定性实验方法学验证

2022-08-07

第一篇：定性实验方法学验证

实验室能力验证方法

第一条为建立规范的安全生产检测检验机构能力验证工作机制，根据国家安全生产监督管理总局(以下简称国家总局)赋予省级煤矿安全生产监察局的职责，制定本办法。

第二条本办法所称的能力验证，是指利用实验室间指定检测数据的比对，确定实验室从事特定测试活动的技术能力。

第三条能力验证活动应当遵循科学合理、操作可行、非营利性和避免不必要的重复验证的原则。

第四条安徽煤矿安全生产监察局依照有关国家标准、国际准则制定有关实验室能力验证工作的基本规范和实施规则，统一监管和综合协调能力验证活动。

第五条能力验证的组织者应当建立并保存能力验证档案及相关记录，包括：

(一)实施能力验证的有关文件;

(二)能力验证的提供者的资质证明;

(三)能力验证的组织者对能力验证的提供者的确认记录;

(四)能力验证的参加者名单;

(五)能力验证的技术报告;

(六)能力验证结果和后续处理文件。

第六条能力验证的组织者应当于每年年底向国家总局报告下一的能力验证计划，包括：名称、目的、能力验证的内容和关键技术要素设计、组织单位、实施时间、拟参加实验室的范围和数量、能力验证提供者的资质证明和审核材料等。

第七条能力验证的提供者应当符合相关国家标准或者技术规范的要求，其技术能力在相应领域和关键技术要素方面领先，并具备可持续性。

第八条安徽煤矿安全生产监察局组织有关方面专家，对能力验证的提供者是否符合相关国家标准或者技术规范的要求进行评价。符合要求的，省局确定其作为能力验证的提供者。

省局鼓励能力验证的组织者利用经过国家认监委确定的能力验证的提供者。

第九条能力验证的参加者应当向能力验证的组织者及时反馈相关信息，并保存相关记录。

能力验证结果离群的，应当采取相应的纠正措施。

第十条能力验证的组织者应当及时向国家总局通报能力验证计划的完成情况、能力验证结果、后续处理措施等有关事项。

第十一条

第十二条省局在能力验证活动完成后向有关方面通报能力验证活动的结果。同时向社会报告能力验证结果，定期公布能力验证满意结果的实验室名单。

第十三条达到满意结果的安全生产检测检验机构和能力验证的提供者，在规定时间内接受安全生产检测检验机构资质认定评审时，可以免于该项目的现场试验。

鼓励各有关方面利用能力验证的结果，优先推荐或者选择达到满意结果的安全生产检测检验机构承担省局委托、授权或者指定的检验检测任务。

第十四条能力验证的组织者应当对能力验证的提供者和能力验证的实施过程实施有效管理。

第十五条对于能力验证的结果可疑或者离群的安全生产检测检验机构机构，能力验证的组织者应当要求其在规定期限内进行整改并验证整改效果，也可视情况暂停或者撤销其相关项目的资质认定或者认可，暂停其承担省局授权、委托或者指定的检验检测任务的资格，直到完成纠正活动并经能力验证的组织者确认后，方可恢复或者重新获得认可以及承担省局授权、委托或者指定的检验检测任务的资格。

第十六条能力验证的提供者违反职业道德，弄虚作假或者泄露机密的，省局应当取消其承担能力验证的提供者的资格。

能力验证的参加者弄虚作假、进行串通，经查属实的，能力验证组织者视其结果为不满意。情节恶劣的，省局应当取消其相应项目的检测资质资格，并报告国家总局备案。

第十七条省局可以采取组织专家评议、向实验室征求意见、抽查档案、要求能力验证的组织者和提供者报告能力验证的实施情况等方式，对实验室能力验证活动进行监督。

第十八条能力验证的参加者对能力验证的结果有异议的，可以向能力验证组织者进行申诉;对违规行为可以向能力验证组织者或者国家总局进行投诉。

第十九条下列用语的含义：

本办法所称能力验证的提供者，是指从事能力验证的设计和实施的安全生产检测检验机构。

本办法所称能力验证的参加者，是指参加实验室间比对，以确定校准或者检测能力的安全生产检测检验机构。

本办法所称的结果可疑，是指按照有关的技术统计方法确定的能力验证结果界于标准认可值(或者中位值)之间的结果。

本办法所称的离群(即结果离群)，是指按照有关的技术统计方法确定的明显偏离标准值(或者中位值)的结果。

第二十一条本办法由安徽煤矿安全生产监察局负责解释。

第二十二条本办法自二0一三年十二月一日起施行。

第二篇：定性方法与定量方法的优劣分析

一、概念

所谓定性，是指把考察重点放在事物“质”的方面，去研究事物的构成要素及要素间的相互联系，从而揭示事物的质的规律性;定量则泛指从数量的方面表征事物间的联系和相互作用，其特点是较可靠精确。用上述两个普适、本质的概念对研究方法进行类的划分，即定性方法和定量方法。

定性研究方法是主要凭分析者的直觉、经验，凭分析对象过去和现在的延续状况及最新的信息资料，对分析对象的性质、特点、发展变化规律作出判断的一种方法。

定量研究方法是依据统计数据，建立数学模型，并用数学模型计算出分析对象的各项指标及其数值的一种方法。

二、两者的区别

定性研究(qualitative research)和定量研究(quantitative research)的根本性区别有三点：

首先，两种方法所依赖的哲学体系有所不同。作为定量研究，其对象是客观的、独立于研究者之外的某种客观存在物;而作为定性研究，其研究对象与研究者之间的关系十分密切，研究对象被研究者赋予主观色彩，成为研究过程的有机组成部分。定量研究者认为，其研究对象可以像解剖麻雀一样被分成几个部分，通过这些组成部分的观察可以获得整体的认识。而定性研究者则认为，研究对象是不可分的有机整体，因而他们检视的是全部和整个过程。

第二，两种研究方法在对人本身的认识上有所差异。量化研究者认为，所有人基本上都是相似的;而定性研究者则强调人的个性和人与人之间的差异，进而认为很难将人类简单地划归为几个类别。

第三，定性研究者的目的在于发现人类行为的一般规律，并对各种环境中的事物作出带有普遍性的解释;而与此相反，定量研究则试图对特定的情况或事物作出特别的解释。换言之，定性研究致力于拓展广度，而定量研究则试图发掘深度。

三、两者的优缺点

应该说在科学研究中没有一种方法是完美无缺的，任何一种方法都会有其自身的优缺点。

对于定性研究方法来说，其操作虽然简便易行，但是其主观性较强，得到的结果也比较抽象，难以反映事物之间的局部差别，应用效果不好。而定量研究方法较定性评价结果更为直观、简洁、准确，应用效果好。但是操作起来往往有一定的困难，尤其是有些关联因子难以量化，也会带有主观色彩，影响量化的准确度。

相比而言，定量分析方法更加科学，但需要较高深的数学知识，而定性分析方法虽然较为粗糙，但在数据资料不够充分或分析者数学基础较为薄弱时比较适用。

四、小结定性方法与定量方法应该是相互补充、相辅相成的;定性分析是定量分析的基本前提，没有定性的定量是一种盲目的、毫无价值的定量;定量分析使定性更加科学、准确，它可以促使定性分析得出广泛而深入的结论。

定性是定量的依据，定量是定性的具体化，二者结合起来灵活运用才能取得最佳效果。在科学研究中，应遵循定性分析---定量分析---定性分析的认识过程，由最初的定性分析，认识事物的质，掌握一事物区别于他事物的规律性;然后通过对事物量的分析和把握，掌握决定事物质的数量界限，弄清事物之间的关系，达到认识的深化;最后，从这些数量和数量关系中归纳揭示出更深层的质，并作出理论上的解释或结论。

第三篇：色谱方法学验证

所谓方法验证(validation，又叫认证)就是要证明所开发方法的实用性和可靠性。实用性一般指所用仪器配置是否全部可作为商品购得(实验室自己制造的仪器部件就欠实用)，样品处理方法是否简单易操作，分析时间是否合理，分析成本是否可被同行接受等。可靠性则包括定量的线性范围、检测限、方法回收率、重复性、重现性和准确度等。下面就简单讨论这几个可靠性参数。

1.方法的线性范围

即检测器响应值与样品量(浓度)成正比的线性范围，它主要由检测器的特性所决定。原则上。这一线性范围应覆盖样品组分浓度整个变化范围。线性范围的确定通常是采用一系列(多于3个)不同浓度的样品进行分析，以峰面积(或峰高)对浓度进行线性回归。当相关系数大于0.99时，就可认为足线性的，小于0.99时，就超出了线性范围。一个好的GC定量方法，其线性范围(以FID检测器为例)可达10;，线性相关系数等于或大于0.9999。

2.方法的检测限

检测限(DL)是指方法可检测到的最小样品量(浓度)。一般的原则是按照3倍信噪比计算，即气样品组分的响应值等于基线噪声的3倍时，该样品的浓度就被作为最小检测限，与此对应的该组分的进样量就叫做最小检测量-此外。忆验证定量方法时，还将10倍信噪比所对应的样品浓度叫做最小定量限，当用于法规分析时，这一数据应等于或低于法规方法所要求的实际样品中待测组分的最低允许浓度。

检测限的测定可用一个接近检测限浓度的样品进行分析，据所得色谱峰的峰高来计算。设此时浓度为c、相应的峰高为h(信号强度单位)、基线噪声为N(与h的单位相同)，则检测限可按下面公式计算：

c/h=DL/3N;即DL=3Nc/h 噪声的大小与仪器的性能，特别是检测器及其电子电路的稳定性直接相关，也与载气的纯度、色谱柱的性能及操作条件有关。噪声的测定是在正常操作条件下，仪器稳定时，将信号放大(降低衰减或放大纵坐标)来测量，一般是测定样品出峰前后1min的基线噪声。

作为分析方法，检测限无疑是越低越好。为此，应选择灵敏度高的检测器，使用高纯度的载气和辅助气，同时要定期维护仪器，保持进样口和检测器的清洁，保持色谱柱的性能。此外，仔细优化分离条件、适当加大进样量(如采用大体积进样技术)也是降低检测限的常用方法。

3.方法回收率

即方法测得的样品组分浓度与原来样品中实有浓度的比率。如果样品未经任何预处理，则回收率一般可不考虑。只有当某些样品组分被仪器系统不可逆吸附时，回收率才是需要考虑的问题。如果样品经过了预处理，如萃取工艺，那就必须考虑整个方法的回收率。一般要求回收串大于60%，越接近100%越好。

回收率可用下述简单方法测定：配置一定浓度的标准样品，将其两等分，其中一份按方法步骤进行预处理，然后用GC分析。另一份则不经颈处理而直接用GC分析。两份样品所得待测组分峰面积的比率乘以100即是该组分的回收率。有时实际样品很复杂，特别是样品基质对预处理的回收率影响较大时，就必须用空白样品基质(确信不含待测物)制备标准样品，比如测定废水中有机农药残留量时，就要采用不含农药的水作空白基质，在其中加入已知量的农药标准品，然后进行处理和分析。处理后测得的组分含量与处理前加入量的比率乘以100就得到了回收率。

很显然，回收率太低时会影响方法的检测限。当样品处理过程较复杂时，应分步测定回收率，最后针对回收率最低的步骤进行方法改进，以期提高整个方法的回收率。

4.方法重复性和重现性

重现性(reproducibility)足指同一方法在不同时间、地点、不同型号仪器、不同操作人员使用寸所得结果的一致性。与此近似的另一个术语是重复性(repeatability)，常指同一个人在同一台仪器上重复进样所得结果的一致性。事实上，文献中二者常常混用，多数人不做严格区分。但大多数欧洲学者会严格区分二者的不同。我们认为对现代仪器来说，分析重复性是容易实现的，而重现性则是更重要的，也是方法验证所必须考察的。重现性和重复性都用多次分析所得结果的相对标准偏差(RSD)来表示。

方法的重现性应包括多次连续进样分析的重复性、不同时间(天与天之间)分析的重复性、不同型号仪器之间的重现性和不同实验室之间的重现性。作为方法开发人员，首先应测定重复性，即在相同条件下连续进样5—10次，统汁待测组分的保留时间和峰面积(或峰高)的RSD，一般要求保留时间的RSD不大于1%，峰面积的RSD不大于5%。文献报道的最佳重复性数据为保留时间的RSD小于0.1%，峰面积的RSD小于1%。

如果样品要经过预处理，还应测定同一样品多次处理的重复性。即同一样品取3—5份做平行处理，看最后测定结果的重复性。这一RSD值应不大于5%。当然，有些工业分析要求不大于10%即可。至于天与天之间的重现性也不应大于10%、

当上述重复性满足要求后，说明该方法在你的实验室是可靠的。要将此方法作为标准方法推广使用，还必须测定不同仪器、不同实验室之间的重现性。当这些重现性(RSD)都能满足要求时。这一方法的可靠性就得到了较为满意的验证。

方法的线性关系及检测限

准确称取 7种目标物的标准品, 用甲醇稀释配制成 7种目标物的标准溶液, 根据需要用甲醇分别稀释配制成 5级标准工作溶液, 浓度范围如表 3所示,在选定的色谱条件下,分别进样分析。以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标作回归方程,结果见表 3 , 回归方程的相关系数 R2均大于 0.9999,线性关系良好。以最低浓度标样重复进样 5次, 取其 3倍标准偏差为检测限, 10倍标准偏差为定量限, 根据样品处理过程将结果换算为ug /g , 得到该方法的检测限和定量限

方法的回收率和重复性

采用标准加入法测定方法的回收率。取一种已知目标物含量的样品( 7 # ) ,加入与其含量相当的混合标

准溶液,重复 5次,测定其加标回收率和重复性, 结果如表 5所示。5次重复实验的 RSD范围为 1 . 3 % ~3 . 1 %, 回收率范围为 97 . 0 % ~ 99 . 6 %, 可以满足定量需要。

——引自《RP-HPLC法测定烟用香精香料中的7种防腐剂》

内标法方法学注意事项(引自网页论坛)

选一与欲测组分相近但能完全分离的组分做内标物(当然是样品中没有的组分)，然后配制欲测组分和内标物的混合标准溶液，进样得相对校正因子。再将内标物加入欲测组分的样品中，进样后测得欲测组分和内标物的定量参数。用内标法公式计算即可。

内标法是将一定量的纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。选择内标物有4个要求：1.内标物应是该试样中不存在的纯物质;2.它必须完全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完全分离;3.加入内标物的量应接近于被测组分;4.色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。内标法的优点是测定的结果较为准确，由于通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，因而在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差。内标法的缺点是操作程序较为麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量，有时寻找合适的内标物也有困难。外标法简便，但进样量要求十分准确，要严格控制在与标准物相同的操作条件下进行，否则造成分析误差，得不到准确的测量结果。

那么内标法的方法学研究就是将过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值，也就是一个比值，来进行一些精密度、准确度、线性之类的研究。

具体就是配制不同浓度的标准溶液，记录样品和内标峰面积，计算样品/内标峰面积比值R样品/内标，利用样品浓度C对比值R样品/内标作直线回归，得回归方程，作为标准曲线。精密度、准确度也如此。

首先你要了解何为内标法

内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。

由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。化学方面的因素包括：

1、内标物在样品里混合不好;

2、内标物和样品组分之间发生反应，

3、内标物纯度可变等。

对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话，应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定，在用内标法做色谱定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等)，还应注明进样体积和内标物浓度。在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值与平均值的偏差小于2，曲线仍可使用，若大于2，则应重作曲线，如果曲线在铰短时期内即产生变动，则不宜使用内标法定量。

所以，当你确定应用内标法之后，就不需要进行这些实验的。因为你在加内标时它就是一个已知浓度了。做方法学的时候，内标和待测物标准品(比如你的白三烯待测物)要分别单独进样，然后再做标液的色谱图(含有内标和样品)，然后再是提取或者回收后的样品(如血浆或者一些细胞，组织提取物等等)，最后比较两者的封面积。

如果内标选择用来做方法回收率的，在样品前处理前进行添加。如果你在做标准曲线时候则上机前添加，添加量不管外标是否为梯度内标量是固定的。你看到有人做实际样品时候只是在上机前添加内标，他这时候的内标不能指示回收率，只能用于校正仪器信号偏差，通俗的说这种内标叫上机内标。而前处理时候加入的内标叫替代内标。(我这是个人称呼，不是官方称呼哈)。添加内标的量，一般要是样品含量的两倍，这个，其实很难把握吧，样品含量我们也不知道，所以就大胆的去加就行了。嘿嘿，纯个人观点哈!

第四篇：分析方法的方法学验证

一、方法验证

1.准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80%、100%和120%的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差(RSD)应不大于2.0%。

2.线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在80%至120%的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归分析。可接受的标准为：回归线的相关系数(R)不得小于0.998，Y轴截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。

3.精密度 1)重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2)中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。

4.专属性可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。

5.检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6.定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。

7.耐用性分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20%时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离;各条件下的含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%。

8、系统适应性配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。

二、分析方法验证 (Validation)

进行验证，以证明分析方法符合检测的目的和要求，这就是分析方法验证。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法符合检测项目的要求。方法验证在质量控制上有重要的作用和意义，只有经过验证的分析方法才能用于药品生产的分析检测，方法验证是制订质量标准的基础。方法验证内容包括方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、检出限、定量限、耐用性和系统适用性等，检测目的不同验证要求也不尽相同。 1. 专属性 (Speciality / Specificity)

专属性是指分析方法能够将产品和杂质分开的特性，也称为“选择性”。对于纯度检测，可在标准品中加入产品中的已知杂质，或者直接用粗品，考察产品峰是否受到杂质的干扰，对于过程跟踪，可用反应体系样品来考察有没有其它的杂质干扰。必要时使用二极管阵列检测器或者质谱检测器进行色谱峰纯度检查。一般要求产品和杂质之间的分离度大于2.0。 2. 线性 (Linearity)

线性是在设定的范围内，检测结果与样品中原料或产品的浓度呈线性关系的程度。线性是定量检测的基础，需要定量检测的项目都需要验证线性。一般用贮备液经过精密稀释，或分别精密称样，制备得到一系列被测物质的浓度(5个以上)，按浓度从小到大运行序列，以峰面积和浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归计算，考察分析方法的线性。 3. 范围 (Range)

范围指在能够达到一定的准确度、精密度和线性时，样品中被分析物的浓度区间。简单的说，范围就是分析方法适用的样品中待测物的浓度最大值和最小值。需要定量检测的分析方法都需要对范围进行验证，纯度检测时，范围应为测试浓度的80%～120%。 4. 准确度 (Accuracy)

准确度是指测定的结果与真实值之间接近的程度，所以也叫做“真实度”，需要定量得分析方法均需要验证准确度。准确度应在规定的范围内建立，对于原料药可用已知纯度的标准品或符合要求的原料药进行测定，必要时可与另一个已建立准确度的方法比较结果。 5. 精密度 (Precision)

精密度是指在规定条件下，同一均匀样品经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度。精密度一般用相对标准偏差(RSD)表示，取样检测次数应至少6次。精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。

a、重复性(Repeatability)：是在相同的操作条件下、较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的精密度。一般是用100%浓度水平的样品测定6次的结果进行评价。

b、中间精密度(Intermediate precision)：同一实验室，在日期、分析人员、仪器等内部条件改变时，测定结果的精密度。 c、重现性(Reproducibility)：指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。

6. 检出限 (Limits of Detection;LOD)

检出限是指样品中的被分析物能够被检测到的最低量，不需要准确定量。检出限体现了分析方法的灵敏度。检出限的测定可以通过对一系列已知浓度被测物的试样进行检测，以能准确、可靠检出被测物的最小浓度来确定，也可把已知浓度样品的信号与噪声信号进行比较，以信噪比为3：1时的浓度确定检出限，一般要求能够达到进样浓度的0.05%。

7. 定量限 (Limits of Quantitation / Quantification;LOQ) 定量限是指样品中的被分析物能够被定量检测的最低量，其测定结果需要一定的准确度和精密度，定量限体现了分析方法灵敏定量检测的能力。检测需要严格控制含量的杂质，必须考察方法的定量限，以保证杂质能够被准确定量。一般以信噪比为10：1时相应的浓度或进样量来确定定量限。

8. 耐用性 (Durability / Robustness)

耐用性是指测定条件发生小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，耐用性主要表明方法的抗干扰能力，主要的变动因素包括：流动相的组成、流速和pH值、色谱柱、柱温等。经试验，应说明小的变动能否符合系统适用性试验要求，以确保方法有效。 9. 系统适用性试验 (System Suitability) 液相色谱分析方法主要依赖高效液相色谱仪和色谱柱，在做方法验证时，有必要将高效液相色谱仪、色谱柱、流动相与实验操作、待测样品等一起当作完整的系统进行评估，并将系统适用性作为分析方法的组成部分，系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。一般系统适应性的要求为：分析方法能够达到0.05%的检出限;主峰的拖尾因子(T)0.95

分析方法开发与验证是一个整体，在实际工作中，一般是先开发分析方法，经过适当的优化以后再做方法验证，验证的部分内容在分析方法开发时就要做，比如说分析方法的专属性验证。分析方法验证并非必须验证所有的内容，只要注意验证内容充分，足以证明分析方法的合理性就可以了，如杂质限度检测一般只需要验证专属性和检出限，而精密度、线性、定量限等涉及定量测定的项目，则不需要验证。有时需要对分析方法进行全面或部分的再验证。当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。当分析方法发生部分改变时，如检测波长发生改变，则需要重新进行检测限、专属性、准确度、精密度、线性等内容的验证，以证明改变后的分析方法的合理性、可行性

第五篇：探究性实验和验证性实验的区别

一、探究性实验与验证性实验的比较

l、概念

(1)探究性实验：指实验者在不知晓实验结果的前提下，通过自己实验、探索、分析、研究得出结论，从而形成科学概念的一种认知活动。

(2)验证性实验：指实验者针对已知的实验结果而进行的以验证实验结果、巩固和加强有关知识内容、培养实验操作能力为目的的重复性实验。

2、比较表

3、复习探究和验证性实验要注意的问题：

(1)分清实验组和对照组。在设计实验时必须要有明确的标记，如用甲、乙、丙，或者是A、B、C或者

1、

2、3，总之让人以一目了然的感觉。即对照原则：

①空白对照：即不给对照组做任何处理。如例

9、

11、1

2②条件对照：给实验组某种处理，给对照组另外一个条件处理。如例

1③自身对照：指对照组和实验组都在同一研究对象上进行。例如鸡的阉割实验——阉割前鸡的状况为对照组，阉割后的鸡为实验组。如例

4、7

④相互对照：不单独设置对照组，而是几个实验相互为对照，例如不同温度对酶活性的影响。研究不同浓度下种子的萌发情况。如例

2、

3、

6、10

(2)分析实验设计中的单一自变量。即单一变量原则。例如不同温度对酶活性的影响时，温度就是这一变量，而pH、底物浓度、酶浓度等就是无关变量，应设置为相同。

(3)注意实验操作步骤的前后顺序要有逻辑性(前因后果)，步步有理，环环相扣，各步骤要严密、完整。

(4)注意实验用具与试剂及需要控制的实验条件。

(5)注意实验结果的观察、记录、分析和结论，确定对实验结果的观察内容和合适的观察方法，最后对结果作出科学的解释并得出正确的结论。

二、实验分析

- 1 -

1、探究性实验的设计

例题：绿豆种子萌发初期的生长主要是胚轴的伸长。某研究性学习小组从一个农科所获得了一种复合肥料，他们想探究这种复合肥料溶液在什么浓度范围对绿豆萌发初期的生长促进作用最大。请你利用下列材料，参与他们的实验设计。

材料：做好标记的大号培养皿若干个、刚萌发出一小段胚轴的绿豆种子若干组(10粒/组)、复合肥料颗粒、蒸馏水、脱脂棉、直尺等

实验步骤：

(1)配制一系列不同浓度的复合肥料溶液。(确定自变量)

(2)分别测量已萌发绿豆胚轴的长度，并计算各组的平均值，记录下来。(确定因变量，前测，收集、处理数据)

(3)将分别用不同浓度的复合肥料溶液浸润过的脱脂棉，铺在不同的培养皿中，再将几组已萌发的绿豆分别放入其中。另外设置一个用蒸馏水代替复合肥料溶液处理的对照组。(设置实验组和对照组)

(4)将上述装置放在温度等外界环境条件适宜且相同的地方培养。(控制无关变量)

(5)几天后，再次测量绿豆胚轴的长度，计算各组平均值，记录下来。(测量、收集、处理数据) 最后，将实验数据进行比较分析，得出结论。

例1：植物开花受光周期的影响。菊花等短日照植物只有白昼短于一定时数若干天后，才能开花。那么菊花感受光周期刺激的部位在哪里?是在植物的顶端花芽，还是在下部的叶片?请你设计实验探究菊花感受光周期刺激的部位，写出实验步骤，预测实验结果并分析。

实验材料：(略)

(1)实验步骤：

①

②

③

(2)实验结果预测与分析：

例2：如果要探究栽种的植物在何种日温与夜温组合下，最有利于植物的生长，你如何进行实验设计?(日温可控制范围：15~35℃;夜温可控制范围：17~ 25℃;植物生长的其它条件均合适)

(1)实验方案：

①

②

③

(2)预测最有利于植物生长的温度组合并作解释：

例3：在自然界中生物的发光现象普遍存在，生物通过细胞的生化反应而发光。请设计实验探究萤火虫的发光强度与ATP浓度的关系。

实验材料：萤火虫的萤光器晒干后研成的粉末，ATP粉末，蒸馏水，大小相同的试管若干，标签纸若干及其他实验所需材料。

实验步骤：

第一步：

第二步：

第三步：

实验现象预测及相应结论

例4：血糖浓度的相对稳定是人和动物维持生命活动所必需的。请设计试验方案，探究某种器官在血糖调节中的功能。

实验目的：学习用摘除法造成功能缺损，以了解研究某些器官功能的一些方法;观察某器官对血糖平衡的调节作用。

动物与器材：成熟的150g左右的健康小白鼠6只，常用的手术器械，消毒器材，75%酒精，麻醉药品，鼠笼，注射器，计时工具等。

(1)列出一个课题名称：。

(2)提出一项测量指标：。

(3)方法步骤：

①取成熟的150g左右的健康小白鼠6只，先饥饿一天，分成实验组4只，对照组2只，并编号。- 2 -

②消毒，切开皮肤和腹壁，摘除实验组的ⅹⅹ器官，缝合伤口并消毒。

③

④

(4)预测结果并分析：

①

②

③

例5：某同学在培养金黄色葡萄球菌时，培养基上污染了青霉，在青霉周围的金黄色葡萄球菌都被杀死了。有关此现象的产生，有人提出了化学拮抗的观点，即霉菌产生一种化学物质抑制了金黄色葡萄球菌的生长繁殖。试设计实验探究青霉与金黄色葡萄球菌之间是否存在这种关系。

你的实验假设是：。

主要实验步骤：①制备细菌生长培养基两份，编号A、B;

②。

③。

④观察的生长状况。

实验结果预测和分析：

例6：一种以地下茎繁殖为主的多年生野菊分别生长在海拔10m、500m、1000m的同一山坡上。在相应生长发育阶段，同一海拔的野菊株高无显著差异，但不同海拔的野菊株高随海拔的增高而显著变矮。为检验环境和遗传因素对野菊株高的影响，请完成以下实验设计。

(1)实验处理：春天，将海拔500m、1000m处的野菊幼芽同时移栽于10m处。

(2)实验对照：生长于m处的野菊。

(3)收集数据：第二年秋天。

(4)预测支持下列假设的实验结果：

假设一野菊株高的变化只受环境因素的影响，实验结果是：移栽至10m处野菊株高。假设二野菊株高的变化只受遗传因素的影响，实验结果是：移栽至10m处野菊株高。假设三野菊株高的变化受遗传和环境因素的共同影响，实验结果是：移栽至10m处野菊株

高。

2、验证性实验的设计

例题：创新实验设计方案

实验课题：探究镍为植物生活所必需的矿质元素

材料用具：完全营养液甲、缺镍的完全营养液乙、适当的容器和固定材料、长势相似的玉米幼苗、含镍的无机盐。

方法步骤：

①取适当的容器及固定材料分为两组，编号A、B 。(实验分组准备)

②分别在A、B两组容器中加入完全营养液甲、缺镍的完全营养液乙。(设置实验组和对照组) ③取长势相似的玉米幼苗平均分成两组，分别固定在A、B两组容器内培养。(控制无关变量) 实验预期：A容器内的玉米幼苗生长正常;B容器内的玉米幼苗生长不正常。

为进一步验证镍元素一定是必需元素，还应增加的实验步骤及结果是：在B容器内再加入一定量的含镍的无机盐B容器内的玉米幼苗生长恢复正常。

例7：空气中的含菌量是衡量空气质量的指标之一。为了检测学校生物实验室、教室、校长室、小树林四个地方空气中的含菌情况，请利用所提供条件设计一个简单实验。

1、请用100mL量筒、4副培养皿、煮沸过的洗碗水，设计取样的实验步骤。

2、请用4只试管、滴管、0.01%亚甲基蓝溶液，设计检测的实验步骤。

3、实验结果的预测及分析。

例8：为了验证叶绿体在光下才能分解水，并还原电子受体，将新鲜菠菜叶片剪碎放入研钵中，加少量Si02和水并研磨成匀浆，通过5～6层纱布过滤获得叶绿体悬浮液。取1支试管，加入叶绿体悬浮液5ml和0.1% 2，6一二氯酚靛酚 (一种能被还原成无色的蓝色氧化剂)溶液5滴，摇匀。置于直射光下，观察试管内颜色的变化。

(1)正常叶肉细胞内的光反应发生的场所是，最终电子受体被还5 -

察三个装置玻璃管两侧液面的变化。

(3)1号装置玻璃管两侧液面左低右高，2号装置玻璃管两侧液面左高右低，3号装置玻璃管两侧液面等高

例10：②将3支试管分别标明35℃、37℃、39℃三种温度(其他合理答案也可得分，但第二支试管的温度要求在37℃左右，其它要求等温度梯度)

③向每管接入培养18-20h的等量大肠杆菌菌液少许，混匀。

④将上述各试管分别按不同温度进行振荡培养24h(或一段时间)，观察并记录结果。

C、37℃试管中菌液的混浊度最高。

例11：①验证水分子进出细胞需通过水通道蛋白

②缺少对照实验改正：取另一只培养皿，加等量的蒸馏水;将不含有水通道蛋白的细胞放入，在相同条件下放置一段时间后用显微镜观察。不含有水通道蛋白的细胞保持原状。

③方法

A、将分离纯化的水通道蛋白与球状体混合，得到含有水通道蛋白的球状体;

B、取甲、乙两只培养皿，加入等量的蒸馏水;