第一篇：动物细胞工程综述
动物细胞工程教案
【教学目标】 1.知识目标：
1.1简述动物细胞的培养过程、条件及其应用; 1.2简述克隆动物的概念含义和基本原理
1.3简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景 1.4简述细胞融合的方法过程和单克隆抗体的制备过程应用 1.5关注克隆技术的伦理问题。 2.能力目标：
2.1通过阅读、自学、质疑、讨论、总结等环节，提高获取知识、分析问题和解决问题的能力
2.2由植物体细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力和思维能力
2.3通过设计单克隆抗体的制备过程，使学生了解生物科学认识模式发展学生的创造性能力。 3.情感态度与价值目标：
3.1 初步培养学生探索、创新和合作精神
3.2 明确知识不断更新并向前发展，认识到学无止境，形成终生学习的意识。
【教学重点】简述动物细胞的培养过程;举例说出细胞融合和单克隆抗体;关注克隆技术的伦理问题。
【教学难点】动物细胞培养过程;细胞融合技术和单克隆抗体的制备。【教学设计思路】 采用自学、指导模式对动物细胞培养技术进行较深刻、透彻地学习，这部分内容主要是解决三个问题：(1)为什么要进行动物细胞的培养?(2)什么是动物细胞的培养?(3)怎样进行动物细胞的培养?第三个问题是本节课的重点。关于动物细胞的培养过程，教师可参照教材中的动物细胞培养过程示意图进行讲解，讲解中要注意区分原代培养和传代培养这两个概念。对于动物细胞培养的条件，则要从学生已有的内环境的知识出发，启发学生自己动脑思考这个问题，以加深对培养条件的理解。为学习其他动物细胞工程打好基础。 在动物体细胞核移植技术及克隆动物的教学中，可首先让学生列举所知道的克隆动物，调动学生已有的知识。随后可向学生提问：克隆动物的方法与植物组织培养一样吗?然后向学生说明目前动物体细胞克隆是通过核移植技术来实现的，以引入本节的主题。关于核移植技术发展简史，可让学生在课堂上阅读，本节的重点和难点是在动物体细胞核移植技术过程，教材中选用了 “多利羊”为例，来说明体细胞核移植的过程。教师应充分利用和挖掘教材内容，带领学生一步步弄清动物体细胞核移植技术的过程。对于体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题这部分内容，可结合本节教材“积极思维”中的有关问题，让学生讨论。 在细胞融合和单克隆抗体的教学中，教师启发学生回忆植物体细胞杂交过程;通过新旧知识对比，引导学生大胆推测动物细胞融合过程，培养学生知识迁移能力，并通过课件演示细胞融合的全过程，加强教学的直观性，培养学生的观察、思维能力。教师要讲明动物细胞融合技术的意义和应用，以便自然过渡到单克隆抗体上来。 关于单克隆抗体的教学，教师要利用好教材提供的材料，突出从问题入手的思路，先介绍医疗实践中仅靠细胞培养难以获得大量抗体，然后，一步一步启发学生讨论怎样解决这个问题。要把科学家在研制单克隆抗体过程中，通过大胆的想像，创造性地解决问题的过程作为本节教学的重点和亮点，使学生在获得单克隆抗体知识的同时，受到创新精神的教育。 【教学课时】二课时 【教学过程】
(一) 导入新课 图片展示:克隆羊“多利”的复制品 投影：新华网
克隆羊多利重生 这4只克隆羊在遗传上与多莉毫无差异。多莉诞生于14年前，是第一个使用成熟细胞克隆的哺乳动物。 克隆羊多莉(Dolly)已经获得“重生”。最初进行此项克隆研究的英国科学家又培育出4只克隆羊，被形象地称之为“Dollies”(多莉的复数)。它们是多莉的复制品，在遗传上与多莉丝毫不差，多莉在7年前离开这个世界。
问题导入
师：克隆羊“多利”的重生，采用的是什么技术? 生：细胞工程技术?
师：动物细胞工程技术到底是干啥的?下面请同学们带着以下问题阅读与总结：(阅读课本P53,回答)
一、动物细胞工程：
1、主要理论依据? 2技术手段? 学生：1.细胞生物学 分子生物学
2.①动物细胞和组织培养 ②细胞核移植③体细胞克隆④细胞融合⑤单克隆抗体制备
3.①探索并改造生物的遗传特性，②大量培养细胞。
师：动物细胞与组织培养是细胞工程的基础，它开始于20世纪初期，那么动物细胞与组织培养主要是指什么?请读课本P53-54,完成以下内容。
二、动物细胞与组织培养：
1、概念： ①材料：取自 ; ②场所： 模拟动物体 ;
③条件：在 、 和 等条件下; ④目的
：
使
动
物
细
胞
或
组
织
继续 。
学生：①动物胚胎或出生后不久的幼龄动物的器官或组织
②体外 体内环境 ③无菌 温度适宜 营养充足 ④生长、增殖并维持原有结构和功能
师：动物细胞与组织培养是指在体外模拟动物体内环境，将动物体细胞或组织，在无菌、温度适宜和营养充足条件下培养，使其继续生长、增殖并维持原有结构和功能的技术。那么请同学们思考并讨论一下问题：(投影展示)
1、动物细胞培养的原理是什么?
学生：
1、细胞增殖
2、为什么要取动物胚胎或出生后不久的幼龄动物的器官或组织进行培养?
学生：因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强。一般幼体细胞比老龄细胞易培养，分化程度低的细胞比分化程度高的细胞易培养。
3、动物细胞体外培养需要满足哪些条件? 学生：①无菌、无毒的环境： (添加一定量的抗生素;定期更换培养液，以便清除代谢产物。) ②营养物质(引导学生引导学生引导学生引导学生区分天然培养基与合成培养基区分天然培养基与合成培养基区分天然培养基与合成培养基区分天然培养基与合成培养基)(无机盐、葡萄糖、氨基酸、核酸、维生素、动物血清等。) ③温度和pH：37℃, 7.2-7.4 ④气体环境： O2和CO2(95%空气和5% CO2 )
4、组织分散成单个细胞的方法是什么? 学生：用胰蛋白酶处理。 教师补充：动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。
5、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么? 学生：不能，因为动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 投影展示：动物细胞与组织培养过程
示
意
图
10代细胞 教师：：：： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁生长当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
思考：细胞发生接触抑制后如何使细胞继续分裂增殖? 学生：将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
思考：传代培养的细胞能一直传代下去吗?
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40～50代，这种传代细胞为细胞株。
细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。教师引导学生总结动物细胞培养过程。
过渡：动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成新个体?我们来一起比较一下这两个过程：比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 因此，目前还不能用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体，用动物体细胞克隆的动物，实际是通过核移植来实现的。
三、细胞核移植与动物体细胞克隆: 读课本P54-57,完成以下内容。
1、体细胞克隆： 是将供体 的细胞核与受体去核 的细胞质进行 ，借助于 的发育能力，经过培养发育成 进而形成 的技术。其关键是 。
学生：细胞核 卵细胞 人工组合 卵细胞 胚胎 个体 细胞核移植技术
2、细胞核移植： 是一种利用 将某种动物细胞的
移入
或
动物的去除细胞核的成熟 内的技术。
学生：：：：显微操作技术 细胞核 同种 异种
3、展示克隆羊“多利”产生过程归纳克隆流程： 供体细胞 →
①
-------→ ③ ------→ 早期胚胎 ------→ 代孕动物 受
体
细
胞
→
②
-------→ 克隆个体
学生：细胞核 去核的卵细胞 融合的细胞
问题：1)、上述多利羊的成功培育过程表明了什么?也反映出了什么问题?
学生：动物体细胞核具有全能性。许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。
2)、书上说治疗性克隆和生殖性克隆的大讨论，你有何观点，请说出来。你认为生殖性克隆会带来哪些伦理上的问题?(发散思维) 3)克隆个体性状与亲本性状的关系怎样? 学生：克隆个体性状与供核亲本性状一致。
4、意义：在克服动物 、创造 等方面有重要意义。
学生：种间杂交繁殖障碍 新物种
5、应用① ;② ; ③ 等。
学生：①利用克隆技术大量复制实验动物，减少实验误差;②利用异种动物借腹妊娠挽救珍稀动物 ;③利用患者自身的细胞培育新的组织和器官以治疗疾病。
四、细胞融合与单克隆抗体：读课本P57,完成以下内容。
(一)细胞融合：
1、概念：指在一定的条件下将 或 细胞 为 的过程。
2、结果：形成
，如 。
3、原理：
学生：
1、2个 多个 融合 一个细胞
2、杂种细胞 鼠—鸡、鼠—猴等
3、 细胞膜具有一定的流动性
4、物理法、化学法和生物法
5、 制备单克隆抗体 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：：：： 植物体细胞杂交(获得杂种植株) 动物细胞融合(制备单抗) 原理 融合前的处理 促融方法 意义和用途 过渡：何为单克隆抗体?
(二)单克隆抗体：：：：读课本P58-59,完成以下内容。
1、概念：用单个B淋巴细胞进行 ，形成 ，其就可能产生出化学性质 、 的抗体——单克隆抗体。 学生：无性繁殖细胞群单一性
第二篇：高中生物专题2细胞工程2.2动物细胞工程2.2.1动物细胞培养和核移植技术检测选修3教案
专题2 细胞工程
2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1.对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法正确的是( ) A.取单个肝肿瘤细胞进行培养，获得细胞群的方法不属于克隆培养法 B.细胞培养过程中不需考虑细菌的污染问题 C.该培养液也能用来培养乙肝病毒
D.在原代培养过程中，培养的细胞最终也会出现停止增殖的现象
解析：A选项的描述属于细胞层次的克隆，A项错误。培养液受细菌污染后，其中营养成分要发生改变，不利于细胞的培养，B项错误。病毒的生存离不开细胞，用培养液不能培养病毒，C项错误。一般的细胞繁殖10代后，将停止增殖，D项正确。
答案：D 2.动物细胞培养过程的顺序是( ) ①原代培养 ②传代培养 ③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液 A.①②③
C.②①③
B.①③② D.③①②
解析：动物细胞培养过程的程序为选取幼龄动物或早期胚胎组织作培养材料→用胰蛋白酶处理组织，制备细胞悬液→原代培养→传代培养。
答案：D 3.用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织或细胞( ) A.容易产生各种变异 C.取材十分方便
B.具有更高的全能性 D.分裂增殖的能力强
解析：用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织，主要因为胚胎或幼龄动物的器官或组织分裂能力旺盛。
答案：D 4.某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列叙述正确的是( ) A.制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理肝组织块 B.恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 C.为了保证细胞培养所需的无毒环境，需大量添加各种抗生素
1 D.本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小
解析：在利用肝组织块制备肝细胞悬液时，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在强酸环境下才能起作用，但这样的环境不适于细胞生存，A项错误;细胞培养应在含CO2恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH值，B项错误;抗生素是用来杀菌的，不是杀病毒的，C项错误;本实验应设置对照实验，用添加甲药物、乙药物的培养液分别培养细胞，根据变异细胞占培养细胞的比例，以检测药物对甲、乙的毒性大小，D项正确。
答案：D 5.如图表示动物细胞培养程序图，请据图回答下列问题。
①取动物组织块
↓ ②________
③处理组织分散成单个细胞
↓ ④制成________
↓
⑤转入培养液中进行培养
↓
⑥处理贴壁细胞分散成单个细胞，制成________
↓
⑦转入培养液中进行培养
(1)过程②表示________________________________________。
(2)过程③和⑥用________处理组织或贴壁细胞分散成单个细胞，这样做的目的是_______________________________________ ________________________________。
(3)④和⑥的过程都要把分散的细胞制成__________________。 (4)过程⑤进行的细胞培养是________，细胞适于____生长增殖。
(5)过程⑦进行的细胞培养是________，一般传至______代后就不易传下去了，传至________继续培养时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，部分细胞的________会发生改变。继续培养时，少部分细胞发生了________，朝着等同于________的方向发展。
解析：进行动物细胞培养时，首先将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成许多单个细胞，然后，用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。以后，细胞进行有丝分裂，数目不断增多。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就
2 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常被称为传代培养。
答案：(1)剪碎组织 (2)胰蛋白酶 解除由于接触对细胞生长和繁殖的抑制 (3)细胞悬液 (4)原代培养 贴壁 (5)传代培养 10 10～50代 细胞核型 突变 癌细胞
A级 基础巩固
1.动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于( ) A.培养基不同
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
解析：此题考查的是动物细胞培养与植物组织培养的区别与联系。动物细胞培养的培养基与植物组织培养的培养基不同，动物细胞一般用液体培养基培养，而植物组织培养一般用固体培养基，与植物组织培养的培养基相比，动物细胞培养的培养基中还要加动物血清等，A项正确。它们都是在无菌条件下进行的，都可以传代培养，且都能够大量培养。B、C、D项的叙述有误。
答案：A 2.下列关于动物细胞培养的说法正确的是( ) A.连续细胞系不具有异倍体核型
B.动物组织细胞间的胶原纤维可用纤维素酶水解
C.原代培养细胞、有限细胞系比无限细胞系、肿瘤细胞更容易克隆 D.提高动物细胞克隆形成率需要以滋养细胞支持生长及激素刺激等条件
解析：连续细胞系大多数具有异倍体核型;动物组织细胞间的胶原纤维的主要成分是胶原蛋白，可以用胰蛋白酶酶解，不能用纤维素酶水解;在进行细胞克隆时，原代细胞、有限细胞系通常不如无限细胞系、肿瘤细胞。
答案：D 3.一只羊的卵细胞被另一只羊的体细胞核移植后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下了一只羊羔，这种克隆技术具有多种用途，但是不能( ) A.有选择地繁殖某一性别的家畜 B.繁殖家畜中的优秀个体 C.用于保存物种 D.改变动物的基因型
解析：目前的克隆技术是将动物的一个细胞的细胞核植入一个去核的卵细胞，经过试管
3 培养一段时间后，再移入另一个体的子宫内发育、分娩的技术。通过该技术能够保持亲本的优良性状，保持性别不变，也能够用于保存物种，但不能改变动物的基因型。
答案：D 4.据英国《卫报》披露，纽卡斯尔大学研究人员不久前成功实现一项生殖医学技术，将患有线粒体疾病妇女的受精卵中的细胞核移植到健康妇女捐献的去核卵子中，最终产下了健康的婴儿。下列叙述错误的是( ) A.此项技术的基础是动物的细胞和组织培养 B.此项技术的原理与克隆羊“多莉”完全相同
C.健康妇女捐献的卵子的细胞质具有调控移入细胞核发育的作用 D.婴儿出生后具有患病夫妇以及捐献健康卵子的妇女三方的遗传特征
解析：动物克隆技术的基础是动物细胞和组织培养，A项正确;此项技术用的受精卵的细胞核，而克隆羊用的是高度分化的乳腺细胞，分化程度不同，B项错误;卵细胞的细胞质具有调控移入细胞核发育的作用，C项正确;该婴儿细胞的核基因由形成受精卵的夫妇提供，质基因由提供去核卵子的妇女提供，D项正确。
答案：B 5.2015年2月3日，英国国会表决同意允许医学界利用3个人的基因共同育子，成为全世界第一个准许“三亲育子”的国家。“三亲育子”技术是将父母细胞核基因与一位妇女捐赠者的健康线粒体结合在一起，引入的基因只占婴儿总基因的0.1%。这项技术旨在防止因线粒体基因缺陷引起的严重遗传疾病。下列相关描述正确的是( ) A.线粒体基因缺陷引起的遗传病是母系遗传病，传女不传男 B.“三亲育子”可能会用到人工授精技术、胚胎移植技术等
C.通过“三亲育子”技术得到的“三亲婴儿”的健康线粒体基因不一定能传给其后代 D.若父亲患有线粒体基因缺陷病，需要通过“三亲育子”技术避免将有缺陷的基因传给下一代
解析：线粒体基因缺陷引起的遗传病是母系遗传病，是由母亲的卵细胞传给子代的，表现为母亲患病子女都患病，A项错误;“三亲育子”技术主要利用的是胚胎工程技术，目前在生产实践中应用较多的是体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植，B项错误;通过“三亲育子”技术得到的“三亲婴儿”如果是个女孩，其健康线粒体基因可以通过卵细胞传给其后代，如果是个男孩，其健康线粒体基因一般不能通过精子传给子代，C项正确;精子的线粒体都集中在尾部，且受精时只有精子的头部进入卵细胞，故男子的线粒体基因一般不能通过精子传给子代，若父亲患有线粒体基因缺陷病，子代一般不会患病，D项错误。
答案：C
B级 能力训练
6.回答下列有关动物细胞培养的问题：
4 (1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成单层细胞，这种单层培养法的出现，对细胞培养的发展起了很大的推动作用。
(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，但极少数细胞克服细胞寿命的自然极限，获得________，朝着等同于癌细胞的方向发展，该种细胞由于细胞膜上________减少，导致细胞间的黏着性________。
(3)在动物细胞体外培养过程中，一般要满足四个方面的条件：无菌无毒的环境、营养、温度、pH及气体环境，其中在培养液中添加________，以防培养过程中的污染;由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，故在使用合成培养基时，通常需加入________等天然成分;气体环境主要是提供细胞所需的O2和CO2，其中O2的作用是_____________，CO2的作用是______________________。
(4)动物细胞培养可用于检测某种物质的毒性大小，若用被检测物质培养的细胞与对照组相比，发生变异的细胞数目所占的百分比大，则该物质的毒性大，判断的依据是________________________。
答案：(1)接触抑制 (2)不死性 糖蛋白 降低
(3)抗生素 血清、血浆 供给细胞进行有氧呼吸 维持培养液的pH (4)物质的毒性越大，越容易导致细胞发生变异
7.某生物兴趣小组对一种抗癌新药进行实验时，以动物肝癌细胞为材料，测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响。请回答下列有关动物细胞培养的问题。
(1)在动物细胞培养时，将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基称为________培养基。通常在培养基中还需要加入适量________等一些天然成分。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是________________。另外，还应该保证被培养的细胞处于________、________的环境。
(2)在细胞生长过程中，当细胞贴壁生长到一定程度时，其生长会受到抑制，这种现象称为________。
(3)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的________。 (4)请你帮助兴趣小组的同学分析本实验，实验的自变量是________________，实验组和对照组除了自变量不同外，其他处理均应该相同，这是为了遵循实验设计的________原则。
解析：(1)将动物细胞所需要的各种营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在使用合成培养基时，还要加入一些动物血清、血浆等天然成分。细胞培养所需的气体中有CO2，作用是维持培养液的pH。被培养的细胞必须处于无菌、无毒的环境中，才能保证细胞正常地生长增殖。(2)动物细胞在分裂过程中有接触抑制的现象。(3)抗生素能杀死培养基中的微生物，
5 保证无菌无毒环境。(4)要测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响，实验的自变量为抗癌药物的有无。其他无关变量应该相同，否则会干扰实验结果，这种设计遵循的是实验的单一变量原则。
答案：(1)合成 血清、血浆 维持培养液的pH 无菌 无毒 (2)接触抑制 (3)抗生素 (4)是否加入抗癌药物 单一变量
8.美国威斯康星州的一个奶牛场有一头奶牛，年产奶量达30.8 t，我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t。某人用该高产奶牛的耳朵细胞，采用核移植技术获得高产奶牛(如下图)。
(1)目前完成①的方法有______________、________________、________________、化学物质处理等。
(2)③过程中选择去核卵母细胞作为受体细胞的原因是 _______________________________________________________ ______________________________________________________。 (3)④过程所利用的技术是_____________________________。 其原理是______________________________________________ __________________________。
(4)该实验的成功说明已分化的耳朵细胞的细胞核中含有与________一样的全套基因，这种繁殖方式属于______________。
解析：进行动物体细胞核移植需用去核的卵母细胞作受体细胞，对构建的重组细胞需经历动物细胞培养，并诱导形成早期胚胎。重组细胞能够培育为动物体，表明动物细胞核具有全能性;克隆动物属无性繁殖。
答案：(1)显微操作去核 梯度离心 紫外光短时间照射
(2)卵母细胞体积大，易操作，营养物质丰富，且细胞质中含有激发细胞核全能性表达的物质
6 (3)动物细胞培养 细胞增殖 (4)受精卵 无性繁殖
9.华南虎是原产中国的老虎品种，已有近30年没有野生华南虎出现的报告，野生华南虎也被一些专家认为已经濒临灭绝。科学工作者尝试用普通老虎完成体细胞克隆华南虎的研究，下图是其培育过程，请据图回答：
(1)克隆华南虎的遗传性状与________(填字母)虎基本一致。 (2)A、B、C 3只虎哪一只没有提供遗传物质?________。 (3)克隆华南虎的过程是否遵循孟德尔的遗传定律?为什么? _______________________________________________________ _______________________________________________________ ______________________________________________________。
(4)有人设想将虎的体细胞与牛的体细胞进行融合，以期获得新物种“虎—牛”，你认为依据目前的生物技术和理论能否实现这一愿望?________。原因是______________________________________ _____________________________________________________。
解析：(1)由克隆华南虎的过程可知，华南虎A提供细胞核，华南虎B提供细胞质，所以克隆虎D的遗传性状与供核的A更接近，即相当于克隆了A。(2)老虎C只提供胚胎发育的场所，没有提供遗传物质给D。(3)核移植过程没有经过两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，没有减数分裂方式的出现，不遵循孟德尔遗传定律。(4)无论是高度分化的动物体细胞，还是不同种动物体细胞融合后的杂交细胞，经细胞培养只会细胞增殖，不会发生细胞分化，形成不了个体，动物体细胞的全能性无法体现。
答案：(1)A (2)老虎C (3)不遵循。克隆属于无性生殖，而孟德尔的遗传定律仅在有性生殖的减数分裂过程中起作用
(4)不能 高度分化的动物细胞全能性受到限制，虎和牛体细胞杂交后得到的杂交细胞不能正常发育成完整个体。
第三篇：《动物细胞工程》教案4（新人教版选修3）
动物细胞工程
一、[教学目标] 1.简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
2.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 3.举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。
二、[教学重点和难点] 1.[教学重点] (1)动物细胞培养的过程及条件。
(2)用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 (3)单克隆抗体的制备和应用。 2.[教学难点] (1) 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 (2) 单克隆抗体的制备过程。
2.2.1动物细胞培养和核移植技术(2课时)
三、[教学教程] 教学过程 教学内容
教学手段和方法 预期目标
1、回顾植物细胞工程的技术手段，引入动物细胞工程内容的学习
2、学习新课：
一、动物细胞培养 (1)概念 (2)原理 (3)过程 (4)条件 (5)应用
3、学习新课：
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 (1)概念 (2)分类 (3)原理 (4)过程 (5)应用 (6)局限
4、小结
5、作业或活动
师：同学们，前面我们一起学习了植物细胞工程的相关知识，请大家来回顾一下其涉及的主要技术手段。
生：有植物组织培养和植物体细胞杂交等。
师;今天我们开始一起来学习动物细胞工程的内容，请大家阅读课本p44引言，介绍动物细胞工程的常用技术手段：动物细胞培养、核移植技术、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是基础技术。现在先来学习动物细胞培养和核移植技术 师：为什么要进行动物细胞培养? 生：(沉默) 师：我们一起来看课文本小节的引言的两个实例。
师：同学们，要解决这些问题，离不开动物细胞培养技术。那么什么是动物细胞培养呢? 生：(情绪高涨)从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
师：很好!从概念中我们不难看出，该技术实施的原理是什么? 生：细胞增殖。
师：怎样进行动物细胞的培养?需要哪些条件?
指导学生阅读p44-46内容，结合插图或投影过程示意图，最好能制成动画。师生共同归纳过程：
取材→分散→配制悬液→原代培养→传代培养。在各个箭头上注明处理方法。 注意：原代培养和传代培养
原代培养：取材水解后的初次培养;
传代培养：原代培养后再处理后的后续培养。两者先后关系，不能倒置，其原理相同。后者一般至10代，也有至40-50代，但细胞核型可能会改变，从而癌变。
师：大家想一想，目前使用的或冷冻保存的细胞常常是10代以内，是什么道理? 生：以保证细胞正常的二倍体核型。 师生讨论p44的两个旁栏思考题
复习：内环境及其稳态知识，并思考和讨论以下问题：
体外细胞培养需要哪些营养物质?需要怎样的合适环境条件? (阅读讨论后)
(1) 环境条件：灭菌处理、抗生素、定期更换培养基
(2) 营养条件：与体内基本相同，有糖、氨基酸、无机盐、必需元素、血清、血浆等 (3) 温度和ph： 接近体温，ph7。2-7。4 (4) 气体环境：o2和co2(5%)
师：物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体? 生：众说纷纭。
师：不能，因为动物细胞的全能性受到分化程度的限制，发育成个体的潜能渐弱。那么这项技术有哪些用途呢? (1)生产生物制品
(2)提供基因工程的受体细胞 (3)检测有毒物质的毒性
(4)用于病理、生理、药理研究
比较：培养基的状态、成分;技术依据的原理;过程;结果等方面。
师：刚才我们讲过利用上述技术无法克隆动物个体，那么能否克隆?有没有别的方法? 生：有(声音洪亮)
师：大家说得对!什么方法? 生：动物核移植技术。 板书概念内容(略)
师：胚胎细胞核移植和体细胞核移植，后者难度较大。我们来学习后者。 体细胞核的全能性 教师板画过程图：
取材→培养→显微注射到去核的次级卵母细胞→重组细胞→重组胚胎→受体雌性动物→克隆动物。
讨论：p49的三个思考题，初步理解技术的局限性。 (1) 改良动物，提高繁殖率 (2) 保护濒危物种
(3) 生产转基因产品;治疗疾病等 (1) 成功率低。 (2) 有待改进。 (3) 健康问题。 (4) 安全问题
师：本节课我们学习动物细胞培养和核移植技术，大家要能说出原理、过程和应用(结果)，体验到科学的伟大力量。
阅读并笔注，要求学生注意动物细胞培养，不能说成动物组织培养;而植物组织培养不能说成植物细胞培养。
板书或投影标题2，2动物细胞工程
板书或投影标题2。2。1动物细胞培养和核移植技术 可结合课本插图或用投影补充一些有关这方面的例子 可在学生阅读自学后，让学生抛开书本，口述，教师简明地板书，带领学生体会和剖析要点，领略大概过程。
这是本节学习的重点，关于培养过程，可参照课本p45示意图讲解，注意两个培养概念的区分。
注意与植物组织培养的比较。
难度不大，让学生回答，相互修正完善。 师生归纳小结，教师板书
注意与植物组织培养比较，把知识学通、学活。可列表比较，让学生一目了然。 让学生同时思考p46旁栏题，阅读下面的小知识卡片。 指导学生阅读并学会归纳有哪几个方面的用途 用预先准备好的小黑板或投影出示。
学生会迅速阅读教材，引发新的内容的学习 让学生分析大体思路
回顾所学知识诱发学生思考原因
这是重点与难点，结合演示(多媒体)，理解技术要领和关键所在。尝试让学生画图。 学生笔注
结合"多利羊"实例，让学生畅所欲言。 课后完成，待讲评。
让学生了解动物细胞工程的技术手段，激发其求知欲望 激发学生热爱科学、关注科学的意识
通过剖析，旨在培养学生分析和解决问题的能力，也有助学生审题能力的加强。 通过比较弄清概念间的本质差异和内在联系。培养学生的求异和求同思维能力。 通过思考，培养知识的迁移能力
关注科学技术的不同，培养学生严谨的科学态度。 通过这样的提问，能引起学生的共鸣。 激趣诱思
让学生认同科学不断发展、不断创新。 有助于理解，效果好 培养了能力。 理解sts间的关系 激发学生立志献身科学的情感态度。 提出本节课的最终学习目标 [基础试题训练] 选择题
1.下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是
( ) a.培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 b.原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞
c.动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质发生了改变 d.动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞
2.生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的"复生"将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功"复生"野驴的方法是 ( ) a.将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体 b.将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体
c.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体 d.将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
3.一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能
( )
a.有选择地繁殖某一性别的家畜 b.繁殖家畜中的优秀个体 c.用于保存物种 d.改变动物的基因型 [教学反思] 动物细胞融合与单克隆抗体(2课时) 教学 过程 教学 内容 教学手段 和方法 预期 目标
1.实例引入新课──细胞融合。 2.复习提问。
3.学习新课──细胞融合。 (1)动物细胞融合的概念。 (2)动物细胞融合的过程。
(3)动物细胞融合的意义和应用。 4.学习新课──单克隆抗体。 (1)单克隆抗体的概念。 (2)单克隆抗体的生产过程。
(3)克隆抗体的应用。 5.小结。
6.布置作业或实践活动。 师：1970年，有两位科学家做了一个人-鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人-鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢?这就是今天我们这节课要学习的内容。 师：由于动物细胞融合与前面所学的植物体细胞杂交技术相似，所以我们通过两个问题，来回顾一下有关植物体细胞杂交技术的基本知识。第一个问题是：植物体细胞杂交技术的过程是怎样的?
生：先用酶去除两种植物细胞的细胞壁，使之成为原生质体，再用物理或化学的方法，诱导两种原生质体融合成杂种细胞，最后用植物组织培养的方法把杂种细胞培育成新的植物体。 师：第二个问题是：动植物细胞在结构上有何区别? 生：动物细胞无细胞壁、无明显的液泡、无质体。
师：有了以上的基本知识，首先让我们一起来看看有关动物细胞融合的概念。请大家翻开课本p52，阅读第二自然段。
师：动物细胞融合的基本原理与植物原生质体融合的基本原理是否相同? 生：应该相同。
师：对，动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，那么动物细胞融合的具体过程是否也和植物原生质体融合的过程一样呢? 生：应该基本一样吧?
师：对，下面我们以灭活病毒诱导动物细胞融合过程为例，来理解动物细胞融合的过程。 诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，但动物细胞融合时可用灭活的病毒作为诱导剂，你们知道这是为什么吗?请阅读课本p52的生物技术资料卡，思考并回答下面问题：
为什么灭活的病毒能作为诱导剂?
生：因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
师：对，那么不灭活的病毒能作为诱导剂吗?
生：不能，因为不灭活的病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
师：回答得非常好!从示意图中我们可以看出，把两个不同的动物细胞放在一起，用灭活的病毒处理细胞后，它们就先质融合，再核融合，进而形成杂交细胞，这个细胞有丝分裂后仍能形成两个完整的杂交细胞。
想一想，在动物细胞融合的实际操作过程中，是只用单个的两种细胞来融合吗?请你们再次结合植物体细胞杂交的过程，思考这个问题。
生：我记得在植物体细胞杂交过程的实际操作过程中，是把多个两种细胞放在一起，让它们融合的。
师：回答正确。
生：为什么在进行两种细胞融合时必须用多个细胞呢?
师：这个问题问得很好，请同学们课下思考并讨论这个问题。如果能查阅到有关资料，你们就能更全面地回答这个问题。
在弄清楚动物细胞融合的原理和过程后，还需说明的是任何一项技术的发现，都不是凭空产生的，必定有一个发展的过程，下面我们来阅读课本p52中的小字，了解一下动物细胞融合技术的发展简史。
从动物细胞融合技术发展简史的资料中，我们能切实体验到这个技术是在不断发展的，那么，实现动物细胞融合有什么意义呢?
大家都知道，物种间由于存在生殖隔离使得有性杂交方法有局限性，而细胞融合技术能打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能。具体成功的实例见大屏幕。 正因为如此，细胞融合技术已广泛应用于细胞学、遗传学、免疫学及生物新品种培育等领域，但此技术还有一个十分重要的用途，就是制备单克隆抗体。有同学听说过单克隆抗体一词吗? 生：(大多数同学回答不出来。)
师：在弄清什么是单克隆抗体之前，我们先来了解以下两个问题：
第一个问题，传统的抗体生产方法及缺陷是什么?请同学们在阅读课本p52的最后一自然段的基础上，讨论这个问题。
生：传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备的抗体特异性差。 师：回答得很好!下面我们再来讨论第二个问题：b淋巴细胞有什么特点?请同学们继续阅读课本p53第一自然段，讨论并回答这个问题。
生：b淋巴细胞能产生抗体，但每一个b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
师：很好!正是由于b淋巴细胞的这个特点，所以要想获得大量的单一抗体，必须用单个b淋巴细胞进行无性繁殖，也就是通过克隆形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单
一、特异性强的抗体，即单克隆抗体，这就是单克隆抗体的概念。
可遗憾的是，在体外培养的条件下，一个b淋巴细胞是不可能无限增殖的，那么，科学家是怎样解决这一问题的呢?想一想，能利用细胞融合技术来制备单克隆抗体吗?请大家先阅读课本p53~54单克隆抗体制备的文字及示意图，再思考回答问题。 师：两位科学家极富创造性的设想是什么?
生：如果把一种b淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。
师：对，正是科学家先有了这个极富创造性的设想，然后再锲而不舍地把设想变为现实，才创造出单克隆抗体。想一想，如果把b淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有几种融合方式?
生：有b淋巴细胞间的融合、骨髓瘤细胞间的融合以及b淋巴细胞与骨髓瘤细胞间的融合。 师：回答得非常好!那么，b淋巴细胞和骨髓瘤细胞间融合所形成的能产生抗体的杂交瘤细胞是如何筛选出来的? 生：先用选择性培养基筛选出杂种细胞，再进行抗体检测和克隆化培养就能得到杂交瘤细胞。 师：对，基本的过程就是这样。那么，科学家又是如何利用杂交瘤细胞来生产抗体的呢? 生：第一种方法是：将杂交瘤细胞在体外大规模培养，从细胞培养液中就能提取大量的单克隆抗体;第二种方法是：把杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖，再从小鼠腹腔中提取单克隆抗体。
师：完全正确。正是由于这两位科学家的杰出贡献，他们于1984年双双获得诺贝尔生理学或医学奖。有关单克隆抗体的应用。请大家阅读课本p54~55的内容，阅读后，请一位同学归纳一下单克隆抗体有哪些主要的用途。最好能结合其中的一个用途，如"生物导弹"问题，谈一谈你对其应用前景的认识。
师：课后作业为课本p55"思考与探究"的三道题，如有条件，可按课本中实践活动的要求组织学生完成。
投影人-鼠细胞融合过程的图片，教师按图讲解，以引入新课，写出或投影本节课的标题──2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体。如果学生回答不全，则可投影植物体细胞杂交技术流程图。
教师讲解和学生讨论的方法相结合，以突出本节课的重点。 师生一起阅读教材，教师按教材上的概念给学生讲解。 投影用灭活病毒诱导动物细胞融合过程的示意图。 学生阅读生物技术资料卡，思考并回答问题。
让学生再次回顾植物体细胞杂交过程，思考并回答问题。 给学生留下更多地思维空间。
让学生自己阅读动物细胞融合技术的发展简史。
把教参上的已成功的动物细胞融合实例打在大屏幕上。 学生阅读和讨论相结合，以突破本节课的难点。
由于教材上没有单克隆抗体的概念，所以应在黑板上写出或投影在大屏幕上。 先让学生阅读教材，再采用师生共同讨论的方法学习此部分内容。 此问题对学生来讲稍难些，教师可提醒学生看图或相应的文字。 学生阅读教材，讨论，教师可投影有关应用的资料。 课后完成，下节课由学生回答。 激发学生学习兴趣。
复习旧知识，为学习新知识奠定基础。 了解动物细胞融合的概念。
培养学生运用已有知识解决新问题的能力。 了解动物细胞融合的过程。
培养学生的阅读能力及自主解决问题的能力。培养思维的广阔性。 联系旧知识，提供一个比较的对象，以此达到知识迁移的目的。 培养学生交流的能力及查阅相关资料的能力。 体验科学技术是一个不断发展的过程。 自然过渡到单克隆抗体的内容。
把本节课的难点问题分解成问题串逐一讨论解决。 了解单克隆抗体的概念。
提出问题，诱导思考，步步深入地了解单克隆抗体的生产过程。
培养学生的阅读及识图能力，使学生体验到科学是一个探究过程，科学研究需要创新的意识和合作精神。
了解单克隆抗体的应用，体验科学、技术、社会三者间的关系。 提出本节课最终的学习目标。
第四篇：《动物细胞》说课稿
七年级生物《动物细胞》说课稿
尊敬的老师，同学们:
大家好,我叫xx,来自xxxxx,欢迎大家莅临指导我的说课,我说课的内容是七年级生物(上)第二单元第一章第三节《动物细胞》。下面我将从教材分析、学情分析、教法和学法、教学设计四个方面来对本课题进行说明。
一、教材分析
1、教材的地位和作用
本单元主要是引导学生从细胞水平来认识生物体，而本节内容是“植物细胞”内容的自然延续，实验活动也是以第二节中的实验知识和技能作为铺垫。它的学习为后面生物体的结构层次的学习打下了基础。
2、教学目标 (1)知识目标
①进一步熟练制作临时装片和说明动物细胞的基本结构。 ②区别动物细胞和植物细胞结构的主要不同点和相同点。 (2)能力目标
提高学生制作以及用显微镜观察临时装片的技能。
(3)情感态度价值观
设计实验，开发学生的创新潜能，通过制作临时装片，养成实事求是的科学态度。
3、重点和难点
重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的异同点。
难点：①制作临时装片过程中的刮取(首次观察自己身体上的细胞学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果)
②细胞结构的观察(与植物细胞相比不易观察，略有难度);
二、学情分析
通过前两的节的学习，学生初步具备了使用显微镜的技能，另外，学生已经观察了植物细胞的结构并有一定的了解，故这节课采用灵活的教学方式，让学生在动手中进一步了解动物细胞的结构。
三、教法、学法：
我在教学中遵循“从做中学，学中做”的原则，运用实验法、比较法、多媒体演示法等方法进行教学，学生在教师的指导下可以运用小组合作法、比较法、观察法等方法学习。
四、教学设计
(一)创设情境，引入新课：
复习：临时装片的制作方法;植物细胞的基本结构(回顾复习上节课所学内容，引导学生积极回答问题，加强对学过知识的记忆。)
温故而知新，提出问题：用同学们自己提出的问题“我怎样能看到自己身上的细胞呀，它和植物细胞一样吗?”引起学生的兴趣，从而引出本节课的课题。(引导学生联系自身，提出问题，创设学习情境，引入新课)
(二)组织实验，合作交流
①出示题目“观察人的口腔上皮细胞”，交流：“看到题目，你有何疑问?” 激起疑惑:“人的口腔上皮细胞怎样取材?怎样才能观察?”(引导学生通过观察和思考实验材料发现问题、提出问题并自己解决问题。培养他们的观察与思维能力。)
②播放幻灯片上的实验步骤边演示边讲解，从而引导学生认真观看老师的示范操作，获得感性认识。 ③进行完演示环节之后，带领他们根据以上的每个步骤用一个字来概括，加深学生对实验步骤的理解，培养他们归纳问题的能力。 ④学生们在本实验的理论知识方面已经初步掌握，在进行实验之前先让学生用小组讨论的方法对即将进行的实验提出问题，“其中哪些步骤与观察植物细胞的步骤不同，考虑一下这是为什么?”然后让他们带着提出的问题展开实验，在进行实验过程当中进行巡视，引导帮助。
⑤依照学生所观察到的细胞，画一个口腔上皮细胞图。(通过绘图感知细胞的形态结构)
此时教学过程中的制作临时装片和观察这个难点的内容已经基本突破。
(三)归纳总结
采用图示法的总结方式，并对本节课的重难点进行进一步的的强调。 ①画的口腔上皮细胞图与投影胶片上的图片做比对。 ②多媒体演示不同种类的动物细胞图片，向学生采用详细讲解法讲动物细胞结构以及作用，指导学生认识动物细胞的基本结构，并区别动植物细胞结构。
(四)模拟制作，能力括展
(组织学生亲手制作模型,极大地调动学生的学习积极性,有利于学生获得相关的生物知识。)
策略①：按照书中方法分组制作。
策略②：改进。利用现成的果冻，将一枚糖粒放入其中表示细胞核，果冻表示细胞质，包装果冻的塑料壳表示细胞膜。
(五)回顾小结
带领学生一起对本节课所学的内容进行回顾，使学生对于本节课的重点和难点有清晰的掌握与了解。
(六)练习巩固
检测学生对课堂所学知识的掌握情况 我的说课完毕，谢谢大家!
第五篇：动物细胞培养总结! !!!
动物细胞培养总结 一.实验准备
1.实验器械、器皿的清洗和消毒 (1)清洗和包装
离心管(1.5ml，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。
蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。 取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。
过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。
过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。
玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。 (2)消毒灭菌
1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。
2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。
玻璃瓶须拧紧，饭盒，枪头灭菌后放入烘箱烘干备用。 2.无菌间消毒及设备检查
用84消毒液拖地，用原液按照1：29的比例兑水，抹布、拖把擦洗。 配400ml 75%酒精于盆中，用酒精棉仔细擦拭CO2培养箱，超净台，超净台内物品，显微镜，桌面，若培养箱内未培养细胞可以再打开高温灭菌模式将培养箱灭菌一次。
用蒸馏水擦拭清洗水浴锅内壁，注意底座不要沾水。 检查CO2总压力表，若读数不足四分之一提前预定CO2瓶，换瓶时需要扳手。CO2培养箱最下层的增湿盘须定期观察加水，将增湿盘内注入1/2无菌蒸馏水，并将盘直接放置在培养箱中央。启动培养箱，培养箱接通电源，增湿盘加水，连接好气体供给，检查有无漏气，输入系统设置。设置温度和二氧化碳。
紫外照射无菌间30分钟，注意屋内不要有人以及培养基等试剂。 3.细胞培养用液的配置及分装
RPM1640培养基配制：将干粉型RPM1640培养基溶于总量1/3的去离子水中，再用1/3水冲洗包装内2次，倒入培养基中，以保证所有干粉都溶解成培养液，根据产品说明的要求和实验补加谷氨酰胺和NaHCO3 ,倾斜三角瓶轻轻放入转子，用磁力搅拌器搅拌2h。用泵使培养基在超净台内通过灭菌的过滤器，过滤除菌，分装后置4度冰箱保存备用。使用前调pH至7.0，加双抗于培养液中浓度为1%，使用时加胎牛血清10%FBS. 胎牛血清FBS的处理：使用前应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体，将胎牛血清放入56度水浴中30分钟，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。分装前提前2天放4度冰箱解冻，溶解完全后于超净台内分装为25ml每管，留2管放四度备用，余下放-20度冻存。配制含血清培养基或冻存液前务必提前一天取出分装后的血清四度溶解备用，血清融化很慢。
5%NaHCO3溶液配制：5g NaHCO3，100ml蒸馏水， NaHCO3溶于水后，过滤除菌。 0.25%胰蛋白酶液200ml在超净台内分装成每管1ml或2ml，封口膜封口，-20度备用。
双抗溶液配制：80万单位青霉素加4ml灭菌D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。100万单位链霉素加5ml灭菌的D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。两溶液各取0.5ml混合，加入9mlD-Hanks液，则成含青链霉素各1万单位/ml，分装后置于4度冰箱保存备用。
二.操作步骤 注意事项：
1、所有实验用的器械，仪器灭菌，消毒，烘干。
2、打开溶剂，培养瓶瓶盖时，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下。
3、用完溶剂，培养瓶时，瓶口及瓶盖也要在酒精灯上烤一下。
4、所有物品放入超净台需用酒精棉擦拭，包括手伸出窗口拿取物品再回到窗内时需要重新用酒精棉擦拭。 开始工作：
1、实验前换紫外照过的白大褂和拖鞋。
2、戴橡胶手套，75%乙醇擦手，然后用75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯。
3、取待用的细胞，旋紧瓶盖。
4、胰酶消化缓慢时可以将细胞置于5%CO
2、37度培养箱中1min-2min，目的是提高酶活性，促进消化。 1.细胞复苏
提前预冷离心机，设参数为4度，1000r/min,5min。
将枪头，装有离心管的饭盒，垃圾盒放入超净台，酒精棉擦一遍超净台台面和移液器尤其枪口，以防别人用枪时不慎沾染脏污堵塞枪口。超净台和房间照15分钟紫外，照紫外的同时取出无血清培养基和含血清培养基37度水浴加热。
关闭紫外，打开风机，升高窗高，点燃酒精灯，用镊子从饭盒中取2个15ml离心管放至试管架，每管加入3ml无血清培养基，提前剪好2条封离心管的封口膜备用。
戴上橡胶手套再套上线手套，用镊子从液氮中取出塑料冻存管，用手拿冻存管迅速浸入37度水浴中，剧烈急速摇晃冻存管，因为有防水胶布缠裹不用担心进水染菌，使其急速融化，注意管内冻存细胞的融化情况。基本转为液态时将冻存管取出，摘下线手套，冻存管转移至超净台内，用酒精擦手，擦拭冻存管尤其管口，撕下胶布和封口膜，再擦拭管口，整个溶解过程尽量在30s至1min内完成。(注意：这一步对细胞存活率至关重要。既要尽快融化以减少融化过程对细胞的损害，又要尽可能减少细胞在较高温度停留的时间以减少DMSO对细胞的毒害，切不可将冻存管放在烧杯内不管。) 打开冻存管管盖，逐滴加入1ml无血清培养基，轻柔地将冻存管内的细胞悬液吸取出来，转移至已备好的离心管内，轻轻摇混匀，盖上管盖，轻轻地上下颠倒混匀。封上封口膜。
低俗离心1000r/min,5min。小心地吸出上清液，要求上清液尽可能吸走，同时又不触及管底沉淀的细胞。(较高要求时可以用手指轻弹离心管管底，将细胞团分散，加入10ml无血清培养基混匀离心10min弃上清再洗一次，有助于减少DMSO残留。)加3至5ml培养液至沉淀的细胞，轻轻摇晃使分散成细胞悬液，将细胞转移至培养瓶中，拧紧盖子，转移至培养箱中再反旋拧松半圈，以利于瓶口内外进行气体交换，注意取出培养瓶时须先拧紧瓶口。37度恒温箱中培养。第二天观察细胞生长情况。培养基瓶盖过火，拧紧后封上封口膜。收好物品，擦一遍台子，灭酒精灯。 2传代培养
附着型胞(adherentcell)传代培养
离心法提前预冷离心机，设置好参数4度，1000r/min,5min。倒液法不需要。
将灭菌枪头，装有离心管的饭盒，新培养皿/瓶,垃圾盒放入超净台，酒精棉擦一遍超净台台面和移液器尤其枪口，以防别人用枪时不慎沾染脏污堵塞枪口。超净台和房间照15分钟紫外，照紫外的同时从冰箱取出PBS,胰酶，含血清培养基于37度水浴加热。关闭紫外，打开风机和照明，升高窗高，点燃酒精灯，将所需试剂先擦瓶底，放在台子上再擦侧壁一圈，擦瓶口瓶盖，撕下封口膜，再仔细擦一遍瓶口。用喷过酒精的塑料筐将细胞培养瓶拧紧盖子拿到超净台旁的椅子上放平放稳，每三瓶/皿一摞拿入超净台先擦最下面一个的底部，擦好后放在台面上，擦一摞的侧面一圈，在分别擦底面顶面瓶口，直到所有培养瓶各个面及瓶口擦好，注意不要擦到有marker标记字迹的部位，酒精会擦掉字迹，若擦到字迹待酒精干后立即补写上以防事后记不清。
轻轻倒掉旧培养液，注意不要使液体倒流回来冲击细胞，挂在外壁的残留液滴用酒精棉擦掉,培养瓶可以轻轻翻转瓶子使细胞生长的面在上，顶面在下，液体留至顶面后直接倒掉液体。加1ml PBS，注意枪冲着不长细胞的培养皿侧壁或翻转培养瓶朝瓶的顶壁或侧壁打入PBS，尽量不碰到瓶口或培养皿，若怀疑碰壁，弃掉枪头。轻轻摇晃培养皿或瓶，使PBS沾到所有细胞，洗涤细胞一遍，轻轻倒掉PBS。
加入0.25%胰蛋白酶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，若是高倍胰酶先稀释(0.25%为1X胰酶)，37℃作用数分钟。等待消化期间准备好新的培养皿/瓶，每25cm2小皿/瓶加入2ml含血清培养基。消化中的皿盖好盖子或瓶拧紧盖子，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状，有10%细胞漂动时，倒掉胰酶溶液，加入1ml(25cm2小皿/瓶)含血清之新鲜培养基终止胰酶作用。(若细胞将要分离而呈现圆粒状且80%细胞漂动，则不移去胰酶，在胰酶作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止胰酶作用，吹打成细胞悬液转移至离心管，封上封口膜，离心后再吸掉上清液。)
轻轻摇晃培养瓶使细胞自瓶壁脱落，以吸管上下轻轻吸放数次以打散细胞团块，注意吹打时有系统性的将所有面积都打到不要集中只吹打一处而一些地方没吹打到，吸和吹时枪头都不要离开液面以减少气泡，气泡多破裂时对细胞有冲击且会增加体积不利于操作，培养瓶吹打时操作角度小不方便，用倒液法(10%细胞漂动即倒掉胰酶加含血清培养基终止消化)时吹打细胞要用二档多吹打几次，用皿或离心法(80%细胞飘动不弃胰酶直接加含血清培养基再离心弃上清)时细胞很容易脱落，可以用一档轻轻吹打，保证所有面积都吹打到即可。混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，拧紧瓶盖，镜下观察细胞数量多，培养液澄清，若细胞密度过低将影响生长可适当补充细胞悬液，若细胞密度过大将影响迅速生长一天后即需传代，可根据实验适当添加培养基或细胞悬液使生长速度符合预期，转移至CO2培养箱，拧松半圈瓶盖，37度培养。试剂瓶瓶盖过火，拧紧后封上封口膜。密封收好物品。擦一遍台子，灭酒精灯。
3细胞换液
取待用的细胞，旋紧瓶盖。
弃去旧的培养液，把培养瓶放回原处。
用微量枪加入适量的PBS缓冲液，缓慢荡洗一下细胞，然后将PBS缓冲液弃掉。
用微量枪加入适量的细胞培养液于培养瓶中。旋紧瓶盖。 将细胞置于5%CO
2、37度培养箱，反旋拧松瓶盖半圈，培养。
4细胞冻存 1>准备工作：
提前一天将血清FBS从-20度取出放在4度冰箱解冻。 选取对生增生期细胞(镜下密密麻麻，胞体突触明显)，在收集细胞24h前换液一次。
进入细胞室前，首先用75%酒精擦试工作台，接着紫外灭菌30，过后，关闭紫外灯，通风10min。从冰箱中取出胰酶、PBS缓冲液、培养基，血清37度水浴。取出室温放置的DMSO。找到防水的医用胶布，滤菌膜，针管和所需枪头饭盒等物品，喷一遍酒精，放入台子照紫外。 2>开始工作：
实验前在更衣间换上紫外照过的白大褂和拖鞋。戴上橡胶手套，75%乙醇擦手，然后用75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯。酒精擦拭胰酶、PBS缓冲液、培养基放入超净台。过火镊子取出离心管于试管架，剪好封口膜备用。用滤菌膜和针管过滤DMSO以除菌。
75%无血清培养基，20%的血清，5%过滤除菌的DMSO，混匀配制成所需的冻存液。
取待用的细胞，旋紧瓶盖。
弃去旧的培养液，挂壁残液注意用酒精棉擦去，用微量枪朝不长细胞的侧壁或顶部打枪，加入适量的PBS缓冲液，缓慢荡洗一下细胞，然后将PBS缓冲液弃掉。用微量枪朝不长细胞的侧壁或顶部打枪，加入适量胰酶约2ml，弃掉枪头。消化数分钟，等待期间，用过火镊子从饭盒中取出冻存管和管盖标记好细胞名称和冻存日期，直立于台面备用。
用微量枪加入适量的完全培养液冲洗(吹散细胞)细胞，将瓶底粘着的细胞吹散下来，再将细胞悬液移入的离心管中，封口，标签。 离心5min，1000转/min。
细胞离心毕，拆封，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液。 用微量枪将冻存液平均加入离心管中，混匀离心管中细胞冻存液。 用微量枪将含细胞的冻存液移入冻存管中，封口膜封口，防水医用胶布再缠一圈，标签时间，细胞名称。
冻存，需缓慢冻存，先放置4度冰箱20min，然后放置-20度冰箱30min，再置于-80度冰箱过夜，最后置于液氮灌-196度中保存。 5 铺板和细胞计数
用传代方法制成细胞悬液。倒掉培养基，用PBS液洗涤后，0.25%的胰蛋白酶液消化，加入培养液吹打制成待测细胞悬液转至离心管，封上封口膜，离心1000r/min,5min。
等待离心其间，取细胞计数板，盖玻片酒精擦拭，均在酒精灯上烤一下，将盖玻片盖在细胞计数槽上，使覆盖细胞计数板上的上下两个“十字”区域。取一只新的15ml离心管，做好标记，摆放好。 离心毕，拆封，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液，加入全培养液吹散沉淀细胞成细胞悬液，拧紧管盖，上下颠倒混匀。 用枪吹打混匀离心管中含完全培养液的细胞，再从离心管中取1ml细胞悬液移入新的15ml离心管，加入4ml完全培养液，即稀释五倍，吹打混匀细胞悬液，上下颠倒混匀细胞悬液。
上下颠倒混匀新15ml离心管内细胞悬液，计数前将待测液吹打均匀，用微量枪从新15ml离心管中取出细胞悬液(约10μl)，滴入计数板上盖玻片的一侧缝隙旁，虹吸作用液体会吸入盖玻片下(不能有气泡，不然会影响细胞计数，注意滴入悬液量不能太大致使细胞悬液流入旁边的槽中)，镜下观察细胞，数出计数板四角大方格中的细胞数(16个小格×4个大格)，用计数器计数(约200个)
细胞数 万个/mL原液=(4大方格细胞数之和/4)×稀释倍数 (常稀释5倍，若细胞过多不能数清则加大稀释倍数，不断调整新离心管中细胞悬液的细胞浓度，直至镜下观察细胞数目符合要求。) 每皿/瓶需铺板50-100万个细胞，根据细胞计数算出每皿所细胞悬液需毫升数，加入悬液时注意混匀，不得有气泡，吸时注意每次枪尖是否都吸满液体。每皿加入细胞悬液后，用含血清培养基补足至2ml/皿/瓶。24h后观察细胞长至八成满时即可加药处理。
6检验判断细胞状态与加药处理
细胞复苏或传代后24内不可传代，传代4小时后开始贴壁。 1>培养基颜色澄清度：
正常生长的细胞培养基澄清透明，倾斜使培养基聚集，对着灯看可透光，若出现丝状沉淀或倾斜培养基对着灯看出现浑浊不透光且镜下细胞之外的部分有密密麻麻的小黑点，很可能是染菌，应弃掉。若镜检在细胞之外部分有一些浑浊，可能因为细胞代谢旺盛分泌物堆积，或者因为消化时间不够以至于过度强硬吹打细胞，造成细胞损伤产生大量细胞碎片，应换液。
新鲜培养基呈粉红色，代谢代谢旺盛的细胞的培养基会变黄，此时若细胞贴壁应换液，若此时细胞已长满，应传代。 2>密度：
细胞密度过低，镜下观察稀稀疏疏，则生长缓慢，甚至死亡。 较大的细胞密度可促进细胞之间相互作用，促进细胞增殖生长。 密度过大，密密麻麻，部分细胞不能伸展成圆形，必须传代，此时不传代，一两天后细胞状态持续不好，开始死亡，镜检漂浮细胞增多。 3>状态：
镜下观察细胞，当左右上下移动镜头时漂动的是未贴壁细胞或死细胞，固定不动的是贴壁细胞，贴壁细胞是活细胞。
状态良好的贴壁SY5Y细胞有圆形的胞体和细细分支的突触，突触分明。状态不好的SY5Y细胞，突触不明显，看不到什么细细的分支，甚至成圆形。
消化时快离壁的细胞呈亮亮的圆形。
加药前应提前计算好药品浓度体积，根据实验处理要求的浓度换算出每皿应加药品稀释液体积和无血清培养基体积，列成表格以备加药时明确操作。将药品储备液稀释成稀释液，再与相应体积的无血清培养基在离心管中混合好。加COS时，倒掉含血清培养基，PBS荡洗一遍，加以混合好的药品。加COS 3小时后加Ab，Ab须提前37度水浴5小时，加药时采用半数放液法，弃去1ml原培养基，加入1ml已混合好的药品。