周期蛋白（精选七篇）
周期蛋白 篇1
1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究将受试者分为Hp阳性组和Hp阴性组,每组又分胃癌组和对照组。所有受试者均取血测Hp抗体滴度,同时进行胃镜检查,于胃体、胃角及胃窦和病灶处取胃黏膜活检,进行病理组织学诊断。其中115例诊断为非贲门胃癌,均来自黄石市第四医院和武汉市第三医院住院患者,男72例,女43例,年龄24～78岁,平均(58.3±12.1)岁;对照组112例诊断为慢性非萎缩性胃炎,为同期住院患者,男68例,女44例,年龄22～71岁,平均(57.8±10.5)岁。
1.2 研究方法
采集受试者空腹静脉血5 ml,其中3 ml储于EDTA抗凝的试管中用于提取基因组DNA,2 ml用于分离血清。应用ELISA方法严格按试剂盒操作说明检测血清Hp IgG型抗体,Hp抗体检测试剂盒购自福建三明蓝波生物技术研究所,产品批号为200803019。试验阳性者定义为Hp感染。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术扩增细胞周期蛋白D1基因片段,以观察其第870位核苷酸A/G(A870G)多态性。PCR引物序列为:上游引物:5,-CTGAAGTTCATTTCCAATCCGC-3',下游引物:5'-GGGACATCACCCTCACT TA C-3'。引物由上海生工生物有限公司合成及纯化,PCR试剂盒购于华美公司产品,产品批号为20081007。
1.3 统计学分析
应用SPSS统计软件包处理数据,先计算各组基因型频率及等位基因频率,确定其符合Hardy-Weinberg平衡后,通过Χ2检验进行组间频率比较,P<0.05为差异有统计学意义。以比值(OR)及其95%可信区间(CI)表示相对危险度。
2 结果
2.1 Hp感染状态与细胞周期蛋白D1基因型多态性分析
在共227名受试者中,Hp感染及细胞周期蛋白D1基因PCR-RFLP检测结果见表1。结果显示,Hp感染阳性和阴性的两组受试者细胞周期蛋白D1基因型分布均符合HardyWeinberg平衡(P>0.05);在Hp感染阳性患者中,其基因型分布频率在胃癌组与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.01),其中携带AA基因型者患胃癌的相对风险度(OR)为3.82,95%可信区间(CI)为1.92～7.61;在Hp感染阴性患者中,其基因型分布频率在胃癌组与对照组比较差异无显著性(P>0.05),其中携带AA基因型者患胃癌的相对风险度为0.86(95%CI为0.28～2.64)。
2.2 Hp感染状态与胃癌细胞周期蛋白D1等位基因频率的关系
表2显示,在Hp感染阳性个体中,胃癌组细胞周期蛋白D1基因AA等位基因的频率为71.0%,而对照组为45.9%,较对照组显著增高(P<0.01)。将A等位基因视为暴露因素,其使个体患胃癌的相对风险度(OR)为2.89(95%CI为1.80～4.62)。而在Hp阴性个体中,胃癌组细胞周期蛋白D1基因A等位基因的频率为51.5%,而对照组为46.2%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。
注:P值为胃癌组与对照组AA基因型频率比较;OR (95%CI)值为AA基因型相对于AG及GG基因型之和的相对风险度
注:P值为胃癌组与对照组A等位频率比较;*:A等位基因相对于G等位基因的相对风险度
3 讨论
大量研究表明,HP与胃癌的发生有着密切的关系[1,2,3],目前认为肿瘤是一类细胞周期性疾病,细胞生长周期的失调在包括胃癌在内的肿瘤的发生发展中起关键作用[4]。研究表明,细胞周期蛋白D1在细胞周期的正常调控中扮演重要角色[5]。细胞周期蛋白D1是一种重要的细胞周期调节蛋白,它可与细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)在G1期结合形成复合物,再通过N末端的LECXE基序与视网膜母细胞瘤(Rb)编码蛋白pRb结合,使pRb的Ser和Tyr残基磷酸化,释放出转录因子E2F,驱动细胞由G1期进入S期,促进细胞增殖,而当细胞周期蛋白D1表达失控时,则将引起细胞增殖失调,进而导致肿瘤形成[6,7,8,9]。
本研究中,Hp感染的胃癌患者中细胞周期蛋白D1基因的AA基因的频率为55.5%,而在HP阴性的胃癌患者中细胞周期蛋白D1基因的AA基因的频率为20.6-%,有显著差异(P<0.01),结果显示Hp阳性携带细胞周期蛋白D1 AA基因型的个体患胃癌的OR为3.82。这说明在HP感染的患者中细胞周期蛋白D1基因的AA基因型是胃癌发生的高危基因,这对于细胞周期蛋白D1基因的AA基因型的人群早期预防胃癌的发生具有重要的警示意义。
摘要：目的 研究幽门螺杆菌感染阳性的胃癌患者中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因多态性与胃癌的相关性。方法 用ELISA方法检测了115例胃癌与112例慢性胃炎患者(对照组)Hp感染,同时采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测上述人群中细胞周期蛋白D1基因第870位核苷酸A/G(A870G)多态性。结果 幽门螺杆菌感染阳性患者中,胃癌组细胞周期蛋白D1基因A等位基因的频率为71.0%,而对照组为45.9%。将A等位基因视为暴露因素,其使个体患胃癌的相对风险度(OR)为2 89,95%可信区间(CI)为1.80～4.62。结论 有Hp感染的胃癌患者中,细胞周期蛋白D1基因中.AA基因型为高危基因。
关键词：胃癌,细胞周期蛋白D1,基因多态性,幽门螺杆菌
参考文献
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周期蛋白 篇2
采用补料-分批式发酵,研究了4种不同间歇周期补氮操作对细胞生长和类人胶原蛋白表达的影响,以及发酵过程中细胞质粒稳定性、细胞菌落形成能力和乙酸生成量的变化.结果表明,在每隔10 min连续补加36 mL补料氮溶液(22 s完成补加操作)的周期操作下,细胞质粒稳定性明显提高,细胞菌落形成能力下降较小,乙酸生成量低,仅0.7 g/L,最终细胞密度为84 g/L,类人胶原蛋白表达量可达到14 g/L,在4种操作方式中最高.
作 者：马晓轩 范代娣 刘树文 骆艳娥 MA Xiao-xuan FAN Dai-di LIU Shu-wen LUO Yan-e 作者单位：马晓轩,范代娣,骆艳娥,MA Xiao-xuan,FAN Dai-di,LUO Yan-e(西北大学,化工学院,陕西,西安,710069)
刘树文,LIU Shu-wen(西北农林科技大学,葡萄酒学院,陕西,杨凌,712100)
周期蛋白 篇3
关键词：腮腺多形性腺瘤,癌在多形性腺瘤中,Beclin-1,细胞周期蛋白D1
腮腺多形性腺瘤是腮腺区最常见的良性肿瘤,在临床上有2%~3%的复发率,并且可以癌变[1]。因此了解多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的发生发展机制对肿瘤的预防、早期诊断和治疗都有着非常重要的意义。近年研究表明,Beclin-1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)与肿瘤的发生、发展密切相关[1,2]。在腮腺肿瘤,尤其是腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中组织 的Beclin-1、cyclin D1表达有关报道较少。现对河北省唐山市中医医院(以下简称“我院”)2009年10月~2014年10月住院治疗的71例腮腺肿瘤患者的临床资料进行分析,旨在探讨Beclin-1、cyclin D1在良恶性腮腺肿瘤组织中的表达,为临床的诊断、治疗及预后提供理论依据。
1 资料与方法
1.1一般资料
收集2009年10月~2014年10月来我院住院治疗的腮腺肿瘤患者71例,均经手术病理证实。其中,腮腺多形性腺瘤30例,癌在多形性腺瘤中41例。并取腺瘤旁组织21例作为对照。71例中男31例,女40例;年龄23~72岁,平均(40.1±5.2)岁。所有病例术前均未进行任何抗肿瘤治疗。本研究经医院伦理委员会通过,患者均知情同意并签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1主要试剂与仪器Beclin-1单克隆抗体为美国Santa Cruze公司产品。即用型鼠抗人cyclin D1单克隆抗体与试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。高清晰度彩色图文分析系统购自武汉千屏影像技术有限公司。
1.2.2免疫组织化学SP法病理组织以10% 福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm连续切片。对标本行免疫组织化学SP法染色。以乳腺癌组织切片作为阳性对照,以PBS替代一抗作为阴性对照。
1.2.3阳性判定标准Beclin-1阳性判定标准 :细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。判断标准:随机观察10个高倍视野 ,每个视野计数100个细胞 ,根据阳性细胞的比率和染色深度进行综合评定。阳性细胞计数评分标准:1分:阳性细胞数占总细胞数<10%;2分:阳性细胞数占总细胞数10%~50%;3分:阳性细胞数占总细胞数>50%。染色深度评分标准:0分:无染色;1分:淡黄色:2分:黄色;3分:棕黄色。总评分为2项评分相乘。0~3分为阴性,4分及以上为阳性。cyclin D1免疫组化阳性判定标准:细胞核出现棕色小颗粒为阳性细胞。阳性细胞与总细胞数的比值>10%为阳性表达,反之为阴性表达。
1.3 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析,计数资料采用χ2检验或精确概率法,P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同腮腺组织中 Beclin-1、cyclin D1 的阳性表达
Beclin-1阳性定位于细胞质中 ,细胞质内可见棕黄色颗粒。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织中Beclin-1的阳性率分别为58.5%、93.3%、95.2%。腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织的Beclin-1的阳性率与癌在多形性腺瘤中比较差异均有统计学意义(均P < 0.05),腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织的Beclin-1的阳性率比较差异无统计学意义(P > 0.05)。cyclin D1阳性定位于细胞核,细胞核中出现棕色小颗粒。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织中cyclinD1的阳性率分别为80.5%、50.0%、19.0%,腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织的cyclin D1的阳性率与癌在多形性腺瘤中比较差异均有统计学意义(均P < 0.05),腮腺多形性腺瘤组织与腺瘤旁比较差异有统计学意义(P < 0.05)。见表1。
注:与癌在多形性腺瘤中组比较,*P < 0.05;与多形性腺瘤组比较, △P <0.05
2.2 Beclin-1、cyclin D1 在癌 在多形性腺瘤中不同临床特征的表达
Beclin-1、cyclin D1的表达与年龄、性别、肿瘤直径无关(P > 0.05);与TNM分期及淋巴结是否转移有关(P < 0.05)。见表2。
3 讨论
多形性腺瘤又名混合瘤,是腮腺常见的良性肿瘤,其生长缓慢,呈膨胀性生长,影响容貌,术后容易复发,多次复发有恶变可能,可危及患者生命。近年来自噬与肿瘤的关系逐渐被人们所重视。研究发现,肿瘤患者体内存在自噬活性的改变[3],因此,推测自噬活性的改变与肿瘤的发生、发展密切相关。自从酵母模型建立以来,发现自噬的调节是一个非常复杂的过程,需要多种分子的参与,其中Beclin-1是酵母自噬相关基因ATG6的哺乳动物同源基因,是一种双等位抑癌基因[4],Beclin-1含有12个外显子 , 编码450个氨基酸。Beclin-1基因定位于染色体17q21,是自噬的执行者。研究表明,Beclin-1参与了自噬体的形成,并促进其成熟,具有促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤增殖的功能[4]。多项研究表明,Beclin-1在多种恶性肿瘤中缺失,如卵巢癌、乳腺癌及前列腺癌等[5]。也有学者实验证明,在敲除小鼠的Beclin-1等位基因后,小鼠恶性肿瘤的发病率明显高于正常小鼠[6]。李磊等[7]研究表明,Beclin-1在正常腮腺组织、腮腺多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的阳性率分别为100%、92%、63%;Beclin-1在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中表达下调,自噬功能改变可能在腮腺肿瘤形成中具有一定作用。本研究结果表明,癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织中Beclin-1的阳性率分别为58.5%、93.3%、95.2%。与腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织比较,癌在多形性腺瘤中组织中Beclin-1的表达下降,差异有统计学意义(P < 0.05);而腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织中Beclin-1的表达比较差异无统计学意义(P > 0.05)。淋巴结转移及TNM分期与Beclin-1的表达有关(均P < 0.05)。本研究结果与上述研究结果大致相符。
cyclin D1是细胞周期的正调节因子 ,是CDK4/6的活化因子,与其结合后共同促进细胞周期。研究表明过度表达的蛋白加速了细胞周期转化,导致细胞异常增殖[8,9,10,11]。在食管、肺、结肠、肝和胰腺等各种肿瘤中均发现了cyclin D1异常表达。Pignataro等[12]于1998年第1次报道腺 样囊性癌 中cyclin D1基因的改 变 ,21.4%的腺样囊性癌组织出现过表达。向国林等[1]研究表明,cyclin D1在正常腮腺组织、多形性腺瘤初发瘤、多形性腺瘤复发瘤及癌在多形性腺瘤中的阳性表达率分别为0%、38%、50%、75%,多形性腺瘤与癌在多形性腺瘤中比较有显著性差异(P < 0.05),多形性腺瘤复发瘤中阳性表达率高于多形性腺瘤初发瘤,但无显著性差异(P > 0.05)。本研究结果表明,癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织中cyclin D1的阳性率分别为80.5%、50.0%、19.0%,腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁组织的cyclin D1的阳性率与癌在多形性腺瘤中比较差异均有统计学意义(均P < 0.05),腮腺多形性腺瘤组织与腺瘤旁比较差异有统计学意义 (P <0.05)。本研究结果与上述研究结果大致相同。本研究结果表明,淋巴结转移及TNM分期与cyclin D1的表达有关(P < 0.05)。
周期蛋白 篇4
近年来, 人们越来越重视卵母细胞发育成熟的分子调控, 相继在脊椎和部分无脊椎动物中开展了研究, 如哺乳类[1]、两栖类[2,3,4]、鱼类[5,6,7,8]及海星[9]。经研究发现, 卵母细胞的发育与成熟需要细胞内各信号通路的协同调控, 其中Mos/MAP通路与plx1/cdc25/cyclin B-P34cdc2通路是孕酮诱导下启动卵母细胞成熟的中心环节, 且细胞周期蛋白B (Cyclin B) 及其相关调控蛋白cdc25等起了关键性的作用[10]。
Cyclin B又称周期素B, 在G2期或G2/M转变期发挥着重要的作用。催化亚基P34cdc2和Cyclin B结合, 组成物种间高度保守的刺激因子MPF (cyclin B-P34cdc2) , 在卵母细胞减数分裂过程中起中心调控作用。在甲壳动物中, 对于卵巢发育的分子调控机理尤其是卵母细胞成熟的分子调控机制还知之甚少。目前也仅限于Cyclin B基因克隆及mR-NA水平表达的研究, 如斑马纹贻贝 (Dreissena polymorpha) [11]、中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis) [12]、日本囊对虾 (Marsupenaeus japonicus) [13]、斑节对虾[14,15]等。因此, 对于Cyclin B在甲壳动物卵巢发育中调控卵母细胞成熟的作用机制还有待深入研究。研究发现, Cyclin B基因存在多个亚型, 且不同亚型在卵巢发育过程中发挥不同作用[16,17,18,19,20,21]。已报道的斑节对虾Cycling B[14,15]基因与人类的细胞周期蛋白B1 (Cyclin B1) 具有较高的同源性, 达到60%。Cyclin B1为有丝分裂期 (M期) 细胞周期蛋白, 是成熟促进因子 (maturation promoting factor, MPF) 的调节亚单位, 含有一段约100个氨基酸的保守序列, 介导其与MPF的催化亚单位———细胞周期蛋白依赖性激酶 (cyclin-dependent kinase, CDK1) 结合, CDK1只有与Cyclin B1结合才具有激酶的活性, CDK1/Cyclin B1即MPF在G晚期积聚, 其生物学功能为启动真核细胞有丝分裂[22]。因此, 文章拟通过构建含有PmCy B基因的重组慢病毒载体, 研究其对干扰了Cyclin B1基因的人类Hela细胞增殖影响, 为斑节对虾卵巢发育的分子调控机理提供一定的基础数据。
1 材料与方法
1.1 材料
Xba I和Bst BI等内切酶购置于NEB公司;Kod plus、T4 ligase以及DNA Marker均购置于takara;质粒抽提试剂盒、胶回收试剂盒购置于天根;293T细胞和Hela细胞购置于ATCC;lipeofectamine-2000、无血清DMEM培养基和细胞总RNA提取和RT-PCR试剂盒购置于英俊公司;MTT和DMSO均购置于sigma;慢病毒表达载体质粒p EGH及慢病毒包装复合物购置于思路迪生物技术有限公司;人类 (Homo sapiens) Cyclin B1 siRNA (Mir1-4 siRNA) 及阴性对照siRNA (NC siRNA) 序列由上海生物工程公司设计并合成, 其中NC siRNA合成时含有红色荧光标记。Mir1 siRNA正义链序列为5'-TAACAAAGTCAGTGAACAA-3', Mir2 siR-NA正义链序列为5'-GGATAATGGTGAATGGACA-3', Mir3 siRNA正义链序列为5'-AGAATGTAGT-CATGGTAAA-3', Mir4 siRNA正义链序列为5'-GT-GAACAACTGCAGGCCAA-3', NC siRNA正义链序列为5'-AATTCTCCGAACGTGTCACGT-3'。
1.2 方法
1.2.1 p3D-LV-OE-018EGH-Cop GFP-Pm Cy B慢病毒质粒的构建及鉴定
根据Gen Bank中斑节对虾Cyclin B的mRNA序列 (EF015589) , 以斑节对虾未成熟卵巢c DNA为模版, 用PCR法扩增获得Pm Cy B基因。对扩增出的Pm Cy B和p3D-LV-OE-018EGH-Cop GFP用Xba I, Bst BI进行双酶切, 胶回收、连接并转化到感受态细菌中。挑选阳性克隆送英俊公司进行测序。
1.2.2 慢病毒包装
把构建好的慢病毒表达载体与慢病毒包装复合物质粒共转染293T细胞。转染前一天胰酶消化处于对数生长期生长状态良好的293T细胞, 以合适比例接种至若干个100 mm细胞培养皿内。细胞接种24 h后按lipeofectamine-2000的说明书进行转染操作, 把慢病毒表达质粒及慢病毒包装复合物共转染到293T细胞中。48 h后收取上清病毒液, 再加细胞培养液培养24 h后收取上清病毒液。纯化后测定病毒滴度 (根据GFP荧光表达情况, 病毒滴度等于带有荧光的细胞数除以病毒原液量) 。
1.2.3 重组慢病毒感染目的细胞
胰酶消化处于对数生长期生长状态良好的Hela细胞, 以合适比例接种至96孔细胞培养板中进行培养, 37℃, 5%二氧化碳 (CO2) 。细胞接种24 h后分别用4个干扰组Mir1-4siRNA和对照组NC siRNA分别转染Hela细胞, 沉默Cyclin B1基因。4 h后荧光显微镜下观察, 是否转染入Hela细胞, 换液。细胞转染24 h后取样, 利用RT-PCR检测干扰效果。同时在4个试验组和对照组分别感染上述收集的含Pm Cy B基因病毒液及阴性对照病毒液, 每孔加100μL病毒粗液。感染后24 h, 换液。培养72 h后进行四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法) 检测细胞浓度。
1.2.4 统计学分析
应用SPSS 13.0统计软件处理数据, 两样本率的比较采用χ2检验, 组间差异比较用方差分析, P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 Pm Cy B重组慢病毒表达载体的构建与鉴定
将PCR扩增获得的Pm Cy B基因和p3D-LV-OE-018EGH-Cop GFP载体酶切、连接、转化, 挑克隆进行PCR鉴定。PCR鉴定阳性克隆再用Xba I, Bst BI进行双酶切鉴定, 酶切鉴定阳性者可在2 000bp处见一特异条带 (图1) 。此外, PCR鉴定阳性克隆送测序, 测序结果显示Pm Cy B基因序列与Gen Bank中序列一致, 无缺失或突变。以上结果表明, p3D-LV-OE-018EGH-Cop GFP-Pm Cy B慢病毒表达载体构建成功。
2.2 重组慢病毒p3D-LV-OE-018EGH-Cop GFP-Pm Cy B的包装
把构建好的慢病毒表达载体与慢病毒包装复合物质粒共转染293T细胞, 转染24h后倒置荧光显微镜观察培养细胞可见大量的绿色荧光蛋白的表达 (图2) , 转染效率将近100%。收集并浓缩病毒液, 得到含有Pm Cy B基因的病毒液和空白对照病毒液。
2.3 对照组NC siRNA检测Cyclin B1 siRNA转染Hela细胞效果
对照组NC siRNA转染进入细胞24 h后, 荧光镜检Hela细胞可见散在分布于细胞中的颗粒状红色荧光, 证实siRNA成功转染了Hela细胞 (图3) 。
2.4 Cyclin B1 siRNA对Hela细胞其mRNA表达水平的影响
4个干扰组Mir1-4siRNA和对照组NC siRNA分别转染Hela细胞24 h后, 经实时荧光定量PCR检测发现4个干扰组的Hela细胞Cyclin B1 mRNA表达量与阴性对照组之间差异显著 (P<0.05) (图4) , 结果表明4个干扰组的Hela细胞Cyclin B1的表达显著下调。
*.差异显著 (P<0.05) ;后图同此*.significant difference (P<0.05) ;the same case in the following figures.
2.5 Pm Cy B基因对干扰了内源Cyclin B1的Hela细胞增殖的影响
转染了Mir1-4siRNA以及NC siRNA的4个干扰组和1个对照组Hela细胞24 h后, 再把含PmCy B基因的慢病毒液和对照组病毒液分别感染4个干扰组和对照组Hela细胞。24 h后荧光镜检Hela细胞, 显示绿色荧光, 表明慢病毒液成功感染了Hela细胞 (图5, 图6) 。转染病毒液72 h后用MTT比色法检测Hela细胞增殖情况, 结果显示感染了含有Pm Cy B基因慢毒液的4个干扰组的Hela细胞增殖速度虽然略低于NC对照组的细胞, 但显著高于转染了对照病毒液的4个干扰组的细胞增殖速度 (表1, 表2, 图7) 。
3 讨论
病毒载体比非病毒载体转染效率高, 是应用最为普遍的基因转移工具[23,24,25,26]。目前可供利用的病毒可分为逆转录病毒、慢病毒与腺病毒。与其他病毒载体相比, 慢病毒载体最大的特点就是强大的穿透性[27]。慢病毒属于逆转录病毒, 可将其携带的外源基因高效整合到宿主细胞中, 且外源基因可在细胞内长期稳定表达。文章成功构建了Pm Cy B慢病毒表达载体, 即p3D-LV-OE-018EGH-Cop GFP-Pm Cy B。该载体含有GFP报告基因, 具有很强的实用性, 同时GFP报告基因以加强型真核启动子h EF1-HTLV启动子启动, 其表达效率高, 观察结果方便快捷, 为后续研究, 尤其是为研究Pm Cy B基因过表达对斑节对虾卵巢发育分子调控的作用机理研究奠定基础。
周期蛋白 篇5
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本
实验组:来自1998年3月~2007年9月在佳木斯大学附属第一医院耳鼻咽喉科就诊的、经病理诊断为外鼻基底细胞癌的患者活检或手术切除标本。标本经4﹪甲醛固定后石蜡包埋,共计30例。其中,男性21例,女性9例,年龄为51~79岁,平均年龄61.8岁。对照组:18例来自佳木斯大学附属第一医院整形美容外科切除的非肿瘤标本的外鼻组织。
1.1.2 试剂
即用型免疫组化S-P试剂盒鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体(以上购自福州迈新生物技术有限公司)兔抗人Livin多克隆抗体(以上购自武汉博士德生物技术有限公司),
1.2 方法
1.2.1 SABC免疫组织化学法
用常规石蜡切片做Livin和Cyclin D1的免疫组织化学方法检测。PBS液代替一抗为阴性对照,同一张切片非染色部位作为阳性部位自身对照。
1.2.2 结果判断
Livin免疫组化阳性产物呈棕黄色颗粒,定位于细胞浆内。Cyclin D1蛋白免疫组织化学阳性产物呈棕黄色颗粒,定位于细胞浆和(或)细胞核。每例切片在400倍视野下选取最高密度区域的5个不重复视野,计算出每例5个视野内上皮细胞总数(∑N)及阳性细胞总数(∑n),应用公式LI=∑n/∑N×100%,求出每例标本的阳性指数(LI)。分别记为:阳性指数<5%为阴性表达(-);阳性指数5%~25%为弱阳性表达(+);阳性指数25%~50%为中等阳性表达(++);阳性指数>50%为强阳性表达(+++)。
1.3 统计学处理
根据资料性质,分别采用χ2检验和四表格确切概率法。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Livin在外鼻基底细胞癌中和正常外鼻组织中的表达
18例正常外鼻组织中,Livin阳性表达为2例(11.11%),均为弱表达。30例外鼻基底细胞癌中,Livin阳性表达为16例(53.33%),其中强阳性5例(16.67%)。Livin在外鼻基底细胞癌中和正常外鼻组织中的阳性率差异有显著性(P<0.01)(表1、图1、图5、图6)。
注:χ2=8.5570 P<0.01
2.2 Cyclin D1在外鼻基底细胞癌中和正常外鼻组织中的表达
18例正常外鼻组织中,Cyclin D1的阳性为3例(16.67%),均为弱表达。30例外鼻基底细胞癌中,Cyclin D1阳性为19例(63.33%),其中强阳性6例(20.00%)。Cyclin D1在外鼻基底细胞癌中和正常外鼻组织中的阳性率差异有显著性(P<0.01)(表2、图2、图3、图4)。
注:*χ2=8.5570 P<0.01
2.3 外鼻基底细胞癌中Livin和Cyclin D1表达相关性
Cyclin D1阴性表达的11例中,Livin阳性表达2例,19例Cyclin D1阳性表达中,有14例为Livin阳性表达,二者共同阳性表达14例,具有统计学意义(χ2=8.6227,P<0.01),r=0.5361,提示Livin和Cyclin D1在外鼻基底细胞癌组织中的表达呈正相关。详见表3。
3 讨论
外鼻恶性肿瘤临床较少见,约占鼻及鼻窦恶性肿瘤的4.1%。基底细胞癌是外鼻最常见的恶性肿瘤。外鼻基底细胞癌(Basall Cell Carcinona of External Nose)多发于50~80岁的中老年人,男性多于女性。外鼻基底细胞癌发生于上皮的基底层,多位于鼻翼和鼻尖部,特点是生长缓慢,恶性程度低,很少发生转移。
IAP是独立于Bcl-2的细胞内抗凋亡蛋白家族,在凋亡的调节中扮演重要角色,被认为是肿瘤细胞产生凋亡抵抗的重要原因,因而在肿瘤领域中变得日益重要。Livin基因是一种新发现的凋亡抑制基因,其产物是IAP家族的成员[4]。在2 000年由4个不同的实验小组几乎在同一时期所发现。上述实验小组均采用IAP同源序列(BIR或RING)寻找的方法,分别从人类基因组c DNA文库中克隆得到此基因[5~7]。人类的Livin基因位于人染色体20 q13.3,全长46 kb,包含7个外显子及6个内含子。Livin在除胎盘外的大多数终末分化组织中不表达,在胚胎组织及多数肿瘤组织中高表达,在黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病以及淋巴瘤等细胞系中,可检测到Livin的过表达[8~10]。
Cyclin D1由11q13的CCND1基因编码,由295个氨基酸组成,主要与CDK4和6(CDK4/6)结合形成活性复合物发挥作用。目前,Cyclin D1己被公认为是一种原癌基因。国内外资料表明,在多种肿瘤中发现了Cyclin D1过表达和基因扩增,包括乳腺癌、膀胱癌、甲状旁腺肿瘤、肺癌及细胞中心型淋巴瘤等[11,12]。
本实验结果显示,Livin和Cyclin Dl在外鼻基底细胞癌组织中均有较高的阳性表达,并且两者呈正相关,提示两者可通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖,对外鼻基底细胞癌的发生,发展起作用,并且两者之间可能存在反馈调节机制,在外鼻基底细胞癌的发生、发展中起协同作用。
摘要：目的 检测凋亡抑制因子Livin和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在外鼻基底细胞癌中的表达,探讨两者在外鼻基底细胞癌发生、发展过程中的作用及其相关性。方法 采用免疫组织化学技术检测凋亡抑制因子Livin和Cyclin D1在30例外鼻基底细胞癌和18例外鼻正常组织中的表达,并观察两者在外鼻基底细胞癌表达的相关性。结果 Livin和Cyclin Dl在外鼻基底细胞癌组织中阳性表达率53.33%(16/30)和63.33%(19/30),明显高于外鼻正常组织11.11%(2/18)和16.67%(3/18),差异均有显著性(P<0.01)。两者在外鼻基底细胞癌中的表达呈正相关。结论 凋亡抑制因子Livin和Cyclin D1均参与外鼻基底细胞癌的发生、发展过程,并且两者之间存在反馈调节机制,在外鼻基底细胞癌的形成中起协同作用。
关键词：基底细胞癌,凋亡抑制因子Livin,细胞周期蛋白D1,免疫组织化学
参考文献
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周期蛋白 篇6
1 资料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本
实验组:收集佳木斯大学附属医院耳鼻咽喉科2003年5月～2007年10月手术切除的鼻内翻性乳头状瘤组织38例(男27例,女11例;年龄35～70岁,平均53.8岁)。对照组:取2006年10月～2007年10月留取的18例(男10例,女8例;年龄29～56岁,平均39.2岁)手术切除鼻腔正常黏膜组织以及本院2001年2月～2007年8月手术切除的15例(男11例,女4例;年龄46～74岁,平均62.7岁)鼻鳞状细胞癌组织。所有标本均经病理证实。
1.1.2 试剂
即用型免疫组织化学S-P试剂盒鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体(以上购自福州迈新生物技术有限公司)兔抗人Livin多克隆抗体(以上购自武汉博士德生物技术有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 采用SABC免疫组织化学法
用常规石蜡切片做Livin和Cyclin D1的免疫组织化学方法检测。PBS液代替一抗为阴性对照,同一张切片非染色部位作为阳性部位自身对照。
1.2.2 结果判断
Livin免疫组织化学阳性产物呈棕黄色颗粒,定位于细胞浆内。cyclin D1蛋白免疫组织化学阳性产物呈棕黄色颗粒,定位于细胞浆和(或)细胞核。2人双盲法观察切片,每例切片在400倍视野下选取最高密度区域的5个不重复视野,计数每个视野内上皮细胞总数(n)及阳性染色细胞数(n),并计算出每例5个视野内上皮细胞总数(∑N)及阳性细胞总数(∑n),应用公式LI=∑n/∑N×100%,求出每例标本的阳性指数(LI)。分别记为:阳性指数<5%为阴性表达(-);阳性指数5%～25%为弱阳性表达(+);阳性指数25%～50%为中等阳性表达(++);阳性指数>50%为强阳性表达(+++)。
1.3 统计学处理
根据资料性质,分别采用χ2检验和四表格确切概率法,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Livin在NM、NIP、NS CC中的表达
Livin阳性表达主要以细胞浆染成棕黄色颗粒。正常鼻腔黏膜组织中Livin无表达,阳性率为0。38例NIP中Livin阳性表达为18例(47.37%),其中强阳性6例(15.79%)。Livin在15例NSCC组织中阳性表达为12例(80.00%)。Livin在NM、NIP、NSCC中的表达两两比较,其差异均有统计学意义(P<0.05),见表1、图1、图2。
2.2 Cyclin D1在NM、NIP、NS CC中的表达
Cyclin D1阳性表达主要以细胞浆和(或)细胞核染成棕黄色颗粒。18例NM中Cyclin D1的阳性为1例(16.67%),为弱表达。38例NIP中Cyclin D1阳性为21例(63.33%),其中强阳性6例(20.00%)。Cyclin D1在15例NSCC组织中阳性表达为13例(86.67%)。Cyclin D1在NM、NIP、NSCC中的表达两两比较,其差异均有显著性(P<0.05),见表2、图3、图4。
2.3 在NIP中Livin和Cyclin D1表达相关性
Cyclin D1阴性表达的18例中,Livin阳性表达4例,20例Cyclin D1阳性表达中,有14例为Livin阳性表达,2者共同阳性表达14例,差异具有统计学意义(χ2=8.6743,P<0.01),r=0.4778,提示Livin和Cyclin D1在鼻内翻性乳头状瘤中的表达呈正相关。
3 讨论
近年来研究表明,细胞增殖与细胞凋亡平衡的失调与肿瘤的发生密切相关[3],如果受损的细胞不能正确启动凋亡机制,机体内细胞增殖与凋亡两者间的平衡遭到破坏,使细胞过度增生,就有可能导致肿瘤发生。
鼻内翻性乳头状瘤是鼻腔、鼻窦最常见的良性肿瘤之一。尽管鼻内翻性乳头状瘤属良性肿瘤,但其特殊的生物学特性使其具有与一般良性肿瘤不同的鲜明特点。第1,鼻内翻性乳头状瘤表现为局部侵袭性生长,常破坏肿瘤周边的骨质,甚至波及眼眶及颅内;第2,鼻内翻性乳头状瘤有5%～15%的恶变率;第3,手术切除后易发,复发率在5%～30%。手术后肿瘤复发与手术技术及肿瘤生物学行为有关[4]。
凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)是独立于Bcl-2的细胞内抗凋亡蛋白家族,在凋亡的调节中扮演重要角色,被认为是肿瘤细胞产生凋亡抵抗的重要原因,因而在肿瘤领域中变得日益重要。Livin基因是一种新发现的凋亡抑制基因,其产物是凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的成员。于2000年是由4个不同的实验小组几乎在同一时期所发现,上述实验小组均采用IAP同源序列(BIR或RING)寻找的方法,分别从人类基因组c DNA文库中克隆得到[5,6,7,8]。人类的Livin基因位于人染色体20q 13.3,全长46 kb,包含7个外显子及6个内含子。Livin是新近发现的人类IAP家族的新成员,是IAPs家族中抗凋亡活性最强的,故己成为当今研究的热点[9]。Livin在除胎盘外的大多数终末分化组织中不表达,在胚胎组织及多数肿瘤组织中高表达,在黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病以及淋巴瘤等细胞系中可检测到Livin的过表达。
细胞周期受控于一组称之为细胞周期素(Cyclin)的蛋白,其中Cyclin D1是G1→S期的重要调节因子。Cyclin D1由11q13的CCND1基因编码,由295个氨基酸组成,主要与CDK4和6(CDK4/6)结合形成活性复合物发挥作用。目前Cyclin D1己被公认为是一种原癌基因。国内外资料表明,在多种肿瘤中发现了Cyclin D1过表达和基因扩增,包括乳腺癌,食管癌,甲状旁腺肿瘤,肺癌,细胞中心型淋巴瘤等。
本实验采用免疫组织化学的方法,检测了38例NIP和18例NM及15例NSCC中的Livin和Cyclin Dl的表达,结果显示,Livin和Cyclin Dl在鼻腔黏膜、鼻内翻性乳头状瘤、鼻鳞状细胞癌中阳性表达率呈一递增趋势符合3者细胞增值活性逐一递增的规律。Livin和Cyclin Dl在鼻内翻性乳头状瘤组织中均有较高的阳性表达,并且两者呈正相关,提示两者通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖而对鼻内翻性乳头状瘤的发生发展起重要作用,并且两者之间可能存在反馈调节机制,在鼻内翻性乳头状瘤的发生发展中起协同作用。故有望成为鼻内翻性乳头状瘤诊断的重要标志物,并为其基因的靶向治疗提供重要的理论依据。
参考文献
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周期蛋白 篇7
1 材料与方法
1.1 材料
检测组织均为10%中性福尔马林固定, 石蜡包埋, HE染色, 光镜观察确诊。标本来源于遵义医学院第一附属医院和第五附属医院病理科。10例正常皮肤表皮取自临床手术切除的带有正常皮肤组织的病变标本;15例皮肤病理性瘢痕上皮病例临床有皮肤烧伤、烫伤或机械性创伤等损伤史, 形成瘢痕的时间为数月至数年不等, 病变部位有胸部、大腿、小腿等处;25例瘢痕癌病例临床有瘢痕形成史, 病变部位有头面部、上肢、下肢等处, 组织学类型均为鳞状细胞癌, 从瘢痕形成到癌变的时间为1~20年不等。
1.2 主要试剂
鼠抗人Cyclin A单克隆抗体、即用型SP免疫组织化学试剂盒及DAB、AEC显色试剂盒均购自福州迈新公司;兔抗人Cyclin D1多克隆抗体、人Cyclin A m RNA寡核苷酸探针原位杂交试剂盒、人Cyclin D1m RNA寡核苷酸探针原位杂交试剂盒, 购自武汉博士德公司;DEPC购自美国Sigma公司。
1.3 实验方法及步骤
1.3.1 组织切片
石蜡包埋标本, 4μm厚连续切片4张, 捞片于处理过的防脱片上, 60℃烤干, 4℃保存备用。
1.3.2 免疫组织化学法
(SP法) Cyclin A、Cyclin D1分别用乳腺癌、结肠癌组织切片作阳性对照, 阴性对照均用PBS代替一抗。切片脱蜡至水, 微波修复抗原, 按试剂盒说明书进行操作, DAB显色, 苏木素复染, 二甲苯透明, 中性树胶封片, 光镜观察。
1.3.3 原位杂交法
Cyclin A m RNA、Cyclin D1m RNA分别用乳腺癌、结肠癌组织切片作阳性对照, 阴性对照用预杂交液代替探针。切片脱蜡至水, 微波修复抗原, 按试剂盒说明书进行操作, Cyclin A m RNA DAB显色, 苏木素复染, 二甲苯透明, 中性树胶封片, 光镜观察。Cyclin D1 m RNA在37℃的烤箱中经AEC显色, 水溶性封片剂封片, 光镜观察。
1.4 免疫组织化学法标记及原位杂交结果判断标准
1.4.1 表达部位
DAB显色:Cyclin A以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞, 部分出现胞质阳性表达;Cyclin A m RNA以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞;Cyclin D1以细胞质/细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。AEC显色:Cyclin D1 m RNA以细胞质/细胞核出现红色颗粒为阳性细胞。
1.4.2 阳性判断标准
采用半定量积分法, 根据每张切片的阳性细胞百分数和染色强度计分的乘积来判定。每例切片在高倍镜 (400倍) 下随机取10个视野, 计数100个细胞/视野, 分别记录每个视野的阳性细胞数并计算其算术平均值, 对阳性细胞所占百分比计分 (<5%=0分, 5%~25%=1分, 26%~50%=2分, 51%~75%=3分, >75%=4分) ;染色强度计分 (无色=0分, 淡黄色=1分, 棕黄色=2分, 棕褐色=3分) ;阳性表达评分标准以阳性细胞数和染色强度计分的乘积来判定[3], 根据阳性细胞百分数和染色强度得分的积分为4个等级:0~2分为阴性 (-) , 3~5分为阳性 (+) , 6~8分为中度阳性 (++) , 9~12分为强阳性 (+++) 。≥6分为高表达, <6分为低表达。
1.4.3表达水平和强度判断
采用CCD成像系统, 在200倍光镜下每张切片随机选取5个不同视野成像, 应用显微图像分析系统分别检测阳性染色的表达水平 (即阳性面积代数与分析区域面积的比值, 值越大, 阳性表达水平越高) 和表达强度 (即平均光密度值, 值越大, 阳性表达强度越高) [4], 各取平均值, 最后进行统计学分析。
1.5 统计学方法
采用SPSS 13.0统计学软件进行分析, 图像分析所得实验数据用均数±标准差 (±s) 表示, 对实验结果进行单因素方差分析, 两两比较采用最小显著差异法 (LSD) , 相关性分析采用Pearson、Spearman等级相关, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Cyclin A、Cyclin D1蛋白的表达
Cyclin A、Cyclin D1蛋白的阳性信号呈棕黄色, 均质状, 主要定位于细胞核或细胞质。在正常皮肤表皮中, 两种蛋白呈阴性表达, 仅在基底层有极少数阳性细胞。在皮肤病理性瘢痕上皮, 两种蛋白呈弱阳性或阳性表达, 且阳性细胞数较正常上皮有所增多。在瘢痕癌中, 两种蛋白呈强阳性表达 (见图1~6) 。皮肤瘢痕癌组织与皮肤病理性瘢痕上皮、正常皮肤表皮中两种蛋白的表达水平 (阳性面积) 、表达强度 (平均灰度值) 比较, 差异均有统计学意义 (Cyclin A:FA=14.917, FG=10.029, P<0.01) (Cyclin D1:FOD=63.596, POD=0.000<0.05;FPA=131.768, PPA=0.000<0.05) , 但皮肤病理性瘢痕上皮与正常皮肤表皮的表达水平、表达强度比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。见表1。
2.2 Cyclin A m RNA、Cyclin D1 m RNA的表达
Cyclin A m RNA用DAB显色, 阳性信号呈棕黄色, 均质状, 位于细胞质。Cyclin D1 m RNA用AEC显色, 阳性表达信号呈红色, 颗粒状, 主要定位于细胞质或细胞核。在正常皮肤表皮中的表达呈阴性或弱阳性, 在皮肤病理性瘢痕上皮中呈阳性, 皮肤瘢痕癌组织中呈强阳性 (见图7~12) 。正常皮肤表皮和皮肤瘢痕癌组织中两种m RNA的表达 (表达水平、表达强度) 比较, 差异均有统计学意义 (Cyclin A m RNA:FA=5.059, FG=10.418, P<0.05) (Cyclin D1m RNA:FOD=49.837, POD=0.000<0.05;FPA=106.728, PPA=0.000<0.05) , 皮肤瘢痕癌、皮肤病理性瘢痕上皮中两种m RNA表达比较, 差异有统计学意义 (P<0.05, P<0.01) , 正常皮肤表皮和皮肤病理性瘢痕上皮中Cy clin A m RNA表达比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。见表2。
2.3 相关性分析
经过Pearson相关分析, 瘢痕癌中Cyclin A与Cyclin A m RNA的表达呈正相关 (r=0.593, P=0.001) , Cyclin D1与Cyclin D1 m RNA的表达亦呈正相关 (r=0.628, P=0.000<0.01) 。
注:PA代表阳性面积代数和/分析区域面积的比值, OD代表平均光密度。1) 与正常皮肤表皮组比较, P<0.01;2) 与皮肤病理性瘢痕上皮组比较, P<0.01
注:PA代表阳性面积代数和/分析区域面积的比值, OD代表平均光密度。1) 与正常皮肤表皮组比较, P<0.05;2) 与皮肤病理性瘢痕上皮组比较, P<0.05;3) 与正常皮肤表皮组比较, P<0.01;4) 与皮肤病理性瘢痕上皮组比较, P<0.01
3 讨论
本研究从蛋白水平和分子水平对正常皮肤表皮、皮肤病理性瘢痕上皮和瘢痕癌组织中Cyclin A及其m RNA和Cycin D1及其m RNA进行了检测和分析。研究结果具有以下特点: (1) 各项指标在正常皮肤表皮和皮肤病理性瘢痕上皮中的表达很弱, 而且没有统计学意义, 仅仅在阳性细胞的数量上稍有不同, 即皮肤病理性瘢痕上皮中阳性细胞数较正常皮肤表皮略显增多。 (2) 各项指标在瘢痕癌组织中呈强阳性表达, 与正常皮肤表皮组和皮肤病理性瘢痕上皮组比较, 具有统计学意义。经相关性分析, 各项检测指标的表达均呈正相关关系。
Cyclin A是一种细胞周期的正性调控因子, 在G1晚期到有丝分裂期均有表达。它的正常表达是保证细胞S期、G2/M期进程顺利完成的主要因子, 代表着细胞正常的增殖活性。近年来发现, 多种人类肿瘤有Cyclin A的扩增或过度表达, 它的异常表达与细胞的增殖、肿瘤的发生有极其重要的关系[5]。文献报道, 在肝癌、结直肠癌、白血病、乳腺癌等多种恶性肿瘤中存在Cyclin A的异常表达, 其异常表达不仅与肿瘤的发生、发展有关, 且与肿瘤患者的预后有关系[6]。本组研究结论与之相同, 在瘢痕癌中Cyclin A无论在蛋白水平还是在分子水平都存在异常高表达, 提示Cyclin A与瘢痕癌的发生密切相关。研究表明, 在整个细胞周期过程中表达的Cyclin A可持续性激活CDK2磷酸化的底物, 直接或间接地释放过量的转录因子 (如B-Myb、E2F等) , 促进G1/S期转换, 启动DNA合成;同时促使细胞由G2期进入M期, 使细胞周期G2/M转换时间缩短, 进而导致细胞周期的循环加速和细胞过度增殖, 最终导致细胞癌变[7]。
Cycin D1也是一种细胞周期的正性调控因子, 是一种癌基因, 其异常表达与肿瘤关系密切[8,9]。在某些血液系统肿瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤等研究中, 都认为Cycin D1的异常表达与肿瘤的发生有相关性。在皮肤肿瘤的研究中, 认为Cyclin D1多在鳞状细胞癌、恶性纤维组织细胞瘤、恶性黑色素瘤和基底细胞癌中有表达。本组研究的皮肤瘢痕癌 (鳞状细胞癌) 中, Cyclin D1呈明显异常高表达, 提示Cyclin D1与瘢痕癌的发生密切相关。研究表明, Cyclin D1的异常表达, 与CDKs结合, 使视网膜母细胞瘤易感因子发生磷酸化, 其构象发生改变而与转录活化因子E2F分离, E2F被释放而发挥转录因子效应, 促进细胞增殖, 抑制细胞凋亡而癌变, 导致肿瘤的发生[10]。
综上所述, 肿瘤的发生与细胞异常增生和细胞的凋亡抑制密切相关, 细胞周期蛋白作为细胞周期调控的正性调节蛋白, 其基因和编码蛋白的异常, 促进肿瘤细胞异常增生, 在肿瘤的发生、发展中扮演着重要角色。所以, 检测肿瘤组织中细胞周期蛋白的表达, 对全面阐述细胞周期蛋白与肿瘤的关系有重要意义。
摘要：目的 探讨Cyclin A、Cyclin D1蛋白及其mRNA在皮肤病理性瘢痕上皮、瘢痕癌组织中的的表达及意义。方法 以皮肤病理性瘢痕上皮、皮肤瘢痕癌组织为研究对象, 以正常皮肤表皮组织为对照。采用免疫组织化学方法 (SP法) 分别检测Cyclin A、Cyclin D1蛋白的表达, 采用核酸分子原位杂交法检测Cyclin A mRNA、Cyclin D1 mR NA的表达, 结合图像分析, 分别观测正常皮肤表皮、皮肤病理性瘢痕上皮、瘢痕癌组织中检测指标的表达强度和表达水平。运用SPSS 16.0对数据进行统计学处理。结果 ①Cyclin A、Cyclin D1蛋白在正常皮肤表皮为阴性, 在皮肤病理性瘢痕上皮呈弱阳性表达, 在瘢痕癌组织中呈强阳性表达。正常皮肤表皮与皮肤病理性瘢痕上皮中的表达比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 两者与瘢痕癌组织比较, 差异均有统计学意义 (P<0.01) 。②Cyclin A mR NA、Cyclin D1 mR NA在正常皮肤表皮呈阴性表达, 在病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达, 在瘢痕癌组织中呈强阳性表达。瘢痕癌组的表达与正常皮肤表皮组及皮肤病理性瘢痕上皮组相比较, 差异均有统计学意义 (P<0.01) ;但正常皮肤表皮组与皮肤病理性瘢痕上皮组相比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。③相关分析显示, Cyclin A与Cyclin A mRNA, Cyclin D1与Cyclin D1 mRNA在皮肤瘢痕癌组织中的表达均呈正相关 (P<0.01) 。结论 在瘢痕癌中, Cyclin A、Cyclin D1存在蛋白水平和分子水平的异常表达;其高表达可能与皮肤瘢痕癌的发生有关。
关键词：细胞周期蛋白,瘢痕癌,病理性瘢痕上皮
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