南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结

南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结（通用2篇）

篇1：南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结

一.细胞培养技术的概念,简史

在体外对细胞培养并进行研究的技术, 也叫细胞克隆技术.细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。

细胞培养技术主要包括二大方面内容: 1.微生物细胞培养技术

2.动, 植物细胞培养技术 ：1)器官培养技术 2)组织培养技术 3)细胞培养技术 二.细胞培养的优点

1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动 2.可控制：（1）可控制-选择对象：类型： 上皮？间质？性质：正常？肿瘤？（2）可控制-调节条件：各种因素:物理、化学、生物等因素（3）可控制-利用方法。采用各种研究技术、记录方法：

研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记--记录：摄影照片、缩时电影、电视--3.应用广（1）学科多：（2）对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类；一种动物：不同年龄；不同组织: 正常或异常（肿瘤）

4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象 5.不易污染环境

三、细胞培养的缺点

1.现人工无法完全模拟体内环境：

a.失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响

2.细胞趋向单一化

3.失去原有组织结构和细胞形态

4.分化减弱或不显：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。5.某些类型细胞还很难培养 6.大规模培养难度大

四.体外细胞培养的方式

1.粘附型培养: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。

粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式

2.悬浮型培养: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团

优点 : 生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态.缺点:观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)五.体外培养细胞的生长形态分类 根据形态大致的不同，主要2类：

1.上皮样：来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状

2.成纤维细胞样：培养中形态与成纤维细胞类似。来源：中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮

形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。3.其它，不定型 六.常用术语

1.细胞系（cell line）：原代培养物首次传代后，就可以称细胞系。不能或有限传代下去称有限细胞系。能连续传代的称连续细胞系。

2.细胞株：某类细胞经传代克隆并保持了该类细胞理化特征的细胞群体。3.原代培养：直接取自生物体的组织细胞并进行培养

4.传代培养：将细胞从一个培养物内分散到另一个培养物的过程。5.转染（transfection）：将某个基因转移到培养细胞核内。

6.lipofection：常用细胞转染剂（脂质体），它搭载基因（DNA）后形成复合物可转染到动物细胞。

第二章 细胞培养的条件及设备

一、细胞培养室

二、常用设备 1.超净工作台； 2.纯水装置； 3.抽气泵； 4.消毒装置； 5.干燥装置；

6.CO2培养箱(孵箱)； 7.液氮生物容器； 8.冰箱； 9.离心机 10.天平

11.显微镜 12.过滤装置 13.空调 14.酸度计 15.干燥器

三、常用消耗器材

1.培养瓶及各种相关玻璃用品、塑料用品和棉制品 2.手术器材

四、培养用液

1.天然培养基（液）：血清、鸡胚浸出液、鼠尾胶

2.人工合成培养液：合成培养基、平衡盐溶液、缓冲液、蒸馏水、消化液和抗菌素等

五、消耗性器皿的清洗、包装及消毒

第三章 细胞培养基本技术

一、原代培养基本技术：取材→漂洗→剪切→消化→计数→接种

二、传代培养技术：去旧换新液→消化→分装

三、细胞冻存及复苏技术

培养液高度：2.5~3.0mm 第四章 每代细胞基本的生长过程

一.游离期：细胞接种后最初一段时间, 细胞在培养基中呈悬浮状, 胞体圆形 二.贴壁期：细胞附着于支持物上 三.潜伏期： 四.指数增长期

影响因素

1.细胞种类

(附着最强)巨噬细胞(30’)一成纤维

细胞——上皮细胞——血细胞(最弱)2.生物因素

血清、培养液中的促附着因子 3.机械，物理等

离心：促进附着

流动：培养液流动可阻止细胞附着

低温：可抑制附着 增加细胞粘附的措施（因素）1.增加支持物粘附性

a.赖氨酸类 b.血清

c.某些生物活性物质,纤维性物质 d.减少接种时细胞悬液的量

待细胞粘附和贴壁之后，再补充足够的培养液 e.减少培养液中血清的含量

使培养液黏度降低

f.培养液中离子成分及其浓度

如，培养液中的Ca含量过低时不利于

细胞的粘附、贴壁和铺展 g.培养液的温度

低温会减低细胞的活动，妨碍黏附和贴壁 伸展过程

细胞悬浮在培养液中时，近似球体形状

当接触坚硬平面

即铺展于底物上，扁平状

与底物形成很多接触点

伸展分几个阶段

(1)开始阶段

开始附着铺开

细胞附着于底物

球形的细胞，下方表面与底物接触成扁

但尚未形成新的伪足(2)放射状铺展阶段

在球形细胞体的周围形成很多伪足隆起 伪足形状

主要 柱形丝状: 直径0.2-0.5um 长10-20 扁平片状: 厚0.1-0.5 宽2-5 尚有: 小泡状叶状: 直径1-2 开始时: 絲状多

以后 片状增加

许多伪足

形成薄的胞质小片牢固贴于底物

胞体中央部分 扁

整亇细胞扁平(3)极化阶段

细胞最后伸展附着的情况

实验：用多种细胞，以显微操作及缩时电影

定位细胞附着于玻璃和聚苯乙烯情况

检测--显微针头— 结果：附着规律 附着点： 附着规律

几乎未见于细胞的中央区

(如不在核之下)总在边缘，边缘”摆动”活动的部位

凸的边缘

在薄的边缘

附着区：

约为细胞下面表面的15-35％ 附着、伸展的条件

底物

细胞能在很多固体表面附着

最终铺展的程度，取决于底物的性质

影响因素：

活性物质(贴附、伸展因子):血清、培养液中，或细胞分泌的生物活性物质被底物吸附后可利于细胞的铺展

细胞借助这些分子,可附着于各种”非特异性”的底物上

如Fn，胶原，聚赖氨酸

机械，物理因素 三.潜伏期 细胞活着但无分裂.细胞株6—24h 原代24—96h  四.指数(对数)增长期

 细胞增殖旺盛, 数量成倍增多, 最适合实验研究.3—5d以后来到. 判断方法:  a.细胞群体倍增时间  B.细胞分裂指数

 五.停止期(衰退期)

 细胞长满瓶壁, 有活力, 不增殖, 能存活一段时间.如传代进入下一循环.传代培养到一定的代数时，细胞的生命活动明显减弱。即使及时传代也无效 表明培养物已经进入衰退期，再向前发展，只有退化、死亡

接触抑制和

密度依赖性生长仰制 增殖的密度抑制 实验

方法：3T3细胞，接种105于6cm培养皿，5d细胞计数

于加入10％、20％、30％牛血清的培养液中，结果：

篇2：南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结

1、什么是管型、管型的形成条件

2、什么是核左移、核右移，有什么临床意义

3、渗出液、漏出液

4、肿瘤标志物有哪些

5、正常骨髓结构特点

6、骨髓细胞发育的特点

7、尿糖、尿蛋白什么情况下出现？选择性蛋白尿、非选择性蛋白尿

8、肾小球肾炎尿液的特点，观察到那些管型

第一章

1、分析影响前的因素

2、诊断灵敏度，特异性（联合检测意义）第二章

1、几个参考值的范围（血常规的基本参考范围如红白细胞，血小板，血红蛋白等；血钾，血钠，GFR,血糖），以及临床意义

2、血沉加快和减慢影响因素

3、异常的红细胞形态有哪些

4、白细胞（考的多），各种情况下，粒细胞和淋巴细胞的增加和减少，贫血，辐射电离，伤寒副伤寒何种细胞增加或减少

5、网织红细胞的定义，增多减少；红细胞沉降速率实验，6、溶血性贫血几个实验的意义，渗透脆性不需要记住参考值，高铁血红蛋白症（G6PD,蚕豆病），血红蛋白电泳临床意义，combs实验用途，7、骨髓检查的步骤，内容，方法以及正常骨髓象的形态特点。

8、粒红比值

9、POX染色临床意义，SB染色临床意义，NAP染色临床意义，类白血病的概念，ACP.AS-D NCE,α-NAE,PAS,染色的临床意义

10、最易发生DIC——M3型

11、交叉配血试验的主侧，次侧

12、溶血贫的特点1,2（尿胆原增加）

13、白血病的各个特点/几种类型/什么样的医学方法

14、MDS熟悉

第三章 血栓和止血检测

1、临床上的四项检测指标

2、内源性：APTT，延长S异常

3、外源性：PT，延长S异常

4、单纯血友病哪一项指标异常

5、凝血试验一定要做对照

6、假如APTT、PT都延长说明什么

7、凝血酶时间

8、血小板活化会伸出伪足

9、原发性纤溶、继发性纤溶区分标志，异二聚体、3P实验

10、阳性排除、阴性排除

11、肌红蛋白：心梗

第四章 排泄物、分泌物及体液检测

1、怎样收集尿液，应注意什么

2、病理性尿液外观；如何区别血尿、血红蛋白尿

3、管型的定义，管型包括那些，透明管型在什么条件下出现

4、正常尿液中可以见到什么？

5、蜡样管型——慢性肾炎

6、最常见的寄生虫，如黏液遍：菌痢

7、潜血、隐血

8、三管 化学检查

9、渗出液与漏出液

10、脑脊液蛋白升高最明显的是什么病理状况，糖保持正常是什么病理情况？

11、脑脊液中可见的蛋白质

12、脑脊液中乳酸脱氢酶变化表明什么

13、白带外观改变；鉴别加德纳阴道炎：结核杆菌、新生隐球菌

14、精液减少、无精症

15、前列腺最常见，，，，（没听到）

16、慢性前列腺炎

第五章 肾功能检测（从这章考试老师急着走，讲得不详细）

1、肾小球滤过率（菊粉）、反应肾小球血流量的检测方法是：对氨基XXX

2、肾前性、肾实质性少尿的鉴别

3、β微球蛋白什么时候增高

4、浓缩稀释功能：远端肾小管

第六章 肝功能

1、脂类代谢

2、胆红素代谢

3、ALT、AST临床意义

4、单胺氧化酶

5、谷酰胺羟化酶：胶原纤维的关键酶

6、急性肝损、慢性肝损

第七章 临床生化检测

1、OGTT诊断糖尿病

2、血钾高容易酸中毒

3、血钙、血鳞，无机磷重要存在于

4、心肌酶包括哪些指标；心肌钙蛋白；肌红蛋白：阴性排除心梗

第八章 免疫学检测

1、T细胞、B细胞、花阶形成实验，T细胞形成实验，T细胞缺陷，HIV

2、甲胎蛋白、肿瘤标志物选择：灵敏性、特异性

3、系统性红斑狼疮，抗体

4、梅毒、血红蛋白

5、C反应蛋白、IgE检测

第九章 病原体检测

1、学习微生物检测的临床意义

2、伤寒病人第一周血培养结果最明显

3、米泔样便：霍乱

4、耐药性：β内酰胺酶，ESBL

5、衣原体有细胞壁、支原体没有

6、甲肝、乙肝、丙肝标志物

7、巧克力培养基：脑膜炎奈瑟菌

8、HIV、淋病。梅毒

第十章 其他检测

1、基因诊断包括那些技术

2、southern、northern各检测什么

3、流式细胞术的应用

4、基因诊断的应用 老师讲过的题目

1、血脂检测前应该做如何准备。

2、尿的采集——中段尿

3、总胆固醇可不空腹检查。

4.、红细胞内有染色质小体（howell-jolly body）和卡-波环（cabort ring，纺锤体）

5、急性大出血（尤其是内出血）白细胞和中性粒细胞明显增加。（1-2h内，RBC可正常。）

6、接触电离辐射，淋巴细胞明显减少。7.、核左移明显，表示感染严重，机体反应好。

8、棒状小体（一出现就可以诊断为急性白血病——急粒和急单，急淋无此小体）

9、缺铁性贫血时，红细胞中心淡染，（小细胞低色素贫血）

10、网织红细胞增多表示铁剂治疗有效。

11、铁幼粒细胞贫血——颗粒要大于6个。

12、红细胞渗透脆性增高，见于遗传性球形（或椭圆形）红细胞增多症。

13、含铁血黄素尿实验(Rouse实验)——普鲁士蓝反应阳性：慢性血管内溶血，常见于阵发 性睡眠性血红蛋白尿，初期可为阴性。

14、血红蛋白电泳——HbA2增高是诊断β—轻型地贫的重要依据。

15、抗人球蛋白试验（combs实验）——用于检测自身免疫性溶血性贫血(AIHA)

16、阵发性睡眠型蛋白尿(PNH)的筛选实验是蔗糖溶血实验，确诊试验是酸化溶血实验。

17、慢性中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)激增到200以上，说明化脓性感染。

18、氯化醋酸AS—D萘酚醋酶染色（AS-D NCE），又叫特异性酯酶（SE）强阳性表示急粒。

19、α-醋酸酚酯酶染色（α-NAE），又叫非特异性酯酶（NSE），强阳性表示急单（白血病）。20、含粗大深染的铁粒10个以上，细胞周边出现2/3个（6个）以上者，称为环状铁粒幼 细胞

21、急性淋巴细胞白血病B细胞系列的主要蛋白标记——CD19+

22、肠蠕动加快，粪便检查粪胆素（粪胆原）强阳性。

23、粪胆素下降为阻塞性黄疸。

24、溶血性贫血时和缺铁性贫血时，间接胆红素增加，尿胆原增加，粪胆原增加。

25、单纯血友病，APTT延长，PT不变。

26、活化的部分凝血活酶时间（APTT）——内源性——与对照组相比延长10s为异常。

27、血浆凝血酶原时间（PT）-外源性-与对照组相比，超过正常3s正常。

28、肌红蛋白阴性排出——急性心肌梗死

29、D-二聚体阴性是排除深静脉血栓（DVT）和肺血栓（PE）的重要试验。

30、血浆硫酸鱼精蛋白副凝试验（3P）实验是鉴别原发性纤溶症和继发性纤溶症的实验

31、鉴别血尿和血红蛋白尿——镜检。尿检以晨尿最好

32、肾病综合征会出现——脂肪管型，腊样管型——慢性肾衰。

33、肠道最常见的寄生虫为蛔虫。

34、粘液便——细菌性痢疾。

35、脑脊液收集3管——第一管做细菌学检查，第二管做生化免疫学检查，第三管做细胞计 数和分类

36、脑脊液葡萄糖正常见于病毒性疾病。

37、诊断阴道加德纳细菌性阴道炎——寻找线索细胞

38、前列腺液非染色标本——卵磷脂最多。前列腺液中白细胞增多可诊断为慢性前列腺炎。

39、血清肌酐测定可用于鉴别肾前性和肾实质性少尿。40、菊粉能完全反应肾小球滤过率(GFR)

41、测定肾血流量常用对氨基马尿酸

42、昼夜尿比密实验（莫氏实验），用于诊断各种疾病对远端肾小管稀释-浓缩功能的影响。

43、脯氨酰羟化酶（PH）是胶原纤维合成酶，是关键酶

44、诊断糖尿病：OGTT血糖峰值>11.1mmol/l, OGTT2hPG>11.1mmol/L，45、无机磷大多储存于骨骼。

46、C反应蛋白（CRP）-急性时相反应蛋白。

47、伤寒第一周——血培养

48、系统性红斑狼疮(SLE)检测dsDNA，和抗sm抗体

49、米甘样水便——霍乱

50、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)可以水解第一、二代头孢菌素，还可水解第三代头孢菌素（如 头孢噻亏，头孢他啶，头孢曲松等）以及氨曲南。

51、衣原体有完整细胞壁

52、脑膜炎奈瑟菌——巧克力培养基

53、southern印迹——DNA印迹，northern印迹——RNA印迹

54、流式细胞术分选含有单个细胞的液滴

55、t细胞亚群检测——t细胞花结形成实验，t细胞转化实验。

56、心肌酶谱：肌酸激酶，肌酸肌酶同工酶，肌酸肌酶异性，LDH，LDH同工酶，心肌肌钙蛋白T,心肌肌钙蛋白I,肌红蛋白，脂肪酸结合蛋白。

1、核左移： 周围血中出现不分叶核粒细胞（包括早幼粒、中幼粒、晚幼粒、杆状粒细胞）增高超过5%，常见于急性化脓性感染、急性中毒、急性溶血反应或出血、也可见于白血病、类白血病等。

2、类白血病：机体对某些刺激因素产生的类似白血病表现的血象，周围血中白细胞大多明显增高，并有数目不等的幼稚细胞出现，病因去除后类白血病放映也逐渐消失。感染、恶性肿瘤最常见，其次见于急性中毒、急性溶血反应或出血、外伤、休克、大面积烧伤等。

3、网织红细胞：晚幼红细胞到成熟红细胞之间的未完全成熟的红细胞，细胞质内还残存着核糖体等嗜碱性物质，煌焦油蓝染后呈现浅蓝或深蓝色的网织状细胞而得名。

4、血管性血友病：由于构成F VIII复合物中的vWF基因的合成与表达缺陷，导致vWF的质或量的异常而引发的一种出血性疾病。

5、管型：是蛋白质、细胞或碎片在肾小管、集合管中凝固而成的圆柱形蛋白质聚体。包括透明管型、细胞管型、颗粒管型、脂肪管型、宽幅管型、蜡样管型等。

6、选择性蛋白尿：尿蛋白以清蛋白为主，并有少量小分子蛋白，无大分子量蛋白，半定量多在+++~++++，典型病种是肾病综合征。

7、肉眼血尿：尿液内含有一定量的红细胞，一般每升尿液中血液＞1ml，肉眼观呈淡红色云雾状、洗肉水样或混有血凝块。

8、镜下血尿：肉眼看尿液外观变化不大，离心后尿沉渣镜检，红细胞＞3个/HP。

9、无精子症：精液离心后沉淀物涂片，显微镜下观察无精子，连续检查3次都无精子，则可确诊为无精子症。