糖脉康颗粒治疗糖尿病慢性并发症的动物实验研究

糖尿病慢性并发症 (DCC) 是慢性过程, 需要长期药物治疗。目前, 西药治疗效果欠佳, 而中医药治疗具有用药灵活、标本兼治等优点, 且副作用小, 价格低。本研究应用糖脉康颗粒对糖尿病大鼠进行干预, 探讨糖脉康对DCC的治疗作用。

1 对象与方法

1.1 动物来源

清洁级雄性Wistar大鼠30只, 体重180～200g。

1.2 实验方法

1.2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立

40日龄左右的雄性Wistar大鼠30只, 适应性喂养1周后, 随机取10只作为正常对照组给予常规饲料。其余20只大鼠给予高糖高脂饲料[1] (饲料组成:10.0%猪油, 20.2%蔗糖, 2.5%胆固醇, 1.0%胆酸盐, 66.5%常规饲料) 喂养4周。然后禁食不禁水24h, 左下腹腔注射30mg/kg链脲佐菌素 (STZ) (将STZ溶于新鲜配制的pH4.4、0.1mmol/L枸橼酸钠-枸橼酸缓冲液, 配制成0.5%的溶液) ;对照组仅注射同等量的枸橼酸缓冲液。72h后取尾静脉血用One Touch血糖仪测血糖, 测血糖前禁食不禁水8～12h, 血糖≥16.7mmol/L表示造模成功。造模未成功的大鼠次日追加20mg/kg STZ, 72h后测血糖, 血糖≥16.7mmol/L表示造模成功, 血糖低于16.7mmol/L的大鼠不参与实验。

1.2.2 实验动物分组及处理

将2 0只糖尿病大鼠随机平均分为2组:糖尿病组、糖脉康组。每日给予糖脉康组糖脉康100mg/kg (1mL/100g) 灌胃, 糖尿病组和对照组仅给予等量蒸馏水 (1mL/100g) 灌胃。灌胃共16周。灌胃期间各组动物自由进食和进水。

1.2.3 坐骨神经传导速度测定

禁食不禁水12h, 用10%水和氯醛400mg/kg腹腔注射麻醉大鼠。分离大鼠坐骨神经后立即测定, 用生理盐水为导电介质, BL-420E+生物机能实验系统测定神经传导速度。

1.2.4 肾脏醛糖还原酶活性测定

参照刘长山等[2]的方法测定, 计算样品蛋白质含量, 计算公式为:蛋白含量 (g/L) = (测定管吸光度值/标准管吸光度值) ×标准管浓度 (g/L) 。

1.2.5 统计学处理

所有数据结果均以均数±标准差 (x-±s) 表示, 采用JMTJFX简明统计分析10.34统计软件包处理, 各组数据间的比较采用单因素方差分析。 (P<0.05) 为有统计学意义。

2 结果

与对照组相比, 糖尿病组、糖脉康组血糖明显升高 (P<0.01) , 但糖脉康组血糖与糖尿病组相比没有明显降低 (P>0.05) ;与对照组相比, 糖尿病组肾脏皮质AR活性明显升高 (P<0.01) , 糖脉康组AR活性较糖尿病组明显降低 (P<0.01) ;与对照组相比, 糖尿病组、糖脉康组坐骨神经传导速度明显降低 (P<0.01) , 糖脉康组神经传导速度较糖尿病组明显升高 (P<0.01) (表1) 。

3 讨论

糖脉康颗粒由黄芪、生地、丹参、赤勺、牛膝、黄精、葛根、麦冬、淫羊藿、桑叶十一味中药组成。诸药共同具有扩张血管, 增加神经内膜中血流, 抑制血小板聚集, 拮抗凝血机制紊乱的作用。

注:与正常对照组比较*P<0.01, 与对照组比较△P<0.05, 与糖尿病组比较#P<0.01

高血糖是糖尿病的重要特点, DCC的发生、发展和严重程度与高血糖的耐受性和程度密切相关[3]。近年来, 通过对几种糖尿病实验动物模型的广泛研究已清楚地表明:糖代谢的多元醇通路与糖尿病血管病变、肾脏病变及周围神经病变等DCC密切相关[4]。动物实验表明, 醛糖还原酶抑制剂可缓解糖尿病实验动物模型的肾小球高灌注和肾小球滤过率升高, 减少尿蛋白排泄。现代药理学研究发现, 部分中草药提取物具有明显的抑制AR活性的作用[5]。本研究构建糖尿病大鼠模型, 并用中药糖脉康进行干预, 发现糖尿病组及糖脉康组AR活性明显高于正常对照组, 而糖脉康组AR活性明显低于糖尿病组, 提示糖脉康可以降低糖尿病大鼠AR活性改善糖尿病肾病 (DN) 的发生与发展。Chung糖尿病动物实验提示多元醇通路过度激活的氧化应激是糖尿病周围神经病变 (DPN) 发病机制的一个重要原因[6]。本实验发现, 应用糖脉康治疗后糖尿病大鼠坐骨神经传导速度较未治疗组明显改善, 但仍低于正常对照组。提示DPN还有其他的发病机制, 多元醇通路过度激活只是其中之一。

中药糖脉康颗粒可降低糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶活性, 明显改善其坐骨神经传导速度, 可防治DCC的发生与发展。

摘要：目的构建糖尿病动物模型, 观察糖脉康对糖尿病大鼠坐骨神经传导速度、肾脏醛糖还原酶 (AR) 活性的影响。方法40日龄左右的雄性Wistar大鼠30只, 随机取10只作为正常对照组给予常规饲料。其余20只大鼠给予高糖高脂饲料喂养4周, 左下腹腔注射30mg/kg链脲佐菌素。72h后取尾静脉血测血糖, 血糖≥16.7mmol/L表示造模成功。20只糖尿病大鼠随机分为糖尿病组、糖脉康组。糖脉康组给予糖脉康100mg/kg (1mL/100g) 灌胃, 糖尿病组和正常对照组仅给予等量蒸馏水 (1mL/100g) 灌胃, 共16周。10%水合氯醛麻醉后取大鼠坐骨神经测定神经传导速度, 取肾脏测定AR活性。对数据结果进行统计学分析。结果与对照组相比, 糖尿病组、糖脉康组血糖明显升高 (P<0.01) , 但糖脉康组血糖与糖尿病组相比没有明显降低 (P>0.05) ;与对照组相比, 糖尿病组肾脏皮质AR活性明显升高 (P<0.01) , 糖脉康组AR活性较糖尿病组明显降低 (P<0.01) ;与对照组相比, 糖尿病组、糖脉康组坐骨神经传导速度明显降低 (P<0.01) , 糖脉康组神经传导速度较糖尿病组明显升高 (P<0.01) 。结论糖尿病大鼠肾脏AR活性升高, 糖脉康干预可使其AR活性降低, 坐骨神经传导速度改善。

关键词：糖脉康,糖尿病大鼠,醛糖还原酶活性,坐骨神经传导速度

参考文献

[1] 郭啸华, 刘志红, 李恒, 等.高糖高脂诱导的2型糖尿病大鼠模型及其肾病特点[J].中国糖尿病杂志, 2002, 10 (5) :290～294.

[2] 刘长山, 陈惠黎, 查锡良, 等.4种药物对醛糖还原酶的抑制作用[J].上海医科大学学报, 1997, 24 (6) :433～435.

[3] UKPDS:UK Prospective Diabetes Study Group.Intensive blood-glucose control with sulphonylucreas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type2diabetes (UKPDS33) [J].Lancet, 1998, 352 (9131) :837～853.

[4] Kador PF.The role of aldose reductase in the development of diabetic complications[J].Med Res Rev, 1988, 8 (3) :325～352.

[5] 谢明智.黄酮类化合物对醛糖还原酶的抑制作用[J].药学学报, 1986, 21 (10) :721～724.

[6] Chung SS, Ho EC, Lam, KS, et al.Contribution of polyol pathway to diabetes-induced oxidative stress[J].J Am Soc Nephrol, 2003, 14 (8Suppl13) :S233.