竹叶提取物的抑菌性分析

2022-09-11

竹子是禾本科 (Gramineae) 竹亚科 (Bambusoideae) 多年生常绿植物, 有着复杂的次生代谢。据记载, 竹叶性淡、微涩、寒, 味甘、苦, 具有清热利尿, 明目解毒及止血的功能。近年来, 有学者在竹叶提取物中发现包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、生物碱、生物活性多糖、氨基酸肽类、葸醌类和萜类内酯等多种活性成分[1,2,3]。一般认为, 黄酮类化合物、蒽醌化合物、生物碱具有抗菌活性。

本文用微波辅助提取竹叶黄酮, 并用测定竹叶提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌等四种菌种的最低抑菌浓度 (MIC) 。

1 材料与方法

1.1 实验材料

大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白葡萄球菌和黑曲霉菌, 以上菌种均来自湖州师范学院医学院的标准菌株。琼脂粉、无水乙醇、石油醚、Na Cl、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、甘油、真空干燥箱 (DZG-6050) 、高速中药粉碎机 (WK-200B) 、电子天称 (BS124S) 、旋转蒸发器 (RE-52A) 、常压微波辅助合成/萃取反应仪 (ZYMAS-1) 、恒温培养箱 (DPX-9052B-1) 、数显水浴恒温振荡器 (SHA-B) 、电热恒温水浴锅 (DK-S24) 、磁力加热搅拌器 (78-1) 、立式压力蒸汽灭菌器 (LDZX-75KB) 、恒温培养箱[100级 (美国联邦标准209b) ]和净化工作台 (DZG-6050)

1.2 实验方法

竹叶提取物的制备:新鲜竹叶烘干, 粉碎, 过筛。称取10 g竹叶粉末, 加250 m L无水乙醇, 浸泡30 min, 微波处理 (时间5 min, 功率600 W, 温度60 ℃) , 恒温回流提取2 h, 过滤, 浓缩, 回收乙醇, 浓缩。

培养基的制备:蛋白胨10.0 g;牛肉浸膏3.0 g;葡萄糖;氯化钠5.0 g;琼脂20.0 g;去离子水至1 000 m L培养基, 用1 mol/L的氢氧化钠溶液调节p H7.0~7.5, 121 ℃湿热灭菌20 min, 得固体培养基。此配方不加琼脂为液体培养基。

供试菌悬液的制备:用接种环刮取适量菌种于斜面培养基上培养24 h, 使菌种活化, 然后将活化的菌种取一环接种于4.0 m L的液体培养基中, 培养8 h, 得到菌悬液。

最低抑菌浓度的测定:以适合供试菌生长的液体培养基将被测的竹叶提取物进行一系列对倍稀释, 浓度分别为100%, 50%, 25%, 12.5%, 6.25%, 3.125%, 1.56%;同时, 设空白对照组。各试管加入菌悬液100μL, 在适宜的条件下培养24 h, 判定结果, 以对照试管有细菌显著生长的时间为观察和评定MIC的最宜时间, 以含药量低而无肉眼可见菌生长的一管含药量为药物对该菌的MIC。

竹叶提取物浓度对抑菌效果的影响探讨:将制备的竹叶提取物原液配制成原液、1∶1、1∶10、1∶20等不同浓度的系列溶液, 浸泡滤纸, 备用。分别吸取0.1 m L各菌悬液于培养基中, 涂布均匀后, 再用无菌镊子夹取分别浸有上述系列竹叶提取物溶液及对照液 (CK) 的无菌滤纸片, 沥去多余试液后, 贴于涂布后的含菌平皿上。每皿5片 (3片为实验组, 另3片为对照组) , 完成后, 置于适宜温度下培养24 h。测定滤纸片的抑菌圈大小, 数据处理, 比较抑菌效果。

2 结果与分析

注:表中“-”表示液体培养基澄清;“+”表示液体培养基浑浊, 其前面是数字表示浑浊的程度, 数值越大越浑浊。

由1看出, 竹叶提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌均有不同程度地抑制作用, 其最低抑菌浓度浓度 (MIC) 分别为:6.5%、6.25%、6.25%、6.3%。

在竹叶提取物浓度对抑菌效果的影响讨论实验结果表明, 随着竹叶提取浓度的减低, 抑菌圈面积逐渐减小。这表明随着竹叶提取物浓度的减小, 提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌的抑菌效果逐渐减弱。而且大肠杆菌在比例为1∶20 (提取原液:溶剂) 时, 抑菌圈面积为负值, 说明此浓度下的竹叶提取物对大肠杆菌没有抑菌效果。

3 结论与讨论

本论文在微波萃取竹叶提取后, 初步研究了竹叶提取物对不同微生物的最低抑菌浓度 (MIC) 。在制备竹叶提取物的过程中, 考虑到提取物的稳定性, 整个提取浓缩的过程始终控制在较低温度下进行, 竹叶提取为对各菌种都表现出明显的抑菌活性。

本实验中只讨论了竹叶提取物对不同菌种的最低抑菌浓度及竹叶提取物浓度对抑菌效果进行了探讨, 后期将进一步讨论, 竹叶提取物的抑菌活性的影响因素及竹叶提取物中具有抑菌活性的有效成分的确定。上述实验结果预示着竹叶提取物可用作食品防腐剂, 这无疑对竹叶开发利用提供了一条可行的思路。目前, 随着人们生活水平的提高, 安全健康消费意识不断增强, 防腐剂的使用要求将更为严格, 竹叶提取物作为天然食品防腐剂, 且不含对人体有害的物质, 竹叶提取物作为防腐剂的开发研究蕴藏着良好的市场前景。

摘要：用微波辅助提取竹叶提取物, 用液体培养基稀释法测定竹叶提取物对大肠杆菌、白葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度 (MIC) 。结果表明, 竹叶提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌均有不同程度地抑制作用, 其最低抑菌浓度浓度 (MIC) 分别为:6.5%、6.25%、6.25%、6.3%。

关键词：竹叶,提取物,抑菌性