刺山柑的提取工艺考察

本试验采用单因素实验[3], 以盐酸水苏碱含量和醇浸出物得率为指标综合评价, 对影响提取效率的主要因素-乙醇浓度、提取温度、加醇量、提取时间、提取次数进行考察。在单因素的基础上进行正交实验, 优选出最佳提取工艺。

1 仪器、设备与材料

UV-2501PC型紫外分光光度计 (日本岛津制造所) ;Sartorius电子天平 (北京赛多利斯天平有限公司) ;SZ-93自动双重纯水蒸馏器 (巩义市英峪予华仪器厂) ;KQ-100DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;101A-2型数显电热鼓风干燥箱 (上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司) ;DZKW-S-6电热恒温水浴锅 (北京永光明医疗仪器厂) ;KDM型调温电热套 (山东省鄄城永兴仪器厂) 。盐酸水苏碱对照品由中国药品生物制品检定所提供, 批号分别为712-200105、110712-200508;硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、甘油、十二烷基硫酸钠、月桂氮卓酮、对羟基苯甲酸乙酯均为药用规格。水为超纯水, 乙醇为药用级;其余试剂均为国产试剂A R级。

注:F0.05 (2, 2) =1 9.0

2 方法

2.1 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量, 加甲醇制成每1mL含220μg的溶液, 即得。

2.2 供试品溶液的制备

取醇/水提取液, 滤纸过滤, 精密量取续滤液25mL, 置蒸发皿中, 水浴蒸干, 精密加入0.1mol/L盐酸10mL使溶解, 加活性碳0.5g, 置水浴中加热半分钟, 搅拌滤过, 滤液置25mL量瓶中, 用0.1mol/L盐酸溶液分次洗涤, 备用。

2.3 测定法

精密量取对照品及供试品各10mL, 置25mL容量瓶中, 另取0.1mo l/L盐酸溶液20mL, 置25mL容量瓶中, 在对照品溶液、供试品溶液及0.1mol/L盐酸溶液中, 各精密加入新制的2%雷氏盐溶液3mL, 摇匀, 加0.1mo l/L盐酸溶液至刻度, 摇匀, 置冰浴中放置1h, 用干燥滤纸滤过, 取续滤液, 以0.1mol/L盐酸溶液为空白, 照分光光度法, 在520nm波长处分别测吸收度, 用空白试剂的吸收度分别减去对照品与供试品的吸收度, 计算, 即得。

2.4 单因素试验

(1) 乙醇浓度:称取刺山柑30g5份, 分别加10倍量95%乙醇、75%乙醇、55%乙醇、35%乙醇、水提取3次, 每次1h, 滤液合并, 定容至1000mL, 考察总生物碱含量和浸出物得率, 得出:乙醇浓度为95%时提取刺山柑达到最高。 (2) 加醇量考察:称取刺山柑30g5份, 分别加6倍、8倍、10倍、12倍、14倍量95%乙醇提取3次, 每次1小时, 滤液合并, 定容至1000mL, 考察总生物碱含量和醇浸出物得率, 得出:加14倍量95%乙醇时提取的刺山柑量达到最大。 (3) 提取时间考察:称取刺山柑30g5份, 加10倍量95%乙醇提取3次, 每次提取不同的时间 (15min、30min、45min、60min、90min) , 滤液合并, 定容至1000mL, 考察总生物碱含量和醇浸出物得率, 得出:60min为提取刺山柑的最佳时间。 (4) 提取温度考察:称取刺山柑30g5份, 分别加10倍量95%乙醇提取3次, 每次30min, 用不同的温度提取 (50℃、60℃、70℃、80℃、90℃) , 滤液合并, 定容至1000mL, 考察总生物碱含量和醇浸出物得率, 得出:刺山柑提取温度选择为80℃。 (5) 提取次数考察:称取刺山柑30g4份, 分别加10倍量95%乙醇提取不同的次数 (1、2、3、4次) , 每次30min, 用80℃提取, 滤液合并, 定容至1000mL, 考察总生物碱含量和醇浸出物得率, 得出:提取次数为2次最合适。

由以上结果可见, 刺山柑醇浓度, 提取时间, 加醇量对综合指标影响较大, 故固定提取温度为80℃, 提取次数为2次, 对醇浓度, 提取时间, 加醇量3个因素进行正交试验, 综合考察各因素对综合指标的影响。

2.5 正交试验

通过单因素试验结果, 初步确定了各因素各水平的大致用量范围, 在此基础上, 固定生药粒度为饮片, 采用L9 (34) 正交实验考察溶剂量、提取时间、提取次数三个因素对盐酸水苏碱含量和醇浸出物得率的影响, 试验安排见表1, 结果见表2, 方差分析结果见表3。

由表1可知, 各因素对综合评分的影响大小顺序为:A (醇浓度) >C (加醇量) >B (提取时间) ;每个因素3个水平之间的趋势为A3>A2>A1, B1>B3>B2, C3>C1>C2, 直观分析得提取工艺为A3B1C3, 即加14倍量95%乙醇提取2次, 每次0.5h。根据表7方差分析结果表明:A因素的影响有显著性 (P<0.05) , B和C因素的影响均无显著性 (P>0.05) , 从大工业生产和节能降耗等全面综合考察, 以A3B1C1组合为佳。

2.6 验证实验

对其进行了验证实验, 确定刺山柑提工艺条件A3B1C1为最佳组合条件, 即80℃水浴中, 加10倍量95%乙醇提取2次, 每次0.5h。

摘要：目的 考察刺山柑乳膏中刺山柑的最佳提取工艺。方法 采用单因素实验, 以盐酸水苏碱含量和醇浸出物得率为指标综合评价, 对影响提取效率的主要因素-乙醇浓度、提取温度、加醇量、提取时间、提取次数进行考察。在单因素的基础上进行正交实验, 优选出最佳提取工艺。结果 刺山柑提取工艺条件在80℃水浴中, 加10倍量95%乙醇提取2次, 每次0.5h为最佳组合条件。结论 此方法提取刺山柑简单易行, 产率较好, 符合生产要求。

关键词：刺山柑,盐酸水苏碱含量,醇浸出物得率,提取工艺

参考文献

[1] 黄丕振, 陈洪轩.新疆生物[J], 1979, 1:95～101.

[2] 中国科学院新疆生物土壤沙漠研究所编.新疆药用植物志[M].新疆人民出版社, 1977:74.

[3] 谢秀琼.中药新制剂开发与应用[M].第2版.北京:人民卫生出版社, 2000.