与异性过于亲密检讨书

与异性过于亲密检讨书（精选8篇）

篇1：与异性过于亲密检讨书

70%人有婚外亲密异性朋友 亚偷情成婚姻调节剂 2011年10月26日 10:17 来源：广州日报 作者：苏芩

导语：快速发展的社会中永远不缺乏新名词，继“亚熟男”、“妈宝男”、“礼貌性上床”之后，又出现了“亚情人”，俗称“小五”。有人说，这是都市暧昧文化的体现，在高压、寂寞、紧张的情感生活中，“亚情人”像一道清新的调节剂，为原本即将枯萎的婚姻生活带来激情；也有人说，“亚情人”就是披着遮羞布的偷情者，最终还是会成为婚姻生活的杀手？孰是孰非？到底该如何把握？

何为“亚情人”？有人归纳为“发乎情，止乎性”，就是比朋友多一些，比情人少一点的两性关系，但也要比我们过去所说的“精神外遇”要前进一步，“亚情人”之间可以讲私密话，甚至拥抱、接吻，但不突破最后一层底线。

亚偷情成婚姻调节剂70%有婚外亲密异性朋友 调查：七成已婚人士有过婚外亲密异性朋友

有“亚情人”必然会有“亚偷情”，某社区曾针对“亚偷情”做过一项调查，结果显示：74%的已婚人士有过婚姻之外的亲密异性朋友。“如果有，目前的状态是什么？”65%的表示，他们无话不谈，包括隐私，没有发生性关系，但也有35%的人把持不住，最终发展成真正的情人关系。虽然有这种关系存在，但大多数人表示，他们永远不会让家庭中的另一方知道这样的事存在，他们只是为了寻找更丰富的情感生活，以弥补现有婚姻的不足。当然，也有四成人表示会有道德上 的焦虑感。“亚情人”是贪婪，也是自保

现在都市流行的“暧昧文化”执行者“亚情人”有愈来愈多的趋势，针对此现象，记者采访了著名情感作家苏芩。亚偷情成婚姻调节剂70%有婚外亲密异性朋友 究竟是什么造成了这种复杂感情？

苏芩：物质生活的极大丰富让大家对生活越来越缺乏期待感。每个人从内心来讲，都渴望生活中能够不断有“刺激点”出现，这种刺激点只是一种感情调节，是一种心理满足。应该说，喜新厌旧是人之本性，尤其感情上。但是，很多现代人又不愿意承担“出轨”给婚姻带来的高额成本，所以“亚情人”是现代人两相权衡的一种结果。是一种贪婪，但也是一种自保。亚情人对婚姻有什么影响？

苏芩：这要看其中的度怎么把握。其实，婚外的感情，在一定程度上，对婚姻会有助益性，因为他找到了一个感情的宣泄口，能够缓解感情上的所有压力，令心情变好。如果一个人能够通过婚外激情来调节自己的心情状态，那他对于婚姻生活、对于伴侣的态度能够变得更好，但相信每个人对“亚情人”的状态都很难把握得这样理性。如果一对男女，在感情乃至身体的方方面面都彼此融汇和拥有的话，一般来说，就很难做到好说好散。

亚偷情成婚姻调节剂70%有婚外亲密异性朋友

男女对“亚情人”的态度有何不同？又该如何正确对待？

苏芩：对于任何一种婚外的感情，不论是“亚情人”还是“情人”，女人都会比男人更有依赖性。男人拥有过后可能会放手，但女人拥有 过后只会希望能更长时间的拥有。作为太太，如果丈夫有了“亚情人”迹象，她首先要做到保持冷静，不要吵嚷，要平心静气想想他的心理需求。其实，男人往往比女人更注重情感上的理解，所以太太要学会做丈夫的“话友”，多聊聊他的内心，那女人就会越来越走近他的心。作为丈夫，如果太太有了“亚情人”，他要克服自己内心的“大男子感”，不要觉得自尊心受辱，不要暴跳如雷。挽回女人心的办法永远只有一条：对她好。一个男人对她付出了爱，总会赢得她更多的爱。最近一项新的调查结果显示，在你我周围，有83.19%的女性和84.44%的男性承认自己在婚姻之外有关系亲密的异性朋友，有64.42%的女性和74.67%的男性承认，在周围朋友、同事的身上看到过亚偷情的婚外密友，而68.83%的女性和60.44%的男性表示，自己与婚外密友无话不谈，但没有发生过性关系。暧昧也要适可而止小心“亚偷情”变真出轨。

1.现实婚姻，欲求不满

此类亚偷情者的婚姻没有婚前感情基础，婚后也没有培育出感情基础，他们要么通过相亲认识，要么网络闪婚，要么一起玩出来的(如驴友)，以80后婚姻最为突出。他们亚偷情纯属是想找一份婚外的感情来弥补婚内的无感情。2.事业平淡，混中生情

很多白领或基层公务员，他们感到自己工作中升迁无望时，就会在上班时候放松自己，想着得过且过，也就为他们与异性接触提供更多的便利，日久生情，自然就会有一个臭味相投的异性密友来打发无聊时 光。

3.你敢点灯，我就放火

不少妻子在老公出轨背叛自己后，都会找人倾诉，除了闺蜜，她们还会把自己心里的苦闷说给异性同事，或在网上发泄，或干脆就想故意制造这种所谓的“绯闻”来求得老公的注意，以判断老公是不是真的爱自己；

当然她们也想出轨来报复老公，但由出于一些传统道德及婚姻的约束，而不敢与异性密友真正出轨，亚偷情就满足了她们心理上的需求。4.纯属好玩，乐交密友

这种亚偷情者更多是性格上所致使，本意其实毫无偷情的概念，只是局限于自己结婚后的日子日趋贫乏，自己配偶不懂风情，促使他们无法抑制住本性和欲望的本能，而渴望寻求一个异性密友的关爱。5.旧爱难忘，情不自禁

多发老同学、老同事、老相识之间，他们之间的感情历来就有，只不过在他们各自有了家庭后，婚姻的平淡让他们有着共同的话题而谈得来，时间长了，彼此的感情也就会由友情升华到“爱情”，或介于友情与爱情之间，他们觉得这是顺其自认、情不自禁。这种亚偷情也是隐蔽在友情之下，很难被配偶发现，这也让他们会越偷越上隐，也会让他们心安理得。亚偷情现象远不是那些亚偷情者说的那么轻描淡写，那么无足轻重。只是亚偷情者不敢正视自己的良知，不敢面对自己的出轨。于是，性就成了很好的挡箭牌了，成了她们没有背叛的借口了。这里，我还要给“亚偷情”给下列这些处方： 1.如果你的TA亚偷情

冷静。切忌动不动就大吵大闹，借题发挥，不妨先冷静下来从TA的日常生活细节中多观察，看清楚他们是不是真的出轨。

反思。只有反思在婚姻中的不足，你才会知道他的动机。一旦你知道TA的那个密友真的存在时，要想尽办法引导TA说出，默认甚至鼓励TA继续和密友保持联系。要知道，你的大度也会令TA有所顾及和收敛。

千万不要视TA的密友为敌人，相反，你还得谢谢TA给了你配偶精神食粮。主动和他的密友交朋友，让你们三人都成密友。把你和配偶濒临死亡的婚姻予以激活。2.如果你陷入亚偷情

虽然你的这种行为不是真正意义上的出轨，但你要知道它的严重后果，坚守道德底线是你玩这个游戏的基本规则，千万别当真，别一发不可收拾。

真心游戏，遵守规则。亚偷情在一定程度上也弥补了婚姻中的不足，但是它毕竟是婚姻之外的交往，可以适可而止地玩玩，不可当真。我建议那些亚偷情者在“亚”之前，就要有一定的心理准备和承受能力，不妨彼此双方约法三章，来保护双方的婚姻。

保护隐私，小心泄密。亚偷情还是一种心理上的轻度变态。当出于好奇或寻找刺激的心态在网络上以及与陌生人玩亚偷情时，无论偷得多真、爱得多深，也不要向对方泄露自己的隐私，以防有小人以你的秘密要挟、控制你的精神和肉体。一有危险，立即脱身。亚偷情者在精神上都会有征服欲、控制欲，双方也希望能成为Soul Mate(灵魂伴侣)，偷心总会有危险时，因此，只要你意识到危险，或是你感觉自己已经深深陷进去时，足以影响到你的人身安全和婚姻家庭时，一定要及时抽身，切莫过于贪念、贪婪。与偷情、出轨不同的是，亚偷情正是区别于“亚” 字，即发生了情，却没有性，他们有“色心没色胆”，偷的仅仅是情，而时刻克制着性，也恐惧着肉体的出轨会伤害到双方的婚姻。

也正是没有性的出轨，他们觉得理性所在，自认为责任心所在，也让他们感到痛苦与困惑。他们为何执着于“亚偷”呢？这是一种本能的需求，它发乎于内心，力量单纯而有力，“亚偷”带给他们的满足是难以割舍的。他们还会觉得自己真正的心理困惑是：进退不得，其实不是真的进退不得，而是对于贪婪和恐惧的双向挣扎。

“亚偷情”并不比“偷情”逊色，甚而更为严重。偷情即是偷人，更多的是注重性的享受，感情的投入却有待考证。亚偷情则纯粹是偷心了，不掺杂性的成分。偷人者往往是过了今夜就完事了，就烟消云散了。而偷心者却是永无宁日，不知何时才是尽头。一颗真情的心，却是多少钱也买不到的。

篇2：与异性过于亲密检讨书

尊敬的公司领导：

您好!首先请接受我最真挚的问候!尊敬的老板，自 此致 敬礼

申请人：辞职报告 面对(本站向您推荐：..)的问题越来越多，此刻，我是如此深刻地发现自己的能力不足，如果由于自身能力不足而拖延公司发展，我将无法原谅自己，同时也无法面对您，我辞职，能让更适合的人员接手工作，这样对于公司的发展将是最好的处理方法，同样我也相信您将会同样以宽广的胸怀来面对新的人员，希望在您的带领下，公司的发展能越来越好！我衷心地祝福公司，也祝福您！

此致！

于对这份感情的结束，请相信我是如此的不舍以及无奈，从懵懂不知的小职员到肩负公司管理的管理层，中间是如此的战战兢兢，感谢您无数次的宽容及忍耐，让我一步一步成长。随着公司发展壮大，需要面对的问题越来越多，此刻，我是如此深刻地发现自己的能力不足，如果由于自身能力不足而拖延公司发展，我将无法原谅自己，同时也无法面对您，我辞职，能让更适合的人员接手工作，这样对于公司的发展将是最好的处理方法，同样我也相信您将会同样以宽广的胸怀来面对新的人员，希望在您的带领下，公司的发展能越来越好！我衷心地祝福公司，也祝福您！

此致！

靠的感觉，在这里我能开心的工作，开心的学习，也能发挥我微薄的光和热。想到要离开这个公司，离开这些曾经同甘共苦的同事，很舍不得，舍不得领导们的教诲，舍不得同事之间的那片真诚和友善，只是考虑到年迈的双亲和自己以后的生活，经过家人的劝导和我慎重的考虑，最终我选择了回家乡发展。故特提出辞职的申请，请领导恩准。

这次回来主要是做好手头的交接工作，做到做事有始有终！能为公司效力的日子不多了，我一定会把好自己最后一班岗，做好属于自己的所有工作，期望领导尽快落实，能在这一周内做好顺利交接的工作，为谢！

在我的新婚大日子里，不能够请领导和同事出席我的婚礼，这是令我倍加遗憾的事情，没办法，我的家乡离这里跨越几个省份，只能够在遗憾中度过了。

我希望我的离去不能够给公司给公司带来任何的损失，也没有带来任何遗憾，我希望公司能够尽快找到合适的人员来弥补我走后的空缺。现在人才很多，凭借公司的实力，找到一个好员工很简单。

同时，衷心的祝愿公司在今后的工作中发挥优势，扬长避短，再上一个台阶，祝愿公司兴旺发达！

此致 敬礼！

技能严重不足，但却始终缺乏努力，付出不了实际行动。这样的我，倘若继续留在公司，对公司、对自己都不利。所以我选择辞职，于公司可以换一个更好的员工，提高办事效率;对自己能够改变一个不同的环境，试图扭转命运。

其实，我不想走，这里留下了我过多的回忆。初入社会的一年半，我没有失落，因为公司始终对我不离不弃。从刚开始一无所知到现在技能依旧粗糙，从tony到bruce，从bob“要吃早饭”这句让我头大的嘱托，到bruce“骑车慢点”这句使人会心一笑的关怀，一切的一切让我像身处一个大家庭一样被照顾着，我无不感到一股温暖。感谢公司!踏入社会的一年半，我没有遗憾，因为我也见过世面。从intel国际会议中心技术峰会到ibmdb2大型技术交流会，从上海到无锡，从新锦江大酒店旋转餐厅到裕景大酒店的豪华自助餐，从桑拿到斯诺克，从鼋头渚到模拟泰晤士镇，所有的所有使我像一个上流社会人物一样被宠爱着，我时刻感受到一种自豪。感谢公司!但，我却不得不离开，安逸磨灭了我太多的忧虑。公司需要能做事的员工，我需要能逼迫自己进步的环境。也许bob最了解我，也许我都不了解我自己，但事实就是很奇怪很矛盾。也许，只是也许吧，我这种人只有在逆境中才能进取，才能生存。

其次，给大家道歉。歉意在于最近的我心情比较复杂情绪有些起伏，故时现急躁不耐烦，倘若有触犯之处，尚请谅解;歉意在于一路跟随大家走来，有痛苦但更多的是快乐，以后却同事不再，不能再为大家贡献绵薄之力，实之愧疚，特别是bruce，一定要注意身体!最后，好好感谢bob。在公司和bob待的时间最长，那些转眼间

就变成记忆的经历还滚烫的回荡在脑海中，历历在目。bob批我最多的一句“做事动动脑子”，我想我会终生受用，以后做事之前我也都会想到这句话。bob说我最多的总是那些像故事一样长的大道理，然而，或许他也一直都没搞清楚坐在他旁边总是看着车外的这个家伙心里到底在想什么，或者到底有没有注意听他那有些低沉略带笑意用心良苦的声音。

bob带过为数不多的人去模拟泰晤士镇，而我就是其中一个。无锡的那件麻烦事，也是我荣幸的跟在身边。而现在，bob又在房租上给我们帮助，更甚者还愿意帮我出83.33%的房租让我续租现在的房子。bob对我尤如此，相信待大家亦相然，所以希望大家懂bob，然后提高自己的技能给公司更多的帮助!俗话说：人之将死，其言也善。所以人之将走，其言也忠，希望大家明白。

说到这，感觉很内疚，也许是公司对我太好了吧，所以我在安逸中死去了，所我要去寻找我那所谓的逆境。希望大家不要在安逸中死去，要懂得知恩图报，努力进取，继续为公司作出自己的贡献，谢谢!辞职人：

情绪化过于激动的辞职报告

尊敬的公司领导：

我在公司工作的时间里，深切的体会到了公司人性化管理，还让我们体会到公司领导对我们的无比关心，公司的定职定量让我们的能力起到了很大的提升，让我们知道我们的能力就像海绵里的水一样可以使劲挤出来的，公司在我们工作中出错扣钱时，让我们在以后的工作中更加细心，对我们今后起到了重要的影响，在此向领导表示我深深的敬意，在公司工作时电脑方面的使用中让我们学习到了硬件的知识和电脑修理，公司发工资问题上，我们懂得了社会的艰难困苦，我们很大的增长了社会经验，知道条件再艰难、困苦，我们也能活下去，但是因为我身体这些原因：头痛颈椎性神经痛 肩周炎 腰肌劳损 轻微腰间盘突出 痔疮(久坐)静脉曲张(久站)关节疼痛 眼睛酸胀痛(久盯屏幕)皮肤发黄 上火口腔溃疡 胃溃疡(不发工资 拖欠工资引起吃饭难导致)轻微脱发 神经性衰弱(压力大睡觉不好)等…

这些病因导致我无法继续在公司工作，不能继续让自己的能力得到提升，不能再锻炼我吃苦耐劳的优良品德，在我治好病之后，若还能继续工作的前提下我会优先考虑贵公司，让我能继续锻炼自己提升自己。

在此祝愿公司能够继续为社会培养吃苦耐劳的社会人才，为社会做出巨大的贡献!此致 敬礼!辞职人：

话，运用萨提亚冰山工具进行情绪自察。

萨提亚的冰山实际上是一个隐喻，它指一个人的“自我”就像一座冰山一样，我们能看到的只是表面很少的一部分——行为，而更大一部分的内在世界却藏在更深层次，不为人所见，恰如冰山。可以通过探索内在冰山，从中寻找出解决之道。在和小张的咨询过程中用了萨提亚冰山工具，一起分析在情绪化辞职这一行为下面所隐藏的应对姿态、感受、观点、期待和渴望。在咨询的过程中作为咨询师首先在观点层和小张沟通，澄清小张的一些不合理信念，比如“你觉得作为一个刚入项目组的新人，一下子就能提出合格的咨询方案这可能吗？”“领导除了在开会的时候点名指出你的不足外，有没有也指出其他新人的不足？”“作为项目主管是不是有权力和义务指出项目组成员工作中的不足来帮助他进步？”“委以重任是不是也是另外一种方式的接纳和认同呢？”“你的领导不善于用口头表扬的方式表达认同，你能够接纳吗？”“可不可以从工作本身来寻找成就和认同呢？”

通过这一系列的问题和咨询，我们发现每当小张在遇到压力的状况下首先习惯指责的应对姿态，很容易把原因指向外界，常见的思维方式是“你应该为我的感受负责”，而在感受层面小张觉得更多的是委屈与愤怒。小张的观点是项目主管嫉贤妒能，没有容纳人才的胸怀，处处针对于他。小张对自己的期待是能够在工作中很好的施展自己的才华，小张期待他的领导能好的赞扬他、鼓励他。小张最深层次的渴望是希望自己有价值、被认同。可是小张恰恰没有看到领导对提出的批评和建议也是对他抱有厚重的期待才会如此。

通过咨询小张走出了上次辞职所造成的心理影响，正如后来小张在咨询后发给我的邮件中写那样：“很多时候需要先处理心情，再去处理事情。当在工作中有负面情绪的时候，更需要静下心来用一些类似萨提亚冰山这样的工具帮助自己觉察情绪背后深层次的原因，这样才能做出客观理性的决策。情绪化辞职很容易，可是因为一时情绪而放弃自己适合和喜欢的工作确实非常可惜。“

如果你也属于容易情绪化辞职的一族，也希望你们当情绪来的时候，稍微让自己静一静，深入的觉察一下自己。也许正如尼采所说“当我们知道一切为何的时候，就能够忍受一切如何。

一、反思法。许多基民恐怕都有过这样的经历：一旦在市场出现某种特征时投资了某个品种，或由于听从了某人的建议实施了投资，并且获得了比较满意的结果，当类似的情形再度出现时，还会理所当然地进行同样选择。然而，证券市场的变化莫测决定了既没有绝对正确的事情，在做任何投资决策前，更不能先入为主与过分自信，否则，等待你的很可能是事与愿违。由此也决定了你在进行投资决策前，务必从相反的角度进行思考，试着提出反对的理由，或是咨询其他投资人的意见，尤其重视反对者的意见，这种反思与多重思考会极大地完善、丰富与修正你的投资决策，提高投资决策的质量。

二、试错法。要知道，人类是有限理性的，而市场是错综复杂与不断变化的，就是投资大师也不可能穷尽投资决策所需的一切信息与规律，普通投资者更应该意识到自己的认知能力是有限的。因此，当市场趋势难以预测，或对某一只基金的未来表现心中无底，或自己的观点与周围人们发生矛盾时，避免犯大错误的最好方法就是对可能的投资方法与对象进行尝试性投资，将投资手段与方法放到实践中进行检验。即：先以少量资金或股票基金份额进行试错性操作。只有当事实证明前期的操作正确后，再大举跟进，实施后续操作。

三、错时法。人类的心理本性具有极强的时间敏感性，在理性与感性的斗争中，随着时间的推移，感性与理性间往往会呈现此消彼长的变化。纵观基民们的错误，大多数是出现在一时冲动的情形下。这主要是因为人们在事情刚发生时，会夸大导致事情发生的因素，而忽视其他因素的重要性，造成思维偏见与决策失误。大涨与大跌都会在发生之时极大地刺激人们的情绪，使其在冲动情况下作出不明智的投资决策。同时，还

需认识到，股票基金作为中长期投资品种，只有当确认市场趋势发生逆转时才真正需要进行买卖操作。而一个牛熊周期短则数月，长则数年。因此，根本不必计较短期内的涨跌，而应规定自己每一次的投资计划必须至少在隔了一天后才可付诸实施，如果仅仅过了一个晚上就有了其他想法，那么恐怕当初的计划本身就存在问题，自然应暂停执行。

2）上网查找相关信息及资料。3）对同学进行采访，问卷。

4）对所有资料汇总、分折调查结果、编写报告。3.、实施步骤

1）对中学生的心理疑问提出问题，进行筛选，整理问题，然后决定调查的问题。

2）对同学们进行口头访问，记录相关口述资料。3）对回收的问卷、资料进行分折、统计、分类。4）编写报告。

二、调查结果：

1、影响中学生人生的最重要的品德

根据调查结果显示，约有26.1%的同学认为奉献精神最为重要，26.5%的同学认为坚强最为重要，42.1%的同学认为诚信最为重要，仅有5.3%的同学认为努力最为重要。“诚信”高居选择榜首。

进一步采访中发现，同学们选择的理由都很充分：

a同学说：“我选择信誉，调查报告《关于初中生情绪调查报告》。我觉得，有信誉，朋友就多。尤其，自己被人信任和依赖的感觉很快乐。”

b同学说：“我选择奉献。古人告诉我们，滴水之恩当以涌泉相报，只要帮助了他人，他人必会加倍回报。大家都这样，感觉多好。

c同学认为：“坚强最重要。无论干什么，只要有锲而不舍、金石可镂的精神，遇到挫折，也不垂头丧气，想办法坚持下来就会成功。

d同学说：“没有努力就没有收获，所以，努力最重要啊。”

2、心事诉说的对象

有心事怎么办？许多同学的做法是对自己的知心朋友或同学诉说。约占74.4%；把心事憋在心里的同学占到了16.2%；余下9.4%愿意同父母、家人及老师商量解决办法。把心事憋在心里的同学将近2成。

3、成长的困惑

通过问卷调查所反馈的信息，以及对一些同学的采访，超过半数同学表示，学习目的不明确，还不清楚自己的奋斗目标，学习一点算一点，所谓的学习看似浪费时间。此外，因为自己在学校受到的教育与社会现实落差很大而迷惑的同学也占有相当比例。说明这些同学所接触的人与事都是与自己生活相背离的，加上没有老师、同学、家人的关爱，造成了一种失落感，如无正确的引导也许会踏上歧途走上不归路。另外，还有的同学因为自己外貌、打扮感到苦恼失落。

4、在校最担心的事情

80.6%的同学说自己在校日夜拼搏是为父母，而不是自己。当取得好成绩，就觉得完成了父母交予的任务。反之，自己的成绩差，就担心遭到老师、父母的批评；12.7%的同学表示最担心的事情是老师不关心，同学不喜欢；另外还分别有2.6%和4.1%的同学表示最担心的是遇到同学的欺负、被人小看，以及遭到同学的孤立，没有知心朋友。

三、解决方案： 1.老师的话：

a老师：初中生的心理是多变而且略带叛逆的，对很多事情充满

困惑又缺少能力解决。这就是成长的烦恼，是很正常的现象。同学们要正视这些现象，不仅要相信自己，也要信任家长和老师，相信他们有能力给你带来帮助。当然，老师和家长也有责任和必要付出更多的耐心来正确的沟通引导，与孩子们建立和谐的关系。

2、一个好的情绪理论应能合理地解释情绪现象，并具有较高的可验证性和可应用性。

3、情绪理论的价值不仅体现在它本身之上，还应体现在它是否能够激发出一些新的观点或提供一个新的角度。换

言之，一个好的情绪理论应具有可发展性。意图：

希望能帮助读者从本书中了解更多有关情绪的理论，并在日常生活之中更好的理解情绪，更好的应用情绪理论。精华：

2、作者认为，将情绪作为因变量而非自变量是现象学理论和行为理论的重要局限性所在。但同时，根据综合理论中弗瑞达等“好的理论”中的表述，情绪作为一个过程，其产生与变化都与外界刺激具有紧密联系，虽然其同时也受到自我评价的重要影响，但这一定程度上不也是将情绪作为一种因变量来研究么？如何看待这种自变量与因变量的转化问题？

3、根据艾森克的理论，焦虑的产生由先天性的遗传因素（神经质）与后天性的创伤性事件因素所决定。但这一理论如何解释在不具有这两种因素的情况下，焦虑情绪在人与人之间传播的现象？

4、在本书中所提到的众多情绪理论，其对情绪的解释都是建立在认知的基础之上的（如弗瑞达、巴克、拉扎勒斯等），这些理论如何解释在无意识状态下的情绪反应？

思考、反思与认识：

情绪作为一种重要的心理现象，普遍存在于我们的日常生活之中，对我们的认知、行为、生理及社会交往等众多方面具有重要影响。情绪是在生理神经基础、认知基础之上形成的。它表现为一种应对倾向。在本书所列出的150余种情绪理论中，本人比较认同伊扎德的观点。在伊扎德看来，情绪就是一个动机系统，一个人格过程，而情绪的原因则可以从神经递质和脑机制、感觉—知觉过程和思维过程三个维度来分析。关于情绪的构成问题，在情绪理论的研究中尚无定

论，但本人认为，伊扎德的基本情绪划分的五条标准较好的解决了这一问题：

1、他们具有不同的神经基础；

2、一般情况下在表情上存在着明显的不同；

3、在有助于产生意识的情感上，它们也存在着明显的不同；

4、它们都是通过进化而来的；

5、它们都具有适应性、组织性和动机的特性。

除此以外，情绪对人的影响也是多方面、多层次、多渠道的。一方面，情绪能直接影响到人们的生理健康；另一方面，它与认知系统形成的有机动态平横，对人格的形成具有直接而巨大的影响，并由此对我们生活的方方面面构成间接影响。因此，了解情绪，应用相关情绪理论也就显得很有必要。

一个好的理论，必须在实际生活中得到检验与应用。从本书中我学到了许多具有实际价值的情绪理论。例如，根据弗瑞达的情绪理论，评价在情绪的过程中具有重要作用。因此，我们在日常生活中，应注意发挥评价对情绪的影响作用。在得意时，我们可以通过给自己一个中肯的评定让自己不要过于激动或骄傲；在失意时，我们可以给自己适当的鼓励让自己保持进取心。我们也可以经常给自己做一些积极的心理暗示以保持一个良好的心理状态与身心健康。同时，在进行

心理咨询活动时，我们应尽量给出一些积极的心理暗示与鼓励，以此引导来访者逐渐释放压力，消除紧张情绪，建立互信关系。又比如，焦虑情绪是现代社会普遍存在的一种心理障碍，它具有痛苦和不确定性的特点。根据伊扎德、拉扎勒斯和曼德勒等人的理论，我们可以导出一些缓解焦虑情绪的行之有效的科学方法，如在发展阶段培养未成年人的自我减压能力、经常运动、在烦躁时将注意力引向别处等。

总而言之，我们应科学地对待情绪，了解情绪。通过理论学习，学会调节自己的情绪、合理抒发自己的情绪以及正确理解他人的情绪，最终得以保持身心健康和人际交往中的和谐。

篇3：强化现场质量安全管理之我见

任何一个企业都要有自己的企业文化, 要履行社会责任、企业责任和家庭责任, 要奉行让客户满意的理念, 本着严格要求的工作精神, 认真贯彻诚信服务质量方针, 这样才能够得到客户、合作伙伴、业内同行及政府部门的认可、信任和赞誉。作为建筑企业的一名工程管理者, 根据多年从事施工管理的经验, 总结了取得的一些成绩和施工过程中的一些特点、亮点, 来激励自己在今后的工作中能有更大的进步, 同时也希望与建筑业界的朋友们相互交流、共同进步。

1 工程概况介绍

该工程为某政府部门综合楼, 框架结构, 地下1层、地上9层, 总建筑面积16000平方米, 该工程的质量目标确保省优, 安全现场管理目标创省级安全文明工地。

工程建设的顺利进行离不开当地建设主管部门的关怀和帮助, 离不开建设单位、监理公司等有关领导的大力帮助、指导、支持, 也离不开各界朋友、供应商的支持、帮助。这里重点叙述作为施工企业自身如何搞好建设创建优质工程。

2 工程质量管理方面如何制造亮点

2.1 强化质量意识。

全体项目成员清楚地认识到:意识决定思想、思想决定行动、行动决定结果, 全体项目部成员在提高质量意识上积极主动、锐意进取。从一点一滴的小事上体现出了质量意识。举例来讲:混凝土工程是框架结构的主要分项工程, 混凝土质量的好坏直接影响着工程质量, 混凝土工程要达到清水混凝土的质量要求, 还要保证混凝土的内在质量。

目前混凝土施工速度很快, 在施工前, 必须按规范规定检查钢筋模板工序达到合格要求, 满足混凝土工艺施工的要求。混凝土工程常见的通病有夹渣、漏筋、孔洞、不密实、裂缝等。为了避免发生上述问题, 我们召开QC小组攻坚会议, 制定详细的施工方案, 安排人员进行监督落实, 确保混凝土工程质量。如为了保持现浇模板内的清洁, 能够把锯末等杂物清理干净, 保证混凝土质量, 项目部配备大功率吸尘器;为了确保混凝土养护, 混凝土柱、板及时采用塑料薄膜覆盖;对一些塑料薄膜覆盖不到的部位, 采用浇水养护和喷洒养护液的方式进行养护。

2.2 严把原材料进场关, 确保了工程原材料的质量, 为工程质量打下了坚实的基础。

材料质量是工程质量的基础, 材料质量不符合要求, 工程质量就不可能符合标准, 更说不上优质工程了。所以加强材料的质量控制是提高工程质量的重要保证。材料采购人员和质量管理人员进行质量教育, 严把材料质量验收关。在施工过程中做到不合格材料绝不进厂, 就拿商品混凝土来说, 车车测定坍落度来确保混凝土的质量, 并且每次混凝土施工前, 项目部要派专人到商品混凝土站检查砂石等原材料质量。

2.3 积极推广应用先进的施工工艺及质量保证措施, 来确保工程质量。

梁、柱施工缝接茬部位采用贴双面胶带, 避免漏浆;阴角部位安放定制的阴阳角模, 来保证混凝土阴阳角顺直、方正;柱、墙模板支设完成后, 在模板外侧根部用砂浆勾缝, 以保证柱、墙根部不漏浆、不烂根, 根部混凝土密实;现浇板采用二次机械抹压提浆工艺, 以减少混凝土干缩裂缝和保证现浇面平整度。

2.4 加强技术交底、质量检测、验收及质量标识等质量管理体系。

项目部配备专业的现浇结构质量检测工具及混凝土强度测试仪等。采用喷漆法制作轴线、50线标识;采用不干胶制作现浇结构质量检测标识;采用挂牌法, 制作样板间验收标识牌、同条件试块养护标识牌、新工艺技术交底牌等, 来标识质量状态, 增强质量的可追溯性同时提高施工人员质量意识。

2.5 采取切实有效的成品保护措施, 来确保工程的质量。

框架柱采用定制橡胶护角, 以保证柱角在施工搬运过程中不被破坏。安全通道的楼梯踏步用木条进行了专门保护, 以保证棱角的完整性。

2.6 为了根治卫生间地漏渗漏的质量通病采用了新材料、新工艺塑料止水节, 有效避免卫生间渗漏同时也提高了工效。

为了防治地下室止水螺栓处渗水, 采用了剔出止水螺栓两侧的木块后用1:2.5水泥砂浆掺加防水剂抹压密实, 硬化后涂刷聚氨酯两遍的做法。

2.7 本工程施工中从模板配制、支设, 到钢筋下料、绑扎, 到混凝土浇筑都采用了系列的质量保证措施, 提高了工程质量。

整体结构混凝土密实整洁, 面层平整, 棱角整齐平直, 梁柱节点、墙板交角、线、面顺直清晰, 起拱线、面平顺;无蜂窝、麻面、掉皮、孔洞;无漏浆、跑模、胀模、错台、烂根裂缝。施工缝结合严密平整、无夹杂物、无冷缝、无砂浆隔离层。

3 强化安全生产、文明施工管理, 确保安全, 营造好环境

3.1

为保证本工程安全生产、文明施工, 工程开工后项目部与各班组签订目标责任书, 明确了各班组的安全管理目标及安全责任, 建立了目标与责任考核制度, 定期进行考核。将月度考核情况与其挂钩, 增强了自我约束力, 实现了“要我做”到“我要做”转变, 以保证目标的实现和安全顺利施工。

3.2

施工中严格执行“两标准、六规范”, 规范了各类安全防护及安全设施的设置。高标准的安全通道及两侧画廊既保证了安全又增添了文化气氛。

3.3

为提高职工的安全意识与操作技能, 掌握安全操作规程, 提高自我防护技能, 采取不同形式对职工进行班前安全教育和安全技术交底, 确保安全生产。

3.4

根据每天的施工情况, 分析安全形势找出当日危险源, 在显著位置设置了危险源警示牌, 使职工能够及时了解当天的危险源, 采取相应的安全自我防护措施。

3.5

为保证文明施工环境, 施工现场的主要道路采用砼硬化;各作业区全部撒石硝硬化处理。

3.6

对现场合理规划布置, 各种材料定点、分类明确存放。成品、半成品材料设台存放, 保证了文明施工及原料存放符合要求, 规划成办公区、施工区、卫生区, 责任到人, 及时清理, 使现场卫生管理无死角, 做到安全生产、文明施工, 卫生、环保符合要求。

3.7

对各种防护棚进行了革新, 真正的实现了工具式、定型化。对现场也起到了美化施工环境的作用。定型化安全防护通道保障了职工的安全, 也加快了施工进度。

3.8

木工作业区消防设施采用钢板和角铁焊制的定型化沙池、水池及架体。其它场所根据标准化施工现场管理方案配备干粉灭火器。

3.9

对施工现场实行封闭管理, 设置高标准大门, 并设专职门卫, 配备胸卡与袖章, 对外来人员实行登记制度, 严格保卫制度。高标准的施工现场大门令人耳目一新。

3.1 0

规划生活区, 建立职工之家, 坚持“以人为本”的指导思想, 使职工有一个良好的人文环境。通过黑板报、宣传栏、读报栏等多种形式开展社会主义文明建设活动, 对职工的思想政治教育、业务知识等起到了正确引导的作用, 娱乐室定时向职工开放, 丰富职工的业余文化生活。

3.1 1

进入施工现场可以通过“六牌二图”详尽了解工程情况。工地东面采用工具式彩钢板围挡, 高度为2米, 其他三面为砌筑围墙, 墙体刷白, 书写红色标语, 使施工现场围挡实现了定型化、工具化。

3.1 2

把安全隐患消除在萌芽之中, 同时确保现场安全管理规范化, 标准化, 以达到创建省级安全文明工地的目标。

4 结束语

以上是本工程在工程质量和安全生产文明施工方面的基本情况, 细节决定成败, 在业主、监理和各级领导的支持和帮助下, 该工程顺利拿到了优质工程奖和文明工地奖。当然在此期间也还存在一些不足之处, 我们也在总结他人提出的意见和建议, 为下一个工程的顺利实施提供经验支持。

摘要：本文以一工程为例, 详细介绍了某工程在创建质量安全奖项的经验, 总结了取得的一些成绩和过程管理中的亮点, 与同行分享。

篇4：男人的异性亲密圈

不论你多会打扮或穿衣服，不论你有多迷人的胸部和美腿，那些让你有感觉的男人，为何总是只想和你做朋友？

根据我多年的认真观察和分析，我发现全天下女人都有个盲点，那就是：你以为你身份证的性别栏填的是女的，你穿裙子和胸罩，外表像女人，全天下的男人就應该理所当然地把你当女人？

老实说，在每个男人眼中，对女人的认知都有一把尺，每个人的尺度也都不一样。

有些男人很在意女人的穿着打扮，有些男人很在意气质和涵养，有些男人则很在意你的个性和举止。

例如，如果你穿得很有女人味，但举手投足却像“兄弟”，口一开就三字经问候人家长辈或老师，坐着时腿叉开，站着时三七步，这就会让很多男人在潜意识里把你归类为“男人婆”或“哥们儿”，不管你的乳沟有多迷人，或是你的美腿多可口，男人顶多把你当身材火辣的“哥们儿”或玩伴，而不会把你当成真心交往的对象，用心呵护你。

很不幸的，很多女人活了二三十年，谈过上百次恋情，仍看不清这个盲点，每天仍自欺欺人地坚信，只要有化妆、乳沟、美腿和身份证上的女性注记，男人就会把你当女人看。

因此，如果你想让男人“感觉”到你是个女人，进而“爱上”你这个女人，最好先跟着我摸清男人心中的那把尺，你才能搞定男人心。

每个男人心里都有一把尺，这把尺会在男人心里画出一个感情认知的飞镖靶，依照心理学原理，这个靶就被称为“亲密圈”（The Circle of Intimacy）。

对所有男人来说，世界上所有的女性，除了血亲外，其余都能从内圈开始往外延伸，分为以下六种类型：

亲密爱人 真命天女、现役女朋友、老婆或小老婆。

红粉知己 虽不是恋人，但却能真心了解他内心的女人，可以让他倾吐心事、互相打气的女人，可能是分手后还能维持友谊的前女友或前妻，或是志同道合、有相同信念的女性朋友。

干妹妹 偶尔也会有干姐姐，不过一般以年轻小妹比较多，像自己家人一样，可自在相处、聊天、玩乐，不会有拘束感。

女性朋友 有共同兴趣、谈得来的女性友人，但不会聊到个人私密领域的话题，相敬如宾，也有可能是十几年的好友，但始终保持距离。

工作伙伴或生活关系人 战友或竞争对手、客户及厂商（包括医患关系、师生关系），除了外表和身份证上让他认知对方是女性，实际上，他内心并没有涉及感情或亲密感的认知。

女性路人 打扫的阿姨、老妈子，或者来问路的女性路人……

篇5：沟通与亲密关系

 人类是群居动物，也是一种需要归属感的动物，所以人类需要建立一种亲密的关系，有些事天生就有的，如与父母和亲戚的密切联系，有的则是后天建立起来的，如同学关系，恋人关系。归属感使得我们和感觉与自己有关联的人的固定交往变得必不可少，为满足这种需求，我们需要与他人建立和维持一种亲密关系，只有与那些了解和关心我们的人互相交流才会达到满足。 美国心理学家舒兹把人际关系分为三种：包容需求，控制需求，情感需求。

 在这里我就三种亲密关系进行剖析和阐述。与父母的关系，恋人关系，同学关系。与父母的关系在不同时期会有不同的表现。在小时候，我们都是在父母的关怀下成长，在小时候，父母都会教我们许多东西，但是我们都会听父母的话，只是偶尔跳跳皮而已。但是等我们进入青春期，我们与父母的关系就会发生变化，青春期的我们比较叛逆，加上父母和我们的代沟，我们之间的关系将更加复杂，甚至恶化。我们便会违抗父母的命令或者和父母吵架。但是对于我来说，在那时候和父母的争吵并没有影响到我们的关系，反而让我们更加了解对方，也许这也算是一种特别的交流方式吧。等到我们长大走出自己的一片天有了些许成就时，也许在成功的路上会遇到一些困难，但是父母是第一个站出来挺你的人。有句话不是说“家时心灵的港湾”?不管我们经历了多少不愉快，但是他们都会永远在我们身旁支

持我们。这就是血浓于水的亲情吧。、 朋友，也谓同志，也就是志同道合。在人际交往中，双方在态度，信仰，爱好，兴趣，家庭背景，经济收入，年龄，文化程度，社会地位，自理，名族，地域，职业等方面具有相似性的haunted，能够促进人们互相喜欢。有这些作为基础，彼此很容易成为朋友。朋友是我们人际关系中必不可少的一环。不同于父母，朋友是那个在困难中鼓励自己，和自己一起奋斗的，可

篇6：与大海亲密接触作文

开着开着，渔船突然慢了下来。你晓得这是怎么回事？原来是渔船开始捕鱼了，捕来的鱼可以分给游客。只见那一篓网丝被凌空抛入海中，随就被无情的浪花吞没了。

过来一会儿，开始收网了。等船员把网放到甲板上，游客们便哄抢起来，我伸手抓向一只“皮皮虾”，谁知它“至死不渝”地奋力反抗。啊！我的手被狠狠地扎了一下，真是狡猾！

带着留连的心情下了船后，我们便去了森林公园浴场。

呈现在我眼前的是一片金色的沙滩和一望无垠的大海。它舞动着那外柔内强的浪花，好像在欢迎我们。我痴迷在这美景中，忍不住奔向大海，想好好地畅游一番，却遭到了浪花无情的洗礼——一口又咸又涩的海水，毕竟有四年没有摸海水了，对海的习性没了把握。不过后来就好了。我坐在租来的皮划艇上，十分自在。

我们还发现了小鱼！也就梳子的齿那么长吧，却精（灵活）得很！我来了兴致，便拿来了网兜和水桶捉了起来。起初，我怎么也捉不到，后来，在爸爸的指点下，我一逮一个准，有几次，我一网下去，居然捞到了三条！

篇7：与大海亲密接触作文

到了海边，远远望去，沙滩在阳光照耀下，散发着金灿灿的光芒，整个海滩好像铺了一层金子。兴奋而又激动的我脱下运动鞋，赤着脚丫脚奔向了沙滩。啊，沙滩软软的，如同踩在软软的毛绒毯上，我来回奔跑，沙滩上留下了我一串串快乐的脚印。海风迎面吹来，粘粘的、凉凉的，我展开双臂，喊着：大海，我来了！我追逐浪花，喜悦的心情写在了脸颊。大海一起一伏，海面犹如铺了一层金色的鱼鳞。

我和爸爸妈妈手牵手，向大海走去。海水没过我的脚踝，凉丝丝的，我扑向大海，水珠蹦上我的脸庞，驱赶着我的炎热。在爸爸的陪伴下，我像个小青蛙在水里畅游，大浪来了，但我依然浮在水面荡来荡去，就好像有人在水下托着我似的。不过，还是避免不了呛上几口水：哎呀，咸死了，咸死了，呸呸呸！我赶紧冲上岸，大喝了好几口水，感觉舒服多了。我又一次奔向大海，这次我的目光被海上活动给吸引住了：许多人坐着快艇，在大海上兜风，刺激的尖叫声在海上回荡。我跑过去对爸爸妈妈说：要不我们去坐快艇吧！爸爸妈妈连连点头：好呀好呀！我们来到排队的地方，人不多，不一会儿就轮到我们了，登上快艇，我迅速穿上救生衣，坐到椅子上，并系好安全带。伴随着嗡嗡的低沉的响声，速度渐渐的快了起来，海浪向我们微笑，海鸥向我们打招呼就在这时，驾驶员对我们说：注意，要转弯了！我赶紧抓住扶手，做好准备。刹那间，快艇来了个超级大转弯，海水扑进船里，船头顿时高高翘起，似乎要倒扣过来一样，海水溅到了我的头上、脸上、手上，真是刺激啊！

篇8：与异性过于亲密检讨书

关键词：青杄,光系统Ⅰ,PSAK,RACE,克隆,生物信息学,RT-PCR

0 引言

PSAK(photosystem Ⅰ reaction center subunit K)是绿色植物光系统Ⅰ(photosystem Ⅰ)反应中心蛋白K亚基,是组成光系统Ⅰ(PS Ⅰ)复合体的重要组成部分[1]。1991年在聚球藻[2]和黄瓜[3]中就鉴定了包括PSAK在内的组成PS Ⅰ复合体的各个基因。Ozawa S和Onishi T等在海藻中证明PSAK与PSAG参与增强捕光复合体Ⅰ(LHC Ⅰ)与PS I反应中心联系,从而增强光系统Ⅰ的稳定性[4]。拟南芥的研究表明,psak功能缺失的突变体光能利用率明显降低,植物体将合成更多的叶绿素a/b和反应中心色素P700的以满足植物体对光能的需要[5]。典型的PSAK分子量一般在13kDa左右,有两个跨膜的α-螺旋结构域,拓扑学的实验表明,跨膜行为是不依赖SRP(Signal Recognition Particle)而趋于自发的[6]。在大麦的研究中表明,PSAK与PSAG在进化上可能由同一个基因编码而来[7]。越来越多的研究证明了PSAK在稳定PS Ⅰ反应中心、参与能级跃迁和电子传递、联系LHCⅠ与反应中心等起到重要的作用[8,9,10,11]。

青杄又名青皮云杉,是中国特有的一种针叶植物,对比较恶劣的环境(干旱、高温、潮湿等)有较强的适应能力,也是我国比较广泛的经济作物[12]。由于木本植物的生活史较长,且受到组培条件、突变体较难获得等条件的限制,针叶植物的分子生物学水平的研究相对较少。本文以多年生青杄和三年生青杄幼苗为材料,以其cDNA文库为模板,根据其EST的保守序列设计引物,通过5′-RACE与3′-RACE实验获取青杄PSAK的末端序列,再经过序列拼接获取其全长cDNA序列。并利用生物信息学的方法对其编码的氨基酸序列进行分析,预测其理化性质、二级结构、三级结构等。同时进行半定量PCR与荧光定量PCR,鉴定其在青杄的各个组织中的表达情况。本文将对PwPSAK的进一步研究,特别是针叶植物光和作用机制研究奠定基础,同时也为生产实践中筛选优质林木资源、抗性育种等提供了理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

多年生青杄的花粉、针叶及种子采集于中国科学院植物研究所。通过RT-qPCR与半定量RT-PCR进行组织表达实验中的青杄根、茎、叶取材于三年生幼苗。青杄cDNA文库由gateway技术构建,由Invitrogen 公司完成。

1.1.2 实验试剂

Taq DNA 聚合酶、DL2000购买于TANGENG公司,pDONR222载体购买于美国Invitrogen 公司,反转录试剂盒购买于Fermentas公司,荧光定量PCR试剂盒购买于KAPA公司,pEASY-T1购买于全式金公司,其它试剂均购于Promega公司。

1.2 方法

1.2.1 RACE PCR获取PwPSAK的末端序列

以多年生青杄cDNA文库为模板,利用PSAK的EST序列中特异引物与pDONR222两端的载体引物进行5′-RACE与3′-RACE实验。

5′-RACE实验利用引物上游引物5P-L与下游引物5P-R,3′-RACE实验利用上游引物3P-L与下游引物3P-R进行扩增。通过EST片端与5′端、3′端序列的拼接,得到了PSAK的全长cDNA序列。实验所需的引物见表1。

1.2.2 生物信息学分析

利用DNAMAN软件进行PwPSAK的cDNA序列编码框预测及蛋白翻译。通过NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)与TRIR (http://www.arabidopsis.org/)网站中的BLASTn与BLASTp工具进行核酸序列与蛋白序列的同源性分析,用CLUSTALX软件进行多序列比对,用MEGA5进行系统树的构建;利用ExPASy(http://www.expasy.org/tools/)中的Compute pI/Mw 工具 (http://web.expasy.org/compute_pi/)预测其等电点和分子量,利用ProtScale工具 (http://web.expasy.org/protscale/)计算蛋白的疏水性图谱;用TMHMM 工具 (http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)预测蛋白是否跨膜;利用SWISS-MODEL工具来预测蛋白的三维结构。

1.2.3 组织表达实验

利用Aidlab公司的植物RNA提取试剂盒提取三年生青杄的根、茎、叶与多年生青杄的种子和花粉的RNA,通过Fermentas公司的RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit合成双链cDNA,根据PwPSAK的CDS设计特异引物RT-L,RT-R(表1),以EF-1α作为内参基因[13],进行RT-PCR实验。利用KAPA公司的SYBR FAST qPCR Kit(ABI prismTM)在ABI StepOnePlus实时荧光定量PCR仪进行RT-qPCR实验,分析其在各自组织的表达情况。

2 结果

2.1 通过RACE实验获取cDNA全长

通过3′-RACE与5′-RACE实验获取的片段进行测序,将测序结果与EST片段进行拼接获取cDNA全长 (图1)。通过DNAMAN对全长cDNA序列的分析可知,全长cDNA共691bp,于78bp出现起始密码子ATG,在498bp处发现终止密码子TAA,664bp处发现PolyA尾巴。设计引物PSAK-L与PSAK-R,PCR扩增目的基因的编码区,将片段连接pEASY-T1载体上,通过酶切和测序进行鉴定。全长cDNA已登录GeneBank,登录号为JQ677991。

2.2 生物信息学分析

2.2.1 氨基酸组成与理化性质分析

编码区有420bp核酸组成,编码140个氨基酸(图1),由Compute pI/Mw工具预测分子量为14.23kDa,理论PI值为10.29。TMHMM工具预测其有两个跨膜区域,ProtScale工具分析蛋白的疏水性,在129位氨基酸(Gly)疏水性最强为2.689,101位丝氨酸[14]]疏水性最弱为-1.844,根据蛋白疏水性图谱结合跨膜预测分析结果,可推测其含量大量疏水结构的跨膜结构域。

利用FoldIndex工具[15]来进行蛋白质固有无序化分析,结果表明蛋白没有无序化特征,预测此蛋白具有很强的刚性结构(图3),在行使其功能时蛋白的构象不会发生改变。

2.2.2 多序列比对与进化树分析

通过在NCBI与TARI上的Blastp工具对PwPASK进行同源检索,找到拟南芥、烟草、北美云杉等8种植物(表2)的同源蛋白序列。根据其编码的蛋白序列进行多序列比对,结果如图4 A,预测其C端为主要的PSAK结构域,与其它各个物种同源性较高。α1与α2是两个螺旋结构;系统树分析结果表明青杄中PSAK与北美云杉中的ABK21864(GeneBank 登录号)同源关系最近。

2.2.3 二级结构与三级结构预测与分析

利用CFSSP(http://www.biogem.org/tool/chou-fasman/)工具对PwPSAK的氨基酸序列进行二级结构分析,结果如图5,利用SWISS-MODEL工具对PwPSAK的蛋白序列进行分析,可以得到保守的PSAK 结构域(有典型的α1与α2螺旋结构),值得注意的是由于N端的大部分序列(1~60aa)在SWISS-MODEL数据库没有同源性大于30%的序列,故N端的三级结构有待进一步研究。

2.3 mRNA水平的组织表达

2.3.1 各组织RNA的提取

以成年青杄种子、花粉及三年生苗为材料,用Aidlab公司的植物RNA提取试剂盒进行mRNA的提取,电泳检测结果如图6,反转录成cDNA后,进行mRNA水平的组织表达实验。

2.3.2 半定量RT-PCR与RT-qPCR结果

以反转录的青杄各个组织(根、茎、针叶、花粉、种子)mRNA的cDNA为模板,RT-L与RT-R为引物,EF-1α-L与EF-1α-R为内参基因引物进行半定量RT-PCR与RT-qPCR,两实验结果均比较一致,结果如图7,表明PwPSAK在各个组织均有表达,但在针叶中表达量最大,茎中的表达量其次。

3 讨论

以青杄cDNA文库为模板的RACE实验是基于EST保守序列和pDONR222载体上特异的引物进行的,cDNA全长是由PSAK的末端序列和EST序列进行拼接而来,进而完成基因的克隆,相比之下,要比传统的通过同源植物保守序列设计兼并引物的方法更加便捷。由其编码的氨基酸可以看出,甘氨酸(Gly)和丙氨酸(Ala)含量最多,为分别为12.9%,其次为10.9%的亮氨酸(Leu)和10.0%的丝氨酸(Ser),其分子式可推导为C623H1029N179O184S8。二级结构预测表明此氨基酸含有55.0%的α-螺旋结构,30.0%的β-折叠结构,其余则为无规则卷曲结构,由于PSAK在其它植物上的研究已证明是具有两个跨膜的的α-螺旋结构域,三级结构中预测的α-螺旋结构则是跨膜的疏水区域。

多序列比对表明在不同的植物中C端(60~140aa)的PSAK结构域较为保守,且由两个典型的α-螺旋结构域,系统发育树可以看出北美云杉的一个基因与青杄的PSAK高度同源,无论从形态学还是在分子进化上都表明两物种有相同的祖先。青杄PSAK蛋白的N端序列(1~60aa)与拟南芥、藻类物种相比同源性较低,说明在分子结构与功能上和藻类、阔叶植物存在一定的差异,进而推测针叶植物的PS I组成和机制和其它植物存在一定差异性。

青杄属于木本裸子植物,对其RNA的提取尤为关键,对于多年生的青杄来说,针叶、花粉和种子的RNA提取比较容易完成,但根与茎木质化严重且茎外侧含有大量木栓组织,不容易提取较高质量的RNA,因此选择三年生的幼苗来提取根、茎、叶的RNA。组织表达所用的定量与半定量RT-PCR所得的结果一致,PSAK在青杄中主要在针叶和茎中表达。