藿香正气颗粒中厚朴酚与和厚朴酚质量标准的研究

2022-09-12

绪论

藿香正气颗粒由藿香、厚朴、紫苏叶、白芷、白术、陈皮、姜半夏、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、大枣、生姜等制成。用于暑湿感冒, 头痛身重, 胸闷或恶寒发热, 脘腹疼痛, 呕吐泄泻等。藿香正气颗粒不含酒精, 所以酒精过敏者也可以服用。藿香正气颗粒现已有检测颗粒中橙皮苷的含量作为其质量标准。本文旨在增加厚朴酚和和厚朴酚作为另一质量标准。

一、仪器与材料

1. 仪器高效液相色谱仪:

岛津LC-2010AHT液相色谱仪 (泵:LC-10ADvp;自动进样器:SIL-10ADvp;柱温箱:CTO-10ACvp;检测器:SPD-10AVvp) 、超声波提取器:HS-10260 (功率260W频率40k Hz) 、色谱柱:Inertsi L ODS-SP (250mm×4.6, 5um) 、电子天平:BP211D型

2. 材料厚朴酚对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:

110729-200411) 、和厚朴酚对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:110730-201011) 、藿香正气颗粒 (天津中新药业集团中新制药厂生产, 规格为1.5g/袋, 批号:10020101、10020102、10020103、10020104、10020105、10020106、10020107、10020108、10020109、10020110) 、甲醇为色谱甲醇 (购自MERCK公司) 、实验用水为娃哈哈纯净水

二、方法与结果

1. 藿香正气颗粒中厚朴酚与和厚朴酚含量测定的条件考察

(1) 色谱条件的考察

在藿香正气颗粒前处理[1~4]相同处理的情况下, 通过查阅文献, 选择文献中常用的3种不同溶剂组合成的流动相:甲醇-水 (78:22) 、乙腈-水 (80:22) 、甲醇-乙腈-水 (50:20:40) 。选择同一批藿香正气颗粒 (10020101) , 经查阅文献设定溶解溶剂为甲醇, 超声30min后用HPLC进行含量测定、理论塔板数、分离度的比较, 筛选出流动相的组合种类。

根据流动相的对比考虑到在分离度达标的情况下选择柱压低的流动相能更加保护色谱柱, 所以选择甲醇-水 (78:22) 。

(2) 藿香正气颗粒中厚朴酚、和厚朴酚的提取溶剂及超声时间考察

选用L9 (34) 正交实验表, 就溶剂、超声时间[5]进行而因素三水平正交试验, A溶解溶剂:甲醇、70%甲醇、乙醇;B超声时间:20min、30min、40min。每个试验选用同一批号 (10020101) 藿香正气颗粒1.5g, 按方案所列的试验条件进行, 取本品1.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25m L, 超声 (250KW, 33KHz) 30分钟, 放冷, 再称定重量, 用醇补足减失的重量, 取续滤液。待测厚朴酚、和厚朴酚含量

实验证明影响藿香正气颗粒中厚朴酚、和厚朴酚含量的主要因素为超声时间, 而因素A溶解溶剂为次要因素。根据正交试验表直观分析选择最佳工艺为甲醇超声30min。

从正交试验的观点来看, 选取有显著意义因素的最高水平, 确定出最佳方案, 不显著的因素, 原则上可以根据实际条件酌情确定一个水平。综上所述, 得到的最佳方案是甲醇溶解, 超声30min。

2. 厚朴酚、和厚朴酚含量测定的对照品溶液及供试品溶液的制备

(1) 色谱条件[6]

色谱柱为Inertsi L ODS-SP (250mm×4.6, 5um) ;流动相:甲醇-水 (78:22) ;流速:1.0m L/min;柱温35℃;检测波长294nm。样品经过0.45μm滤膜过滤。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于5000。在此条件下藿香正气颗粒中厚朴酚与和厚朴酚与其他组分均能达到基线分离。供试品色谱中, 在对照品色谱相应的位置上有相同的保留时间 (和厚朴酚:7.82min;厚朴酚:10.53min) 的色谱峰, 证明此法可行。

(2) 供试品溶液制备[7]

取本品1.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25m L, 超声 (250KW, 33KHz) 30分钟, 放冷, 再称定重量, 用醇补足减失的重量, 取续滤液, 即得。

(3) 对照品溶液制备

精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品, 加甲醇分别制成每1m L含厚朴酚30.12μg、和厚朴酚25.12μg的溶液, 即得。

(4) 阴性对照供试液的制备

取除厚朴外的其他处方药物, 按相同的制剂工艺制成颗粒取本品1.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25m L, 超声 (250KW, 33KHz) 30分钟, 放冷, 再称定重量, 用醇补足减失的重量, 取续滤液, 即得阴性对照品溶液, 待用。

3. 方法学考察[8]

(1) 标准曲线绘制

精密称取厚朴酚4.60mg与和厚朴酚3.09mg, 置50m L量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0m L置25m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。厚朴酚精密吸取10u L注入高效液相色谱仪, 平行测定2次, 以峰面积对浓度进行回归分析。以厚朴酚的浓度x (mg/m L) 对峰面积y进行线性回归, 得回归方程为y=1.2E+7x+152.13, r=0.9998, 线性范围为3.68-22.08μg/m L, 线性关系良好。以和厚朴酚的浓度x (mg/m L) 对峰面积y进行线性回归, 得回归方程为y=1.5E+7x+190.17, r=0.9997, 线性范围为2.47~14.83μg/m L, 线性关系良好。

(2) 精密度试验和稳定性试验

精密吸取厚朴酚 (30.12μg/m L) 、和厚朴酚 (25.12μg/m L) 对照品溶液, 按色谱柱为Inertsi L ODS-SP (250mm×4.6, 5um) ;流动相:甲醇-水 (78:22) ;流速:1.0m L/min;柱温35℃;检测波长294nm。样品经过0.45μm滤膜过滤。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于5000进行分析, 进样量为10μL, 重复进样6次, 测得厚朴酚峰面积平均值为448318、RSD为0.12%、和厚朴酚峰面积420581及RSD为0.21%。

取本品1.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25m L, 超声 (250KW, 33KHz) 30分钟, 放冷, 再称定重量, 用醇补足减失的重量, 取续滤液, 即得。精密吸取同一供试品溶液10u L, 0、2、4、8、12、24h分别进行测定, 测得厚朴酚平均峰面积为66838、RSD值为1.38%、和厚朴酚平均峰面积34896及RSD为0.14%。

(3) 重复性试验

平行制备藿香正气颗粒 (批号:10020101) 的供试品溶液5份, 取本品1.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25m L, 超声 (250KW, 33KHz) 30分钟, 放冷, 再称定重量, 用醇补足减失的重量, 取续滤液测定厚朴酚、和厚朴峰面积, 进样量为10μL, 并测得厚朴酚平均峰面积为74427、RSD值为2.31%、和厚朴酚平均峰面积39798及RSD为0.32%。

(4) 加样回收试验

精密称取已知含量的样品1.5g (藿香正气颗粒的规格为每袋1.5g, 且每袋含厚朴酚0.12mg, 和厚朴酚0.06mg) 含厚朴酚0.12mg, 和厚朴酚0.06mg;总含量为0.18mg。适量5份, 分别加入厚朴酚对照品0.12mg, 和厚朴酚0.06mg。按取本品1.5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25m L, 超声 (250KW, 33KHz) 30分钟, 放冷, 再称定重量, 用醇补足减失的重量, 取续滤液进行含量测定, 进样量为10μL, 依法测定计算回收率为100%及RSD为1.96%。

4. 阴性对照试验

将制得的阴性对照供试品溶液, 稀释后进样测定, 表明阴性对照品溶液在厚朴酚的保留时间位置出峰无干扰。

结论

本次试验采用高效液相色谱法对藿香正气颗粒中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定进行了流动相的选择;溶解溶剂、超声时间的优化;厚朴酚、和厚朴酚含量限值的确定, 并取得了满意的结果。本实验的方法简便易行, 有助于对藿香正气颗粒的质量进行控制。

摘要：测定藿香正气颗粒中厚朴酚与和厚朴酚的含量。方法:采用HPLC法测定厚朴酚与和厚朴酚的含量;色谱柱:Inertsi L ODS-SP (250mm×4.6, 5um) ;流动相:甲醇-水 (78:22) ;流速:1.0m L/min;检测波长:294nm。结果:厚朴酚的线性范围是3.6822.082g/m L, 其线性相关系数为r=0.9998、和厚朴酚的线性范围是2.4714.832g/m L, 其线性相关系数为r=0.9994。厚朴酚、和厚朴酚的加样回收率的平均值为100%, RSD=1.96%。结论:方法简单易行, 结果准确, 可靠, 适用于本品的含量测定

关键词：高效液相色谱,藿香正气颗粒,厚朴酚,和厚朴酚,含量测定