肿瘤因子胃癌分析论文提纲

2022-11-15

论文题目：EphA1对胃癌发生发展的促进作用及其潜在分子机制研究

摘要：研究背景我国胃癌（Gastric cancer,GC）发病率及死亡率均呈现持续增长趋势,外科手术切除联合全身化疗的诊治效果并不令人满意,新近出现的分子靶向治疗改变了胃癌的治疗模式,但仍需探寻更多胃癌肿瘤标志物及抗胃癌作用靶向药物来提高胃癌的治疗效果。越来越多研究提示促红细胞生成素产肝细胞激酶受体A1（erythropoietin-producing hepatocyte kinase receptor A1,EphA1）可能促进胃癌的发生发展、侵袭与转移,有望成为胃癌新的分子治疗靶点,但针对胃癌与EphA1的研究缺乏系统的体内体外研究,且尚未有对其可能机制的深入完整研究。对肿瘤微环境的研究已成为当前癌症研究的一大热点,研究发现肿瘤微环境中各种细胞会分泌大量细胞因子改变微环境性质,这些与肿瘤的生长、侵袭和转移有着非常密切的联系。肿瘤微环境中肿瘤细胞和非肿瘤细胞均可分泌大量VEGF,作为重要的肿瘤血管生成促进因子并大量存在于肿瘤微环境中,它与胃癌的恶性程度、侵袭转移潜能及预后密切相关。恶性肿瘤第八大生物学特征的炎症在肿瘤发生发展、侵袭转移过程中发挥重要作用,肿瘤微环境中存在大量炎症细胞因子,它们不仅可以募集炎症细胞到肿瘤部位,放大炎症效应,还可促进肿瘤细胞生长和转移,促进肿瘤血管、淋巴管生成。有研究表明Eph家族成员不仅作用于肿瘤细胞,也对肿瘤微环境的调整起重要作用,但检索文献未得到肯定结论,还需进一步分析研究。综上所述:新近研究表明Eph家族中EphA1可能促进了胃癌的发生发展、侵袭与转移,可能成为胃癌分子靶向治疗的一个新靶点;胃癌作为一个炎症相关性实体恶性肿瘤,其生长转移离不开存在于肿瘤微环境中提供营养的肿瘤血管生成和构成非可控慢性炎症状态的持续炎性细胞浸润;与RTK家族其他成员一样,Eph家族被许多文献报道参与了肿瘤微环境的调整,可能通过改变肿瘤细胞血管新生和细胞所处炎症微环境来影响肿瘤细胞的生长和转移。但到目前为止,以上这些研究都未有定论,检索文献尚未见到关于胃癌、EphA1、肿瘤微环境三者关系的研究。由此我们提出设想:EphA1是否能通过调整肿瘤微环境中肿瘤血管生成（如改变重要血管生成因子VEGF的表达）和炎性细胞浸润（如改变可激活肿瘤细胞中的NF-κB及STAT3炎症信号通路关键分子IL-6的表达）来促进胃癌发生发展。本课题以EphA1与胃癌之间的关系研究为切入点,提出EphA1可能通过调整胃癌肿瘤微环境中VEGF、IL-6细胞因子来影响肿瘤血管新生和炎症微环境,从而促进胃癌发生和发展的假说,拟从临床标本到实验室,从体外细胞实验到体内动物实验多维角度进行研究验证,以期深入阐明EphA1与胃癌发生发展相关性及其潜在作用机制,为胃癌的诊断和靶向治疗提供新的线索,为开发新的抗肿瘤药物提供候选靶标。第一章 EphA1在胃癌组织中的的表达水平及其与肿癯微环境标志物VEGF、IL-6的关系目的:研究胃癌组织中EphA1表达与胃癌发生发展的关系并探讨其表达水平与肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6表达水平的相关性,进一步明确其作为胃癌基因治疗新靶点可能性。方法:1.应用IHC方法从蛋白水平检测胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中EphA1、VEGF、IL-6的表达情况并分析三者之间的关系。2.应用qRT-PCR方法从基因水平检测胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中EphA1、VEGF、IL-6的表达情况并分析三者之间的关系。3.分析EphA1表达与胃癌组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期情况等临床特征的关系。4.分析EphA1表达与胃癌患者术后生存率的相关性。结果:1.EphA1在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中蛋白、基因表达都呈逐渐递减趋势,癌组织中表达水平显著高于癌旁组织和正常胃黏膜组织。2.癌组织中EphA1蛋白表达水平愈高,肿瘤生物学特征愈差（如肿瘤直径越大、分化程度越差、TNM分期越晚、淋巴结转移越多）,患者总生存期（OS）越差,Cox多因素生存分析显示EphA1是胃癌患者独立的生存预后因子。3.VEGF、IL-6在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中蛋白、基因表达也都呈逐渐递减趋势。且癌组织中表达水平显著高于癌旁组织和正常胃黏膜组织。4.进一步行相关性分析显示胃癌组织和癌旁组织中EphA1、VEGF、IL-6三者蛋白表达水平呈明显正相关。结论:在胃癌组织标本中发现EphA1可促进胃癌的发生发展并影响胃癌患者生存预后,EphA1可作为胃癌基因治疗的新靶点;EphA1可能通过提高肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6细胞因子的分泌水平来促进胃癌发生进展。第二章体外实验验证EphA1可促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移及上调肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6的表达目的:从体外实验层面验证EphA1可促进胃癌发生发展及其潜在机制为上调肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6表达水平的假说。方法:1.构建人EphA1基因干扰人胃癌细胞株SGC7901慢病毒稳定株,设为沉默组（实验组）;2.构建人EphA1基因过表达人胃癌细胞株SGC7901慢病毒稳定株,设为过表达组（实验组）;3.MTT 比色法、Transwell（侵袭和迁移能力）实验、流式细胞术检测分析并对比沉默组（实验组）、过表达组（实验组）、正常对照组（正常人胃癌细胞株SGC7901）三组细胞增殖、侵袭转移、凋亡能力;4.qRT-PCR方法检测沉默组（实验组）、过表达组（实验组）、正常对照组（正常人胃癌细胞株SGC7901）三组细胞中VEGF、IL-6的基因表达变化;5.Western blot法检测沉默组（实验组）、过表达组（实验组）、正常对照组（正常人胃癌细胞株SGC7901）三组细胞中VEGF、IL-6的蛋白表达变化。结果:1.过表达组（实验组）细胞增殖、侵袭迁移能力较正常对照组增强而凋亡能力减弱,沉默组（实验组）细胞增殖、侵袭迁移能力较正常对照组减弱而凋亡能力增强;2.过表达组（实验组）细胞中VEGF、IL-6的基因表达水平较正常对照组提高,而沉默组（实验组）细胞中VEGF、IL-6的基因表达水平较正常对照组降低;3.过表达组（实验组）细胞中VEGF、IL-6的蛋白表达量较正常对照组增多,而沉默组（实验组）细胞中VEGF、IL-6的蛋白表达量较正常对照组减少。结论:上调EphA1基因表达可促进胃癌细胞增殖迁移能力并增加VEGF、IL-6的表达水平,下调EphA1基因表达可抑制胃癌细胞增殖迁移能力并减少VEGF、IL-6的表达水平;EphA1可促进胃癌细胞增殖迁移能力,其机制可能与上调胃癌细胞VEGF、IL-6表达水平有关。第三章体内实验验证EphA1可促进胃癌移植瘤发生发展并增加癌组织中肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6的表达水平目的:从体内实验层面验证EphA1可促进胃癌发生发展及其潜在机制为上调肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6表达水平的假说。方法:1.构建人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型:将EphA1基因干扰SGC7901细胞株种植在裸鼠皮下设为沉默组（实验组）,将EphA1基因过表达SGC7901细胞株种植在裸鼠皮下设为过表达组（实验组）,将正常人胃癌细胞株SGC7901种植在裸鼠皮下设为正常对照组;2.形态观察:观察并比较每组裸鼠成瘤率、首次成瘤时间,观察并比较每组裸鼠皮下移植瘤生长速度;3.qRT-PCR方法检测沉默组（实验组）、过表达组（实验组）、正常对照组（正常人胃癌细胞株SGC7901）三组裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、IL-6的基因表达情况;4.Western blot法检测沉默组（实验组）、过表达组（实验组）、正常对照组（正常人胃癌细胞株SGC7901）三组裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、IL-6的蛋白表达情况。结果:1.与正常对照组相比,过表达组（实验组）裸鼠皮下移植瘤成瘤率高、成瘤早、肿瘤生长快,瘤体更大,而沉默组（实验组）裸鼠皮下移植瘤成瘤率低、成瘤迟、肿瘤生长慢,瘤体稍小;2.过表达组（实验组）裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、IL-6的基因表达水平较正常对照组高,而沉默组（实验组）裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、IL-6的基因表达水平较正常对照组低;3.过表达组（实验组）裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、IL-6的蛋白表达量较正常对照组升高,而沉默组（实验组）裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、IL-6的蛋白表达量较正常对照组降低。结论:增强EphA1表达后可明显促进胃癌裸鼠皮下移植瘤的发生发展并增加VEGF、IL-6的表达,敲低EphA1表达后可显著抑制胃癌裸鼠皮下移植的发生发展并减少VEGF、IL-6的表达;EphA1可促进胃癌移植瘤发生发展,其机制可能与增加瘤组织中VEGF、IL-6表达水平有关。

关键词：胃癌;EphA1;肿瘤微环境;VEGF;IL-6

学科专业：外科学（普外）（专业学位）

英文缩略词表

中文摘要

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前言

第一章 EphA1在胃癌组织中的的表达水平及其与肿瘤微环境标志物VEGF、IL-6的关系

1. 引言

2. 材料与方法

3. 统计学分析

4. 结果

5. 讨论