胶片模板库

2024-04-29

胶片模板库（共4篇）

篇1：HBV感染者DNA模板库的制备

关键词：乙型肝炎病毒感染,模板库,基因多态性

乙型肝炎病毒 (HBV) 感染是一个严重的公共卫生问题, 我国1992年的血清流行病学调查结果提示:国内一般人群的乙型肝炎病毒表面抗原 (HBs Ag) 阳性率为9.75%[1], 属于HBV感染的高流行区。HBV感染后容易慢性化, 与肝硬化和肝癌的发生显著相关, 部分还可转变为重型肝炎[2]。目前在HBV感染的遗传易感性研究中, 疾病关联研究最常用。笔者进行HBV感染候选基因的关联研究所需的大样本量较欧、美等发达地区更具优势。关键之处则在于将收集的大量样本抽提出DNA并制备成分型所用96孔模板, 这无疑是进行疾病关联研究的基础和前提。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象选择本院传染科门诊及病房2012年2月-2014年12月就治的太原地区汉族居民, 静脉抽取10 m L EDTA-K2抗凝晨血:5 m L用于基因组DNA提取;5 m L用于病毒标志和生化检测;同时填写详细的临床资料并输入计算机。样本收集过程按照国家人类基因组研究伦理学准则进行, 获得了收集对象的知情同意。乙型肝炎依据2000年西安第十次全国病毒性肝炎会议修订“病毒性肝炎防治方案”制定标准诊断[3], 另外笔者收集了部分血站献血员作为正常对照。

1.2 方法

1.2.1 人白细胞基因组DNA提取

采用Miller盐析法[4]进行。 (1) EDTA-K2抗凝全血5 m L, 置于50 m L有盖圆底离心管内。 (2) 加6~8倍体积 (约35~40 m L) 蒸馏水, 反复颠倒混匀, 于4℃5000 g离心20 min。 (3) 倾倒上清后于沉淀中加入预冷的0.1%Triton-X100 (约35~40 m L) , 轻柔混匀沉淀, 再次于4℃5000 g离心20 min, 然后弃上清。 (4) 加入2 m L裂解液于沉淀中, 彻底打碎沉淀, 然后加入10%SDS 100μL至终浓度为0.5%, 混匀。 (5) 加入10 mg/m L蛋白酶K 50μL至终浓度为200μg/m L, 混匀, 于55℃4 h或37℃过夜消化。 (6) 加入6.0M Na Cl液0.7 m L, 剧烈振荡20 s。 (7) 7000 g离心20 min, 将上清移至50 m L有盖圆底离心管内。 (8) 加入2倍体积-20℃无水乙醇或95%乙醇, 反复颠倒混匀, 直至出现絮状沉淀, 挑出DNA至一eppendorf管中。 (9) 1 m L 75%乙醇洗涤DNA两遍。自然晾干, 用200μL TE溶解DNA (4℃需要3~7 d) 。 (10) 75%乙醇中的DNA离心, 弃上清。 (11) 凝胶电泳确定所提DNA, UV计测定纯度和浓度, 于TE中-20℃冻存。

1.2.2 模板的制备

(1) 将所抽提的DNA样本定量后加水稀释至终浓度5~10 ng/μL置于96孔PCR板中。 (2) 每个96孔PCR板的最后2孔设为空白对照不加DNA样本。 (3) 用铝箔胶带封口。 (4) 于Eppendorf Centrifuge 5810R冷冻离心机中离心5 min。 (5) 置-20℃冰箱冻存备用。

2 结果

历时将近两年, 去除因各种原因资料不全以及极少数抽提DNA不理想的样本, 共收集到2561份DNA标本, 全部制备成96孔模板。其中, 男1940例, 女621例, 年龄21~75岁。

收集的病例包括急性乙型病毒性肝炎 (AHB) 15例, 乙肝病毒携带者 (As C) 279例, 慢性乙型病毒性肝炎 (CHB) 1497例, 肝癌 (HCC) 23例, 肝硬化 (LC) 218例, 重型乙型病毒性肝炎 (SHB) 168例, 自身免疫性肝炎 (AIH) 15例, 慢性丙型病毒性肝炎 (CHC) 16例, 原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 5例, 其他原因所致疾病 (Others) 104例, 同时收集正常献血员 (BD) 221例, 详细患者临床资料见表1。

采用盐析法提取全血基因组DNA质量稳定, 如图1所示。制备的96孔模板 (铝箔胶带封口并标注后冻存) , 如图2所示。

3 讨论

乙型肝炎呈世界性流行, 不同地区HBV感染的流行强度差异很大, 据世界卫生组织报道, 全球约20亿人曾感染过HBV, 其中3.5亿人为慢性感染者, 每年约有100万人死于HBV感染所致肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌。因此, 它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病, 也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种疾病。本试验所收集到的HBV感染病例中, 急性感染者仅占0.68% (15/2200) , 其余分别表现为慢性肝炎、乙型肝炎病毒携带、肝硬化甚至肝癌等慢性HBV感染状态。当然, 除归结于诸多隐性HBV感染外[6], HBV感染所致较高慢性化程度的本质也暴露无疑。笔者收集的病例包括乙肝病毒携带者、急性乙型病毒性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等HBV感染所致的所有疾病谱。而且在收治的所有肝病中, 确诊有HBV感染的占94.02% (2200/2340) , 再一次强势表明HBV感染仍是今后较长时期面临的主要疾病[5], 因而有关HBV感染的研究也将任重而道远。此外, 自身免疫性肝病作为一种发病机理不明的疾病与许多疾病有关联, 且由于最初的临床症状与病毒性肝炎症状相似, 临床上诊断比较困难。因此, 准确及时地监测出自身免疫性肝病的特异性自身抗体无疑对诊断以及进一步治疗具有重要意义。临床上最典型的自身免疫性肝病包括:原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 和自身免疫性肝炎 (AIH) 。随着检测水平的不断提高和检测手段的日趋完善, 原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎等诸多自身免疫性肝病的诊断一定会愈来愈受到重视。

以生物学功能相关的基因作为候选基因进行疾病关联研究, 是当前宿主遗传易感性研究的主要策略。关联研究是一种简单、实用的分析技术, 就是发现存在于大量数据集中的关联性或相关性, 从而描述了一个事物中某些属性同时出现的规律和模式。关联研究不必知道疾病的遗传模式、表现型比率、不完全外显率、遗传异质性等, 便于设计及开展, 而且大量样本可产生重复性良好的结果。关联研究最重要的是应该避免因群体混杂或分层而出现的虚假的阳性关联结果, 为避免这种情况的发生, 可采取一些措施:临床分型详细、适当;病例和对照应受相同病因作用, 排除疾病异质性;样本量足够大;病例/对照性别、年龄匹配。本试验中笔者所收集到的样本量足够大, 病例和对照人群来自太原地区, 病例与对照之间的年龄、性别基本匹配, 临床分型严格按照西安全国肝病会议制定的诊断标准执行, 保证了进行关联研究的需要。

由于分散性的进行样本收集, 笔者采取了一定的策略:零星收集标本后冻存, 然后集中进行提取。收集标本的同时填写详尽的临床学资料并录入电脑, 这样排除了样本重复的可能。笔者还将患者既往情况、既往住院病历从信息科一一调出核查证实以确保详实地反映患者的疾病状况尤其是HBV感染状态、肝脏功能等, 另外, 笔者收集标本、抽提DNA以及制作模板的过程当中, 完全按所收集标本时间的先后顺序依次完成, 始终未将患者的诊断考虑在内, 从而保证了样本的随机性。

篇2：珠影影库冷冻老胶片

仓库用一种简单明了的方式标记着历史，在仓库的横梁上标注着“1958年到1982年的故事片”，或者“1958到2005年的纪录片素材”等，这样便将300平米的空间分为不同的区域，建厂以来拍摄的将近一千部电影胶片都清晰地安了家，每个胶片上都贴着有具体的名字和年代。

仓库保管员黄永强穿着白大褂，像个医生一样照顾着这些记载着故事的古董们，因为广州这种温度高又潮湿的地方特别难以保存老胶片，因此他每年必须要将所有的胶片和拷贝倒片两次，这是初步检查，看看有没有积压灰尘，长出溴化银（老胶片时间久了会分泌出来的一种物质），这是容易解决的问题，只要用酒精和绒布擦去就行了，如果是断裂，也能用接片机修复。但是胶片磁孔损坏或者需要坚膜（胶片处理步骤之一），就得依靠厂里的冲印中心来治疗，更严重的话就直接送到国家数字中心进行彻底修复。珠影的《雅马哈渔档》《烈火金刚》《孙中山》等片子的胶片都曾送到北京，修复好之后会在国家档案馆和珠影里各留一套拷贝，这样的双保险下，再也不用担心老电影会消失不见了。

需要修复的影片并不以时间长度为依据，比如广东观众熟悉的《72家房客》是上世纪60年代初期作品，虽然有轻微滑道，但总体情况还不错，还用不着送去修复。而这里保存的最早的纪录片——拍摄于1958年的《五一在广州》和最早的故事片——拍摄于1959年的《接班人》由于状态良好也没有拿去彻底修复。

如果老片子有新的使用，倒会成为修复的关键动力，而且会优先转成数字类型。黄永强说他有两件事印象很深，一个是广州电视台要做一期《横渡珠江》节目，需要珠影拍摄的纪录片《横渡珠江》来跟现在的“横渡”画面做对比，于是他们将老胶片修复好，转成数字类型以便电视台使用，没想到播出后反响特别好，广东台也把这资料借去做节目。还有一次，1959年拍摄的故事片《渔岛之子》经过修复后重新出碟，那会儿的小演员如今都是六七十岁的老人家了，他们听说这消息都特别高兴，纷纷自己掏腰包买影碟，说这是终生的纪念，“可见，老电影的修复太重要了，我们可以从中找到很多回忆。”

篇3：汽车用消音胶片

在汽车车身制造过程中通常采用糊状密封剂进行密封消音。汽车在运行中产生噪音的主要原因是车门, 而糊状密封剂只适用于缝隙较小和水平面薄板的消音, 对于汽车车门局部要求比较高的消音性能, 糊状密封剂很难达到要求, 因此, 需研制一种消音减振性能高、方便使用的产品, 以提高汽车舒适性。

我们提供一种无毒、无味、有良好减振消音效果良好的油面粘合力的汽车用消音胶片。该消音胶片以具有减振消音效果的合成橡胶和高效减振消音填充剂为主体, 配以改进塑性的热塑性树脂, 加入增粘树脂和高效吸油填充剂可提高胶片对带油钢板的粘接力, 防止在使用时胶片位移, 加入增塑剂可使橡胶软化, 利于施工;使得配制的胶片在保证足够粘接强度及良好消音减振的同时, 还具有很好的手工操作性。并可根据具体位置大小及特殊情况, 用手将成型的消音胶片放在所需处压实、抹平。施工过程中不粘手、无毒、无味, 因此, 它的应用不会对车厢内部及环境产生不良影响。

汽车用消音胶片, 是按重量百分比组成的组合物, 其组分组成及各组分的重量百分比范围是:

合成橡胶10%~25%, 热塑性树脂5%~15%, 增粘树脂5%~20%, 增塑剂10%~25%, 减振吸音填充剂25%~50%, 吸油增充剂10%~20%, 补强填料5%~10%。

制备汽车用消音胶片的方法包括以下步骤:

1、将10%~25%的合成橡胶、5%~15%的热塑性树脂、10%~25%的增塑剂、25%~50%的减振吸音填充剂、10%~20%的吸油填充剂、5%~10%的补强填料混合, 搅拌均匀, 在二辊开炼机上轧制成柔软固状物。

2、将5%~25%的增粘树脂与制成柔软固状物一起在捏合机中进行充分捏合。

3、用螺杆挤出机按产品尺寸要求挤出在防粘纸上。

4、敷合玻璃纤维布后按尺寸要求裁剪。

该汽车消音胶片可用于汽车制造过程中金属薄板大面积消音减振。使用时可用手直接操作, 无毒、无味, 容易与防粘纸脱离, 而且工艺性好, 粘贴后不位移, 可以经受车身制造后续的洗油、鳞化、电泳、喷漆烘烤等工序, 使用方便。

联系人:李建武

地址:天津市河西区泰山路6号

三友 (天津) 高分子技术有限公司