温州医科大学论文提纲

2022-11-15

论文题目：低水平血清泌乳素与PCOS患者代谢紊乱和IVF-ET结局的关系及相关机制研究

摘要：第一章低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者代谢紊乱的相关性研究研究背景:泌乳素（prolactin,PRL）除了在调节乳房发育和泌乳方面起良好作用外,已有其他300多种独立功能得到证实。研究表明PRL在机体代谢中起重要的调控作用,但是处于正常生理范围内和超出正常生理范围时血清PRL和代谢风险的关系是不一样的。超出生理范围的高PRL血症患者的PRL水平越高,越容易出现胰岛素抵抗、肥胖、动脉粥样硬化及骨质疏松等代谢问题;但是当血清PRL处于正常生理范围之内时,它和代谢风险的关系则会变得相反,PRL水平越低,发展成代谢综合征和2型糖尿病等不良代谢结局的可能性反而越大。也就是说血清PRL水平过高或过低都会引起代谢紊乱,但是处于正常生理范围内的低水平血清PRL和代谢紊乱的关系往往容易被忽视。多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是育龄期妇女最常见的内分泌代谢紊乱性疾病,与胰岛素抵抗、糖耐量异常、高血脂、高血压和心血管疾病等的发生密切相关,发病机制至今还不清楚。由于血清PRL在机体代谢中起重要的调控作用,PRL和PCOS患者代谢紊乱的相关性值得进一步研究和探讨。PCOS患者常常伴发高PRL血症,高PRL血症与PCOS代谢紊乱的相关研究已经很多,在临床上也已经备受关注,但是血清PRL处于正常生理范围内的那部分PCOS患者的PRL水平与代谢的关系却从未被关注。当处于正常生理范围之内时,PCOS患者的血清PRL水平与正常人群相比究竟如何及其与代谢紊乱究竟存在怎样的关系不得而知,至今也未见报道。本研究首次对这些问题进行探讨,以血清PRL水平处于正常生理范围内的大样本的PCOS不孕患者作为研究对象来分析这些患者的血清PRL水平和正常人群的差异及其与代谢紊乱的相关性,从而为今后研究PRL的代谢调控机制和PCOS的发病机制提供理论依据。研究目的:回顾性分析PCOS不孕患者的血清PRL水平及其与代谢紊乱的相关性。研究方法:以2007年1月至2018年8月在温州医科大学附属第一医院生殖医学中心第一次行体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）治疗并且血清PRL水平在正常生理范围内的2052例PCOS不孕患者作为研究对象,以同期9696例血清PRL水平也在正常生理范围内的输卵管性不孕患者作为对照,回顾性分析这11748例不孕患者的血清PRL、血压、体重指数（body mass index,BMI）、基础内分泌激素、空腹血脂、空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）、肝功能及甲状腺激素等指标的水平;再对其中792例有完整腰围、臀围、空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）资料的PCOS不孕患者的腰围、臀围、FINS、稳态模式评估法测定胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）及HOMA-β细胞功能指数（HOMA-β）等指标进行回顾性分析。研究结果:1、对2052例PCOS不孕患者的回顾性分析发现,控制BMI的影响后,不同年龄段的PCOS不孕患者的血清PRL水平均明显低于对照组（P＜0.05）。再以血清PRL四分位数为标准分组后比较各项指标发现,PCOS不孕患者的血清PRL水平越低,促黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、LH/卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine ainotransferase,ALT）、γ-谷氨酰转移酶（glutamyltransferase,γ-GGT）、血清游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3）及 FT3/血清游离甲状腺素（free thyroxine,FT4）越高,FPG、血清促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone,TSH）及FT4越低（P＜0.05）。纠正年龄和BMI影响后的多元线性回归分析发现血清PRL与FPG、TSH及FT4正相关,与LH及LH/FSH负相关（P＜0.05）。2、对792例PCOS不孕患者的回顾性分析则发现,血清PRL水平越低,PCOS不孕患者的腰围、臀围、FINS、HOMA-IR及HOMA-β则越高（P＜0.05）。纠正年龄和BMI影响后的多元线性回归分析发现血清PRL与FINS、HOMA-IR及HOMA-β 负相关（P＜0.05）。结论:当处于正常生理范围之内时,PCOS不孕患者的血清PRL水平要明显低于正常人群。而低水平血清PRL可能是增加PCOS不孕患者代谢风险的一个重要因素,也是预测胰岛素抵抗和β细胞功能障碍的良好指标。第二章低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者体外受精-胚胎移植治疗结局的相关性研究研究背景:内分泌及代谢紊乱与流产、死胎等不良孕产史密切相关。研究表明糖、脂等代谢的异常不仅能改变血清生化组分,还会在卵泡液这一微环境层面产生负面影响,最终降低临床妊娠率。泌乳素（PRL）在机体代谢调控中起重要作用,超出正常生理范围的高PRL血症以及正常生理范围内低水平血清PRL都会对代谢产生不良影响,那么过高或过低的血清PRL是否也可能因此对妊娠结局产生不良影响?是否也可能因此影响体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的治疗结局?到目前为止这些问题从未被关注,也未见相关研究报道。高PRL血症可通过下丘脑-垂体-卵巢轴影响卵泡发育和黄体功能从而对妊娠结局产生不良影响,已在临床上受到足够的重视和有效的治疗,而正常生理范围内低水平血清PRL与妊娠及IVF-ET治疗结局的相关性往往容易被忽视,更值得关注和进一步的研究探讨。我们的前期临床研究已经证实多囊卵巢综合征（PCOS）不孕患者的血清PRL水平低于正常人群,并与代谢紊乱密切相关。本研究首次对正常生理范围内低水平血清PRL和PCOS不孕患者及输卵管性不孕患者这两类比较有代表性的不孕人群的IVF-ET治疗结局的可能关系做初步探讨,希望为今后探索有效的改善妊娠结局的治疗方案提供理论依据。研究目的:回顾性分析正常生理范围内低水平血清PRL对PCOS不孕患者及输卵管性不孕患者IVF-ET治疗结局的影响。研究方法:以2007年1月至2018年8月在温州医科大学附属第一医院生殖医学中心第一次行IVF-ET治疗并均行新鲜胚胎移植、血清PRL水平均在正常生理范围内的1414例PCOS不孕患者和7430例输卵管性不孕患者作为研究对象,回顾性分析血清PRL水平与这些不孕患者IVF-ET治疗结局的关系。研究结果:1、以血清PRL中位数为标准对1414例PCOS不孕患者分组后比较各项指标发现,血清PRL水平越低的患者血清LH、促性腺激素（gonadotropin,Gn）使用总量和使用天数越大,人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）注射日血E2水平越低,差异均有显著性（P＜0.05）。而获卵数、卵子成熟率、临床妊娠率、胚胎种植率及活产率随着血清PRL水平的降低呈现出下降的趋势,流产率则呈现出升高的趋势,但是差异均没有达到显著性。当以活产率作为最终的观察指标,在纠正年龄和BMI等多个影响因素后发现PCOS不孕患者的活产率与T负相关,与优质胚胎数正相关,获卵数在7-15个之间的不孕患者活产率最为理想（P＜0.05）。而血清PRL水平虽然与活产率呈现出负相关的趋势,但是差异没有达到显著性。2、以血清PRL中位数为标准对7430例输卵管性不孕患者分组后比较各项指标发现,血清PRL水平越低的患者血清睾酮（testosterone,T）、窦卵泡计数（antral follicle count,AFC）、hCG 注射日血雌二醇（estradiol,E2）、获卵数、卵子成熟率、优质胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率及活产率越低,血清LH、Gn使用总量及流产率则越高,差异均有显著性（P＜0.05）。当以活产率作为最终的观察指标,在纠正年龄和BMI等多个影响因素后发现,输卵管性不孕患者的活产率与年龄及T负相关,与AFC及优质胚胎数正相关（P＜0.05）。而血清PRL水平虽然与活产率呈现出负相关的趋势,但是差异没有达到显著性。结论:正常生理范围内低水平血清PRL在一定程度上影响了 PCOS不孕患者和输卵管性不孕患者的超促排卵反应性和实验室结果,并和活产率呈现出负相关趋势,但是还没有足够的证据表明低血清PRL是活产率的独立影响因素。低血清PRL与IVF-ET治疗结局的关系还需要进一步研究证实。第三章泌乳素及其受体介导JAK2/STAT5通路对脂肪代谢的影响及机制研究研究背景:泌乳素（PRL）通过和受体结合启动相应的细胞内信号传导通路对目标基因产生作用,从而实现它众多的生物学功能。研究表明PRL与代谢密切相关,但是由于PRL受体的的多样性以及不同类型的受体具有不同的调控机制等原因导致PRL和受体结合后启动的信号通路及调控方式极其复杂。PRL及其受体具体通过什么途径来调控代谢到目前为止都还不清楚。酪氨酸激酶（Janus kinase,JAK）/转录激活因子（signal transducer and activators of transcription,STAT）通路是PRL第一个确定的信号转导通路,也是其他众多细胞因子和生长因子信号传导的共同途径,广泛参与细胞增殖、分化及凋亡等重要生物学过程,并在能量代谢中起重要调控作用。PRL的代谢调控机制至今还不清楚,JAK/STAT通路又和代谢密切相关,所以PRL及其受体介导的JAK/STAT信号通路对代谢的调控作用成为我们关注的重点。既往研究发现PRL能够激活JAK2/STAT5通路调节乳腺上皮细胞乳糖、乳脂和乳蛋白的合成及分泌,但是相关研究比较零星,并主要集中在乳腺发育和乳腺癌研究方面。此外,关于PRL调控乳脂等相关基因转录作用的研究一直集中在乳腺上皮细胞上,对脂肪细胞代谢的研究却几乎未被关注。脂肪组织在机体内分泌和代谢中起重要作用,选择脂肪细胞进行PRL及其受体介导JAK2/STAT5信号通路调节代谢相关机制的研究可能更有意义。另外,在PRL/PRLR介导的JAK2/STAT5信号传导通路中会产生一种剂-效关系特性,而在不同的物种、组织和细胞中PRL通过JAK2/STAT5通路产生正常效应所需要的浓度都不一样,但是具体什么物种、什么组织和什么细胞产生正常效应需要多少PRL浓度都还不清楚,仅有的几项零星的研究也均在摸索过程中,值得进一步研究探讨。此外,JAK/STAT信号通路的异常激活在某些疾病的发生过程中可能存在关键的调控作用,比如肿瘤和白血病。过高或过低的血清PRL都会引起PCOS患者代谢紊乱,它们是否有可能通过JAK2/STAT5通路的异常激活在PCOS的发生发展中起作用也还不清楚,相关研究未见报道。胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）是PCOS代谢异常的基本特征和病理生理过程的中心环节,本研究利用成熟脂肪细胞建立IR模型,首次尝试用不同浓度RPL及PRLR过表达处理IR模型细胞来观察JAK2/STAT5信号通路的变化以及对脂代谢的影响,仅希望能对RPL与脂代谢的关系及相关机制做一个简单粗略的探讨,为将来更好的探索PRL的代谢调控机制和PCOS的发病机制以及代谢相关性疾病的有效临床治疗方案指明一个研究的方向。研究目的:探讨PRL及其受体介导JAK2/STAT5通路对脂肪代谢的影响及作用机制。研究方法:通过油酸诱导分化,将SW872前脂肪细胞诱导成成熟脂肪细胞,并利用油红0进行鉴定,然后通过油酸孵育建立IR模型。分别用高、中、低浓度的PRL干预IR模型细胞,Western blot检测干预24h和48h后PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5及p-STAT5蛋白的表达情况,甘油三酯（troglyceride,TG）试剂盒检测细胞内TG的含量。再构建PRLR过表达载体,将载体及空载转染至成熟脂肪细胞中,Western blot验证转染效率。随后油酸孵育 24 小时进入 IR 状态。Western blot 检测 PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5 及p-STAT5蛋白的表达,TG试剂盒检测细胞内TG的含量。研究结果:油红0染色结果显示高浓度和中浓度PRL干预组的脂质含量明显高于IR模型组（P＜0.05）。PRL干预24h和48h后细胞中的TG含量与模型组相比显著增加,且随着PRL浓度的增加,TG含量也随之增加（P＜0.05）。Western blot结果显示,在PRL干预24h和48h时,与对照组相比,IR模型组中PRLR、p-JAK2和p-STAT5表达量显著降低;与模型组相比,高浓度PRL干预组中PRLR、p-JAK2和p-STAT5表达量显著增加（P＜0.05）。过表达PRLR显著增加IR模型中TG含量（P＜0.05）。Western blot结果显示,与对照组相比,IR模型组中PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5和p-STAT5表达水平显著降低;与模型组相比,PRLR过表达组中PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5和p-STAT5表达水平显著增加（P＜0.05）。研究结论:PRL及其受体与脂肪代谢有关。JAK2/STAT5信号通路在脂肪代谢中起重要的调控作用。PRL干预及PRLR过表达可以通过JAK2/STAT5通路的异常激活增加脂肪细胞中TG的沉积,影响脂肪代谢。但是PRL在脂肪细胞中产生正常效应所需要的浓度以及PRL及其受体介导的JAK2/STAT5通路的异常激活与PCOS发生发展的相关性都还需要更深入的研究来探讨。

关键词：泌乳素;多囊卵巢综合征;代谢;胰岛素抵抗;β细胞功能;不孕;体外受精-胚胎移植;妊娠;活产率;胰岛素抵抗模型;PRL;PRLR;脂代谢;信号通路

学科专业：妇产科学（专业学位）

中文摘要

英文摘要

符号说明

第一章低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者代谢紊乱的相关性研究

1.1 研究背景

1.2 材料与方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 结论

第二章低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者体外受精-胚胎移植治疗结局的相关性研究