病理科免疫组化改进（精选5篇）
篇1：病理科免疫组化改进
题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码1/13
病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范
一、病理科免疫组织化学技术员培训规范：
凡新入我科的病理技术员均需进行免疫组化理论知识的学习、培训，经考核合格、具备病理技术员技士资质后方能从事免疫组织化学染色。
二、病理科免疫组织化学染色操作规范 1.免疫组织化学染色前的准备事项(一)组织切片的制备
常规切片脱蜡至水（组织固定需用10%中性甲醛）(二)抗体的选择、稀释和保存
（1）选择抗体应先了解其反应谱和适用条件〔包括适用切片(石蜡切片抑或冷冻切片)、稀释度和温育时间等〕。
（2）对于未曾使用过的新抗体，应按照有关说明书的提示，以几个不同的稀释度对适宜检材(已知阳性切片/涂片)进行预试验;根据染色阳性表达的程度和检材背景着色程度，确定用于染色的最适稀释度（3）抗体的原液应于分装后置于一20℃冷室中保存，切勿反复冻存(以免效价 降低)。（4）抗体的工作液可置于4℃冰箱中保存。（5）抗体的稀释。
(1)一般用0.01M PBS(生理盐水磷酸盐缓冲液)，pH值7.2。(2)或用0.05M TBS(生理盐水三经基氨基甲烷缓冲液)，pH值7.6。(3)必要时可按需要加适量小牛血清清蛋白。(三)被检测组织内抗原的修复
（1）经4%中性甲醛之类含醛基固定剂固定的组织，其切片中的抗原决定簇因醛的交联作用而被封闭，从而影响抗原一抗体反应。进行免疫组织化学染色前，对于组织切片进行抗原修复处理，会使组织中的固有抗原尽量多地暴露出来，提升了大部分检测抗体的阳性率和反应强度。有的抗体不需要进行抗原修复。应按抗体试剂说明书的提示决定是否进行被检测组织内的抗原修复。（2）抗原修复缓冲液。
(l)一般为0.01M柠檬酸缓冲液(2.1g柠檬酸溶于100ml蒸馏水中，用2M NaOH调节pH值至6.0)。(2)有些抗体需要特殊修复缓冲液，如高PH值的EDTA(50mM Tris.，10mM EDTA，pH9.0)，或商品化的该高题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码2/13
pH修复液等。
（3）抗原修复的常用方法。(l)胰蛋白酶消化法: ①组织切片脱蜡、水化。
②滴加一滴0.1%胰蛋白酶液于组织切片上。
③37℃下温育20-40min(温育时间取决于组织经4%中性甲醛固定时间的长短和被检测抗原)。
④蒸馏水冲洗，终止反应。
⑤阻断内源性过氧化物酶。
⑥进行免疫组织化学染色。（配制0.1%胰蛋白酶液时，应将0.1g胰蛋白酶溶于0.1%无水氯化钙水溶液(pH值7.8)中。）
（2)胃蛋白酶消化法: ①组织切片脱蜡、水化.②滴加胃蛋白酶工作液于组织切片上。
③37℃下温育10-30min(一般为10min，可延至30min，取决于组织经4%中性甲醛固定时间的长短).④浸人蒸馏水，终止反应。
⑤进行免疫组织化学染色。用1%胰蛋白酶液37℃下处理20min。(应以 0.1M HCI配制胃蛋白酶工作液。过度的胃蛋白酶消化会使组织结构破坏、切片 脱落。)（3)微波修复抗原法: ①组织切片脱蜡、水化(硅化玻片或经防脱片胶处理的玻片)。
②将组织切片置于容器(塑料盒或玻璃缸)中，并向其中加人抗原修复液 200ml，盖上具有小孔的盖子。
③将该容器置于微波炉(705-800W)中央加热(95℃)5min，2次(于两次之间，应向容器中添加蒸馏水50ml，严防组织切片干燥)。
④将该容器移出微波炉，置于室温下冷却15-20min。
⑤蒸馏水冲洗。
⑥阻断内源性过氧化物酶，而后将切片置于蒸馏水中。
⑦用TBS或 PBS液冲洗。
⑧进行免疫组织化学染色。(4)热水浴法: 题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码3/13
①组织切片脱蜡、水化(硅化玻片或经防脱片胶处理的玻片)。
②向装组织切片的容器加人足量(例如200ml)抗原缓冲液，置于水浴锅中，加热至95-99℃(不沸腾)预热。
③将组织切片插人已预热的容器内，温育20-40min。
④将该容器由微波炉移出，置于室温下冷却20min。⑤室温下，用TBS、PBS或水洗。
⑥蒸馏水冲洗。
⑦阻断内源性过氧化物酶，而后将切片置于蒸馏水中。
⑧用TBS或PBS液冲洗。
⑨进行免疫组织化学染色。
（5)压力锅法: ①组织切片脱蜡、水化(硅化玻片或经防脱片胶处理的玻片)。
②向4-5.5L的不锈钢压力锅中加人抗原修复缓冲液(约为锅容积的2/3)，不加阀情况 下加热至沸腾。
③将组织切片插放于金属切片架上，并置于压力锅内沸腾的缓冲液中。
④加阀情况下，将组织切片加压2min。
⑤压力锅自行冷却或以流水冷却减压后，持续20min。
⑥将冷却后的切片取出，蒸馏水冲洗后，置于TBS或PBS液中(以免组织切片干燥)。
⑦蒸馏水冲洗。
⑧阻断内源性过氧化物酶，而后将切片置于蒸馏水中。
⑨用TBS或PBS液冲洗。
⑩进行免疫组织化学染色。
（四）组织切片中内源性酶的阻断
1.内源性过氧化物酶 主要存在于红细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞了嗜酸性粒细胞和组织内。阻断方法:最常用0.3%-0.5%H2O2-甲醇液，作用15-30min，阻断液必须使用时新鲜配制。由于阻断内源性过氧化物酶常同时导致被测抗原变性(使特异性着色减弱)，而大部分组织不含有内源性过氧化物酶，所以阻断内源性过氧化物酶一般不必作为常规步骤。必须阻断内源性过氧化物酶时，可安排在第一抗体反应后进行，以减少抗原的破坏。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码4/13
2.内源性碱性磷酸酶 主要存在于嗜中性粒细胞和内皮细胞。阻断方法:应用1M左旋咪唑，作用15-30min。
3.内源性生物素 肝、胰、肾等的细胞内含有多量生物素或类生物素物质。阻断方法:先将切片浸于卵白素(0.5μg/ml)中15min，以缓冲液洗净后，移浸于生物素饱和溶液中15min，再用缓冲液洗去多余的生物素饱和液;也可应用商供的阻断试剂盒(按说明书操作)。(五)正常血清保护
作为检测试剂的抗体蛋白带有一定的负电荷，免疫组织化学染色时，易与带有正电荷的组织〔特别是纤维组织、变性和(或)坏死的细胞、嗜酸性粒细胞等〕发生静电吸引而导致非特异性染色。去除这种非特异性染色最有效的方法是，在滴加第一抗体前，先滴加用于制备第二抗体动物的非免疫血清或是滴加除制备第一抗体动物以外的其他动物非免疫血清，浓度为1：5-1：20;必要时可滴加2%-5%牛 血清清蛋白。正常血清保护作用时间10-20min。用于阻断非特异性结合的血清不能有明显的溶血。(六)缓冲液
用于稀释抗体，洗涤切片的缓冲液主要有两种。1.TBS(0.05M，pH7.6)，Tris一HCl缓冲液(0.SM，pH 7.6)100ml 8.5%NaCl 100ml 蒸馏水加至 1000ml Tris一HCI缓冲液(0.5M，pH7.6)三经甲基氨基甲烷(Tris)61g HCl 37ml 蒸馏水加至 1000ml 2．PBS(0.IM，pH 7.6)Na2 HPO4 · 12H2O2 29g NaH2PO4 · 2H2O 3g NaCl 85g 蒸馏水加至 1000ml 使用时用蒸馏水稀释10倍即成0.0lM。
二、免疫组织化学染色常用方法 题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码5/13
(一)直接法 1.脱蜡和水化。
2.3%过氧化氢或0.5%过氧化氢甲醇液，5min。
3.TBS或PBS缓冲液洗涤。4.抗原修复。
5.无关动物正常血清(适当稀释)20-30min。
6.甩去正常动物血清，滴加适当稀释的辣根过氧化物酶标记抗体，或增强的酶标多聚物一步法(Enhanced Polymer One-step Staining，EPOS)抗体于切片上，20-60min。7.TBS或PBS缓冲液洗涤。
8.0.04%-0.05%DAB(二氨基联苯胺四盐酸)H2O2液显色5-10min，镜下观察控制显色时间。底物配法:DAB 40-50mg；0.05M TBS(pH 7.6)l00ml；3% H2O2 100-200ml。9.缓冲液洗，流水洗涤。10.苏木精淡染细胞核。11.脱水，透明，封片。(二)间接法
l-5步同“直接法”。
6.滴加第一抗体于切片上，湿盒内温育30-60min。7.TBS或PBS缓冲液洗涤。
8.HRP标记抗体或用增强的酶标记多聚物(Enhanced Labeled一 Polymer Sys-tem，ELPS)抗体滴加切片上，湿盒内温育30min。9-14步同“直接法”的7-11步。(三)过氧化物酶一抗过氧化物酶(PAP)法 1-5步同直接法。
6.适当稀释的第一抗体，湿盒内温育30-60min。7.缓冲液洗涤。
8.第二抗体，湿盒内温育30min。9.缓冲液洗涤。
10.滴加PAP，湿盒内温育30min。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码6/13
11-15步同“直接法”的7-11步。
双PAP法:上述操作进行到第10步后，再重复7-10步1次，然后继续11-15步。(四)葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫酶法 1-5步同“直接法”。
6.第一抗体，湿盒温育30-60min。7.缓冲液洗涤。
8.酶联SPA，湿盒温育30min。9.缓冲液洗涤。
10-13步同“直接法”的8-11步。(五)ABC法和SABC法
ABC法是卵白素-生物素-酶复合物(Avidin--Biotin--Peroxidase Complex)法的简称。SABC法是链霉卵白素-生物素-酶复合物(Streptavidin一Biotin一peroxidase Complex)法的简称。l-5步同“直接法”。
6.第一抗体，湿盒温育30-60min.7.缓冲液洗涤。
8.生物素化的第二抗体，30min。9.缓冲液洗涤。
10.ABC复合物或SABC复合物(皆于使用前新鲜配制)，30-60min。11-15步同“直接法”7-11步。(六)LSAB(SP)法
LSAB(SP)法，是标记的链酶卵白素-生物素(Labeled Streptavidin--Biotin)法的简称，操作步骤同“ABC法”，只是以LSAB复合物替代ABC复合物。(七)CSA法
CSA法是催化信号放大(Catalyzed Signal Amplifieation)法的简称。1-5步同“直接法”。6.第一抗体，15-30min。7.缓冲液洗涤。
8.生物素标记的第二抗体，15-30min。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码7/13
9.缓冲液洗涤。
10.链霉卵白素-生物素-HRP复合物(用前新鲜配制)，15min。11.缓冲液洗涤。12.放大液，15min。13.缓冲液洗涤。
14.HRP-StrePtavidin，15min。15-19步同“直接法”的7-11步。(八)二步法Envision System Envision是通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体。1-5步同“直接法”。6.第一抗体，30-60min。7.缓冲液洗涤。
8.Envision TM，10-30min。9-13步同“直接法”的7-11步。(九)双重免疫组织化学法.Sequential(1)鼠或兔抗体1，30-60min。
(2)Envision TM，羊抗鼠/羊抗兔/HRP，30 min。(3)DAB(棕色)，2-10 min。(4)鼠或兔抗体2，30-60 min。
(5)Envision TM，羊抗鼠/羊抗兔/AP，30 min。(6)AP(红色)。2.Simnl一Aaneous(1)混合鼠抗体1和兔抗体2，4℃，过夜或60 min。(2)Envision TM羊抗鼠/HRP和羊抗兔/AP。(3)AP染色。(4)HRP染色。
上述方法除注明温度者外，均可在室温(20-25℃)环境中进行;第一抗体温育后，如有必要可置于4℃题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码8/13
下过夜。
三、免疫组织化学染色的常用抗体标记物(一)上皮源性标记物 1.一般性标记物
（1）CK(角蛋白)CK亚型:①CK5/6;②CK7;③CK8;④CK10/13;⑤CK18;⑥CK19;⑦CK20。(2)EMA(上皮细胞膜抗原)。
2.特异性和(或)相对特异性上皮标记物
（1）CEA(癌胚抗原，标记胃癌、大肠癌).（2）CA242(肿瘤相关粘液抗原，标记胰腺癌、大肠癌)。
（3）TG(甲状腺球蛋白，标记甲状腺癌).（4）PSA(前列腺特异性抗原，标记前列腺癌)。
（5）PSAP(前列腺特异性酸性磷酸酶，标记前列腺癌).（6）34βE12(标记前列腺底细胞).（7）AFP(甲胎蛋白，标记肝癌、内胚窦癌).（8）Hepatoeyte(标记肝细胞癌)。
(9)β-HCG(β-绒毛膜促性腺激素，标记胎盘滋养层细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤).（10）CA125(卵巢癌).（二)间叶源性标记物
主要是Vimentin(vim，波形蛋白)等.（三）肌源性标记物 1.Desmin(Des，结蛋白)2.Actin(肌动蛋白）.3.SMA(平滑肌肌动蛋白).4.MSA(肌特异性肌动蛋白).5.Myosin(肌球蛋白).6.Myoglobin(MG，肌红蛋白)7.Myogen(肌浆蛋白).题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码9/13
8.MyoDI(肌调节蛋白).(四)血管源性标记物 FⅧRAg(第8因子相关抗原).CD31 CD34 UEA-l BNH9.(五)组织细胞源性标记物 1.CD68/KP-l.2.Lysozyme(溶菌酶)。3.a1-AT(a1-抗胰蛋白酶).4.a1-ACT(al-抗胰糜蛋白酶)5.Mac387.淋巴造血组织源性标记物 1.全淋巴细胞
(1)CD45/LCA(白细胞共同抗原）。(2)TdT(末端脱氧核昔酸转移酶)。(3)CD30/Ki-1。2.全B细胞(1)Igκ。(2)Igλ。(3)CD20/L26。(4)CD79a。
(5)BLA36(B淋巴细胞抗原)。3.B细胞亚型(1)CDl0。
(2)CD21(标记滤泡性树突状细胞)。(3)CD23。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码10/13
(4)CD35(标记滤泡性树突状细胞)。(5)CD38.4.全T细胞(1)CD3。(2)CD5。(3)CD43。(4)CD45RO/UCHL-1.5.T细胞亚型(1)CDla。(2)CD4。(3)CD8。6.NK细胞(1)CD56。(2)CD57/Leu-7。(3)CD16/Leu-11。7.粒细胞和单核巨噬细胞(1)CD11c/LeuM5。(2)CD15/LeuM5。(3)Lysozyme(溶菌酶)。(4)al-AT(al-抗胰蛋白酶)。(5)al-ACT(al-抗胰糜蛋白酶)。(6)CD68.(7)S-100蛋白.(8)Mac387。8.其他
(1)EMA(上皮细胞膜抗原).(2)CD99(尤因肉瘤标记物).(3)ALK-l(间变性淋巴瘤激酶)。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码11/13
(4)HLA-DR。(5)Bel-2。(6)Bel-6。(7)Bel-10。(8)Ki-67。
(9)CyclinD1(周期素D1)。(10)CD25。
(11)CD34。
（七）神经源性标记物 1.S-100蛋白.2.NSE（神经原特异性烯醇化酶）.3.Leu7。
4.Neurofilament(NF，神经微丝蛋白)。5.GFAP(胶质纤维酸性蛋白）
（八）神经内分泌源性标记物 1.激素标记物(1)CA(儿茶酚胺)。(2)5-HT(5-经色胺).(3)垂体激素。
①GH(促生长素)。
②PRL(催乳素)。
③ACTH(促肾上腺皮质激素).④TSH(促甲状腺素).⑤FSH(促滤泡素).⑥LH(促黄体素)。(4)甲状腺。
①TG(甲状腺球蛋白)。
②CT(降钙素)。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码12/13
(5)甲状旁腺:PTH(甲状旁腺素)。(6)胰岛。
①Insulin(胰岛素)。
②Glueagon(胰高糖素)。
③VIP(舒血管肠肽).④PP(胰多肽).⑤Someitostatin(生长抑素)。
⑥Gastrin(胃泌素)。2.非激素标记物
(1)NSE(神经原特异性烯醇化酶).(2)CgA(嗜铬素A).(3)SY(突触素).3.激素受体
（1）ER(雌激素受体）.（2）AR(雄激素受体）.（3）PR(孕激素受体).(九)细胞增殖标记物 1.PCNA(增殖细胞核抗原).2.Ki-67.（十）黑色素标记物 1.S-100蛋白.2.HMB45.3.Melanoma。
(十一）癌基因和（或）抑癌基因 1.bel-2.2.c-erbB-2.3.p53 4.p16(多肿瘤抑制基因)。题目：病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 市一—病理科—30 生效日期：2012年1月1日 版本号1.0 修改日期： 页码13/13
5.nm23。(十二)病原体标记物
1.Myoeobaeterium Bovis(分枝杆菌，抗卡介苗)。2.HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原).3.HBcAg(乙型肝炎病毒核心抗原).4.HPV(人乳头状瘤病毒)5.HTLV-1(人类T细胞白血病病毒)。
篇2：病理科免疫组化改进
1、送检标本的签收质量控制管理途径
（1）首先由接收标本人员逐一对申请单和标本进行核查，同时对住院病人标本及申请单履行查验签收制度。
（2）取材时取材人员要对申请单和标本再次进行核对，发现问题及时反馈给临床医师核对纠正。
（3）切片人员完成切片制作后，再次核对申请单项目和切片。
（4）阅片人员阅片时仍然要认真核对申请单项目和切片的符合情况。
（5）发放报告单人员最后把关，严防差错。
2、组织取材工作质量控制管理途径
（1）取材人员必须为有资质的医师。有两人参加，严格按卫生部及省卫生厅下发的取材操作规范工作。
（2）组织处理及切片制作人员要监督取材大小厚薄是否规范，及时向取材人员反馈情况以便改进。
（3）所有阅片人员阅片过程中都要检查取材质量问题，及时提出问题，引起注意，必要时重新取材，确实保证取材质量。
3、组织切片质量控制管理途径
（1）活检组织脱水、固定，切片的染色等程序必须严格按技术操作规范进行。
（2）组织切片制备完成后，制作人员应在显微镜下检查切片质量，如影响医师阅片应采取措施或重做。
（3）各级阅片医师阅片过程中，应随时注意切片质量，及时向制片人提出意见，并帮助分析原因，必要时要求重新制片。
（4）每月月底质控小组随机抽查当月10天的切片，按照技术操作规范规定的《常规石蜡包埋—HE染色切片质量的基本标准》评定切片质量，同时找出问题、分析原因，限期纠正。
4、病理诊断报告质量控制管理途径
（1）病理诊断的签发要严格实行复审制度，（2）疑难及重点病例要实行科内会诊讨论制度，（3）疑难病例必要时要辅以其它的病理技术检查措施。如：深切片，再观察大体标本和补充取材等。
（4）要经常进行临床—病理会诊与临床医师及患者沟通，紧密联系临床情况以帮助诊断。
（5）必要时建议外院会诊，及时回访会诊结果并做必要的科内讨论。
（6）对误诊病例进行重新阅片与讨论，吸取经验及教训。
篇3：病理科免疫组化改进
1方法
第一, 下载IMAGEJ。打开网址HTTP://RSB.INFO.NIH GOV/IJ点击DOWNLOAD。可以看到不同版本的下载方式。根据自己计算机的配置情况选择合适的下载方式, 一般是选取WINDOWS方式下载。
第二, 经解压缩后, 打开压缩包内的文件, 然后按照提示完成IMAGEJ的安装。
第三, 取一张骨髓涂片, 4%甲醛固定5 min。滴加山羊血清封闭液, 室温下10 min后甩去多余液体, 不洗。滴加单克隆小鼠抗人CD3。37℃下1 h后用PBS洗3次, 每次2 min。滴加荧光标记的山羊抗小鼠Ig G, 37℃下20 min后PBS洗4次, 每次5 min。在荧光显微镜下观察, 并存取文件1。
第四, 用瑞氏染色液复染, 镜下观察存取得到文件2。
第五, 打开IMAGEJ和文件1文件2。利用THRESHOLD和Brightness/Contrast命令调整亮度和对比度, SUBTRACT BACKGROUND剪除背景, 存取文件3。
第六, 使用IMAGE CALCULATE命令叠加文件1和文件3, 这样荧光图像和瑞氏染色图像就叠加在了一起。
2讨论
计算机生物医学图像分析不仅大大延伸了人眼的分辨能力, 而且还可以超越时间和空间的限制, 把实际工作中较困难的操作利用其虚拟功能转变为其他简单的形式来完成, 从而引起一些实际工作从原理到实际操作的根本的改变[1]。
如上述方法进行的淋巴细胞的亚群分析, 从操作上不同于传统的最常用的两种方法:免疫荧光方法和免疫酶方法。而是经过改进在计算机的辅助下既利用了免疫荧光的高灵敏度, 又弥补了它不能观察细胞结构的不足。传统的免疫酶法也具有较高的敏感度且经过复染也可以观察细胞结构, 但与免疫荧光法进行比较, 免疫酶法相对要复杂很多[2]。从根本上说这是因为荧光素是一种分子量很小的物质, 可以很多分子同时直接标记在抗体上成为一种敏感度很高的显示系统;而免疫酶要成为一种理想的显示系统, 必须借助于生物素-卵白素等一些中介分子的帮助, 聚集够一定的含量, 才可以在较短的时间内催化底物显色以达到足够的敏感度。因此免疫荧光法要简单很多, 用免疫荧光法比较容易获得试验结果。但也有其缺陷就是细胞的结构不如经过染色看得清楚, 它只能以明和暗区分是否是阳性细胞, 即只能判断有或无, 或进行简单的计数。利用免疫酶法复染后, 不同细胞的结构则可以看得很清楚, 这也是其优势所在, 尤其在组织切片的免疫组化是不可缺少的;免疫荧光则达不到这种效果, 借助于计算机的图像分析功能可以克服这一弱点。只需要再对同一切片进行复染, 然后叠加染色图片和荧光图片。这样阳性细胞在切片中的分布以及整个组织结构都看得很清楚。同时, 具体的操作步骤也简单了很多。
图像处理的功能远不止于此[3,4]。一帧待处理的计算机图像各像素有256个灰度等级, 而人的眼睛只能分辨15~25个灰度等级, 有些试验结果如用光学显微镜观察, 并不能发现试验组与对照组之间的差异, 而用图像分析系统测定灰度, 再经统计分析, 则可发现显著性差异。IMAGEJ可以进行灰度处理, 图像滤波, 直方图均衡, 数学运算, 伪彩色标记, 图像放大, 缩小等各种各样的图像操作[5], 并可进行图像的灰度值, 阳性细胞的面积、直径、数量、分布频度等各种参数的测量。
IMAGEJ是NIH image开发的共享图像操作程序, 可以在线和离线使用, 可以显示、编辑、分析、操作、保存、打印8位、16位和32位图。支持包括:Tiff、Gif、Jpeg、Bmp、Dicom Fits和raw data等多种格式的图像文件。而且其开放的文库设计提供了无限的扩展功能, 使用内部的编辑, 编译功能几乎可以解决用户任何的图像操作和分析问题。总之, IMAGEJ是一种很强大的图形操作软件, 利用它可以很大程度地延伸我们日常的细胞形态学所研究的范围, 操作范围更广, 试验结果更清晰更可靠。更主要的是其共享软件的性质为我们大多数的基层医院提供了一个可供试验的平台。
参考文献
[1]王银改.医学显微图像数字化处理系统的装配与应用[J].医疗卫生装备, 2004, 25 (5) :54-55.
[2]贾春平, 赵建龙.免疫标记技术的进展及纳米技术在其中的应用[J].生命科学, 2008, 20 (5) :749-752.
[3]Abramoff MD.Magelhaes PJ.Ram SJ.Image Processing with IMAGEJ[J].Bioph Otonics International, 2004, 1, (7) :36-42.
[4]Edward J Escott, David Rubinstein.Free DICOM Image viewing and processing software for your desk-top computer:What’s available and what it can do for you[J].Radio Graphics, 2003, 5:1341-1357.
篇4：病理科免疫组化改进
病理科
一、质量管理相关目标及相关评价指标
（一）质量管理相关目标 1.病理部门布局、设施、设备、工作流程和人员结构合理，管理规范，满足临床工作需要。2.建立并执行病理质量管理制度，定期开展质量评价和改进工作，严格执行标本核对制度。3.病理报告及时、准确、规范，严格审核制度。4.提高冰冻切片与石蜡切片的诊断符合率。病理切片、蜡块保存符合规定。5.环境保护及人员防护符合规定。6.患者、医师与护理人员对病理部门服务满意。
（二）相关评价指标 1.术中冰冻病理自送检到出具结果时间≤30分钟。2.尸检率≥15％。3.患者、医师与护理人员对病理科服务满意度≥90％。
（三）病理科质量考核标准 项目 质量考核内容及标准 评分方法 病理工作满足临床需要：能开展活体组织病理检查与诊断、细胞学病理1.检查工作记录和病理片，所列项目缺少1个扣5分； 2.每月由监审科到临床各科对医护人员及病人分别发放满意度检查与诊断、组织化学及免疫组织化学染色与诊断； 功能建设 患者、医师与护理人员对病理科服务满意度≥90％。调查表，满意度每下降1%扣5分。建立标本签收、核对制度；病理切片、蜡块、纸质档案（包括资料归档、1.查签收和核对登记本，对不合格标本是否有拒收标准及登记借用和归还手续等）的管理制度； 并签字，一项制度不到位扣10分；相关登记本不规范扣5分； 有借阅审批、借阅登记制度、有病理资料(计算机管理)的管理制度； 2.查看切片、蜡块、档案管理情况；审批、登记、计算机管理等制度；看各级医师、技师职责是否履行，1种岗位职责未履行有各级医师和技师岗位职责； 制度建设 扣10分； 3.由于制度未落实或职责未履行造成标本遗失或报告单遗失每次扣50分，由此引发医疗纠纷者按相关规定处罚。建立科内质量管理组织与制度，制订包括试剂保管，仪器设备维护措施1.检查资料，无管理组织和制度缺一项扣5分；1件设备不能使在内的质量管理措施并严格遵照执行； 用扣10分； 制定并执行科内读片、上级医师复片及疑难病例讨论制度； 检查、维护、保养记录不完整扣5分； 2.抽查10份病理报告单及讨论记录，发现没有开展科内读片、每季度抽检1次制片及诊断质量，并有室内质控评价总结； 质量管理 每半年至少召开一次临床医技联席会议，会后及时解决会议提出的问上级医师复片和和疑难病例讨论分别扣10分； 题。3.现场查看缺1次抽查情况记录或质量控制总结扣10分； 4.缺临床医技联席会议记录扣5分，问题未整改扣10分。切片制作符合标准要求，常规切片质量优良率＞90%； 1.现场抽查50张病理切片，根据《病理切片制作质量评分表》，冰冻与常规病理诊断符合率达到90%以上； 优良率达不到标准扣10分； 2.从实行了术中冰冻切片的病历中抽取冰冻报告与常规切片报制片质量 告进行比较，冰冻切片与常规切片符合率每低于5%扣10分； 3.诊断不符导致医疗纠纷但未发生费用扣10分，发生费用按医院相关文件扣罚。自病理科接到送检标本到出具结果时间：术中冰冻≤30分钟；一般病理检1.查看20份病理报告，1项病理检查不能按时完成扣10分； 报告规范 查（HE）在5天内；活检≤72小时；大体标本（免疫组化）≤7天（均2.现场查看20份病理报告单，1份病理报告内容不符合或不规
需书面报告）出具诊断报告； 范扣5分； 报告书写规范，内容齐全，描述准确，有报告人及审核人双签字； 室内的环境符合卫生学要求； 1.查看通风、排污、医疗废物处理、分区及消毒和工作人员防制订并执行易燃、易暴、有毒、有害物品管理与使用制度，危险物品有护等现场；看室内环境，不符合卫生学要求扣5分； 环境卫生 专人保管； 2.查资料及危险物品保管现场，危险物品无专人保管扣5分； 医疗服务安1.每季度至少开展一次科室医疗服务安全教育，提高医疗服务安全意少开展一次扣10分； 全和指令性识。任务 2.及时报告、妥善处理医疗过失行为和医患纠纷。未及时报告和处理扣20分；
3.认真完成政府指令性及卫生支农任务，积极参加政府组织的社会公益未完成政府指令性及卫生支农任务扣20分；
性活动。1.医院的科室质量管理专业性强、技术复杂，本身就构成了一个复杂的技术系统。科主任的技术水平、管理能力在很大程度上决定着科室的质量水平。除同行专家评审，作为一般业务行政职能部门是没有能力直接控制质量形成的全过程。环节质量控制、终末质量控制、评价是科主任及科室质量管理小组的职责及经常性工作。科室质量管科室所发生的质控扣分，质控小组成员承担50%。2.科室质量管理小组负责组织本科室各级人员落实质量管理的各项规理小组职责 年终质控扣分，末五名扣除该科科主任院长基金的35% 章制度，并结合本科室的质量教育、检查等与质量管理有关的规章制度执行情况，发现问题，及时纠正。3.科室质量管理小组负责收集汇总本科质量管理的有关资料，进行分析研究和总结，并定期向医疗质量管理委员会和质控科汇报质量管理工作。科室医院感1.对有关预防和控制医院感染管理规章制度的落实情况进行检查和指科室所发生的院感扣分，院感小组成员承担50%。染管理小组导；
年终院感扣分，末五名扣除该科科主任院长基金的15% 职责 2.对医院感染及其相关危险因素进行监测、分析和反馈，针对问题提出
控制措施并指导实施；
3.对医院感染发生状况进行调查、统计分析，并向医院感染管理委员会或者医疗机构负责人报告；
4.对医院的清洁、消毒灭菌与隔离、无菌操作技术、医疗废物管理
二、医院感染管理 质量考核内容及标准 评分方法 1.是否根据国家有关的法律、法规，按照《医院感染管理办法》要求，未根据本科实际情况制定相关制度扣5分；制度未落实每项扣10分； 制定并落实医院感染管理的各项规章制度； 2.是否根据《医院感染管理办法》要求和医院功能任务，建立完善的医1.科室未建立感染管理小组扣5分； 院感染管理组织体系； 2.院感小组未履行职责则科室所发生的院感扣分，院感小组成员承担50%。年终院感扣分，末五名扣除该科科主任院长基金的15% 3.医院感染管理部门是否实行目标管理责任制，职责明确； 未建立目标管理责任制扣5分；责任一处未落实扣5分； 4.医院的建筑布局、设施是否合理； 设施布局不合理扣5分； 5.工作流程是否符合医院感染控制要求。工作流程不符合要求每项扣5分； 6.是否建立医院感染的病例监测、消毒灭菌监测、必要的环境卫生学监未建立制度扣5分； 测和医院感染报告制度； 7.是否按规定报告； 未按规定时限报告每例扣5分；漏报1例扣10分 8.是否指定相关制度加强对医院感染控制重点部门的管理，包括感染性未制定制度扣5分； 疾病科、口腔科、手术室、重症监护室、新生儿病房、产房、内窥镜室、血液透析室、导管室、临床检验部门和消毒供应室等 9.是否存在违反规范的情况。违反规范每次扣5分 10.是否有加强对医院感染控制重点项目的管理，包括呼吸机相关性肺每超过1%扣2分（总计10分）； 炎、血管内导管所致血行感染、留臵导尿管所致尿路感染、手术部位感染、透析相关感染等。上述医院感染率≤10%
11.是否建立医务人员无菌技术操作、消毒隔离工作制度、手卫生规范、无制度扣5分； 职业暴露防护制度。1项制度未落实扣10分； 12.是否存在违反手卫生规范的情况。违反手卫生规范，每次扣5分； 13.是否对消毒药械和一次性使用医疗器械、器具相关证明进行审核； 相关证明未进行审核，每次扣20分； 14.按规定可以重复使用的医疗器械，是否实施了严格的清洗、消毒或重复使用的医疗器械未实施严格的清洗、消毒或灭菌，每件次扣20分； 者灭菌；并进行效果监测。15.监测效果是否达标。监测效果不达标，每次扣10分； 16.是否开展耐药菌株监测，指导合理选用抗菌药物。未按规定进行病原学检查和药敏试验，每例次扣5分； 17.是否按检查结果选用抗菌药物； 未按检查结果选用抗菌药物，每例次扣10分； 18.是否按规定进行耐药菌株监测 按规定进行耐药菌株监测，每少一次扣5分； 19.是否建立员工职业安全制度； 未建立员工职业安全制度扣5分；制度未落实扣10分； 20.发生职业暴露是否及时报告 发生职业暴露未报告扣10分； 21.相关评价指标 ①医院感染现患率≤10％，特殊科室如ICU、血液科、肿瘤科≤15％
每超过1%扣5分； ②医院感染现患调查实查率≥96％。每下降1%扣2分； ③医疗器械消毒灭菌合格率100％。每下降1%扣10分；
三、患者安全目标管理 质量考核内容及标准 评分方法 目标
一、严格执行查对制度，提高医务人员对患者身份识别的准确性 1.多部门共同合作制定准确确认病人身份的制度和程序。健全与完善各科每一环节执行不到位每次扣10分，由此导致的差错扣每次扣30分； 室（各部门）患者身份识别制度。在标本采集、给药或输血前等各类诊疗 活动前，必须严格执行查对制度，应至少同时使用二种患者身份识别方法，如姓名、床号等（禁止仅以房间或床号作为识别的唯一依据）
2.实施任何介入或有创诊疗活动前，实施者应亲自与患者（或家属）沟通，执行不到位每次扣10分，由此导致的差错扣每次扣30分； 作为最后确认的手段，以确保对正确的患者实施正确的操作 3.完善关键流程（急诊、病房、手术室、ICU、产房之间流程）的患者识别查对制度每一环节执行不到位每次扣10分，由此导致的差错扣每次扣30 措施 分； 4.建立使用“腕带”作为识别标示的制度，作为操作前、用药前、输血前ICU、急诊抢救室、手术室、新生儿科/室患者未建立腕带每发现一次扣10等诊疗活动时辨识病人的一种有效的手段（ICU、急诊抢救室、手术室、新 分，由此导致的差错扣每次扣30分； 生儿科/室）5.职能部门（医务处、护理部、门诊部）落实督导职能，有记录 每个部门落实不到位扣10分； 目标
二、提高用药安全 药柜无专人管理扣10分，误用风险的药品无醒目标志并分区放臵扣10分；1.诊疗区药柜内的药品管理，有误用风险的药品管理制度/规范
由此导致的差错扣每次扣30分； 2.所有处方或用药医嘱在转抄和执行时都应有严格核对程序，且有签字证未认真核对每次扣10分，由此导致的差错扣每次扣30分； 明 3.在开据与执行注射剂的医嘱（或处方）时要注意药物配伍禁忌 发现一次存在药物配伍禁忌扣20分，由此导致的差错扣每次扣30分； 4.输液操作规范与安全管理制度、有预防输液反应措施、医院能集中配制、输液配制和输注违法规范每次扣20分；由此导致的差错扣每次扣30分； 或病区有配制专用设施 5.病区应建立药物使用后不良反应的观察制度和程序，医师、护士知晓并考核各科医护人员对常用的药品的不良反应不了解扣每次5分，临床使用 能执行这些观察制度和程序，且有文字证明 药品时未加强巡视和观察扣11分； 6.临床药师应为医护人员、患者提供合理用药的方法、药品信息及用药不临床药师未履行职责每发现1例不合理用药扣临床药师5分；1例药品不 良反应的咨询服务指导 良反应临床药师未提供咨询服务扣5分。7.合理使用抗菌药物 每一例不合理使用抗菌药物扣20分； 目标
三、严格执行在特殊情况下医务人员之间的有效沟通的程序，做到正确执行医嘱 1.在通常诊疗活动中医务人员之间的有效沟通，做到正确执行医嘱，不使除紧急抢救外执行口头或电话医嘱每次扣10分，由此导致的差错扣每次 用口头或电话通知的医嘱 扣30分； 2.只有在对危重症患者紧急抢救急的特殊情况下，对医师下达的口头临时紧急抢救时未护士未向医生重述口头医嘱或未实施双重检查每次扣10分；
医嘱，护士应向医生重述，在执行时实施双重检查 由此导致的差错扣30分；
3.接获口头或电话通知的患者“危急值”或其它重要的检验结果时，接获接检验科危急值报告者未规范、完整记录和进行复述，并提供给医师使用者必须规范、完整的记录检验结果和报告者的姓名与电话，进行复述确认 每次扣10分；由此导致的差错扣每次扣30分； 无误后方可提供医师使用 目标
四、严格防止手术患者、手术部位及术式发生错误 1.择期手术在手术医嘱下达之时，表明该手术前的各项准备工作已经全部发现未完善术前准备下达择期手术医嘱每次扣10分；由此导致的差错扣
完成 每次扣30分； 2.建立手术部位识别标志制度 手术部位未标志每次扣10分； 3.多部门共同合作制定的手术安全核查与手术风险评估制度与工作流程 未制定扣5分。目标
五、严格执行手卫生，落实医院感染控制的基本要求 1.手部卫生。贯彻并落实医护人员手部卫生管理制度和手部卫生实施规范，每一环节不合要求扣5分； 配臵有效、便捷的手卫生设备和设施，为执行手部卫生提供必需的保障与 有效的监管措施 2.操作。医护人员在任何临床操作过程中都应严格遵循无菌操作规范，确未遵循无菌操作规范每次扣10分；由此导致感染每次扣30分； 保临床操作的安全性 3.器材。使用合格的无菌医疗器械 使用不合格的无菌医疗器械每次扣10分；由此导致感染每次扣30分；
4.环境。有创操作的环境消毒，应当遵循的医院感染控制的基本要求 不合要求扣10分； 5.手术后的废弃物。应当遵循的医院感染控制的基本要求 手术后的废弃物未按感染性废物处理每次扣10分；
目标
六、建立临床实验室“危急值”报告制度 未制定或不合实际扣5分； 1.制定出适合本单位的“危急值”报告制度 2.“危急值”报告应有可靠途径且检验人员能为临床提供咨询服务。每一环节不合要求扣5分； “危急值”报告重点对象是急诊科、手术室、各类重症监护病房等部门的 急危重症患者 3.“危急值”项目可根据医院实际情况认定，至少应包括有血钙、血钾、包含项目不符合实际情况扣5分； 血糖、血气、白细胞计数、血小板计数、凝血酶原时间、活化部分凝血活 酶时间等 4.对属“危急值”报告的项目实行严格的质量控制，尤其是分析前质量控每一环节不合要求扣5分；
制措施，如应有标本采集、储存、运送、交接、处理的规定，并认真落实 目标
七、防范与减少患者跌倒事件发生
1.对体检、手术和接受各种检查与治疗患者，特别是儿童、老年、孕妇、对上述特殊患者或体检人员无防范跌倒措施扣10分； 行动不便和残疾患者，用语言提醒、挽扶、请人帮助或警示标识等办法防 止患者跌倒事件的发生 2.建立跌倒报告与伤情认定制度和程序 未建立报告与伤情认定制度和程序扣5分； 3.认真实施有效的跌倒防范制度与措施 未认真实施防范跌倒的措施每个环节扣10分； 4.护理服务有适宜的人力资源保障，与服务对象的配臵合理（开放床位与护理人员配备不足扣5分；
出勤护士比为1：0.4）目标
八、防范与减少患者压疮发生 1.建立压疮风险评估与报告制度和程序 未建立压疮风险评估与报告制度和程序扣5分； 2.认真实施有效的压疮防范制度与措施 未认真实施防范压疮的措施每个环节扣10分； 3.有压疮诊疗与护理规范实施措施 无压疮诊疗与护理规范扣5分； 目标
九、主动报告医疗安全（不良）事件 1.建立积极倡导医护人员主动报告医疗安全（不良）事件的制度（非处罚发现1例医疗安全不良事件未主动报告扣10分； 性）与措施 2.鼓励医务人员积极参加卫生部医政司主办《医疗安全（不良）事件报告
系统》网上报告活动 3.进行“医院安全文化”建设活动 未进行“医院安全文化”建设活动扣5分；
4.将安全信息与医院实际情况相结合，从医院管理体系、运行机制与规章未进行针对性的医疗质量持续改进扣10分； 制度上进行有针对性的持续改进 目标
十、鼓励患者参与医疗安全 1.针对患者的疾病诊疗信息，为患者（家属）提供相关的健康知识的教育，未对患者（家属）提供相关健康知识教育每次扣5分；
协助患方对诊疗方案的理解与选择 2.主动邀请患者参与医疗安全管理，尤其是患者在接受手术（或有创性操在手术前（或有创性操作）前未主动邀请患者或家属确认患者身份每次扣
篇5：病理科免疫组化改进
用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。
2、原理
根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。、分类
1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。
3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中 SP 法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法
是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。
2）免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后，于 60 年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。
本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。
免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有 ABC 法、SP 三步法、即用型二步法检测系统等。
3）免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。、被检测的物质
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。、特点
1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA 显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。
2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于 ABC 法或 SP 三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与 Western blotting、ELISA 的异同
1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然 Western blotting 也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。
2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。
8、免疫组化个人经验总结
1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有 4 度、室温、37 度，我推荐4 度最佳，反应最温和，背景较浅；而 37 度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。
2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。
4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用 PBS 或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。
5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发 SCI 论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。
6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。
免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。