水质中细菌总数检验中不确定度评定

生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后, 水中的细菌数量可大量增加, 其中病原菌也随之增加, 引发传染, 危害人类健康, 因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度, 在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值, 它是评价水质污染程度的重要指标之一。

我们采用平板计数法, 检验水中的细菌总数, 细菌总数是指1m L水样在营养琼脂培养基中, 于37℃经24h培养后, 所生长的细菌菌落的总数 (CFU) 。在实验过程中根据相关规定, 每次实验必须由同一实验人员, 进行平行样测定, 因此, 我们采用同一阳性水样, 做15份平行样, 对水质中细菌总数进行平行样评定。但这个过程中一定会存在无法避免的误差, 即不确定度, 本实验在此对水质中细菌总数检验中不确定度进行评定。

一、实验材料与依据

1.1测试样品:

以正规采样方法采集的, 已确定为阳性的水样。

1.2实验材料

培养基:营养琼脂 (青岛高科园海博生物技术有限公司)

稀释水:超纯水装置制备的纯化水, 经121℃, 高压灭菌15min, 冷却至室温

定量移液管、90cm培养皿、250ml锥形瓶

1.3实验设备

超净工作台型号:BCN-1360B, 生产厂家:北京东联哈尔仪器制造有限公司

恒温培养箱型号:HPP-9272, 生产厂家:北京东联哈尔仪器制造有限公司

鼓风干燥箱型号:HPG-9245, 生产厂家:北京东联哈尔仪器制造有限公司

高压灭菌锅型号:ES315, 生产厂家:日本Tomy

超纯水装置型号:611UF, 生产厂家:赛多利斯

1.4实验依据

《水和废水监测分析方法》第四版, 细菌总数的测定B (P694) ,

二、实验方法:

2.1实验准备

2.2.1实验前, 先将实验用器具用高压灭菌锅以121℃, 20min灭菌, 并用鼓风干燥箱烘干;

2.2.2超净工作台无菌操作区域台面, 用75%酒精擦拭;实验前紫外照射20mins, 开启风机10mins, 进行实验操作过程中保持风机开启;

2.2.3确认实验用仪器设备在检定周期范围内, 同时可以正常使用;

2.2.4确认水样为阳性, 同时并确认菌落范围, 原水样菌落数超出300, 稀释10倍后菌落数在30~300之间;

2.2.5以无菌操作, 准备15份水样。

2.2实验操作

2.2.1营养琼脂培养基灭菌后, 自然冷却, 在温度在50℃左右时, 进行实验;

2.2.2以无菌操作的方式, 取1ml水样置于已灭菌的培养皿中, 倒入15~20ml, 45℃左右的营养琼培养基, 立即旋摇 (不能将培养基摇到平皿外) 充分混匀;一份样品要做平行样对照;

2.2.3待营养琼脂培养基凝固后, 翻转平皿, 底面朝上, 置于37℃恒温培养箱培养;

2.2.4培养24小时后, 去除平皿, 进行菌落计数。

2.3数据模型

细菌总数=A××fn

式中:A培养后细菌总数cfu/ml;

fn为样品的稀释倍数;

三、结果与讨论

3.1稀释倍数不确定度分量:

根据方法要求, 取1ml水样加入到9ml无菌水中, 以稀释样逐级稀释;此间使用定量移液管, 根据校准证书, 查看10ml、1ml分度吸管误差可计算标准不确定度分别为u1=±0.05、u2=±0.007;

3.2菌落数计数不确定度

根据检测方法的要求, 培养15份稀释样品平行测定阳性水样结果, 进行对数分析:

所有菌落数的平均值, A平均=125 cfu/ml。

3.3合成相对不确定度

3.4不确定度评定结果

按照方法进行分析测定, 扩展不确定度中, 取扩展因子K=2, U (C) =10×2=20, 即利用平板计数法检验水中细菌总数, 不确定度评定结果为细菌总数=125±20 cfu/ml。

摘要：以无菌操作的方式, 取1ml水样充分混匀于45℃左右的营养琼脂培养基中, 置于37℃恒温培养箱与培养24小时, 进行菌落计数;同时综合考虑到稀释倍数、平行检测及扩展不确定, 最终合成总不确定度, 进行水质中细菌总数检验中不确定度评定评定。

关键词：细菌总数,平板计数,不确定度

参考文献

[1] 国家环境保护总局, 水和废水监测分析方法 (第四版) [M], 细菌总数的测定 (P694) , 2002:694-697.

[2] JJF 1059-2012, 测量不确定度评定与表示[S].