PCR法在奶牛乳房炎病原菌鉴定中的应用探析

2022-09-11

乳房炎是奶牛最为常见的一种疾病, 对奶牛产业的发展具有较大的影响。当前, 在对奶牛乳房炎病原菌的鉴定中, 主要采取微生物培养法, 这种传统的鉴定方法具有耗时长、费用高等缺点, 在奶牛产业现代化发展的进程中, 表现处于一定的滞后性。但随着分子生物学技术的不断发展, 奶牛乳房炎病原菌的鉴定方法也得到了转变, 以PCR法鉴定病原菌表现出诸多的优越性:检测灵敏度高;检测时间;检测成本低;检测范围广[1,2]。这些显著的优越性, 决定了其在奶牛乳房炎病原菌鉴定中的应用价值。当前, PCR法主要有普通PCR诊断法、多重PCR诊断法和实时荧光定量PCR诊断法。具体如图1所示。本文立足于PCR法的技术特点, 就其在奶牛乳房鉴定中的应用作如下具体阐述。

1 普通PCR诊断法

现代分子生物学技术的不断发展, 促使了PCR法在奶牛乳房炎病原菌的诊断中的应用发展, 并逐步建立起了相对成熟的PCR乳房炎分子诊断方法。从实际来看, 国外很多国家在PCR法的应用研究上已有诸多成效。表1是国外各国在奶牛乳房炎分子PCR法方面的研究成果[3]。从表1中可以看出, PCR诊断法在分子技术不断发展的大背景之下, PCR法在乳房炎病原菌的鉴定中, 起到越来越重要的应用价值, 并有广泛的鉴定范围, 契合当前的技术发展需求。

2 多重PCR诊断法

从实际来看, 引发奶牛乳房炎的病原菌的种类日益多样化, 这就对普通PCR法有了新的要求, 强调多重PCR诊断法在实际中的应用。当前, 在多重PCR诊断研究中, 经历了几个时期[4]。2001年, 多重PCR体系在Riffon下建立, 实现对4种病原菌的同时鉴定, 并且在实际的应用中, 具有快速、准确的实际效果;, 2002年, Ramesh建立双重PCR体系, 实现了对病原菌中的结肠炎杆菌和金黄色葡萄球菌的鉴定。而在我国, 对于多重PCR诊断法的研究及应用也在不断深入, 张善瑞建立了多重PCR体系, 实现了对无乳链球菌、金黄色葡萄菌及大肠杆菌的鉴定, 并取得了良好的应用效果。

3 实时荧光定量PCR诊断法

PCR法随着科学技术的不断发展, 迎来了飞跃式发展, 而实时荧光定量PCR诊断法就是最显著的体现。实时荧光定量PCR诊断法实现了机遇荧光信号对整个PCR扩增过程的检测, 并通过建立标准曲线, 最终对未知模板进行分析。当前这一方法正处于研究发展阶段, 其中“Real-time PCR”技术最为显著[5]。一方面, 相比于传统的PCR法, 其检测灵敏度更高, 且能够实现对细菌数量的明确检测;另一方面, Real-time PCR具有可定量且省时省力的特点, 契合现实的需求。

总之, 随着分子生物学技术的快速发展, 奶牛乳房炎病原菌鉴定技术也迎来了发展的新阶段, PCR法的研究与发展, 提高了奶牛乳房炎病原菌鉴定的准确性, 并省时省力, 非常契合当前的社会发展需求。但PCR法在应用及发展中, 也存在诸多问题, 如普通PCR法难以实现对不同细菌感染进行检测, 且不做做出预先估计的乳房炎病例;而对于多重PCR法, 其在检测灵敏度上相对较低, 不能准确细菌数量。虽然Real-time PCR在前两者的基础上有了改善和发展, 但高昂的设备仪器仍在现实中有一定的制约性。

摘要：乳房炎是乳房在化学、微生物或物理等的刺激之下所发生的一种疾病, 是奶牛的一种常见疾病。基于此, 立足于PCR法的发展现状, 就PCR发在奶牛乳房炎病原菌鉴定中的应用进行了系统阐述, 强化对PCR的发展及应用的认识。

关键词：PCR法,奶牛,乳房炎,病原菌,鉴定