乙型肝炎病毒核酸检测

乙型肝炎病毒核酸检测（精选8篇）

篇1：乙型肝炎病毒核酸检测

乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒

样本要求

1.适用标本类型：血清或血浆 2.标本采集

1）血清：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温放置30—60min，血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5分钟，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管

2）血浆：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入含EDTA-2K或枸橼酸钠的玻璃管，立即颠倒玻璃管混合5—10次，使抗凝剂和静脉血充分混匀，5—10分钟后即可分离血浆，转移至1.5 ml灭菌离心管

3.标本保存与运送：所采集的标本可立即用于测试，也可以保存在—20℃待测，保存期为6个月，标本运送采用0℃冰壶。检验方法

1.DNA提取（样品制备区）

将待测样本、阳性定量参考品、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品进行同步处理。1）取200μl样品，加入450μlDNA提取液I和4μl的内标溶液，用振荡器剧烈混匀15秒，瞬时离心数秒。100℃恒温处理10±1分钟 2）12000rpm离心5分钟，备用 2.PCR试剂准备（试剂准备区）直接使用HBV-PCR反应管 3.加样（样品制备区）

往上述HBV反应管中用带滤芯吸嘴分别加入待测样本、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品和阳性定量参考品的上清液各20μl。盖紧管盖，8000rpm离心数秒后转移至扩增检测区。

4.PCR扩增（扩增和产物分析区）5.结果分析

反应结束后自动保存结果，根据分析后的图像调节baseline值得Start值、End值以及Threshold值，点击Analysis自动获取分析结果，在Repoet界面查看结果，记录未知样本数值（C）6.质量控制

(1)阴性质控品：FAM通道无对数增长期或Ct值等于30，VIC检测通道扩增曲线为明显对数增长期

(2)HBV阳性质控品：FAM通道有明显的对数增长期且Ct值小于30(3)HBV阳性定量参考品：FAM通道有明显的对数增长期，呈典型S形曲线。CT<29且R²>0.98 7.结果判断（1）如果在FAM通道无明显的对数增长期或Ct值等于30，在VIC检测通道扩增曲线有对数增长期，则判定样本的HBV DNA浓度小于检测灵敏度。（2）如果在FAM通道有对数增长期或Ct值小于30 则1）若样本的C<100，则样本的HBV DNA浓度<100IU/ml 2）若样本的100《C《5.00E+008，则样本的HBV DNA浓度= C IU/ml 3）若样本的C>5.00E+008，则样本的HBV DNA浓度>5×10 ⁿ IU/ml

篇2：乙型肝炎病毒核酸检测

2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争格局与投资战略研究报告

报告目录

第一部分 行业发展现状

第一章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展概述

第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒的相关知识

一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒的定义

二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒的特点

第二节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展成熟度

一、行业发展周期分析

二、行业中外市场成熟度对比

三、行业及其主要子行业成熟度分析

第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场特征分析

一、市场规模

二、产业关联度

三、影响需求的关键因素

四、国内和国际市场

五、主要竞争因素

六、生命周期

第二章 全球乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场发展分析

第一节 2008-2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业发展综述

一、世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业特点分析

二、世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒主要厂家分析

三、世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业市场分析

第二节 2007-2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展分析

一、2007-2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展分析

二、2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展分析 第三节 全球乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析

一、2011-2012年全球乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求分析

二、2011-2012年欧美乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求分析

三、2011-2012年中外乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场对比

第三章 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展现状

第一节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展状况

一、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展状况分析

二、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展动态

三、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业经营业绩分析

四、2011-2012年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展热点 网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

第二节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场供需状况

一、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业供给能力

二、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场供给分析

三、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场需求分析

四、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品价格分析 第三节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析

一、2010年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析

二、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析

三、2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场的走向分析

第四章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业经济运行分析

第一节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业工业总产值分析

一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业工业总产值分析

二、不同规模企业工业总产值分析

三、不同所有制企业工业总产值比较

第二节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业市场销售收入分析

一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业市场总销售收入分析

二、不同规模企业总销售收入分析

三、不同所有制企业总销售收入比较

第三节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业产品成本费用分析

一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业成本费用总额分析

二、不同规模企业销售成本比较分析

三、不同所有制企业销售成本比较分析

第四节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业利润总额分析

一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业利润总额分析

二、不同规模企业利润总额比较分析

三、不同所有制企业利润总额比较分析

第五章 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业进出口分析

第一节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品进口分析

一、2011年进口总量分析

二、2011年进口结构分析

三、2011年进口区域分析

第二节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品出口分析 网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

一、2011年出口总量分析

二、2011年出口结构分析

三、2011年出口区域分析

第三节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品进出口预测

一、2011年进口分析

二、2011年出口分析

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒进口预测

四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒出口预测

第六章 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场供需分析

第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场需求规模分析

一、中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒总体市场规模分析

二、东北地区市场规模分析

三、华东地区市场规模分析

四、华中地区市场规模分析

五、华北地区市场规模分析

六、华南地区市场规模分析

七、西部地区市场规模分析

第二节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场需求特征分析

一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒消费群体的年龄特征分析

二、消费者关注的因素

三、市场需求潜力分析

第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒生产分析

一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业产量分析

二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业领先技术分析

三、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业生产集中度分析 第四节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业经营绩效分析

一、行业营运情况分析

二、行业盈利指标分析

三、行业偿债能力分析

四、行业成长性分析

第二部分 行业竞争格局

第七章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局分析

第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业历史竞争格局概况

一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业集中度分析

二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争程度分析 第二节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争结构分析

一、现有企业间竞争

二、潜在进入者分析

三、替代品威胁分析

四、供应商议价能力

网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

五、客户议价能力

第三节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业研发力分析

一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业研发重要性分析

二、中外乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒研发投入和运作方式对比

三、中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒研发力问题分析 第四节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业竞争状况

一、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业品类竞争现状

二、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业的竞争力分析

三、中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业并购重组状况

四、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业并购整合分析 第五节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局分析

第八章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业竞争策略分析

第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争策略分析

一、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场增长潜力分析

二、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒主要潜力品种分析

三、现有乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品竞争策略分析

四、潜力乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒品种竞争策略选择

五、典型企业产品竞争策略分析

第二节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业竞争策略分析

一、后危机对乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局的影响

二、后危机后乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局的变化

三、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争趋势

四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局展望

五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争策略分析

六、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业竞争策略分析

第九章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒重点企业竞争分析

第一节 A

一、企业概况

二、竞争优势分析

三、2008-2012年经营状况

四、2013-2018年发展战略 第二节 B

一、企业概况

二、竞争优势分析

三、2008-2012年经营状况

四、2013-2018年发展战略 第三节 C

一、企业概况

二、竞争优势分析

三、2008-2012年经营状况 网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

四、2013-2018年发展战略 第四节 D

一、企业概况

二、竞争优势分析

三、2008-2012年经营状况

四、2013-2018年发展战略

略......第三部分 行业前景预测

第十章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展趋势分析

第一节 2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场趋势分析

一、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒发展趋势分析

二、2008-2012年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场趋势总结

三、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场发展空间 第二节 2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业发展趋势分析

一、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业政策趋向

二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术革新趋势

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒价格走势分析

四、2013-2018年国际环境对行业的影响

第十一章 未来乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展预测

第一节 未来乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求与消费预测

一、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品消费预测

二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场规模预测

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业总产值预测

四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业销售收入预测

五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业总资产预测 第二节 2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业供需预测

一、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒供给预测

二、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产量预测

三、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求预测

四、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒供需平衡预测

五、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品价格预测

六、2013-2018年主要乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品进出口预测

第四部分 投资战略研究

第十二章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资现状分析

第一节 2010-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资情况分析

一、2010-2012年总体投资及结构

二、2010-2012年投资规模情况

三、2010-2012年投资增速情况 网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

四、2010-2012年分行业投资分析

五、2010-2012年分地区投资分析

六、2010-2012年外商投资情况

第二节 2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资情况分析

一、2011-2012年总体投资及结构

二、2011-2012年投资规模情况

三、2011-2012年投资增速情况

四、2011-2012年分行业投资分析

五、2011-2012年分地区投资分析

六、2011-2012年外商投资情况

第十三章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资环境分析

第一节 经济发展环境分析

一、2008-2012年我国宏观经济运行情况

二、2013-2018年我国宏观经济形势分析

三、2013-2018年投资趋势及其影响预测 第二节 政策法规环境分析

一、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业政策环境分析

二、2011年国内宏观政策对其影响分析

三、2011年行业产业政策对其影响分析 第三节 技术发展环境分析

一、国内乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术现状

二、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术发展分析

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术发展趋势分析 第四节 社会发展环境分析

一、国内社会环境发展现状

二、2011年社会环境发展分析

三、2013-2018年社会环境对行业的影响分析 第五节 中国医药卫生体制改革分析

一、医药卫生体制改革意义

二、医药卫生体制改革思想及目标

三、医药卫生体系与制度改革分析

四、医药卫生体系改革方向

五、医药卫生体制改革重点工作分析

六、医药卫生体制改革步骤分析

七、新医改8500亿的投向分析

八、新医改对乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业的影响分析

第十四章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资机会与风险

第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资效益分析

一、2008-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资状况分析

二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资效益分析 网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资趋势预测

四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业的投资方向

五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资的建议

六、新进入者应注意的障碍因素分析

第二节 影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展的主要因素

一、2013-2018年影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业运行的有利因素分析

二、2013-2018年影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业运行的稳定因素分析

三、2013-2018年影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业运行的不利因素分析

四、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展面临的挑战分析

五、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展面临的机遇分析

第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资风险及控制策略分析

一、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业市场风险及控制策略

二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业政策风险及控制策略

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业经营风险及控制策略

四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业技术风险及控制策略

五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒同业竞争风险及控制策略

六、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业其他风险及控制策略

第十五章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略研究

第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展战略研究

一、战略综合规划

二、技术开发战略

三、业务组合战略

四、区域战略规划

五、产业战略规划

六、营销品牌战略

七、竞争战略规划

第二节 对我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒品牌的战略思考

一、企业品牌的重要性

二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒实施品牌战略的意义

三、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业品牌的现状分析 网 址：

中金企信（北京）国际信息咨询有限公司—国统调查报告网

四、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业的品牌战略

五、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒品牌战略管理的策略 第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业经营管理策略

一、成本控制策略

二、定价策略

三、竞争策略

四、并购重组策略

五、营销策略

六、人力资源

七、财务管理

八、国际化策略

第四节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略研究

一、2011年医疗器械行业投资战略

二、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略

三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略

四、2013-2018年细分行业投资战略

图表略…………

网 址：

篇3：乙型肝炎病毒核酸检测

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1~12月期间本院消化内科与传染病科门诊部和住院部共同收治的HBs Ag低水平阳性的患者3632例, 其中男3168例, 女464例;年龄27~58岁, 平均年龄36岁。所有患者经乙肝病毒酶联免疫吸附试验检测符合HBs Ag低水平阳性。

1.2 方法

HBs Ag检测采用ELISA试验[4], 试剂盒由广州威佳科技有限公司提供。HBV-DNA采用FQ-PCR检测[5], 试剂盒由宝生物工程有限公司提供。

1.2.1 ELISA检测

标本在室温下离心 (1000×g离心10min) 将血清和红细胞迅速小心地分离。使用不含热原和内毒素的试管, 按照试剂盒操作步骤说明进行实验。如果标本不立即使用, 将其分装保存于-70℃条件下, 避免反复冷冻, 在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。避免使用溶血或脂血。

1.2.2 核酸检测

留取血标本中核酸检测成分, 将ELISA检测结果中HBs Ag低水平阳性标本依次编号进行核酸检测, 检测过程依据荧光定量聚合酶链反应说明书进行。

2 结果

HBs Ag低水平阳性者3632例, 占2013年全年在本院进行HBs Ag检测的患者的29.23%, 对HBs Ag低水平阳性者进行HBV-DNA定量检测, 病毒DNA检出率为80.55%, 病毒核酸载量的平均值为7.305。说明当检测出乙肝表面抗原低水平阳性时, 只能说明人体内有乙肝病毒外壳或者是假阳性, 而外壳里面有没有乙肝病毒DNA则还要通过乙肝病毒核酸检测来确定。

3 讨论

HBs Ag编码区位于HBV编码的5个阅读框架的第3个, HBs Ag的衣壳蛋白是由HBs Ag的编码产物Pre-S1、Pre-S2以及HBs Ag-PHSA-Re共同组成[6]。当感染HBV后, 病毒常以完整的病毒颗粒、丝状或管状颗粒、球形颗粒3种形式存在, 其中病毒颗粒含有病毒蛋白和核酸。由于感染HBV后存在一段时间的窗口期[7], 即人体感染乙肝病毒后, 免疫系统在消灭乙肝病毒的这段时期, 也称乙肝恢复期末端, 此时病毒将大量减少或者全部消失, 但是还没有产生乙型肝炎表面抗体 (HBs Ab) 。而HBs Ab一般要在急性乙肝病毒感染后期或HBs Ag消失后, 经过一段时间才出现, 在此间隔期HBs Ag与HBs Ab都不能被检出, 称为“空白期”或“窗口期”。目前虽然有先进的荧光定量PCR技术可以及时准确的诊断感染性疾病, 但窗口期仍然是全世界的难题, 且对于一些没有条件实现临床PCR实验室建立的医院来说, 很难实现对HBs Ag低水平阳性乙型病毒性肝炎患者的正确诊断。所以, 本文在此探讨血清标志物HBs Ag低水平阳性与HBV-DNA检测之间的相互关系, 希望能够对乙型肝炎的临床诊断及疗效观察和预后判断起到一定的作用。

HBs Ag的出现常伴随乙肝病毒的存在, 因此HBs Ag是已感染HBV的标志。HBs Ag可存在于HBV感染者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2~6个月、谷丙转氨酶升高前2~8周时, 可在血清中测到HBs Ag阳性;当HBs Ag呈低水平阳性时, 可结合荧光定量聚合酶链反应来进一步检测体内是否含有HBV-DNA。

研究结果显示, HBs Ag低水平阳性且乙肝病毒DNA<1000, 则体内存在乙肝病毒的表面外壳而不存在乙肝病毒DNA, 不存在病毒复制和传染性;HBs Ag阳性或弱阳性且乙肝病毒DNA>1000, 则说明体内存在完整的乙肝病毒, 具传染性且复制。因此, 当出现HBs Ag阳性或低水平阳性时, 也不一定是HBV患者, 还有可能是乙肝潜伏期、无症状携带者、慢性乙肝或者假阳性者, 这都需要结合PCR检查结果做出综合判断。

摘要：目的 探讨分析血清中乙型肝炎病毒表面抗原 (HBV-HBsAg) 低水平阳性与病毒核酸载量的关系。方法 HBsAg弱阳性的患者3632例, 通过酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测血清 (HBsAg) 、使用荧光定量聚合酶链反应 (FQ-PCR) 检测血清乙型肝炎病毒DNA (HBV-DNA) 。结果 3632例HBsAg弱阳性的患者病毒DNA检出率为80.55%, 病毒核酸载量的平均值为7.305。结论 乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性对乙型肝炎的诊断不具有代表性, 只能能说明体内含有乙肝病毒外壳, 还需要结合血清病毒核酸载量检测来判断患者体内是否具有乙肝病毒DNA。只有在HBsAg阳性且合并病毒核酸载量值异常时, 才有助于乙型病毒性肝炎的诊断和疗效的评估。

关键词：乙型肝炎病毒,表面抗原低水平阳性,病毒核酸载量

参考文献

[1]邱黎霞, 郭满盈, 杨海燕.血清PreS1, PreS2抗原在乙肝诊断中的价值.实验与检验医学, 2009, 27 (2) :177-178.

[2]王宇, 杨延敏.对乙型肝炎患者检测乙肝表面抗原大蛋白和前S1抗原的区别和临床意义.检验医学与临床, 2010, 7 (22) :2446-2447.

[3]夏邦世, 陈友土, 沈忠海.HBsAg阴性或低值弱阳性的乙型肝炎病毒感染.中国预防医学杂志, 2006, 7 (1) :49-51.

[4]陈慧英, 肖艳群, 张健, 等.酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨.检验医学, 2010, 25 (6) :447-450.

[5]刘庆鸣, 曾黎峰, 万本愿, 等.乙肝病毒免疫标志物与其DNA荧光定量聚合酶链反应之间的关系探讨.实验与检验医学, 2010 (5) :270-271.

[6]崔美兰, 周海洋, 刘杰, 等.抗乙肝病毒化学药物研究进展.国际药学研究杂志, 2011, 39 (4) :280-293.

篇4：乙型肝炎病毒核酸检测

【摘要】目的：了解检测慢性乙型肝炎乙肝病毒血清标志物的临床价值。方法：采用HBV-DNA定量和乙型免疫五項对我院118例慢性乙型肝炎患者进行检测，对检测结果进行统计学分析处理。结果：大三阳检出率最高为96.1%，其次为小三阳检出率为77.9%，再次为HBsAg（+）HBcAb（+），检出率为63.9%。其中大三阳的检出率与HBV-DNA的含量同其他乙型免疫五项模式相比，均有统计学意义（p<0.05）。结论：对慢性乙型肝炎患者采用HBV-DNA与乙型免疫五项模式检测，并分析其检测结果可为患者病情早期的诊断、治疗及预后判断提供有效的理论依据。

【关键词】乙肝病毒标志物；HBV-DNA；乙型免疫五项

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2015）06-0015-02

乙型肝炎自上世纪以来便成为严重威胁人类健康的世界性疾病，同时也是我国目前流行性最为广泛、危害性最严重的一种传染性疾病[1]。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型免疫五项简便易行，为临床检查最常用方法。近年来随着分子生物学技术的发展及其在临床应用方面的推广，应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测HBV病毒载量已成为目前临床诊断HBV感染的常用指标[2， 3]。本文对我院2014年1月至2015年6月就诊的118例慢性乙型肝炎患者均采用HBV-DNA定量与乙型免疫五项检测，对检测结果进行统计分析，以了解慢性乙型肝炎乙肝病毒血清标志物检测的临床价值。

1资料与方法

1.1一般资料

本组118例慢性乙型肝炎患者，其中男46例，女72例；年龄16～71岁，平均45.3岁。所有就诊病历均符合中华医学会肝脏病学分会与感染病学分会中慢性乙型肝炎的诊断标准。

1.2方法

所有受检者用一次性负压采血管取清晨空腹静脉血5ml，用真空保凝剂分离胶管分离血清，2h内送检。HBV-DNA采用FQ-PCR检测，按说明书从病人血清中提取HBV-DNA，再用PCR仪扩增，由电脑分析出结果，仪器为FQD-48A扩增仪，试剂由杭州艾康生物公司提供；乙型免疫五项检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测，按说明书进行，仪器为KHBST360型酶标分析仪，试剂由上海科华有限公司提供。

1.3结果判定

HBV-DNA测定值小于1×103 Copies/ml为阴性，反之为阳性。HBsAg：S/CO小于1为阴性，反之为阳性；HBeAg：S/CO小于1为阴性，反之为阳性；抗-HBe：S/CO大于1为阴性，反之为阳性；抗-HBc：S/CO大于1为阴性，反之为阳性；抗-HBs：S/CO小于1为阴性，反之为阳性。

1.4统计学处理

采用SPSS软件统计分析处理，采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

大三阳[HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+）]的检出率最高为96.05%，其次为小三阳[HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）]检出率为59.55%， HBsAg（+）HBcAb（+）检出率为92.59%，详情见表1。其中大三阳的检出率与HBV-DNA的含量同其他乙型免疫五项相比，均有统计学意义（p<0.05），详情见表2。

3讨论

血清乙肝 5项标志物乙型免疫五项定性测定始于80年代中期，对乙肝的疾病诊断 、病程监测及疗效观察具有一定作用 。血液HBV-DNA拷贝数可真实反映HBV感染的状况 ，对感染HBV的判断更直接和重要 ，可用于判断血液中是否有病毒复制以及传染性[4-6] 。

HBV-DNA可直接灵敏、准确的反映乙肝病毒复制情况，对早期的诊断、治疗及预后提供了临床依据。HBV-DNA呈阳性，则说明HBV复制、有传染性。HBV-DNA Copies/ml越高则表明病毒复制越厉害，传染性越强[7， 8]。ELISA是我国临床用血HBsAg筛查指定的方法，试剂改进使ELISA法HBsAg检测灵敏度已达0.2 ng/ml甚至更高。2010年10月血液检测试剂改为孵育总时间不少于120 min的两步法后，国产试剂灵敏度又有明显提高。本文通过118例慢性乙型肝炎HBV-DNA定量和乙型免疫五项检测结果可知，HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+）检出率最高为96.05%，HBV-DNA平均值（Copies/ml）为5.02×107，其次HBsAg（+）HBeAg（+）HBV-DNA检出率为92.59%，HBV-DNA平均值（Copies/ml）为3.51×107。说明这两种复制活跃，传染性较强。HBsAg（+）HBcAb（+）HBV-DNA检出率为7.89%，HBV-DNA平均值（Copies/ml）为4.25×104，HBsAb（+）HBcAb（+）HBV-DNA检出率为2.70%，HBV-DNA平均值（Copies/ml）为1.12×103，HBsAb（+）HBeAb（+）HBcAb（+）HBV-DNA检出率为7.72%，HBV-DNA平均值（Copies/ml）为2.12×103，说明这三种的传染性降低。结果表明HBeAg为反映HBV复制活跃的重要指标，HBeAg/抗HBe转换或HBeAg阴性时其病毒仍在复制，HBeAg不易形成与HBV前c区基因突变有关。

HBsAg为肝炎病毒的外壳部分，其不含病毒核酸成分，临床上HBsAg无法反映病毒的复制情况及传染性的程度，故临床上HBsAg为HBV感染的一项标志。临床上使得HBsAg检测结果出现错误性差异的因素主要如下：HBsAg浓度较低使其在检测时不易测出[5， 9]，造成漏检；HBsAg浓度过高，因出现钩状效应呈假阴性；乙肝病毒的S基因突变；HBsAg的表达因其他病毒的复制或重叠感染而受到抑制。

HBeAg是乙肝病毒核壳蛋白的分泌型，主要为前c区分泌性信号的一种随行物[10， 11]。HBeAg在因在血液中有较高的传染性指标，故采用HBeAg能更敏感、更准确的对其HBV复制进行评价。过去临床上认为乙肝患者出现HBsAb 阳性 、HBeAg阴转是HBV复制减弱 、传染性降低和预后良好的象征 ，但诸多研究表明 ，在HBsAg阴性的慢性乙肝患者中，部分患者临床HBeAg检测呈阴性 ，但HBV-DNA仍为阳性，HBV仍然在复制[12-14]。本实验中HBsAb（+）、HBeAg（-）患者91中有3例（3.30%）HBV-DNA检测为阳性，拷贝数在103Copies/ml左右，与其他报道一致[6， 12， 15]。所以HBsAb（+）出现和HBeAg阴转并不能作为HBV复制终止或者减弱的判断依据 ，相反 ，这种慢性乙肝更容易被忽视 ，给患者造若HBeAg转阴，HBeAb呈阳性则说明病毒复制能力降低，传染性能减弱，而非无传染性。

综上所述，对慢性乙型肝炎患者采用HBV-DNA与乙型免疫五项检测，并分析其检测结果可为患者病情早期的诊断、治疗及预后判断提供有效的理论依据。

参考文献

[1]张小莲畅乙型肝炎患者病毒学检验的临床探究[J]畅中国医药指南，2012，10（28）：188 ～189

[2] 付蕾. HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义[J]. 检验医学与临床，2010（10）：960-961.

[3] Thompson A J， Nguyen T， Iser D， et al. Serum hepatitis B surface antigen and hepatitis B e antigen titers： disease phase influences correlation with viral load and intrahepatic hepatitis B virus markers[J]. Hepatology，2010，51（6）：1933-1944.

[4] Cheng L， Guan Q， Zhang J， et al. Discrepancies between two automated immunoassay systems in determining hepatitis B virus markers in serum samples with concomitant presence of antigens and antibodies[J]. Ann Clin Lab Sci，2010，40（1）：49-52.

[5] 云天英，李武莉，陈韩，等. 乙肝病毒血清标志物模型与HBV-DNA定量的相关性[J]. 海南医学院学报，2009（9）：1165-1166.

[6] 万铁林，耿叔英，王战会，等. HBsAg携带者与HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者病毒学特征的比较[J]. 实用肝脏病杂志，2009（1）.

[7] 付蕾，马黎明，马竟，等. HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义[J]. 实用医技杂志，2008（26）：3547-3548.

[8] 朱合，吴书笔. 检测乙肝病毒前S1蛋白的临床意义[J]. 人民军医，2006（2）.

[9] Huang Z X， Chen D Y， Zhang Q B. [Relationship between hepatitis B virus markers and quantitative HBV DNA in serum][J]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi，2004，12（1）：43.

[10] 姚磊，张征，黄绍光，等. 乙肝不同血清学模式HBV-DNA定量检测及其与Pre-S1关系的研究[J]. 重庆医学，2006（1）：60-62.

[11] 曹亦军. HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义[J]. 齐齐哈尔医学院学报，2005（11）：1279-1280.

[12] Al-Shamahy H A， Rabbad I A， Al-Hababy A. Hepatitis B virus serum markers among pregnant women in Sana'a， Yemen[J]. Ann Saudi Med，2003，23（1-2）：87-89.

[13] Huang W， Gong F Y. [Diagnostic value of serum biochemical markers for liver fibrosis in patients with hepatitis B virus][J]. Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao，2002，22（11）：1034-1036.

[14] 單幼兰，罗娅，黄爱龙. HBV DNA荧光定量PCR检测的临床意义[J]. 中华肝脏病杂志，2001（S1）：102.

篇5：乙型肝炎病毒核酸检测

姓名：

1、核酸检测采样前（）小时尽量避免进食，以免引起呕吐。

A

1小时

B

2小时

C

3小时

D

4小时

2、采样前（）分钟请勿吸烟、喝酒和嚼口香糖，以免影响结果。

A

10分钟

B

20分钟

C

30分钟

D

40分钟

3、采样人员将拭子放入（）中湿润。

A

无菌生理盐水

B

病毒保存液

C

灭菌用水

D

5%葡萄糖

4、核酸标本采集时，操作必须严格按照（）防护要求。

A

一级

B

二级

C

三级

D

四级

5、口咽拭子采集方法：使用咽拭子适度擦拭（）

A

舌根

B

上颚

C

两侧扁桃体及咽后壁

D咽部

6、核酸标本采集不需要准备以下物品（）。

A

病毒采集管

B密封袋

C

手消毒液

D听诊器

7、采集两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少（）次。

A

1次

B

2次

C

3次

D

4次

8、核酸样本室温保存不超过（）小时。

A

1小时

B

2小时

C

3小时

D

4小时

9、核酸样本4摄氏度可以保存（）小时。

A

8小时

B

12小时

C

16小时

D

24小时

10、咽拭子正确使用方式（）

A

篇6：乙型肝炎病毒核酸检测

检测采样申请样表 填表单位:(盖章)填表人: 单位主要负责人: 填表日期: 年 月 日 序号 被采样人姓名 人员类别 性别 年龄 身份证号码 户籍（精确到小区、村组）联系电话 现居佳地（稍到小区、村组、集中隔离点)采样人 姓名 采集日期 送检日期 备注 注明:人员类别中，1代表新增确诊病例、疑似病例、无症状感染者的密切接触者以及其重要密切接触者，2代表各集中隔离点人员及湖北等重点疫区来X的集中隔离人员，3代表二级及以上医疗机构发热门诊人员，4代表重要疫点人员（XX、XX、XX等有接触史人员或有外出务工需求人员)，5代表血液透析人员，6代表企业复工复产人员，7代表各乡镇(街道)、县直机关企事业单位疫情防控一线人员，8 代表有检测需求的社会公众。

篇7：乙型肝炎病毒核酸检测

新冠病毒核酸检测流程及注意事项

检测流程:

注意事项:

核酸检测应知应会

【什么是核酸检测？】

【什么是抗体检测？】

【谁可以申请核酸检测，个人可以申请吗，费用是多少？】

【哪里可以进行核酸检测？】

【检测如何进行，检测过程中我有感染风险吗？】

【检测呈阳性意味着确诊吗？】

【检测前我需要准备什么】

新冠病毒核酸检测流程及注意事项

为满足社会各方和群众对新冠病毒核酸检测的需求，进一步落实“外防输入、内防反弹”的总要求，推进核酸检测“应检尽检、愿检尽检”的原则，XX县人民医院面向社会提供新冠病毒核酸检测服务，现将检测流程及注意事项告知如下:

检测流程:

1.请使用电子健康卡就诊;

2.感染楼一楼发热门诊开具检测单;

3.感染楼一楼东大厅检验窗口打印采集条码;

4.感染楼一楼西大厅采集咽拭子;

5.核酸检测一般于当天或第二天出结果。

注:因近日核酸检测人数较多，我院检验科力争在24小时内出具检测结果，如未在上述时间内查询到结果，还请您耐心等待，或拨打电话咨询。检验科咨询电话:XXXXXXXXXXX,XXXXXXXXXXX

注意事项:

1.在做核酸检测前2小时尽量避免进食，以免引起呕吐;

2.在采集口咽拭子时检测者头后仰，张口发出「啊」音，有助于暴露咽喉，但过程中会出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状，检测者可配合采集人员尽量放松、深呼吸;

3.请做好个人防护，注意手卫生，全程戴口罩，只有在核酸检测采样时才能取下口罩，采样完毕请立即戴好口罩;

4.为了您的安全，请自觉排队，尽量减少交谈，保持1米以上的距离;

5.前来检测人员需如实向医生提供自己的既往病史、流行病学史等，这将是后续诊疗的重要依据。

咨询电话:XXXXXXXXXXXX

检测地址:XX县人民医院感染楼一楼

核酸检测应知应会

【什么是核酸检测？】

即采集人体分泌物后，在实验室条件下，通过分析病毒的RNA基因序列，利用PCR扩增的方法进行检测，进行临床病原学的诊断。目前，核酸检测是及早确定病人是否感染病毒，早发现、早治疗最有效的检测方法。

【什么是抗体检测？】

血清抗体检测就是抽血检测人体对病毒的免疫反应，如果近期有感染新冠病毒，人体会及时产生抗体与病毒抗衡。抗体检测操作简单方便，适用于大量疑似病例、既往感染者和无症状感染者检测初步筛查。

【谁可以申请核酸检测，个人可以申请吗，费用是多少？】

可以。除国家规定的新冠肺炎确诊病例、出院病例、疑似病例、密切接触者等人群必须进行核酸检测外，建议有国内外疫区旅居史的居民或曾直接、间接与确诊、疑似病例短暂接触过的市民进行检测。有工作、就医需要的人员也可以自愿自费进行核酸检测。一般费用在150-200元左右。因疫情形势和地区不同，有的地区免费检测！

【哪里可以进行核酸检测？】

目前国内大部分省级、地级城市的三级医疗机构均可提供新冠病毒核酸检测及新冠病毒核酸抗体检测，具体可咨询当地医疗机构。

【检测如何进行，检测过程中我有感染风险吗？】

采样过程，医生会用一根像棉签一样的拭子去擦拭咽部及扁桃体、或是鼻腔周围的分泌物，只要“轻轻一抹”，快捷、无痛苦。医疗机构会针对检测区域消毒，医护人员会也进行手部消毒，避免交叉感染。一般来说，采样过程安全清洁，无需担心感染风险。

【检测呈阳性意味着确诊吗？】

目前核酸检测试剂的灵敏度和特异性还有限，可能出现假阳性或假阴性，一次检测阳性并不就是确诊。根据国家卫健委发布的诊疗方案，需要结合肺部CT诊断和临床症状才能确诊新冠肺炎。

【检测前我需要准备什么】

篇8：乙型肝炎病毒核酸检测

快速可靠的诊断方法有利于疾病的预防与控制。PCR法及荧光PCR法是实验室常用检测方法, 具有特异性强、敏感性高的特点。两种检测方法均受病毒核酸提取效率的影响, 尤其当临床样本含毒量较低时, 提取效率的高低直接影响到阳性检出率。本试验比较酚氯仿、磁珠吸附两种核酸提取法对普通PCR和荧光PCR检测PCV2的差异, 旨在为临床诊断选择合适、可靠的核酸提取及检测方法提供参考。

1 材料与方法

1.1 病料来源

26份临床组织样品均为流行病学调查样品, 本实验室保存。

1.2 试剂

猪圆环病毒2型荧光PCR检测试剂盒 (北京生科尚仪) ;猪圆环病毒聚合酶链反应检测试剂盒 (北京世纪元亨) ;Mag MAXTM-96 Viral RNA Isolation Kit (AMBION INC) 。以上所有试剂均在使用有效期内。

1.3 仪器设备

MIKRO 220R小型台式冷冻离心机、ABI-7500荧光定量PCR仪、G-STORM PCR仪、蓝盾552可见光凝胶电泳投射仪、ABI MME24核酸提取仪, 使用前均经过校正。

1.4 敏感性试验样品制备

将试剂盒提供的PCV2阳性对照样本, 用PBS缓冲液做10-1~10-8稀释, 置-20℃冰箱待检。

1.5 临床样品处理

取病料约0.1 g, 研磨, 加1.5 m LPBS继续研磨。研磨好的待检组织液置1.5 m L灭菌离心管中, 8 000 r/min离心5 min, 取上清, 置-20℃冰箱待检。

1.6 核酸提取

1.6.1 酚氯仿抽提法

参照猪圆环病毒聚合酶链反应检测试剂盒说明书进行, 取待检样品上清, 阴性、阳性对照各100μL, 加入500μL消化液 (终浓度为0.2%SDS) 和10μL蛋白酶K (终浓度为100μg/m L) , 混匀后55℃水浴过夜。加等体积的苯酚、氯仿、异戊醇混合物 (体积比为25:24:1) 抽提, 取上清, 加入1/10体积约3 mol/L醋酸钠和等体积的异丙醇-70℃静置30 min, 离心弃上清, 用70%冰乙醇洗1次, 自然干燥, 溶解于30μL TE溶液中, -20℃保存备用。

1.6.2 磁珠吸附法

参照核酸提取仪操作手册进行, 取50μL待检样品上清、20μL磁珠混合液、130μL裂解结合液依次加入8联管的A孔, 各150μL洗涤液1加入B孔和C孔, 各150μL洗涤液2加入D孔和E孔, 50μL洗脱液加入F孔, 安装磁头套, 置8联管板于可移动托板的相应位置、推回原位, 运行AM1836程序, 20 min后回收F孔液体, -20℃保存备用。

1.7 PCR反应

目的片段1 154 bp。PCR反应体系:反应缓冲液16μL, Taq酶2μL, DNA模板2μL。PCR扩增条件:94℃3 min, 94℃30 s, 62℃45 s, 72℃45 s, 35个循环, 72℃10 min。结果判定:取5μL PCR反应产物, 用2%琼脂糖凝胶 (100 V) 电泳30 min, 置凝胶成像仪下观察, 出现目的条带的样本为阳性, 未出现的样本为阴性。

1.8 荧光PCR反应

反应缓冲液23μL, Taq酶0.25μL, DNA模板2μL。荧光PCR扩增条件:94℃3 min, 94℃5 s, 60℃30 s, 收集荧光40循环。结果判定:Ct值为none的样本为阴性;Ct值小于等于35.0的样本为阳性;Ct值大于35.0的样本可疑, 重做结果Ct值none者为阴性, 否则为阳性。

1.9 统计方法

用X2检验分析结果差异性。

2 结果

2.1 敏感性试验结果

分别用酚氯仿抽提和磁珠吸附两种提取法对10-1~10-8稀释度的阳性对照进行核酸提取, 提取到的核酸进行PCR扩增和电泳, 检测结果见表1, 检出梯度均为10-5。取上述试验检出临界值, 即10-5和10-6两个稀释度分别平行做3次核酸提取与PCR扩增, 检测结果一致。

2.2 临床样品的检测结果

采用酚氯仿抽提核酸、普通PCR法检测, 未检出阳性样品;酚氯仿抽提核酸、荧光PCR法检测, 检出阳性样品21份;磁珠吸附法提取核酸、普通PCR法检测, 检出阳性样品10份;磁珠吸附法提取核酸、荧光PCR法检测, 检出阳性样品21份。两种提取方法在普通PCR检测中差异显著 (X2=10.029, P<0.01) , 磁珠吸附法阳性检出率明显高于酚氯仿抽提法;在荧光PCR检测中两种提取方法阳性检出率相同。普通PCR法和荧光PCR法对传统酚氯仿法提取的核酸检测, 结果差异显著 (X2=31.951, P<0.01) , 荧光PCR法阳性检出率明显高于普通PCR法;对磁珠吸附法提取的核酸检测, 两种检测方法结果差异显著 (X2=7.988, P<0.01) , 荧光PCR法阳性检出率明显高于普通PCR法。

3 讨论

1) PCR法检测中, 两种提取法对稀释的阳性对照检出梯度一致, 但对临床组织样本的检测差异显著。原因是组织样品中含有大量的酶、蛋白等有机物质, 会影响PCR反应体系、降低Taq酶的活性。所以, 在组织样品的PCR检测中, 核酸抽提能否有效去除杂质是关键。磁珠吸附法原理是DNA特异性地吸附在磁珠粒子表面, 磁珠粒子被磁性材料捕获后, 通过洗涤过程将非特异结合物除去, 结合在磁珠上的DNA被洗脱液洗脱, DNA得以纯化。通过磁珠与特异性核酸结合和洗脱, 可最大限度去除组织中的酶和其他有机成分, 所以阳性检出率明显高于酚氯仿抽提法。

2) 不同提取方法处理的临床样品, 在荧光PCR检测中结果一致, 且阳性检出率均明显高于普通PCR检测, 说明荧光定量PCR方法受细胞中有机物成分影响小, 检测结果稳定性和敏感性优于普通PCR检测。

3) 传统的酚氯仿核酸抽提法和普通PCR法检测成本相对较低, 但对检测人员操作技术要求高, 步骤较繁琐, 耗时长, 使用较多的有机试剂具有污染和毒性作用;磁珠吸附法能够高效、专一吸附DNA, 去除杂质蛋白及细胞中其他影响基因扩增的有机物, 提取到高质量的DNA, 减少人工操作可能带来的污染和失误;荧光PCR检测特异性强、敏感性高, 可以进行定量试验, 且不需要凝胶电泳。笔者认为用磁珠吸附法结合荧光PCR方法, 试验结果相对准确、客观, 且检测时间大大缩短, 尤其在大批量样品的病原检测及流行病学调查中优势明显。

摘要：采用传统酚氯仿、磁珠吸附两种核酸提取法和普通PCR、荧光PCR两种检测方法, 对26份临床样品进行猪圆环病毒2型 (PCV2) 检测。结果比较发现两种提取方法在普通PCR检测中差异显著 (X2=10.029, P<0.01) , 磁珠吸附法的阳性检出率明显高于传统酚氯仿抽提法;荧光PCR检测结果一致。普通PCR和荧光PCR两种检测方法对传统酚氯仿法提取的核酸进行检测, 结果差异显著 (X2=31.951, P<0.01) , 荧光PCR法阳性检出率高;对磁珠吸附法提取的核酸检测, 结果差异显著 (X2=7.988, P<0.01) , 荧光PCR法阳性检出率高。结果表明, 用磁珠吸附法结合荧光PCR法进行检测, 其敏感性和稳定性优于传统方法。

关键词：酚氯仿抽提,磁珠吸附,PCR,荧光PCR

参考文献

[1]李纪春.2型猪圆环病毒病研究进展[J].中国动物保健, 2009 (2) :58-61.

[2]金爱华, 卫秀余, 沈强.近两年我国猪圆环病毒Ⅱ型流行病学调查[J].今日养猪业, 2010 (3) :17-18.

[3]陈发扬.RT-PCR法对福州周边猪PCV2流行情况调查[J].福建畜牧兽医, 2010, 32 (5) :6-8.