HBVDNA定量与乙肝病毒标志物及肝功能的相关性分析

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病, 它是我国慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌发生的主要原因。因此, 准确、迅速的诊断对乙肝的治疗和预后极为重要。本研究采用先进的FQ-PCR技术检测HBVDNA含量, TRFIA法检测乙肝病毒标志物含量, 旨在探讨HBVDNA与各病毒标志物、肝功能之间的关系, 为乙肝的临床诊断、抗病毒药物的选择及疗效观察提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

697份血清标本均为2009年4月至2010年6月我院门诊及肝病科的乙型肝炎患者, 其中包括急性肝炎74例, 慢性乙肝轻度77例, 慢性乙肝中度98例, 慢性乙肝重度117例, 肝硬化149例, 亚急性重症肝炎23例, 慢性重症肝炎159例, 排除有重叠感染及合并可影响肝功能的其他肝病和疾病病例。全部病例中男558例, 女139例, 年龄10～81岁, 平均 (36.25±13.37) 岁。所有患者的诊断均符合2000年中华医学会西安分会修订的《病毒性肝炎防治方案》标准[1]。

1.2 试验方法

乙肝病毒标志物定量检测采用TRFIA法, 仪器由美国PE公司提供Wallac1235全自动时间分辨免疫荧光分析仪, 试剂由广州达瑞抗体工程技术有限公司提供。HBVDNA定量检测采用FQ-PCR法, 仪器是由瑞士Roche公司生产的Lightcycle荧光定量检测仪, 试剂由上海科华生物技术有限公司提供。肝功能生化指标检测所用仪器和试剂是由瑞士Roche公司提供的电化学发光免疫分析仪P800及其配套试剂。所有试验均严格按照试剂盒说明书操作。

注:*P<0.05

1.3 统计学分析

采用SPSS 11.0建立数据库, HBVDNA进行常用对数变换, 乙肝病毒标志物和肝功能指标进行自然对数变换, 使用Spearman等级相关分析, 所有统计操作均在SPSS 11.0统计软件包上进行。

2 结果

2.1 HBVDNA检测结果

检测结果用常用对数检验, 几何均数 (G) 为5.2843。

2.2 乙肝病毒标志物定量与HBVDNA的关系

通过对两者进行Spearman相关检验, 结果见表1。

2.3 HBVDNA与肝功能的关系

对HBVDNA与肝功能各项指标进行相关分析, 结果见表2。

3 讨论

时间分辨免疫荧光分析法可比较精确的检测出乙肝病毒血清标志物的具体含量, 其敏感性大大超过了ELISA法, 非常适合乙肝血清标志物的检测分析[2]。实时荧光定量聚合酶链反应法可直接检测血清中HBVDNA的含量, 是反映HBV复制较为特异的指标, 并且有较高的敏感性[3]。理解血清学免疫分析与HBVDNA检测之间的关系对于临床判断具有重要的指导意义。

对于乙肝血清标志物与HBVDNA的关系, 近年来国内曾有多篇研究报道[4,5], 在对两者的定量关系的分析中, 我们发现HBsAg、HBeAg与HBVDNA的相关系数分别为0.313、0.561, P值均<0.05, 说明HBsAg、HBeAg与HBVDNA为正相关。随着HBsAg、HBeAg含量的增高, HBVDNA的定量也随之增高。由此可以推测HBsAg含量的高低可能与HBV在体内的复制有关, 可以间接反映HBV的复制情况。同时也说明HBVDNA与HBeAg存在一定的一致性, 这就从基因水平进一步反映HBeAg的确是反映乙型肝炎病毒复制的指标之一。

本研究显示, HBVDNA与肝实质损害指标A L T、AST、P A B、ALB、TBIL、PT均不存在相关性, P值均>0.05, 说明乙型肝炎病毒量的多少并不影响肝功能受损的程度。这从乙型肝炎的发病机理上可以解释, 目前认为乙型肝炎病毒是通过刺激宿主的免疫系统攻击受感染的肝细胞来间接地引起肝损伤[6]。乙型肝炎的肝细胞免疫病理损伤以T淋巴细胞毒反应为主, 靶抗原的表达是决定靶细胞破坏的重要因素之一, 目前公认肝细胞膜上表达的HBcAg是CTL攻击的主要靶抗原, 而肝细胞膜上表达的HBeAg、前S1蛋白和前S2蛋白也可能是CTL攻击的靶抗原[7]。这种由CTL介导的效应具有双重性:既清除病毒, 也造成肝细胞的损伤, 即可能是乙肝病毒感染者处于免疫清除阶段;如乙肝病毒感染者处于免疫耐受阶段, 往往表现为HBsAg (+) 、HBeAg (+) 、HBVDNA高水平表达, 患者常常无症状, 肝功能正常或轻度升高。因此, 对临床上一些医生在诊断及治疗上片面依赖乙肝病毒血清标志物或HBVDNA的检测结果, 甚至以它们是否阳性作为抗病毒治疗的主要依据是不正确的。因为乙肝病毒感染者可能处于免疫耐受阶段, 即使治疗也不能达到预期效果。

因此, 采用FQ-PCR检测乙肝病毒感染者HBVDNA水平, 同时采用TRFIA法测定乙肝病毒标志物含量并检测肝功能指标, 有助于了解患者病毒复制水平, 为抗病毒治疗方案的选择提供科学依据。同时, 在抗病毒治疗后HBVDNA转阴的患者, 检测eAg/eAb动态消长过程, 观察HBsAg的变化, 有助于判断治疗终点和调整治疗方案[8]。提示综合分析乙肝病毒标志物定量检测结果与HBVDNA载量及肝功能对于疾病的诊断、治疗及疗效观察有重要临床意义。

摘要：目的 探讨HBVDNA定量检测结果与乙肝病毒标志物及肝功能指标的关系。方法 对697例乙肝患者血清标本采用实时荧光定量聚合酶链反应法 (FQ-PCR) 检测HBVDNA含量, 时间分辨免疫荧光法 (TRFIA) 检测乙肝病毒标志物含量, 并同步进行肝功能监测。结果 结果显示HBsAg、HBeAg与HBVDNA的相关系数分别为0.313、0.516, P<0.05, HBsAg、HBeAg与HBVDNA呈正相关。HBVDNA与肝功能损害指标ALT、AST、PAB、ALB、TBIL、PT不存在相关性, P>0.05。结论 乙肝病毒标志物定量检测结果与HBVDNA载量之间及各病毒标志物之间存在一定的相关性, HBsAg、HBeAg是反映乙肝病毒复制的指标之一, 但不能用病毒量的多少来判断肝功能受损的程度。

关键词：HBVDNA,乙肝病毒标志物,聚合酶链反应,时间分辨免疫荧光法

参考文献

[1] 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华传染病杂志, 2001, 2 (19) :56-62.

[2] 田玉峰, 王家安, 律洁.乙肝五项时间分辨免疫荧光分析与PCR-HBV定量的关系[J].中外医疗杂志, 2008, 34:18-19.

[3] 黄燕萍, 王宇明.荧光定量PCR与普通PCR检测HBVDNA的对照分析[J].第三军医大学学报, 2001, 23 (7) :866-868.

[4] 黄增相, 陈丹阳, 张清波.乙型肝炎病毒DNA定量与血清病毒标志物的关系[J].中华肝脏病杂志, 2004, 12 (1) :43.

[5] 王敏甲, 王芙蓉.乙型肝炎血清标志物与HBV-DNA定量的关系探讨[J].陕西医学杂志, 2006, 35 (11) :1527-1528.

[6] Chang JJ, Lewin SR.Immunopathogenesis of hepatitis B virus in-fection[J].Immunol Cell Biol, 2007, 85 (1) :16-23.

[7] Yamada G, Takaguchi K, Matsueda K, et al.Immunoelectron micro-scopic observation of intrabepatic HBeAg in patients with chronic hepatitis B[J].Hepatology, 1990, 12:133-140.

[8] 谢士达, 刘成永, 高金玉, 等.HBeAg和抗-HBe血清转换的动态变化对拉米夫定疗效的评价[J].肝脏, 2005, 10 (4) :305-317.