薄层色谱法的实验报告

薄层色谱法的实验报告（共7篇）

篇1：薄层色谱法的实验报告

实验报告 专业班级

姓名

评分

学号

同组人

指导老师

实验课程名称

实验项目名称

开课实验室

实验时间

一、实验目得

掌握薄层色谱得基本原理及其在有机物分离中得应用、二、实验原理

有机混合物中各组分对吸附剂得吸附能力不同, 当展开剂流经吸附剂时, 有机物各组分会发生 无数次吸附与解吸过程, 吸附力弱得组分随 流动相迅速向前, 而吸附力弱得组分则滞后, 由于各组分不同得移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上得位置 置, 常用比移值 R ｆ 表示、三、实验仪器与药品5。

0c ｍ×１5 5。0 0 ｃm m 硅胶层析板两块, , 卧式层析槽一个, , 点样用毛细管。

四、物理常数

名称

分子量

熔点/ / ℃

沸点/ / ℃

折光率／n n２0 0

比重

颜色与形态

溶解度

甲基橙

７、33０ 未确定。

１。62６ ６6。20３２ ２ 橙红色 鳞状晶体或粉末

微 溶 于水 水, 较易溶 于 热水 水, 不溶于乙醇

荧光黄

332。3１

定 未确定 未确定

未确定

-—— 橙红色结晶粉末

不 溶 于水 水 , 乙 乙醚 醚, 氯仿苯 与苯,溶 溶于碱液。

五、仪器装置图

“浸有层析板得层析槽”图

１--层析缸 ,2 — 薄层板 ,3 －展开剂饱与蒸汽 ,4 — 层析液

六、实验步骤

(1))薄层板得制备: :

称取２ ~5 ｇ层析用硅胶, , 加适量水调成糊状, , 等石膏开始固化时, , 再加少许水, , 调成匀浆, ,平均摊在两块 5 5、０×１ 5c ｍ得层析玻璃板上, ,。

再轻敲使其涂布均匀。((！

老师代做！))

固化后, ,经 经 1 1 ０5 5 ℃烘烤活化 ０、5 5 h, 贮于干燥器内备用、(2)点样。

在层析板下端２、0cm 处,(用铅笔轻化一起始线, 并在点样出用铅笔作一记号为原点、)取毛细管, 分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液, 点于原点上(注意点样用得毛细管不能混用, 毛细管不能将薄层板表面弄破,在 样品斑点直径在 1 ～２mm 为宜！斑点间为 距为 1cm)

(3)定位及定性分析

用铅笔将各斑点框出, , 并找出斑点中心, , 用小尺量出各斑点到原点得距离与溶剂前沿到起始线得距离, , 然后计算各样品得比移值并定性确定混合物中各物质名称。

纯染料

混合染料2

甲基橙

荧光黄

甲基橙

荧光黄

混合液

斑点移动距离a(cm))

溶剂移动距离ｂ((ｃｍ))

R f

实验注意事项1、铺板时一定要铺匀, , 特别就是边、角部分, , 晾干时要放在平整得地方、2、点样时点要细, , 直径不要大于 2m ｍ, , 间隔 0 0。5 5 ｃm m 以上, , 浓度不可过大, , 以免出现拖尾、混杂现象。3、展 开用得烧杯要洗净烘干, , 放入板之前, , 要先加展开剂, , 盖上表面皿, ,、让烧杯内形成一定得蒸气压、点样得一端要浸入展开剂０、m 5cm 以上, ,但展开剂不可没过样品原点、当展开剂上升到距上端 0.5--１m cm 时要及时将板取出, , 用铅笔标示出展开剂前沿得位置。

讨论: :

七、思考题

篇2：薄层色谱法的实验报告

摘要薄层色谱法，是指将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药物的鉴别、杂质检查或含量测定的方法[1]。本文介绍了薄层层析法的原理，操作方法，主要应用及其在各个学科中的应用，并指出了此方法的局限性、须待解决的问题。

关键词：薄层色谱法；原理；操作方法；主要应用；局限性

薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属于固－液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，在进行化学反应时，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。

薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。

一、原理

色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）：

化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移

动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物[2]。

薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。

二、实验基本流程

铺板点样展开显色 计算Rf值

铺板：取7.5x2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL，调成均匀的糊状，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好的硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h后取出，稍冷后置于干燥器中备用。

点样：点样用的毛细管为内径lmm的管口平整的毛细管，将样品溶于低沸点的溶剂（乙醚、丙酮、乙醇、四氢呋喃等）配成溶液。点样前，可先用铅笔在小板上距一端5mm处轻轻划一横线，作为起始线，然后用毛细管吸取样品在起始线上小心点样，如需重复点样，则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。若在同一块板上点几个样，样品点间距离为5mm以上。

展开：展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑。薄层的展开在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放入广口瓶中，使广口瓶内空气饱和5－10min，再将点好试样的薄层板放入广口瓶中进行展开，点样的位置必须在展开剂液面之上，当展开剂上升到薄层的前沿（离前端5~10mm）或多组分已明显分开时，取出薄层板放平晾干，用铅笔划溶剂前沿的位置后，即可显色。

显色：如果化合物本身有颜色，就可直接观察它的斑点。如果本身无色，可先在紫外灯光下观察有无荧光斑点（有苯环的物质都有），用铅笔在薄层板上划出斑点的位置；对于在紫外灯光下不显色的，可放在含少量碘蒸气的容器中显色来检查色点（因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑点），显色后，立即用铅笔标出斑点的位置。

计算Rf值：准确地找出原点，溶剂前沿以及样品展开后斑点的中心，分别测量溶剂前沿和样点在薄层板上移动的距离，求出其Rf值。

三、主要应用

（1）定性鉴别 化学上经典的定性鉴别，例如经典的有机定性分析或经典的毒物分析，是利用各种化合物的溶解度不同和所含功能基的不同，用溶剂提取或用试剂处理，把它们分组或分为单一组分，然后作试管反应或点滴反应(颜色反应)，或根据它们衍生物的理化性质进行定性鉴别。这种方法的缺点是样品用量叫大，分离手续麻烦,分析时间较长(几小时或几时个小时)，并可能有杂质干扰。现采用合适的展开剂和现色剂在薄层上作为分离和鉴别，根据样品中组分的值和现色情况，同时用标准作对照，一般即能却证为某一化合物。用薄层色谱法定性，样品用量小，分离方便，分离时间短(几分钟或几时分钟)，检出灵敏度高。例如，再毒物分析中检验是否巴比妥安眠药中毒时，取胃内容物或尿样品，先用盐酸酸

化后，用乙醚提取，乙醚提取液脱水，过滤蒸干，溶于无水乙醇中，点在硅胶版上用氯仿、无水乙醇（36：1）展开，用硫酸汞二苯偶碳酰肼试剂显色，并用标准品对照，意见出巴比妥，苯巴比妥，戊巴比妥和异巴比妥。鉴别速度快（1小时），这对于抢救中毒患者和及时为医生提供治疗方案极为重要。

（2）药品的质量控制和杂质检查 药品的纯度，通常用熔点，吸光值等物理常数作为鉴定的指标。但是薄层检查也是药品质量控制和杂质检查的一种有效方法，有时甚至比一般方法更有效。一些国家的药典和药品规范已经采用。方法是把一定量得样品溶液(例如，相当于样品)电在薄层上，用展开剂展开并显色，同时用纯品作对照,如果样品只显示出纯品值一致的一个斑点，则表示含有杂质。进一步可用薄层作杂质的限量检查。例如镏体药物的合成和精致工作中，常含结构类似的杂质,即按上述方法控制其质量和杂质的限量。

（3）化学反应进程的控制 反应副产物的检出以及中间体的分析，在化学反应进行到一定时间或反应终了时，把反应液取出作薄层分析，可以知道还剩下多少原料药未起作用。方法是把反应液或其有机溶剂提取液点在薄层上，同时点原料作参比对照，看薄层上是否出现原料药斑点。还可以用薄层检查反应副产物。如果化学反应分步进行，则每一步反应的中间体的质量和产率也都可用薄层进行定性和定量。例如在合成强力霉素的过程中，需要中间地甲烯土霉素氢化物为脱氧土霉素。氢化反应是否完全，可用薄层检查，如果反应完全，则反应釜中几乎没有或只有极少量的甲烯土霉素存在，薄层板上只显示出一个脱氧土霉素，如果薄层板上有上下二个明显的斑点，表示反应还没有完全，尚需继续还原,直到只显示出脱氧土霉素的一个斑点为止才能出料。

（4）柱色普法分离条件的探索 柱色普法的实验条件，例如选用什么吸附剂和洗脱剂较好各个组分按什么顺序从柱中洗脱出来，每一分洗脱液中是含单一组分或就含几种没有分开的组分等，都可以在薄层上进行探索和检验。薄层上所有的展开剂虽不完全照搬柱色普法上，但仍有参考价值。

四、薄层色谱法在各个学科中的应用

（1）食品和营养 食品中的营养成分是蛋白质、氨基酸、糖类、油和脂肪、维生素、食用色素等。与食品和营养有害的物质则有残留农药、致癌的曲黄霉素等。这些成分都可用薄层色谱法定性和定量。蛋白质和多肽水解为氨基酸，对不同来源的动物性和植物性蛋白水解后产生不同的氨基酸进行定性和定量，有助于解决蛋白质的结构和食品营养问题。二十多种氨基酸用硅胶G薄层板双向展开，一次即能分开，然后定性和定量，方法快速而简便。多糖和寡糖可水解为单糖，可用薄层色谱法进行单糖和双糖的定性和定量。文献上有每一个糖的Rf值和相应的展开剂。油和脂肪解为脂肪酸，脂肪酸的种类和结构中的不饱和键数，与营养和卫生有关，关于油和脂肪的薄层（硅胶、硅藻土、纤维素)分析，文献和综述很多。脂溶性和水溶性维生素在薄层上可方便地定性和定量，例如脂溶性维生素A,D,E,K及B2,B6,B12,酶酸，泛酸，叶酸，C,促生素在硅胶G薄层上可用苯：甲醇：丙酮：冰醋酸（7:2:0.5:0.5）分开。用硅胶G薄层和丙酮：氯仿（1:1)以及激发波长365nm和波长450nm,可用荧光法测定ng量的曲黄素B1,B2,G1,G2,方法灵敏快速。

（2）药物和药物代谢 薄层色谱法在合成药物和天然药物中的应用很广。有些文献和内容偏重于合成药物、化合物及其代谢产物，有文献为在中草药分析中的应用。每一类药物，例如磺胺、巴比妥、苯骈噻嗪、甾体激素、抗菌素、生

物碱、强心甙、黄酮、挥发油和萜等，都包括几种或十几种化学结构和性质非常相似的化合物，可以在上述文献中找出一、二种全盘的展开剂，一次即能把每一类的多种化合物很好地分开。药物代谢产物的样品一般先经预处理后用薄层分析，应用也很广，但有时因含量甚微，不用采用气相和高效液相色谱法灵敏。

（3）化学和化工 化工和化学方面的有机原料和产品都可用薄层色谱法分析。例如含各种功能基的有机物，石油产品，塑料单体，橡胶裂解产物，油漆原料，合成洗涤剂等，内容非常广泛。

（4）医学和临床 薄层色谱法的应用还渗透到医学和临床中去，例如它是一种快速的诊断方法可用于妊娠的早期诊断。方法是基于在孕妇的尿中能检出比未媳妇妇女的尿中含更多的孕二醇，把两者的尿提取后点在薄层上比较，即可作出判断。这一方法可不用动物而在2~3小时内化验出结果。

（5）毒物分析和法医化学 如前所述，经典的毒物分析有许多缺点，目前毒物分析和法医化学采用薄层色谱法等新的手段，对麻醉药、巴比妥、印度大麻、鸦片生物碱等均可分析。

（6）农药 十多种有机磷农药和六种有机氯农药都可在硅胶G薄层上分开并测定含量，可用于农药分析及其残留量分析。

综上所述，薄层层析有许多优点：它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20分钟；混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10～100倍，它既适用于只有0．01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。薄层层析的缺点是对生物高分子的分离效果不甚理想。

参考文献:

篇3：薄层色谱法实验教学改进

【关键词】 薄层色谱；实验教学；仪器分析

【中图分类号】R-05 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）14-0093-01

在仪器分析实验中，薄层色谱法因操作简单、快捷、方便，在药品、食品及其他领域研发、检验中应用广泛。薄层色谱实验较其他实验更具体、直观，学生容易接受和理解，操作要领容易掌握，学生通过该实验操作和观察，激发其理论学习兴趣和对问题的思考，为以后的工作、学习奠定基础。该实验在仪器分析实验教学中是必不可少的环节，但其综合性较强，需要学生不断的练习巩固。笔者将自己在该实验教学中的探索性改进总结如下。

1 薄层色谱法实验在仪器分析实验教学中的地位

中医药文化是我国悠久历史和文明的代表之一，随着现代化程度的提高，人类在与各种疾病斗争的过程中，中药正在不断的被认识和重视。在其发展过程中，化学知识的融入为其提供了客观物质基础证明方法和质量控制手段，因而学习化学知识对中药专业学生非常中药。分析化学是一门强调实践动手能力的应用型化学课程，仪器分析又有机的融入了现代科技手段为化学所用，拓宽了分析化学的应用领域，同时促进了中药行业的进步和发展，对中医药文化发展具有至关重要的作用。药品的特殊性，需要从业者有高度的责任心，通过分析化学实验可以培养学生严谨、实事求是的科学态度，锻炼其提出问题、解决问题和分析问题的科研能力，提高其对问题观察、判断的“谨小慎微”的技能。

为提高办学水平、促进其综合素质的发展、培养能服务于社会的新型人才，国内各高校都在实行教学改革，探讨不同的教学方式、方法以充分利用课内外有效时间，如网络课程、探究式教学、启发式教学等[1-6]。每种教学方法都有其特有的优势，适应于不同的学生群体，笔者根据授课学生的特点，综合实验教学与中药实践相结合的特点，探讨适合的教学方法。传统的薄层色谱实验虽然非常经典，但表现形式较为单一，与中药专业结合针对性不强，学生对其知识的了解兴趣不够，需要进行教学改进。

2 实验设计原则

遵循中医药教育思维模式，注重“基础和操作并重”的原则，薄层色谱实验要掌握理论知识基础上，结合地方特色开展。笔者结合教学经验和自身的科研经历，设计了薄层色谱法检验大黄及何首乌中的蒽醌类苷元成分。

经过讨论，笔者总结薄层色谱实验教学主要步骤如下：预习—演示—操作—发现、解决问题—撰写报告得出结论。教师课前有导向性的对学生进行引导和布置作业，要求学生通过主动学习了解实验对象的原理和实验要达到的目的，并通过对搜集信息的整理、提炼撰写预习报告；实验教学时教师利用多媒体、实物演示等形式向学生充分传达实验内容，学生通过亲自操作体验实验的乐趣；引导学生发现问题、提出问题，形成小组讨论和解决问题的良好实验氛围；实验结束时能够正确对待实验结果和结论。在整个教学活动维持中，教师在协调实验整体性的同时，要关注学生的个体化发展。

3 实验设计目的

大黄是传统中药，在中医治疗中作为单味药和复方广泛使用，其研发也较为深入，文献报道较多，有利于学生的自主学习。笔者结合我校其他课程实验教学活动，合理利用资源，开展以大黄素为对照品的薄层色谱法检查大黄和何首乌中蒽醌类苷元成分。

要求学生预习时，充分利用学校的网络、图书等资源查阅相关文献，培养学生使用各种资源搜集资料的能力，对文献进行提取、分析、综合的能力，同时培养学生主动学习的自信心；由于蒽醌类成分在日光下、紫外灯下、氨水熏后呈现不同颜色，观察方便、有趣，可训练学生从不同角度观察同一现象的思维；通过Rf值的比对，巩固利用对照物进行定性的方法；通过比较大黄和何首乌中共同的蒽醌类成分，体会同科属植物具有相似化学成分的特点；通过撰写实验结果，培养其实事求是的科学态度。学生通过主动和被动学习及亲身实践，明了“为什么作为中药专业的学生要学习化学”的原因和必要性，同时又通过化学知识的不断积累地应用服务于中医药的学习中。

4 实验评估

学生的实验目的不是学会老师教授的内容，而是超越固有内容的学习，拓宽思维，提出问题。实验教学要允许甚至鼓励学生对实验提出不同观点，从不同角度对结果和结论进行分析探讨。实验操作过程中，教师的重点在于发现学生的潜力和问题之处，并及时进行引导和修正。

一个学生实验的开展，需要教师的不断努力和改进，“教学有法，但无定法”是作为一名高校教师不断努力的动力和目标。通过不断的发现问题、分析问题、解决问题以便及时改进教学活动。

参考文献

[1王富林，徐昕，周伟红，等.中美两门大学普通化学网络课程的比较——以中国大学精品形文课程和Coursera为例[J].大学化学，2014，29（6）：15.

[2]张树永，王玉枝，苑世领.国内外化学专业教学方式和方法的改革与探索——高等化学教育咨询的评议项目系列之二[J].大学化学，2014，29（2）：14.

[3]李凌，朱利娜，张宝，等.加强中医药校护理专业学生学习策略的思路[J].中国高等医学教育，2012，（5）：118.

[4]张雪梅，辛宏，黑红亚，等.在PBL课程中提高药学生专业英语口语能力的教学实践与探讨[J].中国高等医学教育，2013，（12）：1-2.

[5]蔡蓉，许伟榕.RBL课程带教的实践与思考[J].中国高等医学教育，2013，（9）：50.

[6]张军，王启宝.启发式教学在立体化学性分子教学中的应用[J].大学化学，2012，27（6）：18.

篇4：薄层色谱法的实验报告

薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

1.仪器与材料（1） 玻板  除另有规定外，用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

（2） 吸附剂或载体  最常用的有硅胶g、硅胶gf<[254]>、硅胶h、硅胶hf<[254]>，其次有硅藻土、硅藻土g、氧化铝、氧化铝g、微晶纤维素、微晶纤维素f<[254]>等。其颗粒大小一般要求直径为10～40μm.薄层涂布，除另有规定外，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种；前者系将吸附剂或载体用水适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上，后者系在吸附剂或载体中加入一定量的黏合剂，一般常用10％～15％煅石膏（caso4.2h2o在140℃加热4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2％～0.5％）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。

（3） 涂布器  应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

（4） 点样器  一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。

（5） 展开室  可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或有双槽，盖子须密闭。

2.操作方法（1） 薄层板制备  除另有规定外，将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm），取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用。或用商品预制板。

（2） 点样  除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。

点样时必须注意勿损伤薄层表面。

（3） 展开  将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为8～15cm，取出薄层板，晾干，按正文项下的规定检测。

展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡或按正文规定操作。

（4） 如需用薄层扫描仪对色谱进行扫描供鉴别、检查或含量测定，则可用薄层扫描法。

3.薄层扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。

除另有规定外，薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采用吸收法，或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与对照品同板点样，展开，扫描，积分和计算。

篇5：薄层色谱法的实验报告

一、氨基酸薄层色谱茚三酮显色的改良

薄层色谱是将固相支持物(也叫吸附剂)均匀铺在玻璃板上使之成为薄层,将待分析的样品点到薄层板的一端,然后将点样端浸入适宜的扩剂中,在密闭的层析缸中展层。由于各种氨基酸的理化性质(分子极性、分子大小和形状、分子亲和力等)不同,其在吸附剂表面的吸附能力各异。当展开剂在薄层板的毛细管中移动时,点在薄板上样品的组分就不同程度地随着展开剂移动,使不同的氨基酸得以分离。

由于吸附剂在喷雾显色时,常见层析表面破坏,造成分析困难,经过多次实验发现,若不采用喷雾法,而直接将展开剂与喷雾剂同时使用,不但便于操作,氨基酸斑点清晰,边缘整齐,薄层面光滑完整,而且比移值也保持不变。

1.仪器

硅胶G薄层板、毛细管、层析缸、电吹风、喷雾器、烘箱。

2.试剂

硅胶G;黏合剂:0.5%的柠檬酸与1%的羧甲基纤维素钠混合,煮沸至无气泡,冷却静置分层后用;氨基酸溶液:0.5%的脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸以及混合溶液;展开剂:V(正丁醇):V(冰乙酸):V(水)=4:1:2;展开显色剂:V(展开剂):V(0.1%茚三酮无水丙酮溶液)=10:1。

3.操作

(1)薄层板的制备。①调浆:称取硅胶14g,加黏合剂25 mL,置于研钵中充分研磨成均匀的膏状;②涂布:取两块洁净的干燥玻璃板(20×20)置于涂布器上均匀涂层。(请询问作者20×20的单位是否是20 cm×20 cm,没有单位的数值没有意义)③干燥:将玻璃板水平放置,室温下自然晾干。④活化:晾干的薄层板置于烘箱内,105℃活化30 min,切断电源,待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。

(2)点样。活化后的硅胶板室温冷却后,在距底边2 cm水平线上均匀确定5个点。用毛细管分别吸取氨基酸溶液,轻轻接触薄层表面,每次加样后原点扩散直径不超过3 mm,干后再点一次。

(3)展层。在层析缸中加入展开显色剂1 cm厚,加盖平衡0.5 h。将薄层板点样端浸入展开显色剂,展开显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖,上行展层。当展层显色剂前沿离薄板顶端2 cm时,停止展层,取出薄板,用铅笔描出溶剂前沿界线,用热风吹干,即可出现氨基酸显色斑点。

二、改善氨基酸薄层色谱的拖尾

拖尾现象是指展层,显色后在层析分配图上,所看到的某一种氨基酸的分子位移,不像标准图谱那样完整地显示在某一位置上,而是前端粗圆而逐渐细小下来,宛如拖着一个尾巴,其图所呈颜色也是由浓渐淡。

1.拖尾现象原因分析

氨基酸薄层色谱拖尾的出现,原认为是对影响Rf的主要因素[如物质结构、极性、层析溶剂、溶剂和样品的pH、温度、薄层的质地是否均匀、薄厚是否适当、硅胶的松紧度是否适中、展层的方式(上行、下行)等]掌握不够所致。然而多次实验证明,无论操作如何严格都仍不可避免地出现拖尾现象。经分析,样品的处理是为纯化,实现层析分配某氨基酸的清晰显色图像;展层使样品达到一个适当的位移,便于在显色后从图像上区分不同样品的氨基酸;显色剂含水量极低,不会影响洋品的斑点扩散,那么问题就集中在点样这个操作程序上了。

2.拖尾改善方法

(1)点样位置。为了对照实验结果,而分别配制的几种氨基酸的溶液,用微量点样管或毛细管,点在以硅胶为惰性支持物的层析板上设计好的多点位置中去。

(2)风干样品。点样后要自然风干,或冷风吹干。因为一旦控制不好温,势必要使样品破坏,样品点太干燥,样品物的分子牢固吸附在层析板上。所以在展层过程中,样品点的每个物质分子不能在层析板上同时起步,而是形成了有先有后,鱼贯而上行或下行的状况,致使在显色后,实验结果的图像上,观察到的不是一个完整的斑点,而是一个拖着尾巴的斑点。这就是上述所说的拖尾现象。

篇6：鲜汁饮薄层色谱鉴别

【关键词】鲜汁饮；薄层色谱；地黄；蒲公英

Study on Quality Standard for Xianzhiyin Mexture

Wang MengliangZhao Jiali

【Abstract】Objective:To study the methods of identification of Xianzhiyin Mexture.Method: Using TLC to identify Rehmanniae ,Taraxaci. Results:The TLC identificationo of Rehmanniae ,Taraxaci was with good results ,high resolution and without feminine sample interferation. Conclusion: This method is rapid,simple ,and with good reproducibility .

【Key Words】 Xianzhiyin Mexture; TLC; Rehmanniae;Taraxaci

【中图分类号】R286.0【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2011）04-0110-01

鲜汁饮来源于我省名老中医之一，原安阳中医院院长，河南省中医学院特邀研究员孙一民主任医师的验方，属医院制剂。由鲜地黄等6味中药组成，均选用新鲜植物药，药鲜质纯，有效成份活性强，易吸收。具有清热解毒，养阴生津，凉血止血之功效。用于：①阴虚内热型血液病所致鼻衄、齿衄、咳血、吐血、尿血、便血、紫癜。②肿瘤放疗、化疗后所致阴虚内热者。③目赤肿痛、口舌生疮、口渴咽疼、尿赤便秘。④外感发热与内伤发热等症状。为了有效控制质量，确保用药安全有效，本试验增加了地黄、蒲公英的薄层鉴别。结果表明，该方法简便快捷，专属性强，结果满意。

1实验部分

1.1仪器、试剂与样品

KQ3200B型超声波清洗器TRANSILLUMINATOR2020D紫外透射仪

试剂均为分析纯

地黄对照药材、蒲公英对照药材（中国药品生物制品检定所，批号121180-200402、121195-200401）；样品由河南省卫辉市中医血液病医院提供

1.2薄层色谱鉴别

1.2.1地黄的TLC鉴别

供试品溶液的制备：取本品20ml微沸蒸干，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

地黄对照药材溶液的制备：取地黄对照药材1g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。

鲜地黄汁的制备：取地黄鲜汁10ml，微沸蒸干，加甲醇20ml使溶解，滤过即可。

阴性样品溶液的制备：按处方比例制备缺地黄的阴性样品10ml，同法制备阴性样品溶液。

照薄层色谱法［1］试验，吸取上述四种溶液各5ul。分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，日光下观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，阴性样品无干扰，见图1。

1、供试品 （批号101102）；2、供试品（批号101128）

3、供试品（批号101129）4、鲜地黄汁（自备）5、阴性样品（院方提供）

6、地黄对照药材

1.2.2蒲公英的TLC鉴别

供试品溶液的制备：取本品25ml, 微沸蒸干，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解作为供试品溶液。

蒲公英对照药材溶液的制备：取蒲公英对照药材1g，加水100ml煮沸20分钟，倾取上清液，微沸蒸干，同法制成对照药材溶液。

阴性样品溶液的制备：按处方比例制备缺蒲公英的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。

照薄层色谱法［1］试验，吸取上述三种溶液各5ul。分别点于同一：以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5︰3︰1︰1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，阴性样品无干扰，见图2。

2讨论

2.1地黄中的代表性成分为梓醇、地黄素、甘露醇、多种糖类与氨基酸、维生素A样物质等。以地黄药材做对照，对处方中的地黄进行鉴别，效果良好。

2.2地黄的薄层色谱鉴别中，曾选用展开剂：用氯仿-甲醇-水（14︰6︰1）展开，样品色谱中与对照药材色谱相应位置上的斑点相一致，但斑点靠近前沿，故加入醋酸乙酯调节展开剂的极性，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10）10℃以下放置的下层溶液展开后，日光下观察即可显示清晰的黄色斑点，且Rf值适中，效果良好。

2.3蒲公英的薄层色谱鉴别中，曾选用展开剂：氯仿。显色剂：10%硫酸乙醇液，105℃加热，紫外光（365nm）下观察，效果不佳。故又改为本文的条件，效果良好。

参考文献

［1］中国药典2010年版一部附录Ⅵ B，P34～35。

篇7：金水丸薄层色谱鉴别研究

【关键词】 金水丸；薄层色谱；鉴别

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）14-0016-03

Abstract：Objective To establish the TLC identification method of Jinshuiwan.Method Create effective TLC identification method by studing of herbal medicines in prescription of jinshuiwan. Result The TLC identification method of Salviae yunnanensis Radix， Scutellariae Radix， Aurantii Fructus， Ophiopogonis Radix in Jinshuiwan preparation have been established. Conclusion The method is simple， specific， reproducible and can be applied to quality control of Jinshuiwan.

Keywords：Jinshuiwan；TLC； Identification

金水丸为云南省中医医院制剂室制备的院内中药制剂，是由麦冬、地黄、山药、茯苓、牡丹皮、紫菀、麻黄、枳壳、黄芩、紫丹参等十八味药材制成的浓缩水丸，具有滋阴润燥、止咳平喘的功效，临床用于阴虚肺燥之咳喘等症。现行质量标准仅对方中的牡丹皮、麻黄进行薄层色谱鉴别及丸剂的通则检查，为进一步提高其质量标准、更有效地控制其质量，进行了有关药味的薄层色谱鉴别研究，建立了金水丸中紫丹参、黄芩、枳壳、麦冬的薄层色谱鉴别方法，方法专属性强、重复性好。

1 仪器与材料

1.1 仪器 FUNGILAB超声仪；BINDER烘箱；sartorius BS224S天平；CAMAG REPROSTAR 3紫外光灯仪。

1.2 材料 硅胶G薄层板（批号：20152046，青岛康业鑫药用硅胶干燥剂有限公司；批号：20131118，青岛海洋化工厂分厂；批号：20151118，烟台维启化工产品有限公司）；丹参酮IIA对照品（批号：110766-201520）、黄芩苷对照品（批号：110715-201318）、柚皮苷对照品（批号：110722-201312）、麦冬对照药材（批号：121013-201310）均购自中国食品药品检定研究院；金水丸样品（批号：20150319、20150630、20151029，云南省中医医院制剂室）；所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 紫丹参的鉴别 取本品研细，过三号筛，称取10g，加乙醚50mL，超声处理10min，滤过，滤液挥干（药渣备用），残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另按处方取除去紫丹参的其余药味模拟本品制备工艺，同法制成阴性供试品溶液。再取丹参酮IIA对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9∶[KG-*3/5]1）为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点，而阴性样品在相应的位置无斑点（见图1）。

2.2 黄芩的鉴别 取“2.1”项下乙醚提取后的备用药渣，挥干乙醚，加甲醇50mL，超声处理60min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL溶解，用稀盐酸调节pH至2～3，用乙酸乙酯30mL振摇提取，取乙酸乙酯部分蒸干（水层备用），残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另按处方取除去黄芩的其余药味模拟本品制备工艺，同法制成阴性供试品溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的深绿色斑点，而阴性样品在相应的位置无斑点（见图2）。

2.3 枳壳的鉴别 取“2.2”项下的供试品溶液。另按处方取除去枳壳的其余药味模拟本品制备工艺，同法制成阴性供试品溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶[KG-*3/5]6∶[KG-*3/5]2）的下层溶液为展开剂，展开9 cm，取出晾干后，再展开一次，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃加热约5min，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点，而阴性样品在相应的位置无斑点（见图3）。

2.4 麦冬的鉴别 取“2.2”项下乙酸乙酯提取后的备用水层，用氨试液调节pH至中性，再用水饱和正丁醇30mL振摇提取，取正丁醇部分蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另按处方取除去麦冬的其余药味模拟本品制备工艺，同法制成阴性供试品溶液。再取麦冬对照药材粉末1g，加甲醇30mL，超声处理60min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和正丁醇30mL振摇提取，取正丁醇部分蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（10∶[KG-*3/5]1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热约2min至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的浅红色主斑点，而阴性样品在相应的位置无斑点（见图4）。

3 讨论

处方中的紫丹参为云南省地方习用中药材，收载于2005年版《云南省中药材标准》第一册，其薄层色谱鉴别以丹参酮IIA为对照，展开剂为苯-乙酸乙酯（19∶[KG-*3/5]1）[1]，研究中比较了甲苯-乙酸乙酯（19∶[KG-*3/5]1）[2]及石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9∶[KG-*3/5]1），采用本文规定的展开剂能获得良好分离，易于结果判断，并避免了使用有毒试剂，利于检验者健康及环保。

《中国药典》2015年版收载的黄芩及含黄芩成方制剂的薄层色谱鉴别多采用聚酰胺薄膜、硅胶G薄层板，展开剂为醋酸、甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]2）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]1）等[2]，经试验比较，使用本文规定的色谱条件能有效鉴别金水丸中的黄芩。

枳壳的鉴别采用《中国药典》2015年版枳壳项下薄层色谱条件试验时，柚皮苷Rf值较小且分离不佳，经试验通过二次展开可获得有效分离。

麦冬的鉴别采用《中国药典》2015年版麦冬项下方法试验时，金水丸样品色谱中斑点较多分离不佳。根据麦冬所含化学成分[3]，采用本文规定的方法并比较了展开剂①三氯甲烷-甲醇-水（13∶[KG-*3/5]6∶[KG-*3/5]2）的下层溶液、②三氯甲烷-甲醇（10∶[KG-*3/5]4）、③三氯甲烷-甲醇（10∶[KG-*3/5]1.5），结果用①时斑点分离不佳、阴性干扰大，用②时目标斑点Rf值过大，采用③展开剂斑点分离良好且Rf值适中。

研究建立的4项薄层色谱鉴别，考察不同厂家的硅胶G预制板并经不同实验者试验均可获得良好重现性。同时也比较了不同温湿度条件下的展开效果，各目标斑点的Rf值在不同条件下略有差异，但斑点能分离清晰，易于结果判断。其中紫丹参鉴别的供试品溶液制备简便，而黄芩、枳壳、麦冬鉴别中的供试品溶液制备方法均经过优化实验建立。

参考文献

[1]云南省食品药品监督管理局.云南省中药材标准（第一册）[S].昆明：云南美术出版社，2005：45.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：301，577，735，1214.

[3]陈屏，徐东铭，雷军.麦冬化学成分及药理作用的研究现状[J].长春中医学院学报，2004，20（1）：35.