山银花研究论文提纲

论文题目：山银花中绿原酸类功效成分检测技术及其产地溯源研究

摘要：目的:在超高效液相色谱串联质谱平台下,建立山银花中绿原酸类似物的精准筛查及检测定量方法,为金银花及山银花质量分级提供依据;基于裂解规律建立多重标志物碎片扫描通道结合高分辨质谱分析的挖掘策略,用于筛查山银花中痕量未知绿原酸类结构类似物。在快速蒸发电离质谱平台下,结合化学计量学判别,进行山银花产地鉴别研究。研究方法:1.建立同时快速测定山银花中8种绿原酸同分异构体分离及定量方法。采用乙腈,0.1%甲酸-水为流动相,优化色谱条件,对8种绿原酸标准品进行分离。在Q-orbitrap fusion质谱平台下,采用负离子模式,Full MS-dd MS~2扫描模式进行数据收集,建立标准曲线。7 m L 60%甲醇水溶液提取0.1g山银花样品,室温下超声40分钟,外标法定量。2.总结绿原酸标准品的裂解规律,选择6个特征中型丢失/子离子标志碎片,利用三重四级杆进行多通道中性丢失/母离子扫描,并对各通道数据整合,得潜在绿原酸类化合物的母离子列表。借助Q-Orbitrap fusion进行预设母离子列表的二级碎裂（Full MS-precursor list-dd MS~2）,对所得化合物进行结构推断及确证。3.借助iknife-REIMS快速蒸发电离质谱方法,对来自8个产地的种山银花、金银花样品进行检测。整合质谱信息,结合化学计量学主成分分析及正交偏最小二乘分析,构建金银花与山银花鉴别模型,以及不同产地、不同品种的山银花的统计学模型,用于快速区分未知来源山银花产地及品种,并用未知样进行模型确证分析。结果:1.建立了同时测定8种绿原酸同分异构体的超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）分析方法。8种活性成分物质在14min内有效分离,各自的线性关系在线性范围内良好,相关系数r均大于0.99,检出限（LOD）为0.3～1.5μg/kg,定量限（LOQ）为1～4.9μg/kg。添加量在100、200、500μg/kg 3个浓度水平时,3个添加水平的平均回收率77.6～107.8%,日内精密度为0.9～5.1%（n=5）,日间精密度为1.6～6.2%（n=5）。2.建立多标志碎片（中性丢失/特征子离子）扫描结合高分辨质谱非靶向筛查山银花中绿原酸类似物的方法。选择6个标志碎片设置扫描通道,并利用结构标志物对新化合物进行结构鉴定,最终在山银花提取物中发现51种绿原酸类似物,由5种不同的取代基构成。3.利用iknife-快速蒸发电离质谱平台,结合化学计量学判别,构建了不同品种、不同产地的山银花统计模型,该模型用于快速区分金银花、山银花以及快速确定山银花及其相关产品的产地。结论:1.UHPLC-Q-orbitrap建立的检测方法可在14 min内对山银花中的8种绿原酸同分异构体进行定量检测,检出限低,回收率高,适用于不同品种山银花的功效成分含量确证分析;2.多重标志碎片结合高分辨质谱技术用于精准全面筛查山银花中绿原酸类活性物质,方法定性准确,灵敏度高,为复杂基质中含有相同母核物质的未知成分筛查提供了新的思路及技术。3.山银花产地及品种统计模型可靠,REIMS技术结合化学计量学分析的方法简便快捷,适用于其他药食同源物质及其产品的指纹图谱分析、及产地溯源及进一步的质量分级。

关键词：绿原酸;山银花;高分辨质谱;产地鉴别;快速蒸发电离质谱;化学计量学

学科专业：药学（专业学位）

摘要

Abstract

英文缩略语

前言

1 山银花概述

1.1 山银花历史沿革及种质资源

1.2 山银花主要功效成分及药理作用

2 绿原酸概述

2.1 绿原酸类化合物简介

2.2 绿原酸的药理活性及应用开发

第一部分:同时测定山银花中8 种绿原酸同分异构体的超高效液相色谱-高分辨质谱方法

1 前言

2 材料和方法

2.1 仪器与材料

2.1.1 试剂和耗材

2.1.2 仪器

2.2 实验方法

2.2.1 标准溶液的制备

2.2.2 液相色谱条件

2.2.3 质谱条件

2.3 样品前处理

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的优化

3.1.1 色谱柱优化

3.1.2 流动相优化

3.2 质谱条件优化

3.3 样品前处理的优化

3.4 方法验证

3.4.1 线性关系、检出限和定量限

3.4.2 重复性、精密度、加标回收率的考察

3.4.3 稳定性考察

3.4.4 样品测定

4 本章小节

第二部分:山银花中未知绿原酸结构类似物的筛查

1 前言

2 材料和方法

2.1 主要试剂和仪器

2.1.1 材料与试剂

2.1.2 标准溶液的配制

2.1.3 仪器

2.2 色谱-质谱条件

2.2.1 质谱参考条件

2.2.2 色谱条件

2.3 样品前处理

2.4 技术路线

3 结果与讨论

3.1 绿原酸类物质的裂解规律

3.2 方法建立

3.2.1 通过多特征碎片扫描发现未知的绿原酸类化合物

3.3 方法建立

3.3.1 Q-trap与 Q-orbitrap的离线耦合

3.3.2 目标母离子列表

3.3.3 结构确认

3.3.4 实际样品分析结果

3.3.5 方法有效性评价

4 本章小结

第三部分:基于快速蒸发电离质谱鉴别山银花品种和产地的方法

1 前言

2 材料和方法

2.1 仪器与耗材

2.2 实验条件

2.2.1 样品处理

2.2.2 质谱条件

2.3 样品数据收集

3 结果与讨论

3.1 条件优化与数据处理

3.2 化学计量学模型建立与评价

3.2.1 山银花与金银花品种鉴别模型与评价

3.2.2 .不同产地山银花区分模型

3.3 方法验证

3.3.1 方法稳定性

3.3.2 模型验证与实际样品分析

4. 本章小结

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 液相色谱串联质谱技术在非靶标筛查中的研究进展

参考文献

致谢