丹参注射液对慢性胰腺炎的治疗作用

慢性胰腺炎 (CP) 是胰腺实质的反复性或持续性炎症致胰腺部分广泛纤维化或钙化, 或伴有腺泡萎缩, 胰腺导管内结石形成, 假囊肿形成的一种疾病。

慢性胰腺炎的形态学特征是胰腺组织的进行性纤维化, 胰腺纤维化主要是由于胰腺组织中以胶原为主的细胞外基质 (extra cellular matrix, ECM) 合成与沉积增加, 降解减少, 两者失去动态平衡所致[1]。HA是细胞外间质成分的一种大分子葡胺多糖, 在细胞粘附, 创伤愈合, 肿瘤发生和血管形成中起重要作用。LN是一种重要的ECM成分, 广泛存在于动物及人类细胞基底膜基质中。丹参是临床常用传统中药, 能改善微循环、有抗凝、促进纤维蛋白溶解, 抗氧自由基, 抑制血小板聚集, 能改善细胞功能的作用[2]。本研究旨在探讨观察丹参注射液对实验性胰腺纤维化血清中HA和LN表达的影响, 初步探讨其对胰腺纤维化的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 材料

雄性Spraque-Dawley大鼠, 体重200~300g, 购自山西医科大学动物实验中心。三硝基苯磺酸 (TNBS) 为Sigma公司产品 (批号107K5008) 。丹参注射液购于福建古天药业有限公司, HA和LN试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组和造模

雄性大鼠50只随机分成5组:正常组、模型组、丹参大、中、小剂量干预组各10只。模型组及干预组采用胰胆管中注入2%三硝基苯磺酸溶液的方法[3], 制备慢性胰腺炎模型。造模后, 干预组大鼠术后72h肌肉注射不同剂量的丹参注射液, 正常组、模型组均肌肉注射等量生理盐水, 各组大鼠均术后第4周处死。

1.2.2 检测指标和方法

所有观察对象抽取静脉血, 分离血清, 转离心, 取上清液进行检测。采用光度酶联免疫分析法 (ELLSA) 检测正常组, 对照组, 干预组中的HA和LN的含量。部分胰腺组织做病理切片, 胶原Ι染色, 进行纤维化分析。

1.2.3 统计学方法

采用SPSS 1 1.0统计软件进行统计分析处理, 所有数据用表示, 含量正常组和干预组比较采用Dunnet t检验, 各个干预组之间的比较采用LSD-t检验。

2 结果

2.1 胰腺组织学观察

正常组大鼠胰腺无明显病理改变, 模型组大鼠胰腺明显萎缩, 可见胰腺间质炎性细胞浸润, 间质胶原纤维增生, 胰管增生扩张, 管周及胰腺小叶内纤维化伴炎症细胞浸润, 腺泡萎缩。干预组中亦发生了胰腺纤维化, 但较模型组纤维化程度减轻, 且随着丹参干预组剂量的增加胰腺纤维化程度呈现逐步减轻的趋势。

2.2 血清中HA和LN的含量

2.3 丹参干预组中各剂量组的疗效

由上述表1, 图1、2可以看出, 小剂量, 中剂量, 大剂量组对慢性胰腺炎均有疗效, 其中以大剂量组的疗效最为明显。

3 讨论

胰腺纤维化与慢性胰腺炎的关系十分密切, 慢性胰腺炎的主要病理特征是胰腺纤维化, 胰腺纤维化可是慢性胰腺炎迁延不愈, 二者相互促进、相互影响[4]。目前已经公认氧化应激是导致胰腺纤维化的一个重要因素, 其在组织炎症和修复的过程中氧化应激激活静息状态的胰腺星状细胞 (pancreatic stellate cell, PSC) , 通过降低机体抗氧化能力和增加氧化损伤参与慢性胰腺炎的纤维化过程。LN属于结构性蛋白, 存在于基底膜的透明层中, 在胰腺纤维化是沉淀于胰腺血窦, 使胰腺血窦毛细血管化, 增加胰腺血窦阻力, 使胰腺血清中LN含量增高[5]HA作为细胞外基质的成分及合成时的中间产物, 其血清浓度可一定程度反应细胞外基质的沉积量及活跃程度。因此通过血清中HA和LN的含量测定可以判断胰腺纤维化程度。

丹参有效成分为丹参酮 (Ⅰ、ⅡA、ⅡB) 、异丹参酮 (ⅠⅡA) , 现代药理研究表明:丹参具有防止钙超载, 消除氧自由基及改善微循环, 作为丹参的主要陈分丹参酮ⅡA是一种新的有效的细胞内脂质过氧化产物与DNA相互作用的抑制剂。国内外学者通过应用各种不同的实验方法对心肌肌质网膜脂质过氧化过程中产生的脂类自由基的消除作用研究发现, 它对DNA的保护作用很可能是通过消除脂类自由基而阻断脂质过氧化的链式反应, 抑制DNA合成物的生成, 从而减少了后者的细胞毒性[6]。这些研究都表明丹参酮有促进机体对氧自由基的代谢、降低自由基水平的作用, 其机理可能是是丹参酮ⅡA通过增强细胞中的超氧化物歧化酶 (SOD) 水平, 并通过这一机制降低丙二醛 (MDA) 水平, 从而减少细胞中的氧自由基, 保护细胞免受损伤。

本实验通过研究不同浓度的丹参注射液对大鼠慢性胰腺炎的干预, 从而探讨丹参注射液对慢性胰腺炎的治疗作用。大鼠胰腺组织病理形态学改变和胶原纤维染色分析结果均支持丹参具有改善胰腺纤维化的作用。大鼠慢性胰腺炎模型组中HA和LN含量明显增高, 用大、中、小3种剂量的丹参对大鼠慢性胰腺炎模型进行治疗, 均能使血清中HA和LN含量降低, 其中以大剂量组疗效最为明显, 以上均说明丹参注射液可以有效延缓胰腺纤维化的发生, 有较好的治疗效果。

注:与正常组相比, P<0.05;与模型组相比, P<0.05

摘要：目的探讨丹参注射液对慢性胰腺炎大鼠血清中HA和LN的影响, 从而验证丹参注射液对慢性胰腺炎的治疗作用。方法通过胰管内注射2%三硝基苯磺酸的方法建立大鼠慢性胰腺炎纤维化模型。50只雄性SD大鼠随机分成5组:正常组、模型组、丹参小剂量组 (400mg/kg) 、丹参中剂量组 (800mg/kg) 、丹参大剂量组 (1600mg/kg) 。4周后应用免疫组化法 (ELLSA) 检测大鼠血清中的HA和LN的表达情况, 同时将胰腺组织行HE染色, 观察病理形态学改变。结果模型组发生明显的胰腺纤维化, 血清中的HA和LN的表达明显升高。各不同剂量干预组纤维化程度及HA和LN的表达均低于模型组。结论丹参注射液可抑制大鼠胰腺纤维化组织的形成, 对慢性胰腺炎有一定的治疗作用。

关键词：丹参注射液,胰腺纤维化,透明质酸,层粘连蛋白

参考文献

[1] Bachem MG, Scheider E, Gross H, et al.Identification, culture, and Characterization of pancreatic stellate cells in rats and humans[J].Gastroenterology, 1998, 115 (2) :421～432.

[2] 彭同林.丹参对重症急性胰腺炎患者血清炎性细胞的影响[J].中西医结合学报, 2007, 1:28.

[3] 王兴鹏, 龚自华, 吴凯, 等.三硝基苯磺酸诱导大鼠慢性胰腺炎模型的建立[J].中华病理学杂志, 2003, 32 (3) :267～269.

[4] Draganov P, Toskes PP.Chronic pancreatitis[J].Curr Opin Gastroenterol, 2002, 18 (5) :558～562.

[5] Garcia2Ruiz I, de la To rre P, D iaz T, et al.Sp1and Sp3transcrip tion facto rs mediate malondialdehyde2induced co llagen alpha1 (I) gene exp ression in cultured hepatic stellate cells[J].J Bio l Chem, 2002, 277:305512～30558.

[6] 曹恩华, 刘晓麒, 李景福, 等.天然抗氧化剂丹参酮ⅡA对干细胞脂质过氧化产物与DNA相互作用的影响[J].生物物理学报, 1996:12.