会降低病原菌的危害，反而还会导致病原菌的抗药性增强。此外，长期使用氯霉素还会在动物体内造成残留，而这会严重损害动物的生殖系统，主要表现为生育力降低、产仔数减少、流产等，进而严重威胁到畜牧养殖业的生产。一旦动物体内出现氯霉素残留，就可能随着由这些动物制成的肉制食品或其衍生物乳制品而进入人体，因为氯霉素有严重的副作用，进而对人体健康就会产生很大的危害。例如氯霉素对人体造血系统危害极大，能导致可逆性骨髓抑制和不可逆性再生障碍性贫血等疾病。又例如新生儿因服用含有氯霉素残留的乳制品后，极易引发“灰婴综合征”等疾病。

2 实验材料与方法

2.1 主要仪器

实验主要用到的仪器有：液相色谱仪（waters 600-996二极管阵列检测器）、紫外可见分光光度计（岛津 UV-2450）、超声波清洗器（DL-120B）、高速台式离心机（TDL-100）、旋转蒸发仪（Heidolph-4000型号）、周转式振荡器（MSI）以及0.45μm的有机微孔滤膜。

2.2 试验试剂

实验主要用到的试剂有：氯霉素标准物质（纯度≥98.5%）、乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）以及由实验室自制的超纯水。

2.3 标准溶液配制

精密称取氯霉素标准品50mg并置于50mL容量瓶中，然后用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1.0mg/L的储备液，贮存于4℃冰箱中。储备液待使用时再配制成相应浓度的溶液。

2.4 牛奶试样配制

选用牛奶为待检测食品，将一定量的氯霉素标准储备液添加到不含氯霉素的牛奶样品中，分别配制成1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L和10.0 mg/L 的供试样品。

2.5 供试样品提取

精密吸取牛奶供试样品10.00mL，置于离心管中，加入乙腈定容，涡旋振荡1min后，超声提取10min。然后以5000 r/min的转速离心10min，移取上清液至100mL蒸发瓶中，重复提取2次，合并上清液，上清液使用旋转蒸发仪于35℃旋转蒸发至近干，用甲醇定容至5.0mL，经0.45μm有机滤膜过滤，试液供液相测定。

3 实验结果讨论

3.1 液相色谱条件的建立

取氯霉素标准储备液进行相应的稀释，然后在紫外分光光度计上扫描石英比色皿。由试验分析可以看出，氯霉素在278 nm处有吸收峰，故选择氯霉素检测波长为278nm。

液相色谱条件为：色谱柱采用岛津Shim-Pack VP-ODS（150.0×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇-水溶液（体积比为40∶60），流速1.0mL/min；波长278nm；柱温30℃；进样量10μL。

3.2 标准曲线的绘制

取一定量的标准储备液并稀释成质量浓度分别为1mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L以及30 mg/L的標准系列溶液。经过计算可知，在1～30mg/L的范围内，氯霉素标准曲线的回归方程为Y=0.2027X+0.4474，相关系数r2=0.9994。

3.3 方法回收率与精密度

按第3节所述进行牛奶的供试样品提取，测定氯霉素含量并计算回收率，每个水平进行3次重复试验，结果见表1。

由表1可知，样品平均回收率在85.67%～98.20%的范围内，RSD为2.81%～8.76%。

4 结语

采用液相色谱法检测食品中的氯霉素残留具有快速、准确的特点，并且在氯霉素检测中得到了广泛的应用。而为了实现更加高效精确的检测，还需要相关技术人员作更进一步的研究和努力。

参考文献

[1] 张杰，许家胜，刘连利.高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留[J].化学研究与应用，2013（4）：593-595.

篇10：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

反相高效液相色谱法分离测定墨旱莲中的鳢肠醛

对墨旱莲中的有效成分鳢肠醛进行了分离和结构鉴定,并对其含量进行了分析.色谱条件:Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比为65:35),流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长为365 nm,进样量为10 μL.结果表明,鳢肠醛的`峰面积与其质量浓度有良好的线性关系(r=0.999 3).方法的加样回收率为96.7%～100.0%.该方法简便、快速、准确,可作为墨旱莲质量控制的一个有效方法.

作 者：原红霞 高晓霞 赵云丽 王晓英 唐倩 于治国 YUAN Hongxia GAO Xiaoxia ZHAO Yunli WANG Xiaoying TANG Qian YU Zhiguo  作者单位：沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016 刊 名：色谱  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY 年，卷(期)：2007 25(5) 分类号：O658 关键词：反相高效液相色谱法   鳢肠醛   墨旱莲  

篇11：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

为了利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)更准确地测定发酵液中的生物素含量,以安捷伦Zorbax SB-C18(4.6 cm×250 cm,5 μm)为色谱柱,对液相色谱紫外线检测波长和流动相的溶液配比、K2HPO4离子浓度和pH值进行筛选.结果表明,以体积分数91.5% K2HPO4(0.04 mmol/L)与体积分数8.5% CH3CN混合液为流动相,在pH值为2.5和紫外检测波长为215 nm的条件下,获得的生物素吸收峰面积与质量浓度的.线性相关系数达0.9999,生物素加标回收率达99.07%～101.26%,相对标准偏差为0.48%～0.82%.由此可见,在上述条件下高效液相色谱法不仅可用于发酵液中生物素含量的测定,而且操作简便,测定结果可靠.

作 者：蒲跃进 周占琴 杨明明 刘波 樊俊华 PU Yue-jin ZHOU Zhan-qin YANG Ming-ming LIU Bo FAN Jun-hua 作者单位：蒲跃进,PU Yue-jin(西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100;湖北省畜牧兽医研究所,湖北,武汉,430209)

周占琴,杨明明,ZHOU Zhan-qin,YANG Ming-ming(西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100)

刘波,樊俊华,LIU Bo,FAN Jun-hua(武汉阳光广济制药股份有限公司,湖北,武汉,430068)

篇12：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

分散固相萃取-高效液相色谱法快速检测猕猴桃中的氯吡脲

建立了高效液相色谱快速检测猕猴桃中氯吡脲残留的`方法.试样经乙腈提取、丙基乙二胺(PSA)分散固相萃取(DSPE)净化后在C18柱上以乙腈-0.01 mol/L磷酸水溶液(体积比为35:65)为流动相进行分离,在260 nm波长下检测.氯吡脲的检出限为0.005 mg/kg,在0.05～10.00 mg/L时线性关系良好(r=1.000).试样在0.05,0.60,1.20 mg/kg三个添加水平的回收率为82.0%～112.0%,相对标准偏差(RSD)(n=5)为2.41%.该方法简便快速,准确灵敏,适合大批量样品的快速处理.

作 者：胡江涛 盛毅 方智 金晶 何开蓉 HU Jiangtao SHENG Yi FANG Zhi JIN Jing HE Kairong 作者单位：四川出入境检验检疫局技术中心,四川,成都,610041刊 名：色谱 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY年，卷(期)：25(3)分类号：O658关键词：分散固相萃取(dispersive solid phase extraction) 高效液相色谱(HPLC) 氯吡脲(forchlorfenuron) 猕猴桃(Chinese gooseberry)

篇13：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

1 仪器与试药

1.1 仪器:

RC806溶出试验仪 (北京中西远大科技有限公司) ;CC-100分析型色谱柱温箱 (成都纳杰科技有限公司) ;WP-UP-Ⅱ-30分析型实验室专用超纯水机 (四川沃特尔水处理设备有限公司) ;EX1700超高效液相色谱仪 (上海伍丰科学仪器有限公司) ;B1510E-B8510E超声波清洗器 (必能信超声 (上海) 有限公司) :UV2800紫外可见分光光度计 (上海舜宇恒平科学仪器有限公司) ;FA1004万分之一分析天平 (上海书培实验设备有限公司) 。

1.2 色谱柱:奥泰公司C18色谱柱 (284 mm×4.6mm, 5μm) 。

1.3 对照品:克拉霉素购自中国药品生物制品检定所。

1.4 试剂:甲醇为色谱纯;水为纯化水, 其它试剂均为分析纯。

1.5 试药:克拉霉素片。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果, 确定色谱条件如下[4,5,6,7,8,9,10,11]。流动相:0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺 (50∶50:0.01) 为流动相, 检测波长:210nm, 流速:1.0m·min-1。柱温:30℃。理论板数按克拉霉素峰计算应不得低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取克拉霉素对照品适量, 置容量瓶中, 加流动相制成每1m L含0.5mg的溶液, 即得。

2.3 克拉霉素溶出度测定方法

取本品, 照溶出度测定法 (中国药典2010版附录) , 以人工胃液250m L为溶剂, 转速为100r/min, 依法操作, 经30分钟时, 取溶液20m L置, 50m L量瓶中, 加4%氢氧化钠5m L, 置水浴中煮沸5min, 放冷, 加稀硫酸2.5m L并, 加水稀释至刻度, 摇匀, 过滤, 按2.1项下的色谱条件, 取续滤液10μl, 注入液相色谱仪。

2.4 精密度试验

精密称取克拉霉素对照品适量, 加流动相使溶解, 制成浓度为0.5mg·m L-1的供试品溶液。照上述色谱条件, 精密吸取10μl, 连续进样6次, 记录峰面积。结果, RSD=0.99%, 表明本方法精密度良好。

2.5 对照品的线性考察

精密称取克拉霉素对照品85mg, 置5ml容量瓶中, 加入流动相使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 分别精密吸取0.5、1.5、2.0、2.5、3.0m L, 置于5m L量瓶中, 加流动相稀释至刻度, 摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL, 注人液相色谱仪, 依照2.1项下的色谱条件测定, 记录色谱峰。以峰面积 (Y) 为纵坐标, 对照品进样量 (X) 为横坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。结果表明, 克拉霉素在0.17~1.02mg·m L-1范围内呈良好的线性关系。

2.6 重现性试验

称取同一批的克拉霉素片样品6份, 按测定方法项下的方法溶出度测定方法并计算样品的RSD值, 结果RSD为0.63%, 结果表明此方法的重现性良好。

2.7 准确度试验

采用加样回收试验, 取已知含量的同一批供试品各6份, 精密称定, 分精密添加一定量的克拉霉素对照品, 按供试品制备所述方法制备供试品溶液, 测定含量 (同时测定样品含量) , 计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%, RSD为0.92%。

2.8 样品稳定性试验

取同一批克拉霉素片样品, 按2.3项下的溶出度测定方法制备供试品, 将供试品置室温下放置, 分别于第0、1、2、3、4、5小时, 精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中, 记录色谱图。测定克拉霉素片中克拉霉素的RSD=0.66%。结果表明供试品5小时内稳定。

2.9 溶出度测定

取克拉霉素片3批, 照克拉霉素溶出度项下的方法测定, 克拉霉素溶出度分别为:92.95%, 95.36%, 91.19%。

3 讨论

3.1 流动相的选择

分别考察甲醇-水-三乙胺 (18∶85:0.1) , 0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺 (50∶50:0.01) 为流动相, 0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺 (60∶40:0.01) 不同比例的流动相, 结果以0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺 (50∶50:0.01) 为流动相为流动相, 供试品各峰分离效果最好, 故选用0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺 (50∶50:0.01) 为流动相为流动相。

3.2 检测波长的选择

制备克拉霉素对照品稀释液照紫外-可见分光光度法 (中国药典2010版一部附录ⅤA) , 于190~900nm波长范围内进行全波长光谱扫描, 记录吸收光谱。在210nm处有最大吸收峰, 故选用210nm为检测波长[12]。

本实验表明此方法可用于克拉霉素片中克拉霉素的溶出度测定。克拉霉素片中克拉霉素的溶出度大于80%.本法操作简便, 结果准确可靠, 可用于本品中克拉霉素溶出度的质量控制。

摘要：建立反相高效液相色谱法测定克拉霉素片中克拉霉素的溶出度。方法:采用奥泰公司C18色谱柱 (284 mm×4.6mm, 5μm) , 0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺 (50∶50:0.01) 为流动相, 检测波长为210nm, 流速为1.0ml/min, 柱温为30℃。克拉霉素在0.17～1.02mg.mL-1范围内呈良好的线性关系 (r=0.99995) 。克拉霉素平均回收率分别为98.9%。结论:本法简便、准确, 可用于克拉霉素片中克拉霉素的溶出度测定。

关键词：克拉霉素片,含量,测定

参考文献

[1]张石革.克拉霉素的药物学特点与临床评价[J].中国药房, 1995, 6.

[2]李晓丽, 周长玉, 史昆鹏.利迈先三联疗法根除幽门螺杆菌疗效观察[J].中国药房, 2001, 4.

[3]付蓉, 张国成, 钱新宏.克拉霉素与红霉素治疗小儿呼吸道支原体感染的对比研究[J].中国药房, 2001, 2.

[4]邢静娴, 刘燕鹏, 柳晓蕊, 江桂生, 吴传斌.挤出滚圆法制备克拉霉素微丸及工艺优化[J].中国现代应用药学, 2011, S1.

[5]陈超.不同克拉霉素载药微胶囊膜的构筑及缓控释性能的研究[D].锦州:渤海大学, 2012.

[6]潘建斌.阿奇霉素微囊干混悬剂的制备及质量考察[D].保定:河北大学, 2009.

[7]李海刚.注射用克拉霉素脂质复合物的研究[D].沈阳:沈阳药科大学, 2007.

[8]刘洋;克拉霉素缓释微丸的研制[D].沈阳:沈阳药科大学, 2005.

[9]边佳明.克拉霉素胃漂浮小丸的研制及体外释放研究[D].重庆:第三军医大学, 2006.

[10]马小军, 郑建华, 王为, 谢威扬.克拉霉素漂浮-生物粘附微囊的制备及缓释性能的研究[A].2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006.

[11]梁建华, 单春燕, 侯敏, 甘强, 吴姝, 姚国伟.克拉霉素的晶型及其转换研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006.

篇14：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

【摘要】目的：探究分析高效液相色谱法及在药品检验中的应用，并总结检验经验。方法：本研究选择银杏叶提取物中银杏黄酮类药物为研究对象，平均分为对照组和实验组，样品量均称取0.2g，其中对照组采用薄层色谱（TLC）法进行检测，实验组组采用高效液相色谱法（HPLC）进行检测，之后，比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度和产品回收率。结果：实验组采用高效液相色谱法（HPLC）进行检测后，银杏黄酮水解分离三种主要黄酮贰元，分别为黄酮贰元槲皮素、山萘素和异鼠李素纯组分分离率分别为98.79%、98.77、98.89（P<0.05），纯度分别为99.89%、99.99%、99.97%（P<0.05）；实验组山萘素加样后的产品回收率为99%，明显高于对照组（P<0.05）；以上差异均具有统计学意义。结论：采用高效液相色谱法进行药品检验，具有方法简便、优化、精密度高的优点，能够获得比较好的分离效果和产品回收率，测定结果可靠且快速可行，值得推广应用。

【关键词】高效液相色谱法；薄层色谱；银杏黄酮；临床应用

【中图分类号】R562.21【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2015）01-0598-01

本研究选择银杏耶提取物中银杏黄酮类药物为研究对象，平均分为对照组和实验组，样品量均称取0.2g，探究分析高效液相色谱法及在药品检验中的应用，并总结检验经验。现报告如下。

1.主要试剂与仪器

1.1主要试剂和药品

银杏叶提取物（EGb德国威玛舒培博士药厂，注册证号H20090296）

重蒸水（超纯水仪滤膜过滤）

甲醇（分析纯AR，深圳市华昌化工有限公司）

磷酸（分析纯，深圳市华昌化工有限公司）

黄酮贰元槲皮素对照品（上海亚培生物科技有限公司）

1.2仪器

美国光谱物理公司高效液相色谱仪SP8800泵，54400型积分仪，ChromDe脱气机，Spheri一5RP一18（5um）色谱柱（22ommx4.6mm），进样器配10uL定量管。WatersM490可编程序紫外检测器。

2.实验方法

本研究选择银杏叶提取物中银杏黄酮类药物为研究对象，平均分为对照组和实验组，样品量均称取0.2g，其中对照组采用薄层色谱（TLC）法进行检测，实验组组采用高效液相色谱法（HPLC）进行检测，之后，比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度和山萘素产品回收率。

2.1样品制备

称取0.2g银杏叶提取物，加入40ml甲醇，震荡摇匀，使其完全溶解，然后加入1.5mol/L的盐酸溶液40mL，混匀，置水浴锅中37°C加热120分钟，待冷却后，置于50ml容量瓶中，利用甲醇进行定容。室温下放置备用。

2.2高效液相色谱法（HPLC）条件

流动相：甲醇一0.4%磷酸溶液（55：45）

流速：1.omL/mini

柱温：25℃

進样体积：10uL

检测波长：360nm

3统计学方法

本研究中，所有的检测统计学数据采均用SPSS18.0软件进行处理，结果采用均数±标准差（X±s）进行表示，数据均经由SPSS18.0软件进行t检验。P<0.05表示数据具有差异性以及具有统计学意义。P<0.01表示数据具有显著性差异以及具有统计学意义。

4.结果

4.1比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度

比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度。结果如表1所示。实验组采用高效液相色谱法（HPLC）进行检测后，银杏黄酮水解分离三种主要黄酮贰元，分别为黄酮贰元槲皮素、山萘素和异鼠李素纯组分、分离率分别为98.79%、98.77、98.89（P<0.05），纯度分别为99.89%、99.99%、99.97%（P<0.05）；以上差异均具有统计学意义。

5.讨论

色谱法最初仅仅是作为一种分离手段，是根据混合物中不同组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些组分在两相间进行反复多次的分配从而得到分，高效液相色谱法（HPLC）是近年来逐渐应用到药品、食品等物质的监测工作当中，本实验通过采用高效液相色谱法（HPLC）分析银杏叶提取物中银杏黄酮类药物，研究发现，采用高效液相色谱法（HPLC）分析后，银杏黄酮水解分离三种主要黄酮贰元，分别为黄酮贰元槲皮素、山萘素和异鼠李素纯组分、分离率分别为98.79%、98.77、98.89（P<0.05），纯度分别为99.89%、99.99%、99.97%，分离率和纯度值都相对于薄层色谱均较高，另外通过外部加样山萘素，检测得知产品回收率为99%。可见，临床上采用尿常规检验联合C-反应蛋白诊断小儿急性阑尾炎，能够有效提高诊断的准确率，降低误诊概率，具有一定的诊断价值，对于急性阑尾炎确诊以及及时治疗具有重要的意义。值得临床推广应用。

参考文献

[1]金蕊，王宝庆，金哲雄.高效液相色谱-质谱联用技术在中药鉴定中的应用[J].生命科学仪器.2009（05）

[2]刘艳芳，刘艳明，董军，李伟，王超然，张秀莉，梁鑫淼.中药物质基础的高效液相色谱分离分析方法研究[J].中国科学（B辑：化学）.2009（08）

[3]付秀娟，王卓伟，谭生健.高效液相色谱法测定丹芩滴丸中黄芩苷和隐丹参酮含量[J].中国医院药学杂志.2005（07）

篇15：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

利用高效液相色谱与二极管阵列检测器/电喷雾质谱联用技术研究了牡丹花中的花色苷类化合物,分离检测了五种花色苷,结合紫外吸收光谱和质谱信息分别鉴定为矢车菊-3,5-O-二葡萄糖苷,矢车菊-3-O-葡萄糖苷、芍药-3,5-O-二葡萄糖苷、芍药-3-O-葡萄糖苷和天竺葵-3,5-O-二葡萄糖苷;比较了六个牡丹品种的花色苷组成.

作 者：樊金玲 朱文学 沈军卫 陶冠军 FAN Jin-ling ZHU Wen-xue SHEN Jun-wei TAO Guan-jun 作者单位：樊金玲,朱文学,沈军卫,FAN Jin-ling,ZHU Wen-xue,SHEN Jun-wei(河南科技大学食品与生物工程学院,河南,洛阳,471003)

陶冠军,TAO Guan-jun(江南大学分析测试中心,江苏,无锡,214036)

篇16：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010型高效液相色谱仪（自动进样器，四元泵，紫外检测器）；抑菌圈自动测量仪CAM-III。

土霉素对照品（批号：130487-200702，含量为93.6%中国药品生物制品检定所），土霉素片（宜昌人福药业有限责任公司，批号20130107 20121203石家庄市协和药业公司批号20130607）；磷酸氢二铵、草酸铵，二甲基甲酰胺、盐酸均为分析纯，水为超纯水，空白样品（是指不含土霉素，其余辅料按制剂压片）自配。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

WH-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）；流动相：0.05 mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2 mol/L磷酸氢二铵（70∶25∶5）；流速：0.9 mL/min，柱温：30℃，检测波长：282 nm：进样量：20μL[1]。

2.2 溶液制备

对照品溶液：精密称取土霉素对照品约25 mg置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液5 mL使溶解后，再加水至刻度，摇匀，制成每l mL含土霉素l mg的溶液，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，再用0.01 mol/L盐酸溶液稀释至每l mL含土霉素0.1 mg的溶液。

供试品溶液：土霉素片（0.25克/片）取20片精密称定重量，精密称取适量（约相当于土霉素25 mg）置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液5 mL使溶解后，再加水，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL置50 mL量瓶中，加0.01 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀即得每l mL含土霉素0.1 mg的溶液。

2.3 系统适应性试验

精密称取土霉素对照品约25 mg置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液5 mL使溶解后，再加水至刻度，摇匀，制成每l mL含土霉素l mg的溶液，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，再用0.01 mol/L盐酸溶液稀释至每l mL含土霉素0.1 mg的溶液，摇匀。在上述色谱条件下，取上述20μL自动进样（图1），计算柱效为6478，分离度符合要求，连续进样5次，峰面积的RSD=0.48%。

2.4 空白干扰试验

取空白样品（是指不含土霉素，其余辅料按制剂压片）按测定方法依法操作，取20μL自动进样，记录色谱图，未见杂质峰（图2）。

2.5 线性关系考察

取上述土霉素对照品溶液（1.0 mg/mL），分别用0.01 mol/LHCL配制成0.01、0.025、0.050、0.075、0.10、0.50、0.75、0.25 mg/mL，共9个浓度系列对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液各20μL注入色谱仪自动进样，按拟定色谱条件测定。得各浓度峰面积，以峰面积为纵座标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y=-2.10636×10-3+2.0635×10-9X(r=0.9999）。结果表明，土霉素片浓度在0.01～1 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.6 加样回收试验

分别精密量取对照品溶液（1 mg/mL)5.00、3.75、2.50 mL置50 mL量瓶中，各加入处方比例量的空白样品，用0.01 mol/L HCL稀释至刻度，摇匀，过滤，得0.1、0.075、0.05 mg/mL的溶液，按测定方法依法测定，自动进样20μL，计算结果见表1。

2.7 稳定性实验

取0.1 mg/mL对照品溶液重复进样5次，每次20μL，峰面积的RSD=0.48%。上述同一份溶液于0、2、4、6、8 h分别进样20μL，测定土霉素峰面积，结果RSD=1.2%n=5）。

2.8 样品测定

取土霉素片按上述含量测定方法及抗生素微生物法测定法[2]，结果见表2。

3 讨论

3.1 色谱柱、流动相及检测波长，参考盐酸土霉素含量测定方法。

使用C18柱和上述流动相，均有较理想的分离效果及适当的保留时间，测定波长选在282 nm也有满意的吸收值。本实验使用进口WH-C18(250 mm×4.6 mm,5μm）柱效果更理想。

3.2 线性关系考察

取土霉素对照品配制的0.01～1 mg/mL的9个浓度系列的溶液，测得各点的平均峰面积，并以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程Y=-2.10636×10-3+2.0635×10-9X，相关系数r为0.9999表明土霉素在0.01～1 mg/mL的浓度范围内有良好的线性关系。

3.3 空白干扰试验：

可看出空白样品在土霉素峰保留时间处（约10 min）无明显杂峰干扰。

3.4 加样回收率试验：

从表1数据可说明本方法有较好的回收率100.1%。

3.5

稳定性试验，表明本法重复性较好RSD=0.48%，溶液在8h内稳定，能满足测定的要求。

3.6

高效液相色谱法与微生物法比较，从表2数据表明HPLC法与抗生素微生物法结果近似，HPLC法完全可以取代抗生素微生物检定法。用于土霉素片的含量测定[3]。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2005:462-463.

[2]中华人民共和国卫生部.药品标准(抗生素药品第一册)[S].1989.

篇17：高效液相色谱法分析海水中的氯霉素

摘 要：吩胺霉素是我国具有自主知识产权的新型抗生素类杀菌剂.选取番茄及三类理化性质不同的土壤为研究对象，建立了吩胺霉素在上述基质中的液相色谱检测方法.土壤中吩胺霉素选择混合液（V氨水∶V乙醇∶V二氯甲烷=1∶2∶3）振荡提取，番茄中吩胺霉素采用乙腈振荡提取，碱性氧化铝柱净化.土壤与番茄中的平均回收率分别为80.2%～95.7%和80.1%～85.6%，RSD（相对标准偏差）分别为2.14%～4.17%和4.12%～5.17%.吩胺霉素的最小检出量为0.2 ng，在基质中最低检测限为0.01 mg/kg.本方法简单可靠，基质效应弱，符合农药残留分析要求，可用于土壤和番茄中吩胺霉素的残留检测.

关键词：吩胺霉素；番茄；土壤；高效液相色谱；基质效应

中图分类号：X592 文献标识码：A

Abstract：Phenazine1carboxamide is a new pesticide. This paper evaluates the residue of phenazine1carboxamide in tomato and three kinds of soils. New methods for determining phenazine1carboxamide residue in these matrices were developed by high performance liquid chromatography detection. Phenazine1carboxamides from soil with ammonia water + ethanol + dichloromethane = 1+2+3（v/v） and from tomato with acetonitrile were exacted， followed by chromatography columns （basic aluminum） cleanup. The mean recoveries of phenazine1carboxamide in soil and tomato were 80.2% to 95.7% and 80.1% to 85.6% respectively， while the relative standard deviations were 2.14% to 4.17% and 4.12% to 5.17%， respectively. The minimum detectable quantity of phenazine1carboxamide was 0.2 ng， and the limit of detection was 0.01 mg/kg. In a whole， this method is simple and reliable， and has weak matrix effects， which satisfies the requirement of pesticide residue analysis. It is applicable to determine the phenazine1carboxamide residues in soil and tomato.

Key words：phenazine1carboxamide； tomatoes； soil； HPLC； matrix effects

农药可以杀虫、杀菌、除草，改善作物的生长环境，为作物生产带来效益，然而不合理地使用农药也会带来环境风险和经济损失.生物农药活性成分属于天然成分，具有对人类和动物安全、难产生生物抗性、可有效控制病虫害等优点[1]，是未来农药发展的趋势.

吩胺霉素是我国具有自主知识产权的新型抗生素类杀菌剂.它由绿针假单胞菌nlsy001（Pseudomonas chlororaphis）通过微生物培养、发酵、提取而获得，是一种对多种真菌性植物病害具有良好抑制效果的新型生物农药.吩胺霉素易溶于丙酮、二氯甲烷、乙醇等有机溶剂，在水中的溶解性较差，化学性质稳定，分子式为C13H9N3O，分子量为223.2.

目前国内关于吩胺霉素的研究报告较少.熊件妹等[2]曾研究了吩胺霉素对黄瓜枯萎病的抑制作用.关于吩胺霉素在土壤以及农产品中的殘留检测方法尚未有报告.高效液相色谱已广泛应用于环境基质中有机污染物质的检测[3].本文选取番茄、3类土壤为研究对象，初步研究吩胺霉素在上述基质中的提取检测方法，以期为土壤以及农产品中的吩胺霉素的残留检测提供科学依据.

1 材料与仪器

1） 仪器：高效液相色谱仪， LC20ADXR（日本岛津公司）；AUW220D型分析天平（日本岛津公司）；Scout SE型电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；RE52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；HY1B型回旋振荡器（江苏金坛医疗仪器厂）；SC3614型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司），0.22 μm有机相膜.

2） 试剂与样品：吩胺霉素标准品，95%（农业部农药检定所）；甲醇为色谱级；二氯甲烷、乙腈、正己烷、乙酸乙酯、无水硫酸钠、无水硫酸镁、氯化钠均为分析纯；碱性氧化铝（100～200 μm）；稀氨水（V浓氨水∶V纯水=1∶9）；番茄来自湖南化工研究院未施用吩胺霉素实验田； 土壤选择未被吩胺霉素污染的吉林黑土、北京潮土以及湖南红土，其理化性质见表1（湖南省化肥农药质量监督检验授权站检测）.

2 实验标准方法

2.1 标准曲线绘制

称取0.026 3 g的吩胺霉素标准样品于50 mL容量瓶中，乙腈定容，配制成500 mg/L的储备液，使用前保存于4 ℃的冰箱.将储备液用乙腈配制成质量浓度为0.01 mg/L， 0.05 mg/L， 0.10 mg/L， 0.50 mg/L， 1.00 mg/L， 10.00 mg/L的系列标准溶液，绘制标准曲线.

2.2 基质匹配标准溶液[4]

将提取后的空白样品基质，添加0.01 mg/L， 0.05 mg/L， 0.10 mg/L， 0.50 mg/L， 1.00 mg/L， 10.00 mg/L系列标准溶液，配制基质匹配标准溶液.

2.3 样品前处理

2.3.1 样品制备

用匀浆搅拌机将清洗后的番茄绞碎，用采样袋收集；土壤取样深度15 cm，多点均质采样后混合，经自然风干，过40 μm筛，用采样袋收集，样品使用前均储存于4 ℃条件下.

2.3.2 土壤的提取净化

称取20 g土壤于150 mL塑料离心瓶，提取液（V氨水∶V乙醇∶V二氯甲烷=1∶2∶3）60 mL振荡提取40 min，4 000 r/min条件下离心8 min，将上清液过脱脂棉转移至分液漏斗；残渣用20 mL二氯甲烷洗涤，洗涤液并入分液漏斗，用二氯甲烷振荡萃取2次，每次50 mL，分层，合并有机相.有机相过无水硫酸钠后收集于圆底烧瓶，45 ℃水浴旋转蒸发至近干，冷却后用2 mL乙腈+甲醇（V乙腈∶V甲醇=1∶1）定容，过0.22 μm有机相膜待检测.

2.3.3 番茄的提取净化

称取20 g番茄样品于150 mL玻璃锥形瓶中，50 mL乙腈振荡提取40 min，将提取液过脱脂棉转移至分液漏斗，残渣用20 mL二氯甲烷洗涤，洗涤液并入分液漏斗，用二氯甲烷振荡萃取2次，每次50 mL，分层，合并有机相.有机相过无水硫酸钠后收集于圆底烧瓶，45 ℃水浴旋转蒸发至近干，5 m L正己烷溶解，待净化.

采用干法装柱，玻璃层析柱中依次装入2 g无水硫酸钠、2 g碱性氧化铝和2 g无水硫酸钠，并不断用吸耳球轻轻敲打至填充密实.10 mL正己烷预淋层析柱后上样，用15 mL正己烷+二氯甲烷（体积比为8∶2）混合液淋洗，弃去淋洗液，继续用150 mL乙酸乙酯洗脱目标物，洗脱液收集于圆底烧瓶中，于45 ℃水浴旋转蒸发至近干，2 mL乙腈+甲醇（体积比1∶1）定容，过0.22 μm有机相膜待检测.

2.4 仪器条件

2.4.1 高效液相色谱条件

色谱柱为WelcholtimateAQGg，150 mm×4.6 mm；柱温40 ℃，检测器为PDA，检测波长254 nm；流动相：甲醇水（体积比49∶51， 10 min），甲醇水（体积比95∶5， 5 min），甲醇水（体积比49∶51， 5 min）；进样量20 μL.吩胺霉素保留时间9 min左右，标准品色谱图如图1所示.

2.4.2 检测条件的确定

通过检测器全扫描发现吩胺霉素在254 nm处有较强的吸收峰，且对目标物没有干扰，故选择为检测波长.

以甲醇与水体积比为49∶51，目标物可以较早出峰，峰型较好，且能与杂质完全分离，故选择为流动相.

3 结果与讨论

3.1 标准曲线

取0.01 mg/L， 0.05 mg/L， 0.10 mg/L， 0.50 mg/L， 1.00 mg/L， 10.00 mg/L质量浓度的系列标准溶液，在测定条件下，以峰面积（y）进样质量浓度（x）作标准曲线，得到仪器对吩胺霉素响应的线性关系.测得吩胺霉素标准曲线方程为y=234 578x-1 253.5（R2=1）.

3.2 添加回收实验

称取番茄及3类土壤空白样品，添加吩胺霉素标准品，分别做0.01 mg/kg， 0.10 mg/kg， 1.00 mg/kg三个添加水平，每个水平重复5次，按上述分析方法提取、净化并做HPLC测定，计算添加回收率，结果见表2.在上述检测条件下，吩胺霉素各样本典型色谱图见图2.

根据上述检测条件，得到吩胺霉素最小检出限为0.2 ng，在土壤和番茄中的最低检测限为0.01 mg/kg.3类土壤与番茄中的平均回收率分别为80.2%～95.7%和80.1%～85.6%，RSD分别为2.14%～ 4.17%和4.12%～5.17%.采用的方法满足农药残留分析标准[5]，为该农药检测提供了参考方法.

3.3 土壤的提取

依据地理位置、物理化学性质的不同，选取了吉林黑土、北京潮土和湖南紅土3种典型土壤，确定了适合3类土壤的吩胺霉素提取方法，并探讨了土壤性质与称样量对回收率的影响.

3.3.1 提取溶剂的选择

吩胺霉素在丙酮、乙醇、甲醇、乙腈中的溶解性较好，但单独使用以上溶剂，回收率均低于55%（表3），这可能是由于极性较强的单一溶剂不能解吸出土壤中的吩胺霉素.使用二氯甲烷作为提取溶剂，回收率有所增加，但仍低于60%，可能是因为土壤中含有一定量的水分，二氯甲烷无法完全浸入土壤孔隙.使用极性溶剂乙醇或甲醇与二氯甲烷的混合提取剂可有效浸入土壤，溶解农药，回收率明显增加（见表3）.由于乙醇毒性低，且与二氯甲烷混合后回收率更高，故作为最终提取溶剂.

上述实验表明，无论单独使用极性还是非极性溶剂提取，回收率均较低，采用极性与非极性溶剂混合液有利于提取，结论与 Gans[6]和Hussen[7]的结果一致.

土壤pH值对农药的吸附也存在影响[8].为了进一步提高回收率，本文对比了中性条件与碱性条件下的提取，发现碱性条件有利于提取（见表3）.最终确定混合液（V氨水∶V乙醇∶V二氯甲烷=1∶2∶3）60 mL作为提取溶剂.

3.3.2 土壤性质对回收率的影响

回收率与土壤的有机质含量有关，有机质含量越高对农药的吸附性越强[9-10]，越不利于提取.吩胺霉素在3种土壤（理化性质见表1）中的添加回收率，从低到高的顺序为吉林黑土<北京潮土<湖南红土；有机质含量从高到底的顺序为吉林黑土>北京潮土>湖南红土，两者呈负相关性，R2为0.584 7～0.730 1.

Kodesova等[11]发现农药在土壤中的吸附与阳离子代换量有显著的正相关性，影响回收率.吩胺霉素在土壤中的回收率与阳离子代换量也成反比关系，黑土的阳离子代换量最高，回收率最低，湖南红土的阳离子代换量最低，回收率最高，R2为0.946 3～0.993 6.

土壤黏粒对某些农药的吸附影响甚至比有机质等其他因素的影响更大[12].本研究发现回收率与土壤黏粒呈负相关性，R2为0.590 6～0.735 4，黏粒含量增加会导致土壤中吩胺霉素的吸附性增大，造成回收率降低.

3.3.3 土壤质量对回收率的影响

研究了5 g， 10 g， 20 g吉林黑土添加0.1 mg/kg吩胺霉素的添加回收.发现土壤称样量越大，回收率越低，5 g样品的回收率为86.1%，10 g样品的回收率为84.6%，20 g样品的回收率为82.5%.原因可能在于土壤越多，不饱和吸附位点越多，被吸附的农药越多；同时相同体积的提取剂无法有效浸入质量较大的土壤空隙，解吸出农药.

3.4 番茄的提取

3.4.1 提取溶剂的选择

由于乙腈提取时的共萃物较少，且在盐溶液中与水容易分离，经常作为首选提取溶剂[13].实验对比了乙腈、甲醇、丙酮的提取结果，在回收率相近的情况下，乙腈提取杂质最少，最终确定乙腈为提取溶剂.

3.4.2 净 化

吸附剂的选择：试验对比了弗罗里硅土、硅胶、碱性氧化铝、活性炭/碱性氧化铝（1∶200）对番茄样品的净化效果.结果发现：弗罗里硅土与硅胶作为吸附剂，乙酸乙酯洗脱出杂质产生干扰.活性炭/碱性氧化铝（1∶200）虽然可以去除杂质，但活性炭的吸附能力过强，乙酸乙酯、甲醇或二氯甲烷均无法有效地将目标物洗脱下来.碱性氧化铝可以有效地吸附杂质，同时乙酸乙酯可以将目标物洗脱，最终确定碱性氧化铝作为吸附剂.

洗脱溶剂：用碱性氧化铝作吸附剂，正己烷无法有效洗脱出杂质；用二氯甲烷预淋洗时，会将部分目标物与杂质共同洗脱；使用正己烷+二氯甲烷（V正己烷∶V二氯甲烷=8∶2）混合液可以洗脱杂质，同时目标物可以保留于层析柱中，达到目標物与杂质分离的效果.预淋后，用二氯甲烷和乙酸乙酯继续洗脱，均可将目标物洗脱，不产生干扰；而甲醇作洗脱溶剂，能洗脱出乙酸乙酯无法洗脱的杂质，产生干扰.由于乙酸乙酯洗脱效果较二氯甲烷好，所以选择乙酸乙酯作为洗脱溶剂.

淋洗体积：对比了120 mL和150 mL的乙酸乙酯洗脱回收率.当用120 mL乙酸乙酯洗脱时，平均回收率为84.7%，用150 mL乙酸乙酯洗脱时，平均回收率为92.7%，所以最后以150 mL乙酸乙酯淋洗目标物.

3.5 基质效应

采用色谱检测时，可能会产生基质效应.本文使用相对响应值法来评价基质效应.计算公式如下：

基质效应值=B/A×100%.

式中： A 为溶剂中农药的响应值；B为空白基质中农药的响应值.

提取后的基质空白分别添加了0.01 mg/L，0.05 mg/L， 0.10 mg/L， 0.50 mg/L， 1.00 mg/L和10.00 mg/L标准溶液，图3为2种空白基质效应值.土壤（吉林黑土）基质中，基质效应值为84%～114%，在0.05 mg/kg呈现弱的基质减弱作用，其他浓度呈现弱的基质增强作用.番茄基质效应值为98%～108%，0.05 mg/kg呈现弱的基质减弱作用，其他浓度呈现弱的基质增强作用.基质效应与浓度之间没有线性关系，2种基质效应总体较弱.

相对响应值法表明基质效应对HPLC检测番茄与土壤中吩胺霉素干扰较小，用土壤和番茄基质匹配溶液校正后的回收率与用乙腈溶剂校正的回收率相比偏离较小.

4 结 论

本文建立了高效液相色谱检测吩胺霉素在土壤和番茄中残留的方法.实验发现，3类土壤对吩胺霉素的吸附性较强，选取提取液（V氨水∶V乙醇∶V二氯甲烷=1∶2∶3），可以达到良好的提取结果；番茄对吩胺霉素吸附性较弱，采用乙腈提取，以碱性氧化铝为吸附剂，正己烷+二氯甲烷（体积比8∶2）为预淋洗剂，乙酸乙酯为洗脱溶剂，可以达到良好的杂质去除效果.土壤有机质含量、阳离子代换量、黏粒、称样量均对回收率产生一定影响.土壤和番茄中平均回收率分别为80.2%～95.7%和80.1%～85.6%，RSD分别为2.14%～4.17%和4.12%～5.17%，在基质中最小检出量为0.2 ng，最低检测限`为0.01 mg/kg，本方法基质效应弱，符合农药残留分析的要求.

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