九味肝泰胶囊说明书及作用

九味肝泰胶囊说明书及作用（精选2篇）

篇1：九味肝泰胶囊说明书及作用

通用名：九味肝泰胶囊

生产厂家: 长沙康尔佳制药集团有限公司汉寿制药厂

批准文号：国药准字Z5173

药品规格：0.35g*36粒

药品价格：￥25.5元

篇2：九味肝泰胶囊说明书及作用

四味肝泰软胶囊在临床经验有效方剂的基础上,以组分中药研发思想开发治疗肝脏恶性肿瘤的候选新药。该复方由水红花子、花蕊石、薏苡仁、白茅根四味药材组成,以活血消癥为主,健脾祛湿,使气血水运得畅,以达活血化瘀,缓消癥块,扶正祛邪,恢复肝脏本身功能的作用。经多年临床应用,可以缓解患者症状,提高生存质量,稳定甚至缩小瘤体,延长生存时间,在肝癌治疗中取得了满意的疗效。

本实验在前期四味肝泰软胶囊体内、外药效研究的基础上,采用流式细胞仪PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响,初步探讨四味肝泰软胶囊作用于SMMC-7721肿瘤细胞的作用机制,为今后开展治疗原发性肝癌创新药物的研发奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 细胞株

人肝癌细胞 SMMC-7721(由上海复蒙生物有限公司提供)。

1.2 药品与试剂

四味肝泰软胶囊(由辽宁中医药大学分析测试中心提供);四甲基偶氮唑盐(MTT)、胰蛋白酶、DMEM培养基(美国GIBCO公司);胎牛血清(美国Hyclone公司);二甲基亚砜(DMSO)(北京索莱宝科技有限公司);细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司);Annexin V/PI双染色试剂盒(南京凯基生物技术有限公司);其他试剂均为分析纯;实验用水均为Milli-Q水。

1.3 仪器与设备

FACE Vantage SE流式细胞仪(美国BD公司);NUAIRETM US AUTOFLOW型CO2培养箱(德国NUAIRE公司);AE31型倒置相差显微镜(德国Motic公司);SUNRISE酶标仪(瑞士TECAN公司);血球计数板(上海求精生化仪器厂);ACCULAB ALC-11C.4型电子天平(德国赛多利斯集团)。

2 方法

2.1 不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期影响的检测

2.1.1 药物配制及分组

精密称取四味肝泰软胶囊适量,置100mL容量瓶中,加0.5%的DMSO超声溶解并定容至刻度,摇匀,制成浓度为0.8056mg/mL的药液。然后按比例稀释分为高中低三个剂量组,其给药浓度分别为0.8056mg/mL、0.4028mg/mL、0.2014mg/mL。

2.1.2 细胞样品的准备

药物与细胞共育36h后,小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1 000r/min离心5min,沉淀细胞。小心吸除上清,加入约1mL冰浴预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5mL离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

2.1.3 细胞固定

将1mL冰浴预冷的70%乙醇加入细胞中,轻轻吹打混匀,4℃固定12h。1 000r/min离心5min,沉淀细胞。小心吸除上清,可以残留约50μL左右的70%乙醇,以避免吸走细胞。加入约1mL冰浴预冷的PBS,重悬细胞。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μL左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

2.1.4 碘化丙啶染色液的配制

按每个样品用染色缓冲液0.5mL,碘化丙啶染色液(20X)25μL,RNase A(50X)10μL的比例配制。配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存,宜当日使用。

2.1.5 染色

每管细胞样品中加入0.5mL碘化丙啶染色液,缓慢并充分重悬细胞沉淀,37℃避光温浴30min,随后冰浴避光存放。

2.1.6 流式细胞仪分析

用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。结果用细胞周期分析软件ModFit分析。分析时,使用FL2-w和FL2-A显示,去除联体细胞。

2.2 不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的影响

2.2.1 药物配制及分组

同2.1.1项下药物配制及分组。

2.2.2 细胞培养及铺板

人肝癌SMMC-7721细胞株,按常规贴壁细胞培养法接种于含体积分数为10%小牛血清的DMEM培养基中,在温度为37℃、5%CO2、饱和湿度的条件下常规培养,2天换液并传代一次,取对数生长期的细胞以1×105/mL接种到6孔板中1mL,设置对照组1(给予细胞培养液)、对照组2(给予细胞0.5%的DMSO水溶液),细胞贴壁后,每孔加入不同组别的药物1mL,分别培养22h和46h,做后续试验。

2.2.3 细胞样品的准备

药物与细胞共育22h和46h后,小心收集细胞培养液和药液到一离心管内备用。用胰酶消化6孔板底细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液和药液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1 000r/min离心5min,沉淀细胞。

2.2.4 细胞固定及染色

用PBS洗涤细胞2次(1 000r/min离心5min)收集细胞,加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞,然后再加入5μL AnnexinV-EGFP和5μL Propidium Iodide,混匀,室温、避光、反应5～15min,在1h内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

2.2.5 流式细胞仪分析

光源为488nm氟离子激光器,受激发后FI代发绿色荧光,PI发红色荧光。双参数的荧光检测图中,以X轴为EGFP通道。Y轴为PI通道。用流式细胞仪Cell Quest软件分析数据。

3 结果

3.1 不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期影响的检测

如表1、图1可知,中、高剂量组与对照组在G0/G1期比较DNA含量均有所降低,高剂量组与对照组相比有显著差异;低、中、高三个剂量与对照组相比在S期含量均明显增加,且三个剂量组与对照组比较均有显著差异;低、中、高三个剂量与对照组相比在G2/M期含量均有明显降低,且三个剂量组与对照组比较均有显著差异。

注:与阴性对照组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

3.2 不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的影响

流式细胞仪Annexin V-EGFP/PI双染法检测四味肝泰软胶囊诱导SMMC-772l细胞凋亡散点图,见图2。

如表2、图2可知,对照组1和对照组2的细胞凋亡总比例没有明显差异,说明0.5%的DMSO对细胞凋亡没有影响。给药22h后,低、中、高剂量组与对照组凋亡总比例均有所上升,且三个剂量组与对照组比较均有显著差异;给药46h后,低、中、高三个剂量与对照组凋亡总比例均有所上升,且三个剂量组与对照组比较均有显著差异;当药物浓度增高时细胞凋亡率也会增大,随着作用时间的延长,细胞凋亡率也随之加大。

注:与阴性对照组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

4 讨论

原发性肝癌(HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一[1],临床疗效不理想,中医药在肝癌的治疗中发挥着重要的作用,可以有效控制肝癌患者病情发展、减少复发、提高生存质量,延长生存期。

四味肝泰软胶囊由水红花子、花蕊石、薏苡仁、白茅根四味药材组成,经体内、外药效实验研究,确定对原发性肝癌有较强的临床疗效。本文在前期研究的基础上,开展其抗肝癌作用机制的研究,为研究其治疗机制奠定基础。

细胞的增殖周期大致可分为静止期(G0)、DNA合成前期(G1)、DNA合成期(S)、DNA合成后期(G2)、分裂期(M);一个细胞增殖周期能否顺利进行,主要取决于该细胞能否顺利完成G1/S转换和G2/M转换,对这两个节点的控制可以调控细胞周期的进程。本实验结果显示,低、中、高三个剂量组S期细胞DNA比例平均值与对照组(17.27%)平均值相比分别上升了15.58%、32.19%、66.76%,在G2/M期细胞DNA比例平均值与对照组(7.68%)平均值相比分别分别降低了41.80%、69.01%、89.58%,且三个剂量组与对照组比较在S期、G2/M期均有显著差异。实验结果表明随着四味肝泰软胶囊浓度的增高,S期细胞比例明显增高,G2/M期细胞比例明显下降,四味肝泰软胶囊可以调节G1/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进人G2/M期,从而起到抑制肿瘤细胞的增殖,不同浓度的四味肝泰软胶囊制剂均可引起SMMC-7721细胞发生S期阻滞现象,从而阻碍细胞进入G2/M期,也对细胞进入G0/G1期的产生了影响,使细胞周期进程受阻,从而使细胞产生凋亡。

低、中、高剂量组与对照组在给药22h、46h细胞凋亡总比例均有所上升,且三个剂量组与对照组比较均有显著差异;且当药物浓度增高时或作用时间延长时细胞凋亡率也随之增大,实验结果说明四味肝泰软胶囊能诱导SMMC-7721细胞凋亡,且这种诱导效应具有明显的时间-剂量-效应关系,四味肝泰软胶囊治疗肿瘤是通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥作用。

摘要：目的:初步探讨不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及凋亡的影响。方法:采用流式细胞仪PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究不同浓度四味肝泰软胶囊作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及对细胞凋亡率的影响。结果:各浓度四味肝泰软胶囊均可以调节G1/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入G2/M期,从而起到抑制肿瘤细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且这种诱导效应具有明显的时间-剂量-效应关系。结论:四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA的合成和诱导细胞凋亡有关。

关键词：四味肝泰软胶囊,人肝癌细胞株SMMC-7721,细胞周期,原发性肝癌

参考文献

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