化学发光分析法试剂

第一篇：化学发光分析法试剂

体外诊断试剂胃蛋白酶原化学发光法试剂检测（最终版）

化学发光法胃蛋白酶原试剂盒

胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)定量检测试剂盒(化学发光法)

公司简介

河南美凯生物科技有限公司是一家集研发、生产、销售为一体的高新技术企业。公司主营微生物检验试剂、化学发光定量检测试剂、胶体金快速检测试剂及配套仪器。

公司现有固定资产7000万元，占地面积15000平方米，拥有标准化GMP生产车间3000平方米，专业研发实验室1000平方米。先后通过了国家质量管理体系考核，获得6840体外诊断试剂和6840医学检验仪器的生产许可证。目前公司已掌握了多个方向的产品开发核心技术，并拥有多项国家专利。

一、什么是胃蛋白酶原PGⅠ. PGⅡ

PGI主要来源于胃底腺的主细胞和颈黏液细胞，PGII则来源于全胃腺(胃贲门腺、胃底腺、胃窦幽门腺)和近端十二指肠腺，前

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化学发光法胃蛋白酶原试剂盒

列腺和胰腺也产生少量PGII。

血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能。因此，联合测定PG I和PG I/II比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。

PG I是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PG I升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低;

PG II与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关; PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。

二、胃癌在严重危害人类的健康

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，全世界胃癌死亡率高居常见恶性肿瘤死亡率的第二位，40万的胃癌患者，30万死亡。尤其在亚洲国家的发病率极高。

降低胃癌死亡率 的关键是胃癌的早期发现、早期诊断和早期治疗，早期胃癌筛检则是实现胃癌早期发现的重要手段。

三、目前几种检测方法的比较

与传统的胃病检查手段相比，胃蛋白酶原PGI&PGII血清检测具有很强的优势。 (1)胃钡餐造影

优点：检测时间短

缺点：射线暴露，检测费用高，不能明确 疾病性质，

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化学发光法胃蛋白酶原试剂盒

结果判定依赖于经验性 ， 受检人群混杂及阳性患者难以随访等问题。对早期胃癌的判定显得无能为力。

血清PG检测对诊断早期胃癌或肠型胃癌更有价值，钡餐检查对诊断进展期胃癌或弥散型胃癌更有价值。 (2)其他肿瘤相关标记物

优点：采用血清检测，无创伤、广泛认知

缺点：对胃癌检测的特异性低，对早期胃部疾病 的诊断无参考价值。

如： CEA 在胃癌患者胃液中阳性检出率为50%, 血清阳性检出率仅为 4.5% (3)胃镜

优点：行业金标准，检测准确。

缺点：⒈体内检测，痛苦。

⒉受医生水平影响大 。

⒊检测费用高。

⒋不适合体检普查。 (4)胃蛋白酶原PGI&PGII血清检测: 优点：1.血清检测无创伤、更安全。 2.费用低廉，适用于普查体检。

3.操作简单，时间短，不会造成受检人员的长时间滞留。

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化学发光法胃蛋白酶原试剂盒

四、几种检测方法收费标准的比较

胃镜检测费： 140-340元/次

肿瘤标记物检测： 50元/项(组合350-1200元)

碳-13呼气： 100-400元/次

上消化钡餐: 180-320元/次

胃蛋白酶原I&II 160-240元

五、综上所述血清PG检测优点

(1)胃癌初筛的国家标准

(2)胃癌检出率高，特异性强

(3)操作简便

(4)无创，病人耐受好

(5)费用低

(6)快速

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化学发光法胃蛋白酶原试剂盒

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第二篇：化学发光免疫分析仪

我只听说在研究分子表面蛋白质时会用到，最近还有一个华裔科学家因为发光蛋白得了诺贝尔奖的。

具体的应用有：

细胞检测中的应用

脂质过氧化物检测的应用(自由基、活性氧分析)

生物传感器的研究应用

分子生物学研究的应用

卫生学检测中的应用

环境检测应用

药物筛选

医学应用

应用化学发光免疫分析法可用于对甲状腺素类、肿瘤标记物、生殖-孕激素类、血清抗原抗体类、心脏指示类等项目检测。

Abbott：Architect i1000/i2000/i4000 SR

AxSYM、AxSYM PLUS

Siemens：(原Bayer)ADVIA Centaur CP、ADVIA CentaurXP

(原DPC) IMMULITE 2000

Beckman Coulter：ACCESS/ACCESS II

DiaSorin：LIAISON

Ortho Clinical Diagnostics：VITROS ECi Immunodiagnostic System

Roche(ECLIA)：Elecsys20

10、Cobas E

威海威高生物：全自动AutolumiS2000

深圳新产业生物：MAGLUMI 2000 Plus

上海蓝怡：全自动免疫发光系统AIA-2000

郑州安图生物：AutoLumo A2000

市场占有率具体数据不能给，在化学发光免疫产品中Roche最大，Abbott与Siemens差不多并列排二，

第三篇：b8化学发光法检测抗核抗体的对比分析1

间接免疫荧光法与化学发光法检测抗核抗体的对比分析

汪光蓉1,2，蔡艳娟1，王强1，凡瞿明1，毛明1，杜琴1，张国元1* (1川北医学院附属医院检验科，2川北医学院检验系，四川 南充637000)

摘要： 目的 探讨间接免疫荧光法(IIFA)和化学发光法(CMIA)检测抗核抗体(ANA)的异同。方法 确诊为自身免疫性疾病患者血清240例，同时采用IIFA法和CMIA法检测ANA。对两种方法检测结果不符者采用免疫印迹法复查抗可溶性核抗原(ENA)。结果 240例ANA 阳性率IIFA 法与CMIA法分别为90.83%和78.75%, 差别有统计学意义(P<0.05);两种检测方法的符合率为77.92%;在53例两种方法检测结果不一致的标本中，41例IIFA(+)CMIA(-)患者ENA阳性率仅为14.63%;而12例IIFA(-)CMIA(+)患者ENA阳性率高达66.67%,差别有统计学意义(P<0.05);IIFA不同荧光核型中，“其他型” 在两种方法检测符合率方面低于颗粒型、胞浆型、均质型核型(P<0.05)。 结论 CMIA法检测总ANA的敏感性低于IIFA法,而CMIA法的特异性优于IIFA法，因此将IIFA 法作为ANA的筛查方法，再结合CMIA法检测，可在获得荧光核型信息观察抗体滴度的同时，进一步对ANA进行定量。而且应用两种不同方法学原理的实验互相佐证，还可以减少实验误差，提高检测的准确性。

关键词：抗核抗体;化学发光法;间接免疫荧光法

Comparison of indirect immunofluorescence assay and CMIA for detecting

antinuclear antibodies Wang Guangrong1，2, Cai Yanjuan,Wang Qiang, Fan Quming , Mao Ming, Du Qin , Zhang Guoyuan

11111

1(1Department of clinical laboratory medicine, 2 Department of laboratory medicine, Affiliated Hospital of North Sichuan medical College, Nanchong 637000) Abstract: Objective To compare indirect immunofluorescence assay (IIFA) and chemoluminescence assay(CMIA) for detecting antinuclear antibodies (ANA). Methods A total of 240 serum samples were obtained from patients with established 作者简介：汪光蓉(1977—)，女，讲师，硕士，主要从事临床免疫检验和教学工作。 通讯作者：张国元 autoimmune disease, and all samples were used for ANA detection by both IIFA and CMIA. In cases where discrepancy occurred in the results by the two methods, extractable nuclear antigens were detected using immunoblotting. Results The positivity rate of ANA detected by IIFA and CMIA was significantly different(90.83% and 78.75%, respectively, P<0.05).All of the samples with different ANA results from two methods were detected for ENA. Positive rate of ENA was 14.63% in 41 cases with IIFA positive and CMIA negative, while 66.67% in 12 cases with IIFA negative and CMIA positive. The difference was significant (P<0.05). For uncommon patterns,the percent agreement of the two methods was lowered in ANA detection than common patterns. Conclusion IIFA is more sensitive than CMIA in detecting the ANA. IIFA prescreening combined with CMIA can obtain the information of the nuclear pattern and allow the observation of the titer alterations. The combination of two or more testing methods can greatly enhance the accuracy of the results. Key words: antinuclear antibodies; chemoluminescence assay; indirect immunofluo- rescent assay

抗核抗体(ANA)是抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称，除针对细胞核的自身抗体外，还包括细胞质内核酸、核蛋白的一系列自身抗体[1]。其作为自身免疫疾病的筛查检测项目早已得到公认，更是成为系统性红斑狼疮的分类和诊断标准之一[2]。ANA的检测方法有很多[3]，包括经典的间接免疫荧光法(IIFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、以及近年来发展起来的化学发光分析(CMIA)方法等。IIFA 法为抗核抗体经典的检测方法，但IIFA 法只能通过观察荧光强度来判断ANA的滴度，存在一些人为的主观因素，而且不能准确的对ANA进行定量，不利于疾病的诊断、病情观测及疗效判断。随着化学发光免疫技术在免疫检验的发展，部分实验室开始采用CMIA 法检测ANA。为客观评价IIFA 法和CMIA 法检测ANA的异同，本文对确诊为自身免疫性疾病(AID)的患者240例，采集血清同时用IIFA 法与CMIA 法检测，现将结果报告如下。 1 对象和方法 1.1 标本来源

2009年3月至2010年5月到我院确诊的AID患者240例，其中男性31例，女性209例，年龄9-68 岁，平均33.5 岁。清晨空腹抽取患者血液，离心分离血清，当日同时采用IIFA 法和CMIA法检测ANA。 1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 DMLB型荧光显微镜(LEICA)，量速化学发光检测仪(LIAISON);IIFA 法试剂盒购自德国欧蒙公司;CMIA法试剂盒购自索灵诊断上海有限公司。试剂均在有效期内使用。ENA试剂盒购自德国欧蒙公司。操作方法均按照说明书进行。

1.2.2 检测方法 同时采用IIFA 法和CMIA法检测ANA。对两种方法检测结果不符者采用免疫印迹法复查抗可溶性核抗原(ENA)。每种方法都严格按照说明书操作完成。 1.3 结果判断

1.3.1 IIFA 法判读ANA 结果 荧光显微镜下HEp-2细胞无荧光染色为阴性;有荧光染色并可辨荧光模型则判为阳性，阳性血清按1∶100、1∶320、1∶1000 滴度系统报告抗体最终滴度及荧光模型。

1.3.2 CMIA 法判读ANA 直接读取ANA的测量值(index)，≤1.49 判为阴性，≥1.60 判为阳性，1.49-1.60 判为可疑。

1.3.3 免疫印迹法判读ENA结果 对照手册，根据膜条上条带标记位置判断结果。与非抗原包被区相比，阳性反应将在相应的抗原处呈现蓝紫色条带，抗原位置出现白色条带判为阴性。 1.4 统计学分析

使用SPSS12.0 统计软件分析，对两种方法的阳性检出率比较采用配对McNemar检验。 2 结果

2.1 IIFA 和CMIA检测结果

ANA 阳性率IIFA法与CMIA法分别为90.83%和78.75%，差别有统计学意义 (P<0.05)。具体结果见表2。

表1 IIFA法与CMIA法检测ANA结果

例数 240

IIFA法

阳性 218 阴性 22

阳性率(%) 90.83

阳性 189

CMIA法 阴性 51

阳性率(%) 78.75 2.2 IIFA 和CMIA检测结果符合情况

由于IIFA 和CMIA检测ANA受操作及试剂等诸多因素影响，因此两种方法检测结果不完全一致。240例份标本中，IIFA 和CMIA检测都为阳性结果得有177例，两种方法检测都为阴性结果的有10例，其检测的符合率为77.92%(187/240)。IIFA 检测为阳性结果，而CMIA检测为阴性结果的有41例;IIFA 检测为阴性结果，而CMIA检测为阳性结果的有12例。 2.3 IIFA 法和CMIA法结果不符分析

53例标本两种方法检测结果不符合，将其进行ENA复检，阳性率分别为14.63%和66.67%，差别有统计学意义(P<0.05)。具体结果见表2。

表2 IIFA 和CMIA检测结果不符标本ENA抗体谱检测结果

结果不符标本 IIFA(+)CMIA(-) IIFA(-)CMIA(+)

例数 41 12

ENA阳性数

6 8

阳性率(%) 14.63 66.67 2.4 不同荧光模型IIFA 和CMIA检测结果分析

IIFA检测到的不同荧光模型与CMIA检测结果，颗粒型荧光与CMIA的阳性符合率为86.32%;胞浆型荧光与CMIA的阳性符合率为87.10%;均质性荧光与CMIA的阳性符合率为84.48%;而其他型荧光与CMIA的阳性符合率仅为55.88%,与前三组比较，差别有统计学意义(P<0.05)。具体结果见表3。

表3 不同荧光模型与CMIA法检测结果分析

IIFA荧光模型 颗粒型 胞浆型 均质型 其他型

ANA

IIFA阳性例数

95 31 58 34

CMIA阳性例数

82 27 49 19

符合率(%) 86.32 87.10 84.48 55.88 注：其他类型包括着丝点、高尔基、核仁、核膜和两种以上的混合核型

3 讨论

目前国内外实验室检测ANA最常用的初筛方法是IIFA法，是检测细胞内抗原自身抗体的金标准。IIFA 法筛查ANA 有很多的优点：实验基质制备容易;基质(HEp-2 细胞和猴肝片)中含抗原谱完整;特异性高，产生特征性的荧光模型;但IIFA 法读片耗时，而且结果的正确性和精确度很大程度上取决于阅片人的知识技术，带有一定程度的主观性。而CMIA法以数值代替滴度，以特异性抗体取代荧光模式，更客观、快捷、易于自动化。其值可以反应患者体内ANA的含量，可用于诊断和监测疾病的进展。但其主要的缺点是无法反应自身抗体的细胞内定位和分布[4]。

实验结果表明，IIFA 法检测ANA 阳性率高于CMIA法,而CMIA法检测的特异性要优于IIFA 法。这些可能与IIFA 法使用的基质Hep-2 细胞所含抗原种类与CMIA法所包被的抗原种类不同有关。Hep-2 细胞包含所有的核抗原，而CMIA法所包被的抗原仅为纯化的八种常见核抗原(SSA、SSB、Sm/RNP、Scl-70、Jo-

1、CENP-B、PDC、dsDNA),两种方法包含抗原的种类决定其检测ANA的敏感度及特异性。

CMIA法作为ANA的新型检测方法，具有较高的检测效能，与IIFA 法检测结果的符合率较高，达77.92。但仍有53例结果不符，将不吻合的标本进一步作ENA抗体谱检测。结果显示， IIFA(+)CMIA(-)标本ENA阳性率仅为14.63%，IIFA(-)CMIA(+)标本ENA阳性率高达66.67，两者比较差异具有统计学意义。说明IIFA 法假阳性率较高。加之作为一种非特异指标，正常健康人和慢性感染患者体内也存在低浓度和低亲和性的ANA[5]，故经典的IIFA 法只能用于ANA检测的初筛。

IIFA不同荧光核型，其与CMIA法的符合率亦不同。结果显示，“其他型” 统计中包括了一些不常见核型(包括着丝点、高尔基、核仁、核膜和两种以上的混合核型)，ANA 检测结果中“其他型”两种方法符合率低于颗粒型、胞浆型、均质型核型。这主要是由于人工重组所有细胞抗原极其困难，某些人工抗原因不具备天然构象而无抗原性或抗原性很弱[6]。这可能就是在IIFA(+)CMIA(-)模式中仍有6例标本ENA为阳性的原因。因此，CMIA法检测某些稀有核型ANA 的标本时可能出现假阴性。

总之，IIFA法和CMIA法检测ANA各有其特点，IIFA 法作为ANA检测的经典初筛方法，由于受多种因素及主观判断的影响，其假阳性率较高;而CMIA作为ANA检测的新型方法，由于所能包被的抗原有限，不能检测到全部的ANA，存在部分的假阴性。如能将两种方法结合用于ANA的检测，可在获得荧光核型信息观察抗体滴度的同时，进一步对ANA进行定量，不但有利于疾病的诊断、病情观测及疗效判断，而且可以有效的避免漏检和错检，提高检测的准确性。

参考文献

[1]. Kurien BT, Scofield RH. Autoantibody determination in the diagnosis of systemic lupus erythematosus[J]. Scand J Immunol, 2006,64(3):227-235. [2].Wiik AS. Anti-nuclear autoantibodies: clinical utility for diagnosis, prognosis, monitoring, and planning of treatment strategy in systemic immunoinflammatory diseases[J]. Scand J rheumatol,2005,34(4):260-268. [3]. Kern P, kron M, Hiesche K. Measurement of antinuclear antibodies:assessment of different test systems[J]. Clin Diagn Lab Immunol,2000, 7(1): 72-8. [4]. Fenger M,Wiik A,Hoier-Madsen M,et al.Detection of antinuclear antibodies by solid-phase immunoassays and immunofluorescencs analysis [J].Clin Chem, 2004,50:2414-2147. [5].武永康，王兰兰，唐江涛.抗核抗体不同检测方法的对比分析[J].中华风湿病杂志，2006,10(10)：610-614. [6].秦雪，陶瑕，陈志坚.间接免疫荧光法与ELISA 检测抗核抗体、抗双链DNA 抗体的比对分析[J].南方医科大学学报，2009;29(3)：472-475.

第四篇：发光免疫类检测试剂主要原材料、生产工艺及质量控制注册技术审查指导原则(报批稿)20101109

发光免疫类检测试剂主要原材料、生产工艺及质量控制注册技术审查指导原则(报批稿)

2010-11-09 01:29

发光免疫类检测试剂主要原材料、生产工艺及 质量控制注册技术审查指导原则(报批稿)

一、前言

本指导原则的主要目的是规范申请人对发光免疫类检测试剂的主要原材料研究资料、生产工艺及反应体系研究资料的准备，并对产品质量控制提出指导性技术要求。

本指导原则系对发光免疫类检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其它方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。

二、适用范围 该指导原则主要适用于利用发光免疫分析技术对蛋白质等被测物质进行检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查，第二类试剂的生产及质量控制可参考该指导原则执行

三、基本要求

(一)基本原则

1.研制、生产用的各种原料、辅料应当制定相应的质量标准，并符合有关法规的要求。

2.诊断试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》;同时，生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行;生产企业还应该通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管理部门批准。

3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。

4.研制生产过程中所用的材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。

5.试剂生产和质量控制的总体目标：保证产品使用安全，质量稳定，工艺可控，使用有效。

(二)原材料质量控制 1.主要生物原料 与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶(辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、中和反应用抗原或抗体、制备校准品(标准品)等。一般按工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定;若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料(包括工艺)或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。

主要生物原料的常规检验项目一般包括： (1)外观

肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或者为白色粉末，不含其他颜色杂质;特殊生物原料应具备相应外观标准。

(2)纯度和分子量

主要经SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其他适宜的方法，如高效液相法等。根据所检测生物原料的分子量选择适宜聚丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳。一般每个电泳道加样量为5μg，电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。

(3)蛋白浓度 蛋白浓度可通过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩脲方法等进行检测。

(4)效价

效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。

(5)功能性实验

功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料的相关性。

2.生物辅料

生物辅料一般指在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料、主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合2000年版的《中国生物制品主要原辅材料质控标准》规定的标准要求，并且要适合于本企业的生产。

建议作以下检验： (1) 牛血清或羊血清

外观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体，无溶血或异物 无菌试验：将血清直接37℃度放置7天，放在明亮处观察，不得出现混浊或沉淀。

总蛋白含量：用双缩脲法测定，蛋白含量不小于32mg/ml。 球蛋白含量：取待测血清1ml，采用饱和硫酸铵法进行沉淀，沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法测定，蛋白含量应≤2mg/ml。

(2) 牛血清白蛋白：

外观：应为浅黄色、黄色或乳白色的冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的其它杂质颗粒。

溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，在18-26℃时，溶解时间应不大于15分钟。1%牛血清白蛋白水溶液的pH值应为6.57.1。

总蛋白含量：用双缩脲方测定，质量标准为≥95%。 总蛋白中的BSA含量：采用硝酸纤维素膜电泳法，其标准为≥95%。

BSA的净含量：总蛋白含量乘总蛋白中的BSA含量，其标准为≥90%。

(3) 酪蛋白：

酸度应符合生产所需的质量标准。 (4)标记用酶

应在产品的质量标准中明示所使用的标记用酶的名称(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)，同时应根据不同生产厂家的检验方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值(OD403nm/OD280nm)应大于3.0。

对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实验，即以其为原料配制一定浓度的稀释液作为样品，进行测定，均不得出现非特异性反应。 生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意变更供应商。 3.化学原材料

化学原材料的质量标准，包括外观、一般盐类检测、溶液pH值、重金属检测、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等，均应符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》分析纯级别的要求，并且要适合于本企业的生产。

(1)无机类：主要包括有氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氯钠等。

(2)有机类：主要包括有吐温20、三羟基氨基甲烷等。 (3)特殊化学原料：Eu-DTTA，鲁米诺等。

Eu-DTTA纯度分析与鉴定：要求Eu-DTTA各功能团符合分子结构，纯度在96%以上。

4.其他原辅料 (1)微孔板条

外观：明亮处用肉眼观察板条的外观质量应无划痕、破损、飞边、肮脏、表面光滑。板条与微孔反应条塑料框架应配合合适。

材质：微孔反应板条每孔加200?L增强液，用发光免疫分析仪检测其荧光值，平均本底荧光值≤1500。

吸附能力和精密性：用一定浓度的蛋白包被微孔板条，检测荧光值，CV值结果应符合相关产品的功能性质量标准，一般批内CV≤5%,批间CV≤10%。

(2)其他 粘胶纸、铝箔袋、说明书、包装外盒、瓶子和干燥剂等应参照国家食品药品监督管理局颁布的《体外诊断试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》建立相应质量控制标准。

(三)试剂盒各组分的生产

发光免疫分析试剂主要组分的生产包括包被反应板、标记物制备、各种溶液的配置、冻干、分包装等步骤;并通过产品的半成品检验和成品检验两个质控过程来保证其质量符合规定。

1.固相载体的制备(因不同产品使用的包被载体有很大区别，在此以标准96孔微孔反应板为例进行描述)

(1)包被板的准备

准备经检验合格的包被板，记录批号、数目、状态标识。 质控项目：尺寸，外观，包装。 (2)包被液的配制

配制包被缓冲液，加入包被的抗体或抗原至工作浓度，混合均匀，即成所需的包被液，工作浓度的包被液应在规定时间内使用。

质控项目：包被缓冲液配方，pH值，包被物成份。 (3)包被板的包被

包被液按工艺要求加入包被板。记录所包被的包被板数量。 质控项目：包被体积，温度，时间，过程监控。

(4)洗板工作液的配制(按各单位工艺要求，可以不洗板) 按配方配制洗板工作液。

质控项目：洗板工作液配方，pH值。 (5)封闭液的配制 按配方配制封闭液。

质控项目：封闭液配方，pH值。 (6)洗板和封闭

包被完成后，抽去孔内包被液，用洗板工作液洗板后(按各单位工艺要求，可以不洗板)，加入封闭液。

质控项目：封闭体积，温度，时间，过程监控。 质检项目：封闭前检验包被均一性。 (7)抽干

封闭后的反应板，抽干孔内液体。 质控项目：过程监控。 (8)干燥

反应板应按工艺的要求进行干燥。

质控项目：温度，湿度，时间，过程监控等。 (9)密封包装

将干燥后的反应板用铝箔袋密封包装，内放干燥剂(按各单位工艺要求，可以不放)。

质控项目：密封性能，标示及效期等。 (10)反应板(半成品)检验

对装袋密封后的反应板进行抽样检验，外观、板内变异、板间变异。

2.滴配过程

(1)酶结合物的制备(根据各产品实际情况，该步骤可不进行)

采用常规过碘酸钠——乙二醇法将相关的抗体(或抗原)标记辣根过氧化物酶(或其他酶)，酶标记后的抗体(或抗原)应加入适当的保护剂保存于低温。

质控项目：标记方法，过程控制。 (2) 酶结合物的鉴定 ①功能性实验

将酶结合物用酶稀释液稀释后，用于产品的滴配，其结果应符合相关试剂盒的质量标准。

② 稳定性

将酶结合物用酶稀释液稀释，进行2-8℃，及热稳定性实验，滴配结果应符合相关试剂盒的质量标准。

(3)酶结合物稀释液

按酶结合物稀释液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于规定时间内使用。

质控项目：酶结合物稀释液配方，pH值。 (4)酶结合物工作浓度的滴配

取酶结合物，用酶结合物稀释液稀释到不同的浓度，用已制备好的反应板进行滴配。测定系列标准品及相应的质控品，确定使体系达到最优的酶结合物工作浓度。

(5)酶结合物工作液配制

将所需量酶结合物和酶结合物稀释液按滴配浓度混合均匀。 质检项目：分装前检验，用配套的反应板进行检验，外观、灵敏度、质控品测定值、定量产品应作校准品线性检测。

(6)酶结合物工作液的分装 按工艺要求分装酶结合物工作液。

质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量，封装后密封性。

(7)酶结合物工作液(半成品)检验

对分装后的酶结合物工作液进行抽样检验，外观、分装量、灵敏度、校准品剂量-反应曲线线性、质控品测定值。

3. 校准品、阴/阳性对照或质控品的制备 (1)稀释液

按稀释液的配方配制，存放在28℃或-20℃保存，并于有效期内使用。

质控项目：稀释液配方，pH值。

(2)校准品、阴/阳性对照或质控品的配制

校准品、阴/阳性对照或质控品的配制应具有量值溯源性，可参照国家标准品、WHO标准品或其他级别的标准物质进行配制。

质检项目：分装前检验，准确性、剂量-反应曲线线性(定量产品)、质控品测定值。 (3)校准品、阴/阳性对照或质控品的分装

按工艺要求分装校准品、阴/阳性对照或质控品。 质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量。 (4)校准品、阴/阳性对照或质控品(半成品)检验 对分装后的校准品、阴/阳性对照或质控品进行抽样检验，外观、分装量、准确性、剂量-反应曲线线性(定量产品)、质控品测定值。

4.化学发光底物的制备 (1)底物缓冲液

按底物缓冲液的配方配制，存放在2-8℃保存，并于有效期内使用。

质控项目：底物缓冲液配方，pH值。

(2)化学发光底物(氧化剂和发光剂)的配制

分别按氧化剂和发光剂的配方在底物缓冲液中加入相应的氧化剂和发光剂

质控项目：氧化剂和发光剂配方。

质检项目：分装前检验，本底、发光强度。 (3)化学发光底物(氧化剂和发光剂)的分装 按工艺要求分装化学发光底物(氧化剂和发光剂)。 质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量，封装后密封性。

(4)化学发光底物(半成品)检验 对分装后的化学发光底物进行抽样检验，外观、分装量、本底、灵敏度、发光强度。

5.铕标记物的制备

针对不同的标记生物原料，确定不同的标记制备工艺，包括铕-DTTA与标记生物原料的比例，标记温度和标记时间、标记得率的计算标准等。在实际操作过程中要求严格按照SOP进行操作

6.冻干

各种冻干品都需建立各自的冻干工艺，冻干品外观应该呈现疏松的粉末状固体，具有一定的形状，复溶完全、迅速，呈澄清透明液体。

7.分装、灯检和贴签

分装量用减重称量法进行测量，把质量换算成体积后进行分装量的控制。灯检是目测检查各组分的色泽、分装量以及是否混浊、有杂质等。

8.包装

根据试剂盒包装SOP要求及说明书的要求，以流水线操作形式进行包装。包装时应严格检查品名、批号、装量，认真核对各物料数量，并在关盒前进行复核。

(四)质量控制 1.半成品质量控制 (1)半成品抽样

检验人员按试剂的批号，根据抽样申请单抽取规定数量的半成品各组分，作号标记、待检。

(2)质控品的要求

用于半成品质量控制的质控品包括阴/阳性样品符合率，灵敏度(最低检出量)，特异性，检测范围，定量曲线的线性，精密性，稳定性等指标，如具有国家标准品或参考品的产品应使用国家标准品(参考品)或经国家标准品(参考品)标化的企业参考品进行检验。如无国家标准品(参考品)，可采用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。

(3)半成品检验

根据各个试剂盒的企业标准或者制检规程进行半成品的检验，检验指标一般包括准确性、灵敏度、特异性、精密性、相关性等，均应达到相应的质量标准。

企业应对每一批试剂的半成品进行稳定性研究。试剂盒各组分应留样，28℃定期作稳定性考核，同时作37℃热稳定性试验，试验结果应符合产品的质量标准。

2.成品质量控制 (1)成品抽样

产品包装完成后，质检人员根据试剂的批号、实际包装量、抽样申请单的要求进行抽样，同时填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。抽样数量应包括检验用数量和留样数量。质检人员同时应检查相关原始记录。

每一批试剂的报批批量应至少为10000人份。 (2)成品检验

一般使用国家标准品(参考品)对成品进行检验，并达到国家标准品(参考品)的质量要求。若该诊断试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。

在批放行前，每一批发光类诊断试剂应完成37℃热稳定性试验，试验结果应符合产品的质量标准。

四、名词解释

发光免疫类检测试剂：根据特异性抗原抗体反应等生物学原理，利用发光信号的强弱对样本中相应抗原或抗体进行定性或定量检测的一类试剂。主要包括化学发光(酶促、非酶促)，电化学发光和时间分辨荧光等法。

五、参考文献

1.《中国生物制品规程》(2000年版)，化学工业出版社

第五篇：化学试剂知识

化学试剂

1. 无机分析试剂无机分析试剂是用于化学分析的常用的无机化学物品，其纯度比工业品高，杂质少。

2. 有机分析试剂有机分析试剂是在无机物分析中供元素的测定、分离、富集用的沉淀剂、萃取剂、螯合剂以及指示剂等专用的有机化合物，而不是指一般的溶剂。有机酸和有机碱等这些有机试剂必须要具有较好的灵敏度和选择性。

3. 基准试剂基准试剂是纯度高杂质少稳定性好化学组分恒定的化合物。在基准试剂中有容量分析pH测定、热值测定等分类。每一分类中均有第一基准和工作基准之分。凡第一基准都必须由国家计量科学院检定，生产单位则利用第一基准作为工作基准产品的测定标准。目前商业经营的基准试剂主要是指容量分析类中的容量分析工作基准(含量范围为99.95%~100.05%重量滴定)，一般用于直接配制标准溶液或间接标定标准溶液。

4. 标准物质标准物质是用于化学分析仪器分析中作对比的化学物品或是用于校准仪器的化学品，其化学组分、含量、理化性质及所含杂质必须已知并符合规定或得到公认。

5. 微量分析试剂微量分析试剂适用于被测定物质的许可量仅为常量百分之

一、重量约为1~15毫克、体积约为0.01~2毫升的微量分析用的试剂 。

6. 有机分析标准品有机分析标准品是测定有机化合物的组分和结构时用作对比的化学试剂，其组分必须精确已知，也可用于微量分析。

7. 农药分析标准品农药分析标准品适用于气相色谱法分析农药或测定农药残留量时作对比物品，其含量要求精确，有由微量单一农药配制的溶液也有多种农药配制的混合溶液。

8. 折光率液折光率液为已知其折光率的高纯度的稳定液体。用以测定晶体物质和矿物的折光率，在每个包装的外面都标明了其折光率。

9. 试纸试纸是浸过指示剂或试剂溶液的小干纸片，用以检验溶液中某种化合物、元素或离子的存在，也有用于医疗诊断 。

10. 仪器分析试剂仪器分析试剂是利用根据物理、化学或物理化学原理设计的特殊仪器进行试样分析的过程中所用的试剂。

原子吸收光谱标准品原子吸收光谱标准品是在利用原子吸收光谱法进行试样分析时作为标准用的试剂 。

11. 色谱用色谱用试剂是指用于气相色谱、液相色谱、气液色谱、薄层色谱、柱色谱等分析法中的试剂和材料，有固定液、担体、溶剂等。

12. 电子显微镜用电子显微镜用试剂是在生物学、医学等领域利用电子显微镜进行研究工作时所用的固定剂、包埋剂、染色剂等的试剂。

13. 核磁共振测定溶剂核磁共振测定溶剂主要是氘代溶剂又称重氢试剂或氘代试剂。是有机溶剂结构中的氢被氘重氢所取代了的溶剂。在核磁共振分析中氘代溶剂可以不显峰，对样品作氢谱分析不产生干扰。

14. 极谱用极谱用试剂是指在用极谱法作定量分析和定性分析时所需要的试剂。

15. 光谱纯光谱纯试剂通常是指经发射光谱法分析过的纯度较高的试剂。

16. 分光纯分光纯试剂是指使用分光光度分析法时所用的溶液。有一定的波长、透过率，用于定性分析和定量分析。

17. 生化试剂生化试剂是指有关生命科学研究的生物材料或有机化合物以及临床诊断医学研究用的试剂。

18. 生物碱 生物碱为一类含氮的有机化合物，存在于自然界一般植物中，但有的也存在于动物中，有似碱的性质，所以过去又称为赝碱。大多数生物碱均有复杂的环状结构，氮原子多包括在环内，具有光学活性，但也有少数生物碱例外，如麻黄碱是有机胺衍生物，氮原子不在环内。咖啡因虽为含氮的杂环衍生物，但碱性非常弱或基本上没有碱性。秋水仙碱几乎完全没有碱性，氮原子也不在环内等。生物碱一般性质较稳定，在贮存上除避光外不需特殊贮存保管。

19. 氨基酸氨基酸为分子结构中含有氨基―NH2 和羧基―COOH的有机化合物 。氨基酸是组成蛋白质的基本单位蛋白质经水解即生成20多种氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等。氨基酸在生化研究中用途较小，大都用于有机合成、石油化工、医疗等方面。氨基酸及其衍生物品种很多，大多性质稳定，要避光干燥贮存。

20. 抗菌素抗菌素又名抗生素，是各种生物体(植物、动物和微生物)特别是土壤微生物生命代谢活动的产物。具有在低浓度时也能选择性地抑制它种微

生物病毒以及组织细胞的性能。目前抗菌素已发展到2000多种，但实际广泛应用的尚不多。抗菌素的化学结构各异，性质不一，按其化学结构可分为32类，如肽类、核苷类、蛋白质类、大环类、多稀大环内酯类等等。目前对抗菌素的研究和应用日益扩大，在医药上可防治各种传染病，在畜牧方面可防治禽兽的疾病，促进幼龄禽兽的发育，节约饲料和提高肉产量等;在农业方面可防治植物病害，刺激植物生长，提高作物产量;在工业上可用作鱼肉、蔬菜和水果等食品的保鲜剂。由于抗菌素来源于生物体，长期受潮受热易于变质失效，故对大多数抗菌素应防潮以及阴凉处保存，对有些抗菌素还应放在低温处 。

21. 糖碳水化合物糖类又称碳水化合物，旧称醣。广泛存在于动植物中，是多羟基醛或多羟基酮以及它们的缩合物和某些衍生物的总称。按缩合结构的不同可分为单糖、低糖类、多糖类。糖类的物理化学性质比较稳定，一般不需特殊