微生物检验性能验证

第一篇：微生物检验性能验证

酶联试剂性能验证方案

验证试剂名称： 验证时间：

验证实验室负责人: 本方案根据ISO15189要求制定，适用于酶联试剂项目的性能验证，本方案从特异性、敏感性、测定下限 、重复性(包括CUT-OFF值的重复性)、符合率5个方面对各个试验项目进行评价。 实验准备：

1、质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。

2、样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。

一、特异性

1、 特定病原体以外感染性疾病患者的样本。

2、 含有干扰性物质的样本：类风湿因子(RF)阳性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素样本。

结果判断：非特定病原体感染患者样本均应为阴性。含一定浓度干扰物质的样本检测应为阴性。

二、敏感性

20份不同强度阳性标本在同一批检测，20次检测全部为可测出的阳性结果，我们认可该试剂灵敏度在可接受范围内。

三、检测下限

处于测定下限浓度(如临界点浓度+20%)的样本，重复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。

四、重复性

1、批内精密性

高、中、低三个浓度的样本，在一批检测内，重复检测20次(孔)，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。

判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤15%。

2、批间精密性

高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间内单次(孔或管)重复进行20批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。

判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤15%。

3、 cutoff值验证

将阳性样本进行一系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓度即为临界点。

五、符合率

20份已确诊为阳性和20份已确诊为阴性的标本在同一批检测，计算阳性符合率和阴性符合率，阳性符合率和阴性符合率应≥95%以上。

第二篇：卤化丁基橡胶塞二次灭菌后性能验证方案

XXXX有限公司

卤化丁基橡胶塞二次灭菌后性能验证

一、 目的：

1、考察卤化丁基胶塞两次灭菌后的性能变化;

2、通过实验数据对比，为胶塞二次灭菌的可行性提供依据。

二、试验依据：

1、YBB00042005注射液用卤化丁基橡胶塞

2、YBB00052005注射用无菌粉末用卤化丁基橡胶塞

3、Q/320281YDZ 1-2011注射用冷冻干燥无菌粉末用卤化丁基橡胶塞

三、试验方案：

1、取清洗干净的卤化丁基胶塞1000只，在高压灭菌器中121℃×30min灭菌;

2、将灭菌后的胶塞在90℃×2h条件下干燥，待用;

3、按照YBB00052005标准或Q/320281YDZ 1-2011标准用上述胶塞做全项检验(说明：溶血、全身急性毒性试验未作，热原试验用细菌内毒素试验替代);

4、将上述实验剩余胶塞(即第一次灭菌胶塞)按照步骤

1、2进行第二次灭菌处理，再按照步骤3进行全项检验;

5、将第二次灭菌后试验剩余胶塞再按照步骤4进行第三次灭菌及全项检验;

6、分别按照上述实验步骤，注射用无菌粉末用卤化丁基橡胶塞和注射用冷冻干燥无菌粉末用卤化丁基橡胶塞各做10组试验;

7、由于注射液用卤化丁基橡胶塞是终端灭菌，本方案没有进行验证。

四、结论：

1、对上述每类胶塞的10组试验数据进行整理并进行对比分析，找出卤化丁基橡胶塞经过第

一、

二、三次灭菌后的性能变化趋势。

2、通过数据分析，得出结论。

编制：审核：批准：

日期：日期：日期：

第三篇：卡方检验模型验证方法

卡方检验模型验证方法模型参数的验证方法主要使用卡方拟合度检验( Chi-square Goodness-of-fit Test )结合最大似然

估计( Maximum Likelihood Estimation )，并且使用QQ图(Quantile-Quantile Plot)证明验证结果。 具体的说，就是先假定采集的样本数据符合某一分布，通过最大似然估计方法估计出该分布的参数，然后 代入并用卡方检验计算相对于该分布的偏差。实践中我们对于一组样本数据，计算所有常见分布的偏差值， 选取偏差最小的分布做为该样本的拟合结果。另外，从QQ图直观上看，该分布做为拟合结果描绘出的曲线

必须近似为接近参考线的直线(见3.3)，否则我们就将数据拆分为多个部分进行分段的拟合(如对终端请 求包大小的拟合)。

1.1 卡方拟合度检验卡方检验是一种大样本假设检验法，用于检验随机事件中提出的样本数据是否符合某一给定分布。

它需要较

大量的样本数据及已知的待检验概率分布函数。

1.1.1 卡方检验原理对于一个服从二项分布的随机变量Y服从Binomial( n, p) ,

均值为,

方差

。 由中心极限定理，

设服从

符合标准正态分布N (0, 1)，所以Binomial( n, p1 ),

服从自由度为1的卡方分布 , , 。

则有

所以

同理对于k个随机变

量，均值分别为

，

在数据拟合时，先对数据分组，每组数据的实际个数即为随机变量

，

，，则数据拟合即为判

断是否符合分布，

该卡方分布的自由度为k-1-nep(k为随机变量个数，nep为估计参数的个数)。

1.1.2卡方检验步骤：假定样本服从某一给定分布。根据样本数据用最大似然法估计分布的密度函数参数。 设定置信度，对n个样本数据排序。

把排序后的数据分成k组，确定每组的上下限,(上下限确定方法不同对验证能力有影响，

为常数， 每组数据不少于5个)，为了方便起见，本项目中采用平均划分分组间隔，即使

对于所有的成立。

计算每组数据实际个数，第i组实际个数为。

计算每组数据期望个数，第i组期望个数为：连续：，其中F(x)为待验证的概率分布函数，离散：。 计算。 理论上说如果，则数据符合分布函数为F(x)的分布，

其中，nep为估计的参数的个数。但是由于实际采集的数据并非完全地符合某一分布， 总存在一定的偏差，计算出的值并不满足这个条件， 最小的分布作为验证结果。 所以我们使用的拟合标准为采用卡方估计值

第四篇：微生物验证

九味羌活颗粒

微生物限度检查方法学验证报告 目的：对九味羌活颗粒微生物限度检查方法进行方法学验证。方法：采用平皿记数法，分组分别使用5种实验菌验证。菌液组分别取各实验菌液注入培养基中培养，供试品对照组取供试液注入培养基中培养，试验组取供试液加菌液注入培养基中培养。通过3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次试验的回收率。采用观察大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌在相同环境下的培养来验证控制菌的检查方法。

1.实验材料

供试品九味羌活颗粒我公司自己生产，(批号：1003001规格：15g/袋)培养基：营养肉汤培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖甘酸培养基(MUG)均由中国药品生物制品检定所购买。

稀释液：PH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液。

菌种：细菌验证用菌种：枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63 501】金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26 003】 大肠埃希菌【CMCC(B)44 102】 霉菌验证用菌种：白色念珠菌【CMCC(F)98 001】黑曲霉【CMCC(F)98 003】以上菌种均由中国药品生物制品检定所购买，传代次数均未超过五代，采用菌种保藏技术，保证试验菌株的生物学活性。

2实验方法

2.1. 细菌、霉菌和酵母菌计数方法的验证

2.1.1. 菌液制备

(1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35℃～37℃培养18小时～24小时，取此培养液1ml至0.9%无菌氯化钠溶液9ml中，采用10递增稀释法，稀释至10-5 ～10-7 ，使菌液浓度为50cfu/ml～100cfu/ml。

(2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23℃～28℃培养24小时～48小时，取此培养液1ml至0.9%无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5 ～

10，使菌液浓度为50cfu/ml～100cfu/ml。

(3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23℃～28℃培养5天～7天，加0.9%无菌氯化钠3ml～5ml洗下霉菌孢子，吸出孢子液，取1ml孢子液至0.9%无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4 ～10-6，使菌液浓度为50cfu/ml～100cfu/ml。

2.1.2. 供试液的制备

取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪混匀，作为1:10的

-7

供试液。

2.1.3. 验证试验

(1)菌液组：分别取菌液1ml,采用平皿计数法，测定上述制备好的菌液中每毫升的活菌数。

测定结果见表1。

(2)供试品对照组：取供试液1ml，采用平皿计数法。测定结果见表2。

(3)试验组：取供试液1ml和50cfu～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数，测定结果见表3，计算回收率见表4。

将上述用于细菌计数倾注营养琼脂培养基，待凝固后，置30℃～35℃培养48小时观察结果，霉菌和酵母菌计数倾注玫瑰红钠琼脂培养基，待凝固后，置23℃～28℃培养72小时观察结果。

表1菌液组菌落计数(cfu/皿)

由表可知该供试品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种试验菌的回收率均高于70%。经上述对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和记录审核，验收小组意见是本计数方法适合九味羌活颗粒的细菌、霉菌及酵母菌的计数方法。 2.2控制菌检查 2.2.1.菌液制备

接种大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤中，35℃～37℃培养18小时～24小时，取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5 ～10-7，使菌液浓度为10cfu～100cfu

2.2.2. 供试液的制备

取本品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇，制成1:10的供试液。 2.2.3验证试验

大肠埃希菌检查方法的验证：

(1) 供试品组：取供试液10ml，加至胆盐乳糖培养基100ml中，置35℃～37℃培养2

4小时。

(2) 空白对照组：取与供试液等量的稀释液加至胆盐乳糖培养基100ml中，置35℃～37℃

培养24小时。

(3) 阴性菌对照组：取供试液10ml，加至胆盐乳糖培养基100ml中，加入金黄色葡萄球

菌10cfu～100cfu，置35℃～37℃培养24小时。

(4) 阳性菌对照组：取供试液10ml，加至胆盐乳糖培养基100ml中,加入大肠埃希菌

10cfu～100cfu,置35℃～37℃培养24小时。

取上述培养物各0.2ml，分别加入含5ml的4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基(MUG)试管中，置35℃～37℃培养5小时～24小时。观察结果，见表7。

表7大肠埃希菌检查结果

表7结果显示，阳性菌生长良好，表明本品在该条件下对大肠埃希菌的抑制作用可以忽略不计;阴性菌均为检出，表明该控制菌检查方法的专属性好，说明采用常规法进行本品的大肠埃希菌检查可行。

综上所述，上述拟定的方法草案可行。 4.确定的微生物限度检查方法

微生物限度取本品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇，制成1:10的供试液。采用10倍递增稀释法，稀释至10-3 ，细菌、霉菌和酵母菌计数均采用平皿法，分别取每稀释级的供试液1ml，倾注于2个平皿中，依法检查(中国药典2005年版一部附录XⅢC)。 大肠埃希菌检查采用常规法，依法检查(中国药典2005年版一部附录XⅢC)。1g供试品中，细菌数不得过1000个，酵母菌和霉菌数不得过100个，大肠埃希菌不得检出。 5. 供试品的检查

按照上述确定的微生物限度检查方法检验供试品，结果符合规定，见表8

表8供试品检验结果

6结论：

根据验证试验结果，确定九味羌活颗粒的细菌、霉菌和酵母菌数采用平皿法测定，控制菌大肠埃希菌检查采用常规法测定。

第五篇：上海公布检验检测 机构能力验证情况

近日，上海公布检验检测机构能力验证情况，评定结果为合格515家次，可疑4家次，不合格6家次。

2016年，上海市质监局持续加大检测机构能力验证力度，创新能力验证模式，加强检测机构监管，督促检测机构持续保持获证时的技术能力水平，分别在涉及安全、健康、环保等社会重点关注的检测领域，组织开展了果蔬汁中农药残留量，奶粉中三聚氰胺，水产中磺胺类药物残留量，食品中磷、镁、钙，绝热材料导热系数，钢焊缝超声波，热轧带肋钢筋拉伸试验，工作场所空气有毒物质，农药产品含量，水中汞、砷、硫化物，纺织品中纤维含量，电子电气产品待机功耗、爬电距离和电气间隙测试共计12项能力验证活动，目前已完成11项，共有525家次的检验检测机构参与，最终评定结果为合格的有515家次，可疑的有4家次，不合格的有6家次。

对于评定结果不合格的检测机构，上海市质监局已发出责令改正通知书，责令其进一步认真分析原因，采取切实有效的纠正措施，保证检测数据的准确可靠，在3个月内完成整改，整改验证合格前不得对社会出具该不合格项目的公证数据。