动物细胞工程复习题

动物细胞工程复习题（精选6篇）

篇1：动物细胞工程复习题

1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型? ⑴按生长方式分为二型：

粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。

悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。）

⑵可分四型：(1)上皮型细胞(2)成纤维型细胞(3)游走型细胞(4)多形型细胞 2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程 ⑴通常，体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段：

①原代培养期：也称初代培养，是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。此期的细胞呈现出活跃移动的特点，可见细胞分裂，但不旺盛。处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。细胞群具有明显的异质性，细胞间的相互依存性强，在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。②．传代期 ：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期，原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。一般情况下，正常体细胞在传代10-50次左右后，细胞分裂的能力就会逐渐减弱，甚至完全丧失，细胞便进入衰退期。

③衰退期：处于衰退期的培养细胞，增殖速率已经变得很慢或不再增殖，直至最后衰退死亡。

以上特点，主要是针对体外培养的机体正常细胞，对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言，永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力，这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。

⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。⑤停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度限制 3.简述体外培养细胞对生存环境的基本要求.⑴细胞的营养需要：①基本营养物质： 氨基酸（１２种＋谷氨酰胺）、维生素、葡萄糖、核糖、脱氧核糖等无机离子。②促细胞生长因子：多由血清提供

⑵细胞的生存环境：①温度条件对细胞生长的影响：不同生物来源的组织细胞培养温度不同；体外培养动物细胞最常用的温度是37℃，耐低温不耐高温。在生理温度范围内，温度与细胞生长率之间存在正相关关系。②气相环境对细胞生长的影响：动物细胞培养的气相环境都是采用5%CO2与95%空气（提供氧）的混合气体。Ｏ2参与细胞的能量代谢过程，ＣＯ2用于维持培养液的酸碱度，一般多为开放式培养 ③培养液的酸碱度对细胞生长的影响：大多数的有机体细胞能在pH6.0～8.0的环境中生存。最适宜的pH值范围是7.2～7.4。体外培养的正常细胞耐酸能力要强于耐碱能力④无污染、无毒。

4．什么是细胞培养用液,主要分为哪几类? ⑴培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。⑵主要包括：平衡盐溶液 ；

培养基；

其他培养用液。5．D-Hank’s与Hank’s的主要区别是什么? D-Hank’s不含有Ca2+、Mg2+，常用于配制胰酶溶液。6．简述胰酶的常用浓度及配制时的注意事项。

胰酶(trypsin)溶液： 浓度一般为0.1％～0.25％，配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液。

7.细胞培养中血清的主要作用？

(1)提供基本营养物质 ；(2)提供贴壁和扩展因子(3)提供激素及各种生长因子；(4)提供结合蛋白(5)对培养中的细胞提供某些保护作用 8.血清的使用与储存有哪些注意事项？

（1）使用前的处理：使用前通常在56℃加热30分钟，这一过程称为灭活。热灭活目的：灭活血清中的补体成分。对于一些品质高的胎牛血清和新生牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。

（2）储存条件：血清一般储存于－20℃,同时应避免反复冻融。大包装的血清，首先将血清灭活处理，然后分装为小包装，如10ml、20ml、50ml，储存于-20℃，使用前融化。融化后的血清在4℃不宜长时间存放，应尽快使用。9.简述干粉培养基的配制过程。

DMEM培养液的配制（举例）： ⑴900 mL ddH2O于1000 mL烧杯中，将DMEM粉1包倒入其中，盛粉袋用50 mL ddH2O分次冲洗，也倒入容器，磁力（或玻棒）搅拌溶解。⑵用5％－10％的NaHCO3调pH至7.2。⑶加青、链霉素至终浓度100u/mL 和100ug/mL ⑷用0.22um的滤膜过滤除菌。⑸分装（200 mL左右）后4℃冰箱保存。

10.细胞培养工作室可分为那几个部分，各有什么作用? 一般包括：准备室、培养室和缓冲室。作用：⑴准备室：用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等。⑵培养室：用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。天花板不宜高过2.5M。⑶缓冲室：（更衣室）11.CO2培养箱的作用及使用中的注意事项。

用于维持适当温度、湿度与pH。注意事项：⑴质量关键在控温装置，温度变化一般不应超过0.5度;培养箱的温度设在35～37℃，这是人和哺乳动物培养细胞的最适温度。⑵培养容器需与外界保持通气状态。⑶箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精）⑷水槽:保持一定湿度

12.试述清洁液的配方组成及配制时的注意事项。

⑴清洁液 :重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml），强清洁液

63∶1000∶200，次强清洗液

120∶ 200∶1000，弱清洁液

100∶ 100∶1000 ⑵配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸，并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择塑料制品。配成后清洁液一般为棕红色 13．简述消毒灭菌的常用方法、要求条件及主要应用范围。⑴物理消毒灭菌法

①紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。消毒时间：30min（至少）； 紫外杀菌功能除了紫外本身以外，还可以由产生的臭氧来完成。紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。②过滤：0.22μm（适用于液体）③湿热（高压蒸气灭菌法）15磅,121℃，20min 各种物品有效消毒压力和时间不同，一般要求如下：

培养用液、橡胶制品

l0磅l0分钟

布类、玻璃制品、金属器械等

15磅20分钟

④干烤：160℃, 2 小时（适用于玻璃器皿等）注意：消毒后不要立即打开箱门，以防冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效果。

⑵化学消毒灭菌法：①7５%酒精

主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理。②1－２‰新洁尔灭

主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒。③抗生素

主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。细胞培养中最常用的抗生素是青霉素（常用浓度是100u/ml）与链霉素（100μg/ml）。不要在原代培养中加入抗生素。

14.如何对玻璃器皿进行有效清洗？

玻璃器皿的清洗：浸泡—刷洗(+烘干)—浸酸—冲洗；清洗后的玻璃器皿：干净透明无油迹。⑴浸泡： ①初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。②新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等。先用自来水简单刷洗，然后用5％稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。③再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的残留蛋白质，干固后不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上。⑵刷洗：用毛刷（特制的羊毛刷）沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质。刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度。自然晾干或烘干后泡酸。⑶浸酸：玻璃器皿浸泡到清洁液（洗液）中。清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时间：一般为过夜，不应少于6 小时。⑷冲洗：在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗,使之尽量不留污染或清洁液的残 迹。最好用洗涤装置。如用手工操作，需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，然后用蒸馏水清洗3-5 次，晾干（或烘干）备用 15．细胞培养中最常用的抗生素及使用浓度是什么? 青霉素（常用浓度是100u/ml）与链霉素（100μg/ml）。

16．什么是原代培养？简述原代培养方法的分类及主要操作步骤。

⑴原代培养：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称原代培养。⑵原代培养方法分类：贴块法和消化法。消化法又分为冷消化与热消化；一次性消化与分次消化。主要步骤：

贴块法：将取得洗净并剔去多余成分的组织切成约1mm3大小的植块，用于植块培养。消化法：将取得洗净并剔去多余成分的组织剪碎——蛋白酶溶液消化——机械方吹打组织块—对滤过液离心（<1000r/min, <10min）——用培养液悬浮成细胞悬液——计数并调节细胞密度——用于分离细胞培养

17．何谓传代培养？简述贴壁细胞的传代操作步骤。

⑴传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或其他比率转移，接种到另一培养瓶的培养。⑵贴壁细胞传代培养： ①选取生长良好的细胞，在超净工作台的酒精灯旁，倒去瓶中的旧培养液，加入2～3ml的D-Hanks液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片。②加入适量0.１％－ 0.25％胰蛋白酶消化液，室温消化，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。③用Hanks液洗涤1次，加入适量培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液。④以1：2或1：3进行分装，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37 ℃CO2培养箱培养。⑤观察：细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。18．收集细胞时一般常用的转速和时间是多少？ 转速：1000r/min；时间：5min

19.什么是冷冻保存？影响细胞冷冻保存效果的因素有哪些？

⑴冷冻保存(cryopreservation)：将体外培养物悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度(一般是低于-70℃的超低温条件)，并在此温度下对其长期保存的过程。⑵①冷冻速率当冷冻速度过慢时，细胞脱水严重，细胞体积严重收缩，超过一定程度时即失去活性。冷冻速度过慢，还会引起细胞外溶液部分结冰，从而使细胞外未结冰的溶液中溶质浓度增高，产生溶质损伤。

当冷冻速度过快时，细胞内水分来不及外渗，会形成较大冰晶,造成细胞膜及细胞器的破坏，产生细胞内冰晶损伤。②冷冻保存温度：液氮温度(-196℃)是目前最佳冷冻保存温度。应用-70℃～-80℃条件冷冻保存细胞，短期内对细胞活性无明显影响，但随着冻存时间延长，细胞存活率明显下降。③复温速率 指在细胞复苏时温度升高的速度。一般来说复温速度越快越好。常规的做法是，在37℃水浴中，于1～2min内完成复温。在冷冻复苏中遵循：慢冻速溶原则。④冷冻保护剂：是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。

分为：渗透性：

常用甘油、DMSO

非渗透性

甘油或二甲基亚砜这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。

保护机制：是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤；同时，细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。甘油和DMSO并不能防止细胞内结冰。在使用该类冷冻保护剂时，需要一定的时间进行预冷，让甘油或DMSO等充分渗到细胞内，在细胞内外达到平衡以起到充分的保护作用。目前，DMSO的应用比甘油更为广泛。

非渗透性冷冻保护剂不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质。20．冻存的细胞一般如何复苏？

1)将恒温水浴箱的温度调至37～40℃。2)从液氮中取出冻存小管，立即投入37～40℃温水中快速晃动，直至冻存液完全融解。要在1～2min内完成复温。3)将细胞冻存悬液移入离心管，加入约5m1培养液，轻轻吹匀。4)将细胞悬液经800～1000 r/min离心5min。弃上清液。5)给细胞沉淀物加入完全培养液，轻轻吹吸均匀。将细胞悬液移入培养瓶内，加足培养液进行培养。21．简述培养细胞的非玻璃化冻存过程。

非玻璃化冻存——是利用各种温级的冰箱分阶段降温至-70～-80℃，然后投入液氮进行保存；该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形成。

冻存过程：(1)待冻存细胞悬液的准备 ：①按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物,制备成单细胞悬液,计算细胞总数。②将细胞悬液以800～1000r／min离心5min，弃上清液。③向沉淀物中加入冷冻液。轻轻吹吸均匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml。④按每管1～1.5ml的量，分装于冻存小管内。拧紧管盖。⑤在冻存小管上做标记，包括细胞代号及冻存日期。

(2)分级冷冻：①先将冻存小管放人普通冰箱冷藏层(4～8℃)，约40min。②接着置于普通冰箱冷冻层(-10～-20℃)，30～60min。③再于-30℃放置30min左右（可省略）。④然后在-70～-80℃下过夜。⑤最后将冻存小管投入液氮保存。还有一种简单的方法，就是将冻存小管先悬挂在液氮罐口20 min，再直接投入液氮中保存。第三种方法是，用4℃预冷的冷冻保护液悬浮细胞，分装冻存小管后，将冻存小管放在4℃下30min；然后置于壁厚1 cm以上的泡沫塑料小盒内封好，立刻将小盒放置在-70～-80℃冰箱中24h以上至1周；再将冻存小管投入液氮中保存。

(3)记录：做好冻存记录。记录内容包括冻存日期、细胞代号、冻存管数、冻存过程中降温的情况、冻存位置以及冻存经手人。22．DMSO使用时应注意哪些事项？

⑴在使用DMSO前，不需要对其进行高压灭菌，因其本身有灭菌作用。⑵在常温下，DMSO对人体有毒，故在配制冷冻保护剂时最好带手套。

⑶由于许多冷冻保护剂(如DMSO))在低温条件下能保护细胞，但在常温下却对细胞有害，故在细胞复温融解后要及时洗除冷冻保护剂。23.细胞培养中常见有哪些微生物污染，有何主要特征？

⑴真菌污染：真菌种类多，形态各异，但污染后均不难发现，大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面，肉眼可见；有的散在生长，镜下观察呈丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错穿行于细胞之间。念珠菌和酵母菌呈卵圆形态，散在于细胞周边和细胞之间生长。⑵细菌污染：污染后大多能改变培养液pH培养液变混浊，毒性大的细菌很快导致细胞崩解死亡。加用抗生素的培养用液一般可预防和排除个别少量细菌的污染。⑶支原体污染：支原体是细胞培养中最常见、不易被察觉和干扰实验结果的一种污染。24．运送细胞的比较简便的方法是哪一种，简述其过程。

⑴一是用液氮或干冰保存运输，效果较好，但需用特制容器如小液氮罐等，又因液氮和干冰蒸发均较快，适于空运，比较麻烦;二是充液法运输，比较简便。

⑵充液法运输操作如下： ①选生长状态良好的细胞，待达80%或90%汇合时，去掉旧培养液换入新培养液，量要达到培养瓶的颈部(过满易污染)，保留少许空间，塞紧瓶塞，空气过多运输中气泡运动易使细胞脱落;②妥善包装和运送；一般在不超过四五天到达目的地的情况下，对细胞活力无严重影响;③到达后，倒出大部分培养液，保留正常量，置37℃培养，次日传代。25.简述细胞污染的概念及种类.⑴细胞污染: 凡混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物，都视为污染。⑵组织培养污染: 微生物：真菌、细菌、支原体和病毒；化学物质：影响细胞生存的非细胞所需的化学成分；细胞：不同细胞类型的交叉污染。

26.细胞培养中污染主要通过哪些途径，一般如何预防？

⑴空气: 培养设施不宜置于通风场所；定期清理净化工作台的过滤层，防止阻塞；操作中应减少空气流动；带口罩；夏季潮湿季节空气中含菌数量多，每立方米内含菌数不应超过1～5个。⑵清洗消毒：培养器皿和容器洗刷不净残留污物、培养用液灭菌不彻底等，都可引入有害物。⑶操作：实验操作马虎、动作不准确、消毒观念不强，使用的吸管、刀、剪沾染微生物等；或封瓶口时不严，都可发生污染。同时培养两种以上细胞，操作不慎使用同一吸管或培养用液，可能导致细胞交叉污染。⑷血清：血清也是污染细胞的来源，有的市售血清制备水平低、检测不严，常已被支原体和病毒污染。⑸组织：初代培养组织常有污染；有的是在手术中污染，有的本身可能是被污染的组织(如已发生溃烂的肿瘤组织)；手术用碘酒消毒后，擦拭不净可能混入碘污染。

27． 细胞计数的操作要领及计算公式是什么？

⑴具体操作程序如下：①取血细胞计数板和盖玻片，用75%酒精擦净。将盖玻片放于计数板上。②用滴管取混合均匀的细胞悬液，滴入计数室内。要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。滴加细胞悬液后约静置1分钟后则可以进行计数。③统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，分别数出四角的四个大格（每个大格含有16个中格）中的细胞数。对压边线细胞：计上不计下，计左不计右

⑵计算：一般以每毫升含细胞数来表示，大方格的面积为1mm2，室深为0.1mm，则体积为0.1mm3。推算得0.1mm3×104，才为1ml体积。所以计算公式为：细胞悬液的细胞数）/ml ＝（四个大格子细胞数/4)×104 ×稀释倍数；计数中，如果细胞悬液的细胞浓度过高，必须稀释后再计；如果细胞数太少,可离心浓缩后再计。每个细胞悬液至少滴样两次求平均值。

⑶用细胞计数板计数时应注意的事项:①不要漏计，不要重复②细胞悬液应混合均匀③浓度不可过高也不可过低。

28.简述细胞生长曲线绘制过程及其应用。

⑴细胞生长曲线(cell growth curve)是观测细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，可根据细胞生长曲线分析细胞增殖速度，确定细胞传代、细胞冻存或具体实验的最佳时间。它以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标作坐标图。

⑵制作方法：①培养细胞：首先在2４孔培养板内分别接种相同数量的细胞。计数并记录接种的细胞悬液之密度。②计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24h计数３孔内的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2～3次。如此操作至第七天结束。③绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。29.简述MTT比色法的原理及操作过程。

⑴原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将染料MTT(二甲基噻唑二苯基四唑溴盐)转变为不可溶性的紫色结晶，后者被DMSO（或酸性异丙醇）溶解后所呈现的色度(用OD值表示)反映出活细胞的代谢水平。死亡细胞则无此酶活性。1.MTT溶液的配制

用PBS液(pH7.2)或者生理盐水将MTT配成5mg／m1的溶液。（用0.2µm滤膜过滤）。保存：于4℃避光保存。可用2周。若暂不用，可冻存。

2.实验过程：（1）、将细胞培养于96孔培养板。（2）、按不同实验要求处理细胞。（3）、每孔加入15-20µlMTT液，继续培养3～4h。（4）吸去培养液，每孔加入200µlDMSO,在微型振荡器振荡5min,充分溶解混匀。（5）在酶标仪上测定光吸收。测定波长为490nm，以只加培养液的的培养皿为空白对照。

3.结果分析 ：细胞存活率=实验组光吸收值/对照组光吸收值*100％

4.注意事项：(1)高浓度血清可影响光吸收值,常使用含10%血清的培养液,在加入异丙醇溶液或DMSO前尽量吸净培养液。(2)吸去培养液时动作要慢,以免吸去形成的结晶。30.简述台盼蓝排除检测法原理

原理：由于死细胞的细胞膜通透性发生改变，某些染料可大量进入却不被排出，因而细胞呈色。而活细胞反之，能排出进入细胞内的染料，因而不易着色。此法的原理即是利用死、活细胞对染料的不同反应而区分开两种细胞。最常用的为“台盼蓝排除检测法”

(2)活体染色与细胞计数：①将1滴细胞悬液(贴壁细胞可经0.25％胰蛋白酶溶液消化后，吹打制成细胞悬液)与2滴台盼蓝液混合后，滴入细胞计数板。②2min后，在显微镜下计数至少200个细胞。未着色的为活细胞，呈蓝色的为死细胞。计算活细胞百分比。

注意事项:台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰实验结果。

篇2：动物细胞工程复习题

【考纲要求】1.动物的细胞培养与体细胞克隆(A)。2.细胞融合与单克隆抗体(A)【学习过程】

考点一．动物细胞培养

典型例题1．如图是动物细胞培养的基本过程示意图，请据图回答。

(1)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是___________，在容器B用__________酶处理，这是为了使细胞____________________。

(2)培养首先在C瓶中进行,这时的细胞培养称为，瓶中的培养液成分有______________ 等。此时培养时，细胞增殖的方式是 ______________，此外，细胞增殖还表现出_______________和接触抑制等特点。

（3）分装后，在D瓶中培养称为。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，原因是。

问题思考：

1.胰蛋白酶作用的对象时什么？ 位于细胞内还是细胞间？ 用胰蛋白酶处理分散成单个细胞的的目的是什么？

2.动物细胞培养液与植物组织培养培养基有何独特之处？

3.在动物细胞原代培养过程中，会出现接触抑制现象，此时瓶壁上形成的细胞是____层。

4.动物细胞培养过程中几次用到胰蛋白酶?

5.“在观察根尖分生组织细胞的有丝分裂实验中”使植物细胞互相分离开来用什么方法？

6.动物细胞培养能否像植物组培那样最终培养成新个体？

练习巩固

1.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是()A．培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞 B．克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D．恶性细胞系的细胞可进行传代培养

2．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列说法正确的是()A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理

B．细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞的呼吸 C．甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象 D．仅用该培养液也能用来培养乙肝病毒

3.用动植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述，不正确的是

A．都需用CO2培养箱 B．都需在培养基中加入动物血清 C．都需在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性

考点二．体细胞核移植(克隆)

典型例题2．世界上第一只克隆绵羊“多利”的培育程序如图所示，请据图回答

(1)“多利”面部的毛色是______，请根据遗传学原理说明判断根据：____ _____。(2)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞细胞核也具有__ ____。问题思考：

(1)1)被去掉的黑面母绵羊的细胞核和白面母绵羊的细胞质，很快都将死亡，哪一个最先死去？

（2）从生殖角度来看，你认为这种产生新个体的方式属什么方式？

（3）用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想这是为什么？

(4)与克隆动物有关的亲本有几个？关系怎样？

（5）对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，操作过程有什么不同？

（6）课本体细胞核移植技术存在的问题的内容

练习巩固

1.下列对动物核移植技术的描述不正确的是（）

A 哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植

B 体细胞核移植的过程中可通过显微操作去除卵细胞中的细胞核 C 体细胞核移植的过程中通常采用卵细胞作为受体细胞

D 通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对提供体细胞核的动物进行了100%的复制

2.如图为某哺乳动物的生殖过程图，正确的叙述是()

A．个体2为克隆动物，c为高度分化的体细胞 B．个体2的遗传性状与提供b细胞的母羊完全不同 C．产生动物个体2的生殖方式为有性生殖 D．e细胞为完成减数分裂的卵细胞

考点三．动物细胞融合---制备单克隆抗体

典型例题3如图表示单克隆抗体的制备过程，据图回答下列问题：

(1)制备单克隆抗体的步骤：

a．将________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得B淋巴细胞，若要生产预防SARS的疫苗，则应用____________感染小鼠。

b．通过图中②过程获得的细胞为____________，它具有 的特点.c．图中③为______________过程，常用________________作为诱导剂。将诱导融合后的细胞，放在________培养基的多孔培养板上培养、筛选，筛选得到的细胞中的染色体数正好是小鼠体细胞中的二倍吗？________，原因是_______________________(2)将该抗体制成生物导弹，则生物导弹的组成是____________________；

问题思考：

1.细胞融合方法有哪些？细胞融合过程有哪些结构融合？

2.动物细胞融合与植物细胞融合方法有何区别？

3.制备单克隆抗体中融合细胞有几种？

4.融合后的细胞要进行筛选，用什么培养基筛选？几次筛选？

5.单克隆抗体比常规抗体有什么优点？

练习巩固

1.下列有关单克隆抗体的制备的叙述，正确的是

A.先利用特定的抗原蛋白饲喂小鼠，再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞 B.为避免病毒感染，应用聚乙二醇诱导骨髓瘤细胞和淋巴细胞融合 C.体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加动物血清和抗生素 D.经过选择培养基初次筛选的杂交瘤细胞即可进行体内或体外培养 2．下列有关生物工程的叙述正确的是

A．在筛选杂交瘤细胞的过程中需要使用特定的选择培养基 B．应用基因诊断技术，可检测受体细胞中目的基因是否表达

C．茎尖细胞具有很强的分裂能力，离体培养时不需要脱分化即可培养成完整植株 D．将牛的体细胞核移植到去核卵母细胞中，获得克隆牛是一种培育新物种的方式3．下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较，正确的是

篇3：动物细胞工程复习题

1 课程简介

《生物工程大实验》是生物工程专业的一门必修实验课,主要包括发酵工艺学、植物细胞工程、动物细胞工程3部分,在课程的教学过程中,动物细胞工程的实验周期相对稍短一些,同学们对动物细胞工程兴趣会更浓一些,因此,在动物细胞工程实验教学上应率先进行开放教学模式摸索。

2 教学形式

教学共分为5部分内容,包括实验方案设计、方案讨论、实验操作、实验论文报告、实验总结。

2.1 实验方案设计

笔者在进行《动物细胞工程》理论教学中,发现学生对动物细胞培养特别感兴趣。利用学生的这种好奇心理,在课程结束时,安排学生做了一个实验方案设计———小鼠××细胞系的建立,该设计既是理论课程的一个结课报告,也是本实验的一个实验指导。为节省材料,将学生分成几个大组,每个大组8个人,然后每个大组再分成4个小组,每小组2个人。每个大组发放1只小白鼠,每个小组的学生根据自己的兴趣,可自由选择目的细胞,包括肌肉细胞、肾脏细胞、肝脏细胞、肺细胞、骨髓干细胞等。这样在一个大组内就可做不同的细胞,便于同学之间的相互交流和学习,同时也节约了材料。

该次实验方案是一个完整的有关动物细胞系建立的具体方案,包括实验准备工作、培养基的配制、原代细胞培养、细胞的纯化与传代、细胞生长曲线的测定、细胞的冻存与复苏。在方案中,要求学生详细写出实验目的、实验原理、实验材料、方法与过程及注意事项,这就要求学生认真思考自己所需要的材料,因为每组学生所做的细胞不同,采用的培养及纯化方法也不相同,所需要的材料也不相同,包括需要哪些药品、试剂怎样配制、需要多少吸管,甚至连废液缸都要考虑到。这样培养了学生的主动思考能力和积极参与性,而不再像以前一样由老师准备好所有器材,自己只需要按照老师指定的步骤,将老师已准备好的试剂一一的加进去即可。

2.2 方案讨论

方案设计好以后,教师进行修改,主要指出一些原则上的错误,让学生进行改进,然后进行交流。挑选一个比较典型的小组,向大家汇报,让同学来指出其设计上的不足,再在老师的指点下,比较自己的方案,这样在讨论中让学生对自己的目的和要求更加清晰。最后,给大家播放有关动物细胞培养方面的教学录像,详细介绍在操作中的注意事项,特别是一些细节问题,让同学们事先有所了解。

2.3 实验操作

大家的方案在讨论和看完录像后再一次进行修改,经老师修订同意后就可进行实验操作环节。学生按大组领用所需的器材,自己进行清洗、包装和灭菌处理,配制所需的试剂,按照设计的实验方案进行实验操作。在实验过程中,由于细胞生长的进度不同,同学们需要在不同的时间来进行处理。为解决这个矛盾,实验室采取了全天开放、学生预约登记的形式,保证学生可以在预定的时间进行实验。在实验进行过程中,要求学生每天来观察细胞生长情况。

2.4 实验论文报告

该实验报告采用科技论文报告的形式代替传统的实验报告,要求学生严格按照科技论文格式写出题目、前言、材料与方法、结果与分析、讨论与建议。前言部分要求学生简单介绍实验的原理与目的,由于动物细胞原代培养与细胞纯化的方法很多,多种方法大多可以使用,学生甚至可以同时使用不同的实验方法进行,但要求必须写出选择此方法的依据。材料与方法部分要尽可能详细,以锻炼学生自己动手准备实验的能力。实验结果要实事求是地记录下来。讨论为重点部分,要求结合理论知识对实验结果进行分析、综合、归纳和推理。若结果与预期不符,应分析原因,列出改进措施。最后,要求学生对此次实验教学提出自己的看法和意见。

2.5 实验总结

课程结束后要对此次实验的情况进行总结,对出现的一些典型的情况进行分析。比如染菌严重等。分析其可能的染菌环节,及操作上的一些不正确的地方,让学生明白自己的不足之处。

3 教学效果

此次开放实验教学,总体来说还是取得了较为满意的效果,与以前传统的实验教学方式相比,该教学主要达到了以下目的[3,4]:

3.1 真正做到了理论和实践相结合

由于《动物细胞工程》是一门理论与实践结合非常紧密的课程,在课程讲授过程中,会涉及到许多与实验操作有关的知识,而学生以前并没有相关知识的积累,讲解起来非常空洞。比如,在讲授原代细胞的制备方法中,会包括酶消化法和组织块法2种方法,这2种方法有何优缺点,应怎样根据实际情况进行选用等,这类知识教师通常在课堂讲授时只讲一些基本的理论知识,而具体情况需同学们通过自己的实践和相互交流就得到深刻的认识。

另外,由于要求学生自己动手设计实验方案,而方案的设计必须建立在踏实的理论知识基础上,这就要求学生在实验方案设计的同时,必须理清楚方案设计的理论依据,同时也培养了同学们查阅资料、阅读文献的能力。

3.2 有效培养了学生的动手能力、思维能力,训练了从事科研工作的基本功

由于实验带教老师仅指出实验的名称,提供与本实验相关的实验器材、试剂、动物等,其余由学生通过阅读教材、查阅资料,明确实验目的、实验方法与步骤、注意事项等内容,并在此基础上按步骤进行操作。在教学过程中,学生始终处于主体位置,教师则处于主导位置。学生在实验中必须充分应用所学的理论和已掌握的技能,完成整个实验,包括实验的设计、操作的步骤、仪器和材料的选择、结果的分析等。其中每一步骤对学生来说都是全新的,充满了挑战性,试验结果不是预先知道的,学生必须对实验中出现的异常现象及时分析,并提出相应解决办法,这就要求学生要有严密的实验思路和严谨的科学态度,调动学生的主动性。比如器材的清洗、包装、灭菌等工作,平时大家都不太重视,而通过实验,就有了切身体会,有的同学在做过滤除菌制备培养基时,由于无菌工作未作好,导致培养基染菌变浑浊而只能重做。由于各小组的实验材料和结果都不相同,也进一步拓宽了学生的知识面,充分挖掘了学生的创造才能,促进学生科学素质的提高,培养学生的综合能力。

实验结束后要求学生按照论文的格式和规范撰写实验报告。对于普通高校的大多数学生来说,撰写论文是一件遥不可及的事情,现在他们具有了论文的素材,就可以模仿科技论文的写作要求去完成,使学生获得了撰写科研论文的训练,掌握了从事科研工作的基本功。

3.3 加强了老师和学生之间的交流,增进了师生感情

由于学生频繁出入实验室,与老师接触的时间增多,师生之间可广泛的进行交流,可以加深学生对老师的理解、对教师行业的尊重。

3.4 培养了责任心和科学态度,提高了兴趣,增强了自信心

实验分小组,做到任务到人,每个人对自己培养的细胞都爱护有加,这种负责任的心态是在做别的实验时看不到的。与以往实验不同,同学之间是用自己的劳动成果做比较,都格外努力。成功的同学根据自己的想法做设计、做实验,获到了很好的结果,会产生一种自豪感和自信心。而失败的同学虽然有一些丧气,但在认真总结教训和向成功同学取经的基础上,在第2次实验中还是会得到满意的结果。另外,由于实验过程中需要同学之间相互合作、协调进行,增进了同学的团结、互助、协调的精神。

3.5 提高了师资队伍水平和实验教学质量

开放式教学中一些实验内容反映了当代科学技术的发展水平,涉及的知识面广。教师不仅要有本学科扎实的理论基础、较好的实验技能,还要加强业务学习,不断更新自己的知识,这在新实验开设和学生科技创新活动中显得尤其重要。可以说开放教学提高了师资队伍业务水平。从传统的实验教学到开放性实验教学的转变不仅对教学双方产生巨大影响,对提高实验室的建设和管理水平也会起到不可估量的作用,这种改革无疑会使实验室的各项工作发生质的飞跃。开放实验维护了学生的原创精神,能使学生在宽松的实验环境中实现从被动学习到主动学习的转变。可以说开放实验是实验教学中实现因材施教的必由之路,是培养学生创新能力的必备条件。

4 存在的问题与改进措施

4.1 实验室配套设施不完善

由于实验人数剧增、延续时间较长,仪器设备接待能力明显不足。因为细胞培养严格要求无菌操作,所以,大部分操作都在超净台上进行,这样就造成对超净台需求的矛盾。而且,因为同学们大多是新手,操作时非常小心、谨慎,这样也常常导致不能按照预定的时间结束实验,设备流动速度慢,同学们等待时间较长。另外,由于学生人数多,人流量大,导致无菌室有名无实,也由此使一些同学的实验材料被污染。

4.2 增加了教师的实际工作量

设计性实验教学比单项实验教学工作量大、持续时间长。为了充分利用设备,缓解实验室设备紧张的压力,在一个规定的时间段,采用了学生预约、全天开放的实验模式。为了做好实验,同学们无论中午、晚上,只要有时间就可以到实验室做实验,由于学生以前没有受过这样的训练,教师必须随时在场给学生提供帮助,这就要求教师做出更多的奉献。另外,由于学生采用了各种各样的材料,教课老师需要查阅大量的资料,自己做一些预备实验,这样才能更好地指导学生。

4.3 加大了实验费用开支

实验要求学生自己准备实验材料和试剂,这比教师统一准备要消耗更多的实验试剂和材料,从而加大了实验费用开支。而且由于大家所采用的实验材料不一致,虽然老师在审阅设计方案时,取消了一些耗费较大的项目,但是仍然需要准备各种实验相关试剂和材料,也造成了实验开支的大大增加。

5 结语

与课堂理论教学相比,实验教学更有利于培养学生的创新能力,实验室是让学生学会从实践中发现问题、解决问题和将所学知识运用到实际中去的重要场所,是培养具有创新能力的科学研究和应用人才的实践基地。而要真正上好实验课并非易事,综合性、设计性实验教学仍有待进一步完善。

摘要：对生物工程专业的动物细胞工程实验进行了开放式实验教学模式探讨,通过实验方案设计、方案讨论、实验操作、实验论文报告、实验总结等5个教学环节的实施,达到了较好的教学效果。同时分析了此种教学模式存在的问题与改进措施,以为切实搞好开放实验教学活动提供参考。

关键词：动物细胞工程,开放实验教学,教学模式,西南科技大学

参考文献

[1]常东胜,李涛,李静平.开放式实验教学模式的探讨[J].齐齐哈尔医学院学报,2005,26(7):810-811.

[2]李江滨,黄迪南,侯敢.生物化学实验教学改革探讨——论文式实验报告[J].卫生职业教育,2005,23(15):100-101.

[3]周俊,刘明,曹海平.浅谈开放式实验教学的优点[J].中小企业管理与科技,2010(1):107-108.

篇4：“细胞工程复习”教学设计

“细胞工程”是人教版新课程教材《生物选修3•现代生物科技专题》的教学内容,根据操作对象的不同,可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。本部分内容是从细胞水平和分子水平了解植物细胞工程和动物细胞工程。细胞的全能性是植物细胞工程的基础,植物组织培养技术是植物细胞工程的基本技术手段,是植物体细胞杂交与单倍体育种的基础。动物细胞培养技术是核移植、细胞融合与单克隆抗体等技术手段的基础。本部分内容以必修1中的细胞学、必修2中的遗传学,以及必修3中的内环境与稳态等知识为基础,为“胚胎工程”、“生物技术的安全性和伦理问题”的后续学习打下了基础,共同构成一个相对完整的知识体系。

〖学生分析〗

高二的学生已经掌握了一定的生物学基础知识,具备了一定独立思考和判断的能力,合作性学习能力也比较强,但是个体之间仍然存在着较大的差异。

〖重、难点分析〗

1.植物组织培养是本节的重点

分析:植物组织培养重点讲述植物组织培养技术和基本原理,即离体培养的植物细胞脱分化和再分化过程,不仅在知识上对细胞结构、功能、细胞增殖、细胞分化进行深化和擴展,而且还为培育无病菌植株、制备人工种子及植物体细胞杂交等提供技术支持。同时,随着科学技术的不断进步,植物组织培养这门新技术将日益普及和深入,成为现代农业生产中的重要技术手段。

2.植物体细胞杂交是本节的难点

分析:植物体细胞杂交是在植物组织培养技术的基础上,借助动物细胞融合的方法发展起来的一门新型生物技术。这部分知识对于学生来说是全新的,因此应用表格和动物细胞融合比较学习。

3.单克隆抗体是本节的重点、难点

分析:动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、核移植等。其中动物细胞培养是其他技术(单抗、细胞融合、核移植等)的基础,其价值更多是通过其他技术成果来体现的。而动物细胞融合技术是目前较成熟的、其最重要的用途便是制备单克隆抗体。可见单克隆抗体应列为本节的重点内容,同时单克隆抗体技术本身环节多,技术复杂,因此也列为本节的难点所在。

〖设计理念〗

从新旧知识联系入手,进一步深入学习细胞全能性理论,并在学习过程中,渗透对学生能力和学习方法的培养;充分利用学生现有的知识,借助于多种直观教学手段,特别是多媒体课件,使学生对植物体细胞杂交和单克隆抗体由点及面的学习;智能训练,实现知识的正向迁移。

〖教学目标〗

1.知识目标

(1)细胞全能性(理解)。

(2)植物细胞工程的主要技术——植物组织培养和植物体细胞杂交(知道)。

(3)动物细胞工程的主要技术——动物细胞培养、动物细胞融合、核移植(知道)、单克隆抗体(知道)。

2.道德目标

通过向学生介绍几大动植物细胞工程技术的发展动态及一些新的研究成果,使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入,知识不断更新并向前发展。认识到学无止境,形成终生学习的意识。

3.能力方面

在教学过程中,合理利用图表、流程图等,培养学生的观察能力、思维能力以及整合、运用科学信息的能力;通过联系生产实际,培养学生活学活用,理论联系实际的能力。

〖教学手段〗

CAI教学、讨论教学、对比教学。

〖教学策略和程序〗

1.教师课前准备

图片资料,科学文摘,多媒体课件。

2.学生课前准备

上网、阅览室查找资料;复习细胞工程的相关知识。

3.教学过程(见表1)

4.作业设计

(1)完成《世纪金榜》基础梳理部分,巩固课堂上所学的知识。

(2)任何新技术的诞生,总会让人们争论不休,支持者当然可以举出无数理由,反对者也能历数此项技术的种种不足,对于“克隆动物”,你是持支持还是反对态度,并分别举出你支持或反对的理由。

〖教学反思〗

1.充分体现了新课程理念

本专题内容与学生生活联系的比较少,学生对此比较陌生,因此采用了学生先复习,教师运用多媒体演示和学生活动相结合的手段,在教学过程中,合理利用图表、流程图等,培养学生的观察能力、思维能力以及整合、运用科学信息的能力。充分调动了学生学习的积极性,激发了学生学习的兴趣和求知欲,培养了学生分析问题、解决问题的能力,进一步体现了学生学习的“主体”地位和教师的引导作用。

2.教学中存在的问题

(1)对课堂的调动不够,基础好的同学思维活跃,而基础差的同学在合作学习中参与的较少。

(2)课堂教学的方法还有些单一。

篇5：动物细胞工程复习题

2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术

1．对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法正确的是()A．取单个肝肿瘤细胞进行培养，获得细胞群的方法不属于克隆培养法 B．细胞培养过程中不需考虑细菌的污染问题 C．该培养液也能用来培养乙肝病毒

D．在原代培养过程中，培养的细胞最终也会出现停止增殖的现象

解析：A选项的描述属于细胞层次的克隆，A项错误。培养液受细菌污染后，其中营养成分要发生改变，不利于细胞的培养，B项错误。病毒的生存离不开细胞，用培养液不能培养病毒，C项错误。一般的细胞繁殖10代后，将停止增殖，D项正确。

答案：D 2．动物细胞培养过程的顺序是()①原代培养 ②传代培养 ③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液 A．①②③

C．②①③

B．①③② D．③①②

解析：动物细胞培养过程的程序为选取幼龄动物或早期胚胎组织作培养材料→用胰蛋白酶处理组织，制备细胞悬液→原代培养→传代培养。

答案：D 3．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织或细胞()A．容易产生各种变异 C．取材十分方便

B．具有更高的全能性 D．分裂增殖的能力强

解析：用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织，主要因为胚胎或幼龄动物的器官或组织分裂能力旺盛。

答案：D 4．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列叙述正确的是()A．制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理肝组织块 B．恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 C．为了保证细胞培养所需的无毒环境，需大量添加各种抗生素 D．本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小

解析：在利用肝组织块制备肝细胞悬液时，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在强酸环境下才能起作用，但这样的环境不适于细胞生存，A项错误；细胞培养应在含CO2恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH值，B项错误；抗生素是用来杀菌的，不是杀病毒的，C项错误；本实验应设置对照实验，用添加甲药物、乙药物的培养液分别培养细胞，根据变异细胞占培养细胞的比例，以检测药物对甲、乙的毒性大小，D项正确。

答案：D 5．如图表示动物细胞培养程序图，请据图回答下列问题。

①取动物组织块

↓ ②________

③处理组织分散成单个细胞

↓ ④制成________

↓

⑤转入培养液中进行培养

↓

⑥处理贴壁细胞分散成单个细胞，制成________

↓

⑦转入培养液中进行培养

(1)过程②表示________________________________________。

(2)过程③和⑥用________处理组织或贴壁细胞分散成单个细胞，这样做的目的是_______________________________________ ________________________________。

(3)④和⑥的过程都要把分散的细胞制成__________________。(4)过程⑤进行的细胞培养是________，细胞适于____生长增殖。

(5)过程⑦进行的细胞培养是________，一般传至______代后就不易传下去了，传至________继续培养时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，部分细胞的________会发生改变。继续培养时，少部分细胞发生了________，朝着等同于________的方向发展。

解析：进行动物细胞培养时，首先将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成许多单个细胞，然后，用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。以后，细胞进行有丝分裂，数目不断增多。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常被称为传代培养。

答案：(1)剪碎组织(2)胰蛋白酶 解除由于接触对细胞生长和繁殖的抑制(3)细胞悬液(4)原代培养 贴壁(5)传代培养 10 10～50代 细胞核型 突变 癌细胞

A级 基础巩固

1．动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于()A．培养基不同

B．动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C．动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能

D．动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株

解析：此题考查的是动物细胞培养与植物组织培养的区别与联系。动物细胞培养的培养基与植物组织培养的培养基不同，动物细胞一般用液体培养基培养，而植物组织培养一般用固体培养基，与植物组织培养的培养基相比，动物细胞培养的培养基中还要加动物血清等，A项正确。它们都是在无菌条件下进行的，都可以传代培养，且都能够大量培养。B、C、D项的叙述有误。

答案：A 2．下列关于动物细胞培养的说法正确的是()A．连续细胞系不具有异倍体核型

B．动物组织细胞间的胶原纤维可用纤维素酶水解

C．原代培养细胞、有限细胞系比无限细胞系、肿瘤细胞更容易克隆 D．提高动物细胞克隆形成率需要以滋养细胞支持生长及激素刺激等条件

解析：连续细胞系大多数具有异倍体核型；动物组织细胞间的胶原纤维的主要成分是胶原蛋白，可以用胰蛋白酶酶解，不能用纤维素酶水解；在进行细胞克隆时，原代细胞、有限细胞系通常不如无限细胞系、肿瘤细胞。

答案：D 3．一只羊的卵细胞被另一只羊的体细胞核移植后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下了一只羊羔，这种克隆技术具有多种用途，但是不能()A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型

解析：目前的克隆技术是将动物的一个细胞的细胞核植入一个去核的卵细胞，经过试管 培养一段时间后，再移入另一个体的子宫内发育、分娩的技术。通过该技术能够保持亲本的优良性状，保持性别不变，也能够用于保存物种，但不能改变动物的基因型。

答案：D 4．据英国《卫报》披露，纽卡斯尔大学研究人员不久前成功实现一项生殖医学技术，将患有线粒体疾病妇女的受精卵中的细胞核移植到健康妇女捐献的去核卵子中，最终产下了健康的婴儿。下列叙述错误的是()A．此项技术的基础是动物的细胞和组织培养 B．此项技术的原理与克隆羊“多莉”完全相同

C．健康妇女捐献的卵子的细胞质具有调控移入细胞核发育的作用 D．婴儿出生后具有患病夫妇以及捐献健康卵子的妇女三方的遗传特征

解析：动物克隆技术的基础是动物细胞和组织培养，A项正确；此项技术用的受精卵的细胞核，而克隆羊用的是高度分化的乳腺细胞，分化程度不同，B项错误；卵细胞的细胞质具有调控移入细胞核发育的作用，C项正确；该婴儿细胞的核基因由形成受精卵的夫妇提供，质基因由提供去核卵子的妇女提供，D项正确。

答案：B 5．2015年2月3日，英国国会表决同意允许医学界利用3个人的基因共同育子，成为全世界第一个准许“三亲育子”的国家。“三亲育子”技术是将父母细胞核基因与一位妇女捐赠者的健康线粒体结合在一起，引入的基因只占婴儿总基因的0.1%。这项技术旨在防止因线粒体基因缺陷引起的严重遗传疾病。下列相关描述正确的是()A．线粒体基因缺陷引起的遗传病是母系遗传病，传女不传男 B．“三亲育子”可能会用到人工授精技术、胚胎移植技术等

C．通过“三亲育子”技术得到的“三亲婴儿”的健康线粒体基因不一定能传给其后代 D．若父亲患有线粒体基因缺陷病，需要通过“三亲育子”技术避免将有缺陷的基因传给下一代

解析：线粒体基因缺陷引起的遗传病是母系遗传病，是由母亲的卵细胞传给子代的，表现为母亲患病子女都患病，A项错误；“三亲育子”技术主要利用的是胚胎工程技术，目前在生产实践中应用较多的是体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植，B项错误；通过“三亲育子”技术得到的“三亲婴儿”如果是个女孩，其健康线粒体基因可以通过卵细胞传给其后代，如果是个男孩，其健康线粒体基因一般不能通过精子传给子代，C项正确；精子的线粒体都集中在尾部，且受精时只有精子的头部进入卵细胞，故男子的线粒体基因一般不能通过精子传给子代，若父亲患有线粒体基因缺陷病，子代一般不会患病，D项错误。

答案：C

B级 能力训练

6．回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成单层细胞，这种单层培养法的出现，对细胞培养的发展起了很大的推动作用。

(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，但极少数细胞克服细胞寿命的自然极限，获得________，朝着等同于癌细胞的方向发展，该种细胞由于细胞膜上________减少，导致细胞间的黏着性________。

(3)在动物细胞体外培养过程中，一般要满足四个方面的条件：无菌无毒的环境、营养、温度、pH及气体环境，其中在培养液中添加________，以防培养过程中的污染；由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，故在使用合成培养基时，通常需加入________等天然成分；气体环境主要是提供细胞所需的O2和CO2，其中O2的作用是_____________，CO2的作用是______________________。

(4)动物细胞培养可用于检测某种物质的毒性大小，若用被检测物质培养的细胞与对照组相比，发生变异的细胞数目所占的百分比大，则该物质的毒性大，判断的依据是________________________。

答案：(1)接触抑制(2)不死性 糖蛋白 降低

(3)抗生素 血清、血浆 供给细胞进行有氧呼吸 维持培养液的pH(4)物质的毒性越大，越容易导致细胞发生变异

7．某生物兴趣小组对一种抗癌新药进行实验时，以动物肝癌细胞为材料，测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响。请回答下列有关动物细胞培养的问题。

(1)在动物细胞培养时，将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基称为________培养基。通常在培养基中还需要加入适量________等一些天然成分。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是________________。另外，还应该保证被培养的细胞处于________、________的环境。

(2)在细胞生长过程中，当细胞贴壁生长到一定程度时，其生长会受到抑制，这种现象称为________。

(3)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的________。(4)请你帮助兴趣小组的同学分析本实验，实验的自变量是________________，实验组和对照组除了自变量不同外，其他处理均应该相同，这是为了遵循实验设计的________原则。

解析：(1)将动物细胞所需要的各种营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在使用合成培养基时，还要加入一些动物血清、血浆等天然成分。细胞培养所需的气体中有CO2，作用是维持培养液的pH。被培养的细胞必须处于无菌、无毒的环境中，才能保证细胞正常地生长增殖。(2)动物细胞在分裂过程中有接触抑制的现象。(3)抗生素能杀死培养基中的微生物，保证无菌无毒环境。(4)要测定抗癌药物对体外培养细胞增殖的影响，实验的自变量为抗癌药物的有无。其他无关变量应该相同，否则会干扰实验结果，这种设计遵循的是实验的单一变量原则。

答案：(1)合成 血清、血浆 维持培养液的pH 无菌 无毒(2)接触抑制(3)抗生素(4)是否加入抗癌药物 单一变量

8．美国威斯康星州的一个奶牛场有一头奶牛，年产奶量达30.8 t，我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t。某人用该高产奶牛的耳朵细胞，采用核移植技术获得高产奶牛(如下图)。

(1)目前完成①的方法有______________、________________、________________、化学物质处理等。

(2)③过程中选择去核卵母细胞作为受体细胞的原因是 _______________________________________________________ ______________________________________________________。(3)④过程所利用的技术是_____________________________。其原理是______________________________________________ __________________________。

(4)该实验的成功说明已分化的耳朵细胞的细胞核中含有与________一样的全套基因，这种繁殖方式属于______________。

解析：进行动物体细胞核移植需用去核的卵母细胞作受体细胞，对构建的重组细胞需经历动物细胞培养，并诱导形成早期胚胎。重组细胞能够培育为动物体，表明动物细胞核具有全能性；克隆动物属无性繁殖。

答案：(1)显微操作去核 梯度离心 紫外光短时间照射

(2)卵母细胞体积大，易操作，营养物质丰富，且细胞质中含有激发细胞核全能性表达的物质(3)动物细胞培养 细胞增殖(4)受精卵 无性繁殖

9．华南虎是原产中国的老虎品种，已有近30年没有野生华南虎出现的报告，野生华南虎也被一些专家认为已经濒临灭绝。科学工作者尝试用普通老虎完成体细胞克隆华南虎的研究，下图是其培育过程，请据图回答：

(1)克隆华南虎的遗传性状与________(填字母)虎基本一致。(2)A、B、C 3只虎哪一只没有提供遗传物质？________。(3)克隆华南虎的过程是否遵循孟德尔的遗传定律？为什么？ _______________________________________________________ _______________________________________________________ ______________________________________________________。

(4)有人设想将虎的体细胞与牛的体细胞进行融合，以期获得新物种“虎—牛”，你认为依据目前的生物技术和理论能否实现这一愿望？________。原因是______________________________________ _____________________________________________________。

解析：(1)由克隆华南虎的过程可知，华南虎A提供细胞核，华南虎B提供细胞质，所以克隆虎D的遗传性状与供核的A更接近，即相当于克隆了A。(2)老虎C只提供胚胎发育的场所，没有提供遗传物质给D。(3)核移植过程没有经过两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，没有减数分裂方式的出现，不遵循孟德尔遗传定律。(4)无论是高度分化的动物体细胞，还是不同种动物体细胞融合后的杂交细胞，经细胞培养只会细胞增殖，不会发生细胞分化，形成不了个体，动物体细胞的全能性无法体现。

答案：(1)A(2)老虎C(3)不遵循。克隆属于无性生殖，而孟德尔的遗传定律仅在有性生殖的减数分裂过程中起作用

篇6：动物细胞工程复习题

灭菌：是彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的一切微生物以及它们的芽孢或孢子，使物体成为无菌状态。

消毒：是非彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的有害微生物，但不能杀死全部芽孢。

防腐：是抑菌过程，即用化学或物理方法，防止或抑制微生物的生长繁殖。

动物细胞机械分离法：通过适当的物理学处理手段，将动物组织解离成单个细胞的方法。

动物细胞消化分离法：通过酶或螯合剂把已经切成较小体积的组织进一步分散，使之成为小细胞团或单个细胞状态的方法。

单层细胞培养法：将解离得到的细胞，用培养液制成所需浓度后，接种培养的方法。

悬浮细胞培养法：指细胞悬浮在培养液中生长增殖的培养方法。

动物细胞传代培养：将原代培养细胞分离、稀释，并接种到新培养器内，继续扩大培养的过程。

14、细胞系：原代培养物经首次传代成功后的细胞群体，由原代培养物中的各种细胞组成。

15、有限细胞系：细胞系不能继续传代，或传代数有限，大多数二倍体细胞为有限细胞系。

16、连续细胞系：细胞系在体外培养时表现出具有无限传代的潜力，也称为无限细胞系。

17、细胞株：通过选择或克隆化培养，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群。

27、动物细胞培养用微载体：指直径在 50 微米到数百微米不等、适合动物细胞贴附和生长的微珠。

1、细胞重组：采用一定方法从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外将不同细胞来源的细胞器进行重组，并组装成有生物活性的细胞或细胞器的一门技术。

2、胞质体：除去细胞核后，由膜包裹的无核细胞。

3、核体：是与细胞质分离得到的细胞核，带有少量细胞质，并围有质膜。

4、微细胞：由一条或几条染色体、少量细胞质和完整质膜包裹而成。

8、核移植技术：利用显微操作等方法，将一个细胞的核移植到另一个细胞中，或将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换。

3、干细胞：来自胚胎、胎儿或成体内，具有无限自我更新和增殖能力以及不同程度分化潜能的一类细胞。

4、胚胎干细胞：由哺乳动物早期胚胎分离克隆出来的未分化细胞，能分化为机体的各种组织细胞，并具有形成嵌合体的能力。

5、诱导性多潜能干细胞：由已分化的体细胞诱导而来，具有类似胚胎干细胞的高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞。（181）

6、全能干细胞：可以发育成一个完整个体的干细胞，一般指哺乳动物的受精卵和 8 个细胞期以前的卵裂球。

7、亚全能干细胞：失去了发育成完整个体的能力，但仍具有形成内、中、外三个胚层来源的所有细胞类型潜能的干细胞。

13、阐述动物细胞工程的应用前景。

（1）生物制品生产

①动物细胞大规模培养技术的建立和发展，大大促进了生物活性物质、药品和疫苗的生产。

②基因重组技术及杂交廇技术的建立和发展，促进了利用动物细胞表达高质量、高价值蛋白。

③单克隆抗体在多种疾病的诊断和治疗中得到广泛应用。

（2）动物克隆

①采用动物胚胎细胞和体细胞核移植技术，成功克隆多种动物。

②动物克隆技术开发了动物繁殖等领域新途径。

③治疗性克隆也得到广泛应用。

（3）干细胞技术

①干细胞体外培养将造福人类。

②细胞治疗和组织工程。

③药物筛选。

④成体干细胞可塑性的发现。

13、简述血清对动物细胞培养的作用。

①丰富的营养物质；②促进细胞生长繁殖；③细胞贴附；④细胞保护；⑤培养基缓冲

30、阐述无血清培养基的主要种类和补充成分。

（1）无血清培养基的主要种类

①一般意义上的无血清培养基

②无动物来源培养基

③无动物蛋白培养基

④化学组分限定培养基

（2）无血清培养基的补充成分。①激素和生长因子

②结合蛋白

③贴壁成分

④微量元素和低分子量营养成分

⑤酶抑制剂

12、简述动物悬浮细胞培养法的一般步骤。

①分散细胞团块；②计数细胞；③加入培养液；④接种细胞；⑤培养细胞

23、简述适合动物细胞培养的生物反应器应具备的条件。

①混合系统设计良好；②反应器内空间利用率高；③能严格保证无菌环境；④能精确控制；

⑤便于观察和采样

28、简述动物细胞微载体培养系统的特点。

①细胞产率高；②易于控制；③易于分离、收获细胞；④反应器改进容易；⑤适合多种贴壁

细胞培养

29、简述动物细胞微载体培养系统的缺点。

①易受剪切损伤；②价格贵；③需要较高的接种细胞量；④老化后易脱落；⑤需要加入血清

45、阐述微载体动物细胞培养的主要步骤。

①微载体的选择。主要根据所用细胞种类和培养目的来进行。

②微载体浸泡。使微载体水化膨胀。

③微载体消毒。常用高压蒸汽灭菌。

④接种。应该使用对数生长期、分散的单细胞。

⑤培养。在培养器内加入培养液、微小球和细胞。

⑥观察。培养液开始呈酸性时，需要换液，观察细胞生长情况。

⑦细胞计数。采用消化法后计数。

⑧传代培养。消化化后进行传代培养。

⑨分离细胞与收获。通常采用酶消化法，分离细胞一般采用离心法.46、阐述大规模动物细胞培养技术的应用和存在的问题。

（1）应用。①主要生产有重要价值的产品，已经成为生物医药高技术产业的重要部分。

②主要产品有疫苗、干扰素、单克隆抗体、基因重组产品等。

（2）存在的问题

①细胞密度和产物浓度低。

②长时间培养时，细胞分泌产物能力易丢失。

③长时间培养时，产物活性易降低。

④培养成本高。

⑤对细胞代谢和生长特性的基础研究比较欠缺。

⑥在线监测技术不完善。

3、简述动物细胞化学诱导融合优势。

①来源方便；②使用简便；③不需要特殊仪器设备；④融合效率高

6、简述动物细胞融合后融合细胞的筛选方法。

①基于酶缺陷型细胞和药物抗性的杂交筛选；

②基于营养缺陷型细胞所建立的杂交筛选；

③由温度敏感突变型细胞所建立的杂交筛选；

④应用荧光激活细胞分选仪进杂交细胞筛选

7、简述单克隆抗体的技术流程。

①亲本选择；②细胞融合；③杂交细胞的筛选；④克隆培养；⑤单克隆抗体生产

8、简述单克隆抗体制备过程中细胞融合的步骤。

①脾细胞和鼠骨髓瘤细胞的混合；②逐滴加入 PEG；③终止 PEG 作用；④用 HAT 悬浮细胞；

⑤分装融合细胞

11、简述影响胞质体制备的因素

①细胞密度；②细胞松弛素剂量；③离心温度；④离心速度；⑤离心时间

15、简述核移植的一般操作程序。

①核受体和核供体的制备；②核移植；③重组胚的活化；④培养；⑤胚胎移植

16、简述核供体细胞对核移植效率的影响因素。

①细胞周期；②细胞类型；③细胞分化程度；④传代次数；⑤供体动物年龄

23、简述动物克隆技术中存在的问题。

①成功率低②克隆动物的遗传问题；③可应用性；④技术不成熟⑤基础理论研究还很薄弱

24、阐述核移植的一般操作程序。

①核受体细胞的制备。大多采用去核的 MⅡ 期卵母细胞为受体。

②核供体细胞的制备。核供体细胞应该是完整的二倍体、基因组，能正常发育。

③细胞核移植。常用胞质内注射和透明带下注射两种方法。

④重组胚的活化。一般重组胚电融合时所施加的电脉冲在诱导融合时，具有激活重组胚的作用。

⑤重组胚的培养。有体内和体外培养两种方式。

⑥重组胚的胚胎移植。胚胎移植后的妊娠率和产仔率是判断移植效率的最终标准。

⑦核移植后代的鉴定。一般从形态、性别上鉴定，还可采用分子生物学技术鉴定。

25、阐述动物克隆技术的意义及存在的问题。

（1）动克隆技术的意义

①促进生物学基础问题的研究 ②加速良种繁育，保护濒危动物 ③培育转基因克隆动物，生产生物药物 ④与基因和干细胞技术结合，开展治疗性克隆

（2）动物克隆技术中存在的问题

①成功率低②克隆动物的遗传问题③可应用性④技术不成熟⑤基础理论研究还很薄弱

18、简述胚胎干细胞的形态学特征。

①细胞体积小；②核大；③核质比例高；④核仁明显；⑤体外培养呈集落状生长

19、简述用于胚胎干细胞鉴定的分子特征。

①碱性磷酸酶（AKP）；②转录因子 Oct-4；③端粒酶；④阶段性特异性胚胎细胞表面抗原（SSEA）

20、简述动物细胞分离纯化的常用技术。

①利用细胞体积；②利用细胞密度；③选择性细胞凝集；④基于不同黏附特性；⑤利用细胞

表面标志

简述诱导多潜能干细胞（iPS）的应用前景。

①细胞核重编程机制的研究；②临床医学研究；③新药研发及筛选；④其他物种 iPS 细胞的建立

28、阐述干细胞的概念、干细胞的分类和生物学特点。

（1）干细胞是指来自胚胎、胎儿或成体内，具有无限自我更新和增殖能力以及不同程度分

化潜能的一类细胞。

（2）干细胞的分类

①根据来源分为胚胎干细胞、成体干细胞和诱导性多潜能干细胞。

②根据分化潜能分为全能干细胞、亚全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞

（3）干细胞的生物学特点有：

①自我更新能力。指分裂后子代干细胞能保持与自己相同的基因型与表型，维持未分化状

态并具有相同的分化潜能。

②分化能力。指分裂后转变为形态、机能、化学构成上与自己相异的子代细胞。

③增殖能力。指通过细胞有丝分裂实现细胞数量的扩增。

29、阐述胚胎干细胞的应用前景和存在问题。

胚胎干细胞：由哺乳动物早期胚胎分离克隆出来的未分化细胞，能分化为机体的各种组织细

胞，并具有形成嵌合体的能力。

（1）胚胎干细胞的应用前景

①探讨胚胎发育的调控机制。②临床应用。可用于临床细胞、组织和器官的修复和移植治疗，建立动物模型等。③建立药物筛选和研究平台 ④动物克隆及改良

（2）存在的问题

①维持胚胎干细胞未分化状态的机制及定向诱导分化的调控机制尚不清楚。②临床治疗存在安全性问题 ③器官克隆与移植仍有待于技术上的突破。④面临伦理、宗教和社会学问题

30、阐述什么是组织工程及理想种子细胞的标准。

组织工程：是将细胞工程和材料科学相结合，利用具有较好生物相容性的材料，按缺损组织

或器官的结构要求制成模型或支架放在体外培养系统中，使细胞沿着模型或支架不断生长扩

增，构建成新的组织、器官。

理想种子细胞的标准主要包括：