一种经济可行的鉴定葡萄球菌的方法

葡萄球菌是引起人类各种感染的常见病原菌之一。以往只认为金黄色葡萄球菌是致病的, 而其它凝固酶阴性的葡萄球菌 (coaglualase negative Staphylococcus CNS) 是人类及动物皮肤与粘膜上正常菌群之一。但近年来这些葡萄球菌又成为尿路感染, 菌血症或败血症, 心瓣膜修复术、长期流动性腹膜析等重要医源性感染的病原菌[1~5]。因此, 有必要对所有的葡萄球菌都进行准确的鉴定。鉴定葡萄球菌的方法较多, 目前应用较多的是Kloos 1982和1985年[7~8]提出的方案生产的各种试剂盒, 但进口试剂盒价格昂贵, 鉴定值也不算高, 给病人加重了负担。因此, 本文为寻找一种价格远低于进口试剂盒, 而鉴定值又比较高的适合我国国情的简单快速的方法进行了尝试, 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 菌株来源

我们挑选了中山医院近期临床分离出的93株的葡萄球菌及上海市第一人民医院提供的由Vitek鉴定出的5株菌。

1.2 方法

根据Manual of Clinical Microbiology1995年版上提供的鉴定葡萄球菌的试验, 再结合API、Vitek等我们从中挑选了针对性和特异性较高的20种反应, 制成微量生化反应板条, 同时用氧化酶、葡萄糖发酵、触酶、凝固酶、菌落色素、溶血情况为补充试验。

上表中 (表1) , 1~2及23~26不放在板条上, 分开做, 3~22一共20种反应按照一定配方配制后, 加入20孔的塑料板条, 每孔100u L, 冰冻保存。使用时, 每孔加入浓度相当于0.5McFarland的待测菌悬液100uL, 其中精氨酸、鸟氨酸、尿素滴加石蜡油以提供厌氧环境, 放入35℃温箱18~24h后即可读结果。其中VP与硝酸盐还原需滴加试剂后10min内读结果。板条上20孔的反应结果与氧化酶、葡萄糖发酵、及凝固酶触酶、色素、溶血得到一个9位号码, (氧化酶和葡萄糖发酵组成一个号码, 其它24个反应每3个组成一个号码) , 将号码输入已设计的软件中, 即可得到鉴定结果及其鉴定值。

注:*:API中碱性磷酸酶为阴性, 若为阳性鉴定值可达96.5%, **:API未鉴定出来, 得到的编码查不到结果

1.3 比较试验

挑选出其中的20株菌, 同时做现在临床应用较多API Staph。

2 结果

我们对98株菌鉴定出的结果, 发现其中60.7%的菌株鉴定值>80%, 但也有11.8的菌株鉴定值较低<60%。鉴定值特别低的菌株多为一些较少分离出的菌株, 如海葡萄球菌, 中间型葡萄球菌等, 可能为非对人致病菌, 详见表2。

对其中25株鉴定值较高的菌株API作对照的结果详见表2, 表4。

从上面的结果对比可看出, 该方法对金葡, 表葡的鉴定值比较高, 与API的一致性也较高 (金黄色葡萄球菌的一致性可达100%, 表皮葡萄球菌也达到了85.7%, 因为其中有1株表皮葡萄球菌API没有鉴定出来) 。但对其它CNS的鉴定值比较低, 与API的一致性也只有50%。

3 讨论

从以上试验结果可看出, 我们所正在研究的方法与API对20株葡萄球菌的鉴定一致性达到了80%, 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌还要高。从中也可以发现API Staph仍然对一部分葡萄球菌未能鉴定出结果来。相信经过不断的摸索与改进, 该方法一定能够更加成熟与完善, 能够造福于更多的病人。

摘要：目的为寻找一种经济简单快速的鉴定葡萄球菌的方法。方法20孔微量生化板条, 再加上氧化酶、葡萄糖发酵、凝固酶、触酶、溶血、色素, 反应结果得到一个9位号码, 输入设计的软件中, 于此得到被测菌的鉴定结果, 并与APIStaph作了比较。结果60%以上的细菌鉴定值>80%, 20株与API符合率达到了80%, 其中, 金黄色葡萄球菌的符合率为100%, 表皮葡萄球菌为85.7%。结论鉴定葡萄球菌的方法较多, 目前应用较多的是Kloos1982和1985年[7～8]提出的方案生产的各种试剂盒, 但进口试剂盒价格昂贵, 鉴定值也不算高, 给病人加重了负担。因此, 本方法是一种价格远低于进口试剂盒, 而鉴定值又比较高的适合我国国情的简单快速的方法之一。

关键词：葡萄球菌,鉴定

参考文献

[1] Hovelius B.Rev Infect Dis, 1984, 6 (3) :3～4.

[2] Kinchoff LV.Clin Res, 1982, 10 (2) :238～240.

[3] Herchline JE.Occurrence of Staphylococcus lugdunensis in Consecutive Clinical cultures and Relationship of Isolation to Infection[J].J Clin Microbiol, 1991, 29 (3) :419～421.

[4] Grver LD.J Antimicrob Chemether, 1984, 13 (5) :577～560.

[5] 罗海波.葡萄球菌的研究进展[J].浙江医科大学学报, 1984, 13:144～148.

[6] Kloos WE.Identificition of Staphylococcus species with the API Staph-Ident system[J].J Clin Microbiol, 1982, 16:509～512.

[7] Linnette EH.Manual of Clinical Microbiology[M].4th edition, DC:Ameri-can Society for Microbiology, 1985:143～153.