肿瘤因子胃癌分析论文

【摘要】胃癌是胃黏膜上皮的恶性肿瘤，目前在世界范围的癌症相关死亡中占第二，我国居世界第一。很多患者一发现就到了晚期，从而失去手术根治的机会。胃癌相关肿瘤标记物的检测是一种早期发现胃癌的好方法，也是胃癌的诊断治疗及预后判断的检测标准。本文概述了胃癌肿瘤标记物CEACA199，CA72-4对胃癌的诊断和临床具有重要意义。今天小编为大家精心挑选了关于《肿瘤因子胃癌分析论文(精选3篇)》相关资料，欢迎阅读！

肿瘤因子胃癌分析论文 篇1：

Us贫血、肿瘤病理状况与胃癌患者生存预后的相关性研究分析

作者简介：周燕（1977.12-），女，讲师，本科，研究方向：肿瘤病理。

摘要：目的：研究贫血、肿瘤病理状况与胃癌患者生存预后之间的关系。方法：选取我院2005-2009年确诊的500例胃癌患者，并对患者进行病史、病历、住院时间等方面的调查研究，采用SPSS软件对治疗后胃癌患者的预后情况进行统计，并分析得出影响胃癌患者生存预后的主要因素。结果：据调查统计，500例胃癌患者当中，贫血305例，无贫血195例，无贫血患者的生存期为（36.19±1.25）月，贫血患者的生存期为（22.13±2.26）个月，差异具有统计学意义（P<0.05）。此外，根据回归分析表明，有无贫血与胃癌患者预后情况无明显联系，肿瘤病理情况（直径、分化情况、肿瘤分期）有着明显的相关性。结论：具有肿瘤相关贫血的胃癌患者与无贫血患者生存期之间的差异具有统计学意义（P<0.05），贫血患者生存期明显短于无贫血患者；肿瘤病理情况是影响胃癌患者生存预后的主要因素。

关键词：胃癌； 肿瘤； 贫血； 病理状况； 相关性； 预后； 研究； 分析

恶性肿瘤是目前威胁全球人类健康的恶性疾病之一。我国恶性肿瘤的发病率当中，胃癌是发病率最高的恶性疾病，根据相关调查统计，目前我国胃癌的年死亡率占30%。胃癌中贫血是常见的并发症之一，它严重地影响着患者的生存期，肿瘤病理状况则严重影响着胃癌患者的生存预后情况。我国大约有45%以上的胃癌患者出现贫血，而在进行化疗手术之后，患者贫血的发生率可高达85%或以上。可见，肿瘤相关贫血与患者的预后情况之间的相关性研究非常重要，是目前胃癌疾病研究的重要组成部分。

然而，目前虽然有相关调查显示，患者的生存预后情况与肿瘤相关贫血之间的关系缺少充分的研究，对肿瘤病理情况与患者的预后情况、贫血对患者生存期的影响、肿瘤病理情况对贫血的影响因素等方面都缺乏相应的数据。因此，本文主要对胃癌患者进行调查研究，进一步分析肿瘤相关贫血、肿瘤病理状况与胃癌患者生存预后情况的相关性，并取得了好的结果，现将内容报告如下：

1资料与方法

1.1一般资料：选取我院2005-2009年确诊的500例胃癌患者进行调查分析，其中男315例，女185例，患者的年龄为（26.25±12.23），患者均经过病理确诊为胃癌。患者的入选标准如下：（1）排除原发性肝脏、肾脏疾病严重受损等患者。（2）排除相关血液疾病或先天性贫血患者。（3）排除进行贫血治疗患者。（4）排除脾脏功能亢进者。

1.2方法

1.2.1研究中的定义标准采集：本次研究主要按照我国关于贫血的相关定义进行研究分析。关于贫血的定义主要包括：男患者血红蛋白在120g/L以下，女性患者血红蛋白在109g/L以下的均为贫血。贫血主要分成三类，其中包括：正常细胞贫血、低色素贫血以及巨幼细胞性贫血。此外，关于贫血程度的划分主要分成轻度、中度和重度，轻度：HB≥90g/L、中度：60

关于肿瘤的病理情况分析，主要可以分成四种类型，本次研究I期胃癌患者110例，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期为390例。

1.2.2数据收集：对入院的胃癌患者进行分析，主要收集化验前的相关指标，如：血红蛋白、红细胞、血红细胞压积、血红细胞平均容积、血红蛋白量、血红蛋白浓度、胃癌组织学分型、胃癌病理分型、病理分期、分化程度等，对患者的相关情况建立表格进行记录。并计算出患者的生存时间，核对无误后，进行统计学分析。

1.3统计学分析：本组主要对患者进行回顾性分析，使用SPSS15.0统计软件进行分析，分析内容主要包括：胃癌患者贫血情况、肿瘤病理情况、胃癌病理组织分型、胃癌病理分期、癌细胞分化程度等方面。计数资料采用X2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1患者贫血分布情况分析：500例胃癌患者中，发生贫血的有305例，未发生贫血的有195例。其中贫血的分布情况为：巨幼细胞性贫血为92例，正常细胞贫血为109例，小细胞贫血104例，详见表1：

表1患者贫血分布情况分析例数巨幼细胞性贫血（%）正常细胞贫血（%）小细胞贫血（%）30592（30.16）109（35.73）104（34.09）2.2贫血的严重程度分析：在发生贫血的患者中，轻度贫血为105例，中度贫血为112，重度贫血为88例，详细情况如表2显示：

表2贫血严重程度分析例数轻度（%）中度（%）重度（%）305105（34.42）112（36.72）88（28.85）2.3肿瘤病理组织学分型、癌症分期、分化程度与胃癌患者肿瘤相关性贫血之间的关系：病理组织学分型：普通型253例，特殊型247例；癌症分期：I期Ⅱ期122例，Ⅲ、Ⅳ期378例；癌症分化程度：高中分化319例，低未分化181例。详细如表3所显示：

经卡方检验得出，病理组织学分型、癌症分化程度两者与胃癌肿瘤相关性贫血发生的关系，数据差异无统计学意义（P>0.05）；癌症分期中Ⅲ、Ⅳ期贫血率要明显高于I期Ⅱ期，数据差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.4病理分期、癌症分化程度与肿瘤相关贫血程度分析：本次研究发现，发生贫血的有305例，未发生贫血的有195例。在305例患者中，胃癌I期Ⅱ期患者为49例，Ⅲ、Ⅳ期患者为256例；癌症分化程度高中分化162例，低未分化为143例。病理分期、癌症分化程度与贫血程度之间的关系详细如表4显示：

从上述表格可以看出，病理分期与肿瘤相关贫血之间构成区别，差异具有统计学意义（P<0.05），即Ⅲ、Ⅳ期患者的贫血程度均高于I期Ⅱ期患者。此外，癌症分化程度与肿瘤相关性贫血构成无统计学意义（P<0.05）。

与胃癌患者肿瘤相关性贫血之间的关系特征贫血无贫血合计病理组织学分型普通型147106253特殊型15889247合计305195500癌症分期I期Ⅱ期4973122Ⅲ、Ⅳ256122378合计305195500癌症分化程度高中分化162105319低未分化14390181合计305195500表4病理分期、癌症分化程度与贫血程度之间的关系特征贫血程度合计轻度中度重度病理分期I期Ⅱ期3116249Ⅲ、Ⅳ期749686256合计10511288305癌症分化程度高中分化626139162低未分化425051143合计105112883052.5生存期分析：本次研究主要将肿瘤相关贫血作为对患者预后因素进行分析，分析肿瘤相关贫血对患者生存期的影响。根据本次调查显示，无贫血患者的生存期为（36.19±1.25）月，贫血患者的生存期为（22.13±2.26）个月，数据差异具有统计学意义（P<0.05）。

此外，本次研究将胃癌患者分成四期进行分析，并在不同的分期中记录患者有无贫血的生存时间。研究发现，I期患者无贫血生存期为（74.25±5.64）个月，贫血生存期为（59.73±6.25）个月，数据差异性具有统计学意义（P<0.05），可见I期患者肿瘤相关贫血对生存期有着较大影响。但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者肿瘤相关贫血对生存期的影响较小，差异无统计学意义（P>0.05）。

3讨论

3.1胃癌病理分型以及癌症分化程度与肿瘤相关性贫血之间的关系：经过相关研究发现，胃癌在组织学上可以分成普通型和特殊型两种，其中普通型较为常见。根据本次的调查研究发现，肿瘤病理组织学分型与胃癌肿瘤相关性贫血发生数之间的关系，数据差异无统计学意义（P>0.05）。也就是说，无论是特殊型癌症还是普通型癌症，与胃癌患者贫血无明显关系。根据相关的研究发现，导致肿瘤相关贫血的主要因素包括以下几点：第一，治疗的过程中缺乏营养补给。第二，癌症的转移，导致骨髓坏死或纤维化。第三，因此癌症患者机体出血或溶血。

根据本次研究分析得出，患者在患病即Ⅲ、Ⅳ期患者的贫血程度均高于I期Ⅱ期，导致这种情况的主要原因包括：第一，患者发生病变，并导致胃腔内发生梗阻现象，导致营养不良。第二，晚期胃癌的红细胞生成素明显不足，导致贫血情况更加严重。第三，肿瘤坏死因子的增加，导致骨髓造血干细胞的增多，影响红细胞的生长，导致贫血。

此外，癌症的分化程度主要体现了癌细胞的成熟程度。癌症的不同分化程度，与肿瘤相关性贫血发生之间的关系无明显差异（P>0.05）。

3.2病理分期、疾病分化情况与肿瘤相关性贫血程度的关系：当患者出现贫血症状时，常常会表现出乏力、困顿、心悸、注意力不集中等情况。对于女性患者来讲，更会造成脸色苍白、月经失调、造血机能过低等情况。

本次研究发现，患者在Ⅲ、Ⅳ期中贫血的情况相对较严重，且较容易出现营养性贫血。根据临床分析还得出，癌症分化程度的不同，对患者贫血程度的构成无统计学意义。但也有研究人员就此认为：肿瘤贫血程度患者的构成比与癌症病例分期之间的相关性较为明显，但不能根据患者的贫血程度对癌症分化程度进行判断，以免造成误诊。

3.3胃癌患者肿瘤相关贫血的特点：经过本次研究发现，胃癌患者与其他癌症患者一样，肿瘤相关性贫血主要是因为在治疗的过程中，由于营养缺乏、癌症的转移、溶血的出现等各种因素所引起的。本文参考了相关的研究，结合我院胃癌患者的实际情况，总结出胃癌患者肿瘤相关性贫血的特点如下：

第一，肿瘤相关贫血中，主要表现为小型细胞贫血以及正常细胞贫血，只有极少数部分胃癌患者会出现巨幼细胞性贫血。

第二，在进行胃癌治疗前，患者较容易发生肿瘤相关性贫血，几率可达50%以上。

第三，相关研究发现，癌症贫血程度轻、中、重三种程度均可能发生，但轻度和中度贫血较为常见，重度贫血相对较少。该结果与本次研究的结果相一致，轻度、中度、重度贫血分别为：105例、112例和88例。

3.4肿瘤相关贫血是影响胃癌的预后因素：为了进一步确认肿瘤相关贫血、病理状况、分化程度等方面对患者预后情况，一些研究主要建立了Cox模型进行分析。分析结果发现，病理状况、癌症分化程度等均是影响患者预后情况的独立因素，然而就模型分析得出，贫血对患者的生存有一定影响，但并非影响患者预后的独立因素。

贫血是胃癌治疗过程中常见的并发症，因此对胃癌患者造成非常大的影响。贫血容易导致患者的机体组织缺氧，从而改变肿瘤的基因表达，导致治疗出现困难。此外，贫血还会导致患者体内血管转录因子的表达出现错误，使肿瘤血管出现增生现象，加速对患者机体的损耗。因此，贫血是影响胃癌预后情况的一个重要因素。有学者认为，胃癌患者体内的血小板普遍出现不良情况，由于血小板与血红蛋白之间的负性关系，导致患者容易患上高血小板血症，该并发症又会一定程度影响着预后情况。本次调查研究发现，贫血癌症患者的生存期要明显低于无贫血患者。

本文通过研究分析表明，贫血较为严重的胃癌患者，一般处于癌症的中晚期，差异具有统计学意义（P<0.05）。然而，要更进一步明确贫血与胃癌预后的关系，必须要对患者的贫血进行纠正，并分析其对患者的主要影响

参考文献

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作者：周燕

肿瘤因子胃癌分析论文 篇2：

胃癌诊断标记物CEA、CA19 9、CA72—4的研究

【摘要】胃癌是胃黏膜上皮的恶性肿瘤，目前在世界范围的癌症相关死亡中占第二，我国居世界第一。很多患者一发现就到了晚期，从而失去手术根治的机会。胃癌相关肿瘤标记物的检测是一种早期发现胃癌的好方法，也是胃癌的诊断治疗及预后判断的检测标准。本文概述了胃癌肿瘤标记物CEACA19 9，CA72-4对胃癌的诊断和临床具有重要意义。

【关键词】胃癌；肿瘤；标记物

1背景

中国胃癌死亡率为25.2/10万（男性：32.8/10 万，女性：17.0/10 万），占全部恶性肿瘤死亡的23.2%，占恶性肿瘤死亡的第一位。（男性是女性的1.9倍）。中国胃癌的世界人口调整死亡率：男性：40.8/10万，女性：18.6/10万，分别是欧美发达国家的4.2-7.9倍和3.8-8.0倍。中国胃癌发病有明显的地区差异和城乡差别。全国抽样调查263个点，胃癌调整死亡率在2.5-153.0/10万之间，城市地区和农村地区分别为15.3/10万和24.4/10万，后者是前者的1.6倍[1]。胃癌是严重威胁人类生命的恶性肿瘤之一，居我国恶性肿瘤死亡率的首位[2]。关于胃癌肿瘤标志物的报道很多，目前认为较有临床价值的有CEA、CAl9-9、CA72-4等，对胃癌的早期诊断和临床治疗具有一定意义。

2肿瘤标记物

肿瘤标志物是肿瘤细胞产生和释放的生物活性物质，常以抗原、酶、蛋白质、激素等代谢产物形式存在于肿瘤细胞内或主体液组织中[3]。在血组织、血浆或其他体液中能够检测到的有关生化物质，这些物质达到一定的水平就能体现某些肿瘤的存在。此外，在患者机体中，由于肿瘤组织浸入正常组织，引起机体免疫功能和代谢异常，产生一些生物活性物质和因子。这些物质的因子特异性低，其产生、变化与肿瘤的发生及发展有着密切关系[4]。胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，其症状的非特异性而经常被延误诊治。

2.1血清肿瘤标记物单项检测

2.1.1癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）癌胚抗原是一种含糖蛋白质，存在于3-6个月的正常胎儿消化道上皮细胞中，随着胚胎后期和胎儿出生后逐渐消失，机体发生肿瘤时重新出现[1]。CEA具有广谱性标志物的特点，广泛应用于消化系统肿瘤的诊断、防治和疗效观察。

研究表明，血清CEA水平诊断胃癌的敏感性为19.0%-56.1%，特异性为50%-92%。由于CEA的多克隆抗体易与样品中无关抗原结合，故部分胃炎、消化性溃疡、慢性肝胆疾病和乳腺病等也可出现假阳性[5]。CEA是种细胞粘附分子高水平还可看作肿瘤已有转移的标记。在治疗效果检测中CEA有一定的指导作用。

2.1.2CAl9-9CAl9-9是由腺癌细胞产生，在胃癌、结直肠癌、胰腺和肝胆系等消化系统肿瘤中呈显阳性。胃癌患者血清CAl9-9水平的敏感三性为26.3%-69.O%，特異性为52.0%一95.0%；其水平和敏感性随着胃癌TNM分期递增而升高，尤其以Ⅳ期与有肝转移组升高最显著，并且与胃癌淋巴结转移、生存率以及预后密切相关。CAl9-9也可作为治疗前后的诊断指标，对复发进行监测[6]。CAl9-9由腺癌细胞产生，经胸导管引流到血液中，引起外周血中CAl9-9水平的升高。

研究表明CAl9-9的阳性表达率在胰腺癌中最高（70%-95%），并且在H道恶性肿瘤中次之（55%-79%），该指标在消化系肿瘤中如胰腺癌、胃癌、结直肠癌等疾病的良恶性鉴别中有较大意义。有研究发现，CAl9-9在胃痛组的水平明显高于慢性胃炎组，淋巴结转移组与非转移组中CAl9-9的水平的差异有统计学意义，在胃癌不同浸入深度的组别之间其差异也有统计学意义[7]。

2.1.3CA72_4CA72_4是一种新发现的肿瘤标志物，是一种高分子量糖蛋白，是目前诊断胃癌的最佳肿瘤标志物之一，对胃癌具有较高的特异性，对其他肠道癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌也有不同程度的检出率。在消化系统恶性肿瘤中有着很好的应用价值[8]。

2.2血清肿瘤标记物联合检测血清癌胚抗原CA72-4、糖类抗原19-9（CA19-9）及糖类抗原72-4（CA72-4）联检在胃癌诊断中有着很好的应用价值。CEA、CA19-9及CA72-4是胃癌患者血清学诊断中较好的肿瘤标志物，三者联合检测可提高胃癌诊断的敏感性和特异性[9]。

邱冰，刘颖等研究者发现：CA72-4、CEA、CAl9-9联合检测可以提高胃癌敏感性和有效性。是检测胃癌的一种简单有效的检测方法[10]。

陈志军、周爱清等研究发现：三种肿瘤标记物联合检测的灵敏度，准确度高。采用三相肿瘤标记物联合检测具有简便、高效、经济等优点[11]。

3总结

综上所述，肿瘤标志物检测主要用于恶性肿瘤的临床诊断、治疗监测和预后的判断。血清癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9（CA19-9）及糖72-4（CA72-4）联和检测在胃癌诊断中具有一定的价值。CEA、CA19-9及CA72-4是胃癌患者血清学诊断较好的肿瘤标志物，三者联合检测可提高胃癌诊断的敏感性和特异性.随着医学技术不断的提高，一些新的肿瘤标记物也不断出现。但由于我国国情，偏远城镇经济、医疗水平比较落后。CA72-4、CEA、CAl9-9三种肿瘤标记物具有简便、高效、经济等优点。适合偏远城市。为胃癌早期诊断、治疗起到一定的作用。大大降低了胃癌的发病率。

参考文献

[1]杨雪琴，陈创候，晋轩.多肿瘤标志物检测系统C12在胃癌诊断中的价值分析[J].中国肿瘤临床，2008，35（4）：184-188.

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定的临床意义[J].中国血液流变学杂志，2007，17（3）：453-455.

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[6]郭花，朱金花，等.肿瘤标志物对胃癌诊断应用价值的比较[J].中国临床医学，2009，6（16）：369.

[7]张永乐，薛英威，等.肿瘤标记物CAl9-9、CEA对胃癌转移和预后预测价值的分析[J].标记免疫分析与临床，2009，12（3）：198-120.

[8]邱冰，刘颖，等.CA72-4 、CA72-4联合检测在诊断肾、结肠癌中的应用[J].中国实验诊断学，2008，8（8）：12.

[9]张建民，荣文，许其佼，等.血清MG-Ag，CA50，CAl9-9，CEA联合检测对胃癌的诊断价值[J].河南诊断与治疗杂志，2000，14

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[10]雷长喜.联合检测胃液CA72-4在胃癌早期诊断中的价值[J].2009，12（6）：385.

[11]陈志军，周爱清，等.联合检测胃液CA72-4在胃癌早期诊断中的价值[J].2008.12（6）：611.

作者：姜广红等

肿瘤因子胃癌分析论文 篇3：

基于微流控芯片的CAFs影响胃癌细胞耐药及GRP—78表达相关性

【摘要】 目的：利用微流控芯片平台探索肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）影响人胃癌SGC7901细胞对化疗药物的耐药及其与GRP78表达的相关性，从而为临床工作提供以CAFs和GRP78为靶点来改善肿瘤耐药的新思路。方法：本实验自主设计了一个可用于药敏检测及蛋白半定量的三维联合共培养微流控芯片体系，通过灌注细胞悬液-凝胶混合物于三维培养池内来实现胃癌细胞系的三维培养。应用凋亡染色方法检测SGC7901细胞单独培养组（对照组）、SGC7901细胞+NFs共培养组、SGC7901细胞+CAFs共培养组中SGC7901细胞对不同浓度的化疗药物顺铂的药物敏感情况。应用免疫荧光法检测对照组和实验组SGC7901细胞GRP78表达。结果：SGC7901细胞+CAFs共培养组与单培养组相比，SGC7901细胞对顺铂的敏感性较SGC7901细胞单独培养时低（P<0.05），SGC7901细胞+CAFs共培养组SGC7901细胞中GRP78蛋白表达较对照组升高（P<0.05）。结论：CAFs可以诱导人胃癌SGC7901细胞对顺铂耐药；CAFs可能通过上调人胃癌SGC7901细胞中GRP78的表达而导致耐药。

【关键词】 微流控芯片； 肿瘤相关成纤维细胞； 胃癌； 耐药

The Relevance of CAFs Influencing the Drug Resistant of Gastric Cancer Cells and the GRP-78 Expression Based on Microfluidic Chip/SHUAI Zhi-feng，HAN Cui-cui，ZHANG Xiao-jie.//Medical Innovation of China，2016，13（09）：005-008

【

【Key words】 Microfluidic chip； Cancer-associated fibroblasts； Gastric cancer； Drug resistance

First-author’s address：Basic Medical College，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.09.002

胃癌是我国最常见和死亡率最高的恶性肿瘤之一[1-2]，严重影响人们的生命和健康。化疗是治疗进展期和转移性胃癌的主要方法，但现应用5-FU、顺铂和紫杉醇为基础的各种联合化疗方案的总体有效率只有20%～40%，肿瘤细胞对化疗药物产生耐受性常常导致化疗失败[3-4]。已有研究发现，CAFs在肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等过程中均起到了重要作用，并可能与肿瘤的耐药性相关[5-6]。微流控芯片是一种在微米尺度空间对流体进行操纵为主要特征的科学技术，由于芯片中流体通道直径与细胞生长所需空间相适宜，通过连续动态供养、多种细胞的三维共培养，使细胞生长环境更加类似于其在体内的真实生长状态[7]。因此，本研究拟通过微流控芯片平台进行CAFs、NFs和胃癌细胞共培养，来探索CAFs影响胃癌细胞对化疗药物的耐药及其与GRP78表达的相关性，从而为临床工作提供以CAFs和GRP78为靶点来改善肿瘤耐药的新思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞系 人胃癌细胞系SGC7901细胞，为齐齐哈尔医学院医药科学研究院提供。

1.1.2 新鲜组织获取 人新鲜胃癌组织来源于本院附属医院肿瘤外科，人包皮新鲜组织来源于本院附属医院泌尿外科，均由术中获取，获取前经患者或家属知情同意和本单位伦理委员会许可。

1.1.3 主要试剂 优质胎牛血清、碘化丙碇（PI）染色剂、羊抗人GRP78抗体、鼠抗人平滑肌肌动蛋白抗体SMA和鼠抗人β-actin抗体均购自Sigma公司；FITC标记荧光二抗、辣根酶IgG抗体、蛋白提取剂试剂盒和BCA蛋白定量试剂盒均购自碧云天公司；基底膜提取物（BME）购自R&D Systems公司；RPMI1640和IMDM基础培养液购自hyclone公司；顺铂购自Aladdin公司。

1.2 方法

1.2.1 微流控芯片的构建与处理 本课题组设计了微流控芯片CAD图形，并交于大连海事大学基于标准软光刻技术制作SU-8负胶模板。此设计用于药敏检测及蛋白半定量的三维联合共培养微流控芯片体系，通过灌注细胞悬液-凝胶混合物于三维培养池内来实现胃癌细胞系的三维培养；通过中部连接通道上的二维培养单元来实现成CAFs、NFs与胃癌细胞的非接触式共培养；并通过微型注射泵持续注入实现流动实时营养物供给，使细胞所处的环境更加接近体内肿瘤微环境，以便模拟人体内肿瘤的真实状况。主要方法：于模板上制作PDMS基片，等离子清洗活化PDMS基片和玻璃载玻片，使之相互键合，完成芯片制备过程。使用前，向芯片的进液孔注入无水乙醇并使之充满整个通道，然后用蒸馏水冲洗乙醇，操作3次，将芯片于高压蒸汽锅内高压灭菌，烘箱中烘干，紫外消毒后使用。微流控芯片及局部结构示意图见图1。

1.2.2 实验分组 实验分单培养组（对照组）和共培养组（实验组）。对照组为单培养组（胃癌细胞系SGC7901细胞），共培养组分为SGC7901细胞+CAFs共培养组、SGC7901细胞+NFs共培养组。

1.2.3 药敏检测 三组芯片中各实验组细胞培养48 h后，通过MS26微量泵经芯片药物入口将顺铂泵入芯片，将芯片置于孵箱内诱导48 h。PBS注入芯片，冲洗细胞后向芯片中注入PI染液，倒置荧光显微镜下观察。

1.2.4 耐药相关蛋白表达 三组芯片中各实验组细胞培养48 h后，免疫荧光检测各实验组细胞中GRP78蛋白的表达。

1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 顺铂药物敏感性的检测 为了验证CAFs对肿瘤细胞药物敏感性的影响，笔者把各实验组细胞用顺铂作用48 h，PI染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。SGC7901细胞+CAFs共培养组与单培养组相比，SGC7901细胞对顺铂的敏感性较SGC7901细胞单独培养时低（P<0.05），见图2。

2.2 GRP78蛋白表达的检测 为了验证CAFs和SGC7901细胞共培养后对SGC7901细胞中GRP78蛋白表达的影响，以及探讨GRP78的表达与CAFs引起的肿瘤细胞对顺铂耐药的相关性，用芯片平台免疫荧光法检测SGC7901细胞GRP78蛋白表达水平。SGC7901细胞+CAFs共培养组SGC7901细胞中GRP78蛋白表达较对照组升高（P<0.05），见图3。

3 讨论

胃癌的发病率占消化系统肿瘤的第一位，是我国死亡率最高的恶性肿瘤之一。早期胃癌主要通过手术治疗，而晚期和转移性胃癌主要依靠化疗，但胃癌的耐药现象往往导致胃癌化疗失败，因此探讨胃癌耐药机制成为一项重要的研究课题[7-8]。

以往的大量体外实验研究证实，许多化疗药物均能显著诱导胃癌细胞系发生凋亡，但这一结果在内体研究时往往效果并不明显，因为体内肿瘤微环境要远比体外单一的实验环境复杂得多，尤其是肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）可能参与了胃癌细胞的耐药过程[9]。

本课题组构建了微流控芯片细胞三维共培养平台实现肿瘤相关成纤维细胞与胃癌细胞的非接触共培养，探讨CAFs对胃癌细胞耐药性的影响。微流控芯片技术构建的实验室具有微型化、高通量、集成化的优势，能实现肿瘤细胞的三维动态培养。利用微流控芯片将肿瘤细胞和间质细胞进行共培养，芯片通道与细胞大小相适应，模拟了细胞在体内生长所需的空间；利用微量泵给细胞提供流动培养基，并带走代谢废物，更加真实地模拟肿瘤在体内的生存状态，构建了体内肿瘤微环境，是进行肿瘤相关研究的理想模式。

肿瘤间质相关成纤维细胞（CAFs）与创伤修复过程中的成纤维细胞不同，不再向正常表型转化，而保持持续活化的特征，并通过产生各种细胞因子促进临近肿瘤细胞的生长、侵袭和转移，促进肿瘤的演进。CAFs和肿瘤细胞之间的相互作用表现在许多方面，它还可能与肿瘤细胞的耐药性有关，而以往对肿瘤耐药性的研究多侧重于肿瘤细胞本身，但越来越多的研究者发现肿瘤间质成分可能通过各种途径影响肿瘤细胞的耐药性。为了验证CAFs对肿瘤细胞药物敏感性的影响，笔者把各实验组细胞用顺铂作用48 h，PI染色后显微镜下细胞凋亡情况。结果显示CAFs+SGC7901共培养组与单培养组相比，SGC7901细胞对顺铂的敏感性较SGC7901细胞单独培养时低（P<0.05），表明CAFs能降低顺铂对胃癌细胞的敏感性，促进SGC7901细胞对顺铂的耐药。此前有研究者发现CAFs与抗血管生成药的耐药性的产生有关，能引起肿瘤细胞对西妥昔单抗的耐药[10-11]。

CAFs可能通过代谢调节、免疫调节等途径促进肿瘤细胞的耐药。肿瘤细胞由于增殖速度快，必然导致营养相对供应不足，造成局部低氧和酸中毒的微环境，可诱导葡萄糖调节蛋白（Glucose regulated proteins，GRPs）的产生[12]，其中GRP78是这种应激性蛋白的代表。它是一种内质网分子伴侣蛋白，许多研究报道GRP78高表达与某些肿瘤细胞耐药相关[13-15]。本研究用微流控芯片平台免疫荧光法检测SGC7901细胞GRP78蛋白表达水平，探讨CAFs引起的胃癌细胞对顺铂的耐药是否能引起与GRP78蛋白表达的改变。结果CAFs与SGC7901细胞共培养组SGC7901细胞中GRP78蛋白表达较对照组升高（P<0.05），因此推断，CAFs引起的SGC7901细胞对顺铂耐药与GRP78蛋白的表达有一定相关性。

综上所述，肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤微环境中最主要的宿主细胞，肿瘤微环境中的CAFs可能通过增加肿瘤细胞中GRP78蛋白的表达而引起胃癌细胞对顺铂的耐药，微流控芯片构建的肿瘤细胞成纤维细胞共培养体系能真实模拟体内肿瘤微环境，是研究肿瘤的理想模式。

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（收稿日期：2015-12-09） （本文编辑：欧丽）

作者：帅智峰　韩翠翠　张晓杰