彩色多普勒检测子宫内膜癌阻力指数(RI)与术后检测微血管密度(MVD)关系的临床研究

目前认为血管生成在子宫内膜癌生长和侵袭过程中起重要作用, 并与其恶性程度及预后密切相关。微血管密度是一种反映血管生成的定量指标, 而CD105对血管新生的标记特异性最强[1]。本实验应用经阴道彩色多普勒血流显像技术, 检测子宫内膜癌中血流的变化, 关注阻力指数 (RI) 与术后CD105标记的微血管密度 (MVD) 表达关系, 以期为临床工作提供支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2004年1月至2009年12月在我院及他院确诊为子宫内膜癌的患者, 共收集130例, 年龄37～72岁, 平均54.1岁, 均经病理确诊。本组患者术前均未进行任何治疗。排除合并其它器官恶性肿瘤的患者。

1.2 彩色多普勒检测方法

应用彩色多普勒超声诊断仪, 阴道探头频率6.5MHz, 二维切面观察子宫内膜、宫腔内病灶大小、形态、内中回声及肌层浸润深度后, 选用CDFI多切面观察病灶内血流情况, 用脉冲多普勒获取稳定频谱图像后, 连续测量3个心动周期的RI值, 取其平均值。

1.3 主要试剂及免疫组化方法

CD105试剂购自武汉博士德生物技术有限公司, 检测应用免疫组化采用S-P法。主要步骤: (1) 将5μm切片脱蜡水化后, 用PBS冲洗。 (2) 用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复及EDTA抗原热修复。 (3) 每张切片加1滴过氧化物阻断溶液 (试剂A) 。 (4) PBS冲洗3次, 每次3min。 (5) 甩去PBS液, 每张切片加1滴非免疫性动物血清 (试剂B) , 室温下孵育10min。 (6) 甩去血清, 每张切片加1滴第一抗体, 室温下孵育60min或4℃过夜。 (7) PBS冲洗3次, 每次3min。 (8) 甩去PBS液, 每张切片加1滴生物素标记的第二抗体 (试剂C) , 室温下孵育10min。 (9) PBS冲洗3次, 每次3min。 (10) 甩去PBS液, 每张切片加1滴链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液 (试剂D) , 室温下孵育10min。PBS冲洗3次, 每次3min。甩去PBS液, 每张切片加2滴新鲜配制的DAB溶液, 显微镜下观察3～10min, 阳性显色为棕色。自来水冲洗, 苏木素复染, 分化, PBS冲洗返蓝。切片经梯度酒精脱水干燥, 中性树胶封固。操作过程中严格质控。

1.4 结果判断标准

肿瘤内微血管密度计数:低倍镜下 (40倍) , 每张切片中选择5个血管密度最高的区域, 然后在高倍镜下 (400倍) 统计每个区域的微血管数目, 其平均值即为微血管密度[2]。

1.5 统计学处理

实验数据应用SAS 6.12进行分析, 2组间定量资料比较采用t检验, 相关分析应用线性相关分析, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 子宫内膜癌RI值、MVD在不同临床特征中的表达意义

子宫内膜癌术前RI值与术后MVD值与肿瘤的肌层浸润及淋巴结转移密切相关, 见表1。

2.2 子宫内膜癌中RI与MVD的关系

子宫内膜癌中RI与MVD的表达呈负相关 (r=-0.43, P<0.05) 。

3 讨论

子宫内膜癌是女性生殖器官最常见的肿瘤之一, 虽然可通过诊断性刮宫于手术前获得诊断, 但是不能提示其病灶的累及深度、血管生成情况, 也不能提供对预后的判断信息[3]。因此, 手术前确切了解子宫内膜癌的更多与预后相关的特征, 对指导治疗和判断预后有重要意义[4]。而实体肿瘤的生长和转移依赖于肿瘤内新生血管的形成。CD105又名Endoglin, 是转化生长因子-β受体复合物成分一, 是与增生有关的内皮细胞膜抗原, 由2个单体通过二硫键连接而成。子宫内膜癌是高血管实性肿瘤, 血流丰富。对子宫内膜癌彩色多普勒血流与血管生成关系进行研究, 有助于深入了解肿瘤发生、发展及转移机制, 及进一步探讨其与肿瘤临床和预后的关系。彩色多普勒技术与其他影像学检查方法相比, 具有快速方便、操作简单及无辐射等优点, 且能提供有关肿瘤血管生长程度、分布、血流等信息, 是目前观察血管生成最方便、最先进的研究技术[5]。

本实验收集130例子宫内膜癌患者, 术前应用经阴道彩色多普勒超声检查, 计算RI, 术后采用免疫组织化学技术检测CD105标记的MVD, 结果显示子宫内膜癌中RI与MVD的表达与肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关, 而且RI与MVD在子宫内膜癌中呈负相关, 提示应用彩色多普勒检测RI可以反应子宫内膜癌的血管形成情况。由于肌层浸润及淋巴结转移情况均为与子宫内膜癌预后相关的指标[6], 因此术前检测RI可能对于判断肿瘤的预后具有一定价值。

血流是反映超声血流丰富程度的超声指标, 在超声图像上可宏观显示, 准确判断, 并可分级或定量[5]。血流参数与微血管密度的指标有密切关系, 提示这些超声指标可直观地反映微血管丰富程度, 为肿瘤血管生成的超声声像研究提供理论依据, 便于宏观无创的评价研究子宫内膜癌的发生、发展及其转移机制。有观点显示随着肿瘤的生长和血管新生, 子宫血流逐渐增加, 子宫动脉的血流改变与肿瘤体积成比例[7], 也证实了实验结果的客观性。

总之, 应用彩色多普勒检测RI可以反应子宫内膜癌的血管形成情况, 术前检测RI可能对于判断肿瘤的预后具有一定价值。

摘要：目的 探讨彩色多普勒检测子宫内膜癌血流阻力指数 (RI) 与术后CD105标记的微血管密度 (MVD) 的关系, 以积累经验, 指导临床工作。方法 收集130例子宫内膜癌患者, 术前应用经阴道彩色多普勒超声检查, 计算阻力指数, 术后采用免疫组织化学技术, 检测CD105标记的微血管密度, 探讨RI与MVD在不同临床特征中的意义及RI与MVD表达的关系。结果 子宫内膜癌中RI与MVD的表达与肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关, 而且RI与MVD的表达在子宫内膜癌中呈负相关。结论 应用彩色多普勒检测RI可以反应子宫内膜癌的血管形成情况, 且术前检测RI可能对于判断肿瘤的预后具有一定价值。

关键词：子宫内膜癌,彩色多普勒,阻力指数,CD105,血管生成,预后,免疫组织化学技术

参考文献

[1] 刘爱东, 庞久玲, 刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究[J].中国老年学杂志, 2009, 29 (7) :886-887.

[2] 赵妉勃, 姜慧峰, 刘爱东.结、直肠癌组织中Survivin和CD105的表达及意义[J].山东医药, 2008, 48 (32) :101-102.

[3] 余美, 雷建明.彩超检测子宫内膜癌血流及期MVD和VEGF表达的相关性[J].中国肿瘤生物治疗杂志, 2009, 16 (3) :300.

[4] 翟玉霞, 李从铸, 黄海擎.经阴道彩色多普勒超声术前判断子宫内膜癌肌层浸润程度[J].中国超声医学杂志, 2004, 20 (2) :140-142.

[5] 罗红缨, 李微, 谢艳霞.彩色多普勒超声检测膀胱癌血流及其与MVD、VEGF表达的关系[J].中国现代医生, 2009, 47 (11) :17-19.

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