蜂蜜中蛋白质及氨基酸含量的测定

2023-02-21

蜂蜜是一种营养成分, 很高绿色环保的食品。由于比较珍贵, 价格相对较高, 所以存在着作假的行为, 这也直接降低了蜂蜜在消费者心中的形象。鉴别蜂蜜真伪的方法多种多样, 例如, 糖类、酶值的检测等等。但在检测的过程中, 并不能够百分百保证准确。所以我们选择从根本上进行检测, 因为蜂蜜中含有一种独特的物质, 只有检测才能够发现。但要想检测出这种物质需要一种精确搞笑的鉴别方法, 这成为当前工作者研究的重点。

一、蛋白质和氨基酸含量差异鉴别蜂蜜真假研究进展

蜂蜜虽然是一种花卉的提取物, 但依旧含有蛋白质。经过资料调查我们能够发现一般情况下蜂蜜的蛋白质含量为0.4%左右。选择八种不同的蜂蜜共28份, 进行蛋白质的检测, 能够发现大多数蜂蜜的蛋白质为4%到1.88%左右。从这里我们也能发现不同产地、不同花源、产生了蜂蜜蛋白质含量都有所区别。在深入研究的过程中, 我们发现蜂蜜蛋白质的特性, 进而得出鉴别蜂蜜真伪的另一种方法, 那就是蛋白质的差异。除此之外, 蜂蜜中还含有氨基酸, 虽然和其他食物相比比较低, 但还是有生理学活性的。蜂蜜还有的氨基酸和其他氨基酸不同, 组成含量有所区别。辅氨酸组成的含量最高, 占氨基酸的50%左右。而且这种脯氨酸是授粉昆虫才有的。Biino成为第一个提出用脯氨酸鉴别蜂蜜真伪的人。因为蜂蜜中的氨基酸和其他氨基酸有所差别, 一旦加入葡萄糖就会随着数量的增加, 逐渐减少。在这项研究的基础上, 研制出了鉴别脯氨酸分辨蜂蜜真假的办法。根据国内外的研究, 我们能够发现, 一般情况下蜂蜜脯氨酸的含量都会超过180mg/kg。对这个脯氨酸进行鉴别能够发现是否掺糖或者是成熟度如何。对脯氨酸进行鉴别, 能够辨别蜂蜜的真假。目前我们国家已经在对脯氨酸研究的基础上建立了相关的特定标准, 我们在辨别蜂蜜的时候都会使用这项技术。

二、蜂蜜中蛋白质及氨基酸含量的测定方法

1材料与方法

1.1实验材料

蜂蜜成品:野菊花蜜 (样品1) , 山野百花蜜 (样品2) , 龙眼蜜 (样品3) , 荔枝蜜 (样品4) , 冬蜜1 (样品5) , 冬蜜2 (样品6) 。均购自蜂场或店铺。

1.2主要试剂

牛血清白蛋白 (AR) , 考马斯亮蓝G-250 (AR) , 95%乙醇 (AR) , 磷酸 (AR) , 茚三酮 (AR) , 氯化亚锡 (AR) , 磷酸二氢钾 (AR) , 磷酸氢二钠 (AR) , 谷氨酸 (AR) 。

1.3主要仪器

751紫外分光光度计, HH-4数显恒温水浴锅, 90-3型双向定时恒温磁力搅拌器。

1.4实验方法

(1) 绘制蛋白质标准曲线。吸取1mg/m L牛血清白蛋白溶液0、0.02、0.04、0.06、0.08m L和0.1m L, 分别放在相同的6支试管里, 每支试管都要加水到0.1m L。之后再放马斯亮蓝G-250的溶液, 五毫升, 在室内放置两分钟左右, 对吸光度值进行测定595nm, 并根据这些数据绘制出一个曲线图, 解出回归方程。

(2) 选择蜂蜜样品检测出其中的蛋白质含量。选择六克左右的蜂蜜样品, 把它溶解在蒸馏水里, 预计在25毫升左右。吸取样品溶液, 准确值0.1毫升。之后再根据曲线图, 完成剩下的实验步骤做具体的操作测定工作。

1.5蜂蜜样品中氨基酸含量的测定

茚三酮显色法。

(1) 绘制氨基酸标准曲线。吸取200μg/m L氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5m L和3.0m L。选择若干个容量瓶, 每个容量瓶为25毫升, 分别放置。之后加水到四毫升左右, 融入茚三酮溶液, (准备35毫升的热水, 放入一刻的茚三酮, 之后溶入氯化亚锡40mg, 充分溶解过滤杂质, 放置一夜进行冷处理) 加水定容为50m L) 和磷酸盐缓冲溶液 (p H8.04) 各1m L, 混匀后水浴加热15min, 迅速冷却至室温, 再加水至25m L。溶液静置15min后测定吸光度值 (570nm) , 绘制标准曲线并求回归方程。

(2) 选择蜂蜜样品检测出其中的氨基酸含量。选择六克左右的蜂蜜样品, 把它溶解在蒸馏水里, 预计在25毫升左右。吸取样品溶液, 准确值4毫升。之后再根据曲线图, 完成剩下的实验步骤做具体的操作测定工作。

2实验结果

2.1蛋白质标准曲线

我们根据结果, 把蛋白质设置为横向坐标, 吸光值设置为纵向坐标, 根据数据得出一个曲线, 曲线回归方程为y=0.006x, R2=0.9991。

2.2蜂蜜样品中蛋白质的含量

选择的蜂蜜样品经过检测能够发现蛋白质含量各不相同, 数值在0.044到0.319g每100g之内。蜂蜜的品种不同, 蛋白质含量也不同, 不过偏差都在0.666%—6.447%之间。再重复实验的过程中发现误差比较小, 平行样品也没有很大的区别。我们把氨基酸设为横坐标, 激光执手为纵坐标, 根据这些数据, 绘制出标准曲线。曲线回归方程为:y=0.0015x, R2=0.9991

2.3蜂蜜样品中氨基酸的含量

对氨基酸进行吸光度测试, 选择不同, 品种的蜂蜜样品。并对这些含量进行计算, 最终得出结果, 100克蜂蜜中含氨基酸为零点零三到零点零五左右。相同样品测出的结果和标准相比, 存在着偏差, 为0.6%到1.3%左右, 相同样品之间误差很小。

结语

经过实验, 我们得出检测结果。选择两种方式分别测试了, 蛋白质和氨基酸。一种是考马斯亮蓝法一种是茚三酮显色法。这两种方法都能得出, 比较准确的数值。但是蜂蜜的样品不同, 所含的氨基酸以及蛋白质也不尽相同。在出口的蜂蜜中, 荔枝蜜和龙眼蜜这两种蜂蜜蛋白质含量比较高。相比之下冬蜜样品蛋白质含量比较低, 但氨基酸含量比较高。在研究调查的过程中野生菊花和百花蜜氨基酸和蛋白质都不高。

摘要：蜜蜂采集花朵的花蜜或者是分泌物, 把这些与自身的分泌物结合在一起, 从而形成蜂蜜。蜂蜜富含多种营养成分, 对人体非常有益。就目前的情况来看, 我们国家的蜂蜜质量还存在着很多问题, 有造假的情况。消费者在购买的时候缺少信心, 不敢随意的挑选, 这阻碍了蜂蜜产业的发展。本文将对蜂蜜内部的蛋白质, 以及氨基酸进行分析, 探讨蜂蜜的产品质量。

关键词：蜂蜜,蛋白质,氨基酸,含量测定