植物钙素生理功能论文提纲

2022-11-15

论文题目：厚朴苯己醇苷对功能性消化不良实验大鼠的作用及其机制初探

摘要：中药厚朴的基原植物为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴 Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.,其用药部位为干燥干皮、根皮及枝皮,其功效为燥湿消痰、下气除满。在临床上,中医常将厚朴配合其他中药材治疗消化道疾病,尤其是功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）,如厚朴排气合剂、舒肝平胃丸、香砂养胃丸、保和丸等常用的中成药制剂中均包含厚朴。脂溶性成分厚朴酚、和厚朴酚是中国药典收录的用于评价厚朴质量的指标之一,这两个成分对消化道的作用也常见报道。传统上,厚朴多以水煎入药,本课题组前期从厚朴中分离得到了水溶性苯乙醇苷类成分。本论文首次以厚朴苯乙醇苷提取物（phenylethanoid glycosides extract,PGE）和木兰苷 A（magnoloside A,MA）作为研究对象,考察了其对正常实验大鼠、碘乙酰胺配合隔日禁食构建的FD实验大鼠的影响,探讨可能的作用机制。1 MA的制备及PGE主要成分定量分析采用凝胶色谱和反相色谱相结合的方法,制备了 MA单体化合物2.54 g。采用高效液相色谱法,建立了 PGE中主要成分MA和木兰苷B的含量测定方法,测得MA的含量为10.49%,木兰苷B的含量为15.91%。2 PGE和MA对正常实验大鼠的影响以正常大鼠为研究对象,连续给药8天,考察PGE和MA对其的影响。研究结果显示,与对照组相比,PGE和MA给药组在大鼠体重、胃排空率和小肠墨汁推进率上没有统计学差异（P＞0.05）。3 PGE和MA对FD实验大鼠的作用及作用机制初探采用碘乙酰胺刺激幼鼠、幼鼠成年后隔日禁食的方法建立了 FD实验大鼠模型,将大鼠分为对照组、模型组、MA高剂量组（20 mg/Kg）、MA中剂量组（10 mg/Kg）、MA 低剂量组（5 mg/Kg）、PGE 组（40 mg/Kg）、阳性对照组。3.1 对大鼠胃部组织切片和小肠吸收功能的影响病理切片结果显示,与对照组相比,FD大鼠胃部未发现器质性改变;血清D-木糖含量表明,各组的小肠吸收功能无统计学差异。3.2 对大鼠胃排空的影响与对照组相比,FD模型大鼠胃排空率的下降具有统计学意义（P＜0.05）。与模型组相比,MA高、低剂量组,PGE组大鼠胃排空率的升高具有统计学意义（P＜0.05）。表明MA和PGE能提高FD大鼠的胃排空率。3.3 对大鼠脑肠肽及炎性因子的影响采用ELISA方法检测各组大鼠血清和组织中脑肠肽胃泌素（gastrin,GAS）、胃动素（motilin,MTL）、生长抑素（somatostatin,SS）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene related protein,CGRP）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）,及炎性因子 γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）、白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）的含量;采用比色法检测脑肠肽一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）及乳酸（lactic acid,LD）、血清淀粉酶（amylase,AMS）的含量。研究结果表明,与对照组相比,模型组中GAS、MTL、AMS的含量下降;5-HT、CGRP、VIP、NOS、LD和IL-4的含量上升,且均具有统计学意义（P＜0.05）。与模型组相比,PGE和MA给药组中GAS、MTL、AMS含量上升;5-HT、CGRP、VIP、LD和IL-4含量下降,且均具有统计学意义（P＜0.05）。其中,MA对MTL、SS、5-HT、CGRP、IL-4、LD和AMS水平的回调作用显示出剂量依赖性,一般而言,MA-H对FD大鼠的回调作用更明显。另外,通过对PGE组和MA-L组数据的比较,推测PGE中各苯乙醇苷类成分可能有协同作用。3.4 对大鼠肠道菌群的影响采用16S rRNA基因测序法,对实验大鼠粪便中肠道菌群进行分析。从测序结果来看,相对于对照组来说,模型组中Firmicutes和Bacteroidetes门菌群的总相对丰度上升,ACE指数下降;相比于模型组,给药后Firmicutes和Bacteroidetes门菌群的总相对丰度下调,ACE指数上升（P＜0.05）。说明厚朴苯乙醇苷类成分有提高大鼠菌群丰富度的作用。采用LEfSe方法,从OTUs的注释信息中筛选出14个差异菌群;从Tax4fun功能预测结果中,筛选得到19个代谢相关的差异通路;推测这14个差异菌群和19个代谢相关的差异通路可能是PGE和MA的作用靶点。3.5 对大鼠粪便中短链脂肪酸含量的影响采用GC/MS技术对大鼠粪便中8种短链脂肪酸（short chain fatty acids,SCFAs）进行含量测定,并计算总SCFA含量。结果表明,虽然8种SCFAs和总SCFA的含量在各组无统计学差异,但与对照组相比,模型组的总SCFA、乙酸和丙酸含量均有上升趋势;PGE和MA给药后,有一定的下调趋势。提示PGE和MA可以影响肠道菌群的代谢产物—SCFAs,推测SCFAs可能是PGE和MA的作用靶点。3.6 作用机制初探采用双变量斯皮尔曼相关分析的方法,将14个差异菌群和19个与代谢相关的差异通路的相对丰度分别与5-HT、LD、IFN-γ、IL-4、AMS、GAS、MTL、NOS、SS、CGRP、VIP含量和乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、异丁酸、异戊酸、庚酸、总SCFA的含量进行相关性分析;将5-HT、LD、IFN-γ、IL-4、AMS、GAS、MTL、NOS、SS、CGRP、VIP含量与乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、异丁酸、异戊酸、庚酸、总SCFA的含量进行相关性分析。分析结果表明,14个差异菌和19条差异代谢通路与多个BGP及其他生理指标存在显著相关性,而与SCFA含量少有显著相关性。另外,SCFA含量与5-HT、AMS、LD、NOS和CGRP含量均存在显著相关性（P＜0.05）。厚朴苯乙醇苷类成分1)可提高FD实验大鼠的胃排空率,提高GAS、MTL水平,降低5-HT、CGRP、VIP含量（均具有统计学意义）,且具有剂量依赖关系;推测其具有调节胃肠运动;降低脏器敏感度的作用。2)调节肠道菌群结构,下调Firmicutes和Bactetroidetes门菌群的总相对丰度,使菌群物种丰富度上升;改变肠道菌群功能通路;调节肠道菌群代谢物SCFA的含量;间接调节胃肠激素分泌,进而改善FD症状。

关键词：厚朴;功能性消化不良;苯乙醇苷;木兰苷A;肠道菌群;脑肠肽

学科专业：中药学

摘要

Abstract

英文缩略词

前言

第一章 PGE及MA的制备

第一节 MA的分离和纯化

1 实验仪器及材料

2 MA的分离和纯化

第二节 PGE的制备及化学成分定量析

1 实验仪器及材料