二苯胺试剂鉴定DNA

二苯胺试剂鉴定DNA（共2篇）

篇1：二苯胺试剂鉴定DNA

二苯胺试剂：鉴定 DＮA。

二苯胺试剂得配制

A 液：1。５ g 二苯胺溶于 1００ mL 冰醋酸中,再加 1５ mL 浓硫酸，用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态，则需加温后待其熔化，再使用。

B 液：乙醛得体积分数为 0、2％得溶液.配制：将 0、1 mＬ B 液加入到 10 ｍL A 液中，现配现用.DＮA 得粗提取与鉴定

实验原理

1、DＮA 在ＮａCl 溶液中得溶解度,就是随着 NａCl 得浓度得变化而改变得。

当ＮaＣl 得物质得量浓度为０、14 ｍol／L 时，DNA 得溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在ＮaＣl 溶液中得ＤＮA 析出。

2、ＤNA 不溶于酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DNＡ。

3、DＮA 遇二苯胺(沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。

注意事项

1、步骤 3 析出含 DＮA 得黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。

2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但就是在不同得步骤中玻璃棒得用法不同。

实验用具

鸡血细胞液（５～1０ mL）;体积分数为 95%得冷酒精,蒸馏水，质量浓度为０、１ g/mＬ得柠檬酸钠溶液，物质得量浓度分别为 2 mol/L 与０.015 mol／L 得 NaCl 溶液,二苯胺试剂；烧杯(10０ mL，1 个, ５０ ｍL，５０0 mL，各 2 个)，漏斗，试管（２0 ｍL,２个），玻璃棒,滴管,量筒（1０0 ｍL，1 个），纱布，镊子，滤纸，铁架台,铁环，三角架，酒精灯,石棉网,载玻片，试管夹。

实验原理:

1、析出溶解在 NaC１溶液中得 DＮA。

２、用冷酒精提取出含杂质较少得ＤNA.

３、DNA 在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤:

１．提取细胞核物质:顺时针方向搅拌，稍快,稍重.5 ｍin

2.溶解 DＮA:

3。析出含 DNA 得黏稠物：蒸馏水３００mＬ,逆时针方向搅拌，缓慢

4。过滤：取黏稠物

５。再溶解:顺时针方向搅拌，较慢。３ ｍin

6。过滤:取滤液。

7．提取出含杂质较少得 DNA,逆时针方向搅拌，稍慢.5 min

８．DNA 得鉴定:沸水浴５min

【实验十二】DNA 得粗提取与鉴定

实验原理

DNA 在氯化钠溶液中得溶解度,就是随着氧化钠得浓度得变化而改变得。当氯化钠得物质得量浓度为 2 mol/L 时，DNＡ得溶解度最大，浓度为 0.１4 mol/L 时,ＤNA 得溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中得 DNA 析出.DNA 不溶于９5％得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DNA。

DNA 中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。

目得要求 1、学会 DNA 得粗提取与鉴定得方法。

２、观察提取出来得 DNA 物质得颜色与形状。

材料用具

材料：活鸡或鲜血鸡血。

仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL,ｌ个),烧杯（10０ mL，l 个,50 mL、5０0 mL 各 ２个)，试管（２0 mL,2 个）,漏斗,试管夹,纱布.试剂:酒精得体积分数为 95%得溶液（实验前置于冰箱内冷却 24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为 0。1g/mＬ得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为 2 mol/L 与 0．015 mol/L 得溶液，二苯胺试剂。

方法步骤

实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成)，制备得方法就是：取柠檬酸钠得质量浓度为 0。1 g/ｍＬ得溶液（抗凝剂)1０0 mＬ,置于500 mL烧杯中.将宰杀活鸡流出得鸡血（约１80 mL)注入烧杯中,同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血.然后,将血液倒入离心管内，用 １000 ｒ/min 得离心机离。２ｍiｎ,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时,用吸管除去离。心管上部得澄清液,就可以得到鸡血细胞液.１．提取鸡血细胞得细胞核物质

将制备好得鸡血细胞液 5 mL～１0ｍＬ，注入到 50 ｍL 烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水 20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌 5 min,使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布得漏斗将血细胞液过滤至５00mL.取其滤液。

２．溶解细胞核内得ＤNA

将氯化钠得物质得量浓度为 2 mｏｌ得溶液 40ｍＬ加入到滤液中,并摇动烧杯,使其混合均匀,这时 DNＡ在溶液中呈溶解状态。

３．析出含 DNA 得粘稠物

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现得粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠得物质得量浓度相当于０、1４ moｌ/Ｌ）。

4。滤取含 DNＡ得粘稠物

用放有多层纱布得漏斗，过滤步骤 3 中得溶液至 500ｍL 得烧杯中,含 DNA 得粘稠物被留在纱布上。

5.将ＤＮA 得粘稠物再溶解

取 １个 5０ mL 烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为 2 mol／L 得溶液 ２0ｍL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

６。过滤含有 DNA 得氯化钠溶液

取１个１00 mL 烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤 5 中得溶液。取其滤液,DＮＡ溶于滤液中。

７．提取含杂质较少得 DNＡ

在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为 ９５％得溶液 50ｍＬ(使用冷却得酒精，对 DNA 得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA。注意观察丝状物就是什么颜色得.8.ＤNA 得鉴定

取两支20 mL得试管，各加入氯化钠得物质得量浓度为0.01５ ｍｏl/L得溶液5 ｍL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mｌL 得二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 ５ ｍin，待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色得变化。将观察得结果填写在《实验报告册》上。

结论

步骤８得 2 支试管中溶液颜色得变化说明了什么？将得出得结论填写在《实验报告册》上.讨论

1。提取鸡血中得 DNA 时,为什么要除去血液中得上清液？

2．步骤回与步骤 3 中都需要加入蒸馏水,两次加入得作用相同吗？为什么？ 3。ＤNA 得直径约为 20×10-1０ ｍ,实验中出现得丝状物得粗细就是否表示 1 个 DNＡ分子直径得大小？

篇2：二苯胺试剂鉴定DNA

DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解，产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸，后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物，其反应如下图。蓝色化合物在595nm处有最大吸收，且DNA在40µg ~400µg范围内时，吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。

甲基绿能把DNA染成绿色，为什么在DNA粗提取与鉴定试验中则用二苯胺鉴定?带着这个问题我上网查资料，经过我反复的思考，哈哈.....终于想明白了。我们在观察DNA、RNA的分布实验中用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂染色，由于甲基绿和吡罗红与DNA、RNA的亲和力不一样，呈绿色的是DNA，呈红色的是RNA，我们很容易用显微镜观察到DNA、RNA主要分布在那里?里面强调的是用甲基绿和吡罗红混合染色剂，所以隐含的意思是不能单独使用一种染色剂，要是单独用甲基绿染色就会把RNA染成绿色，鉴定材料《二苯胺鉴定dna》。DNA粗提取与鉴定这个实验，DNA鉴定则换成用二苯胺，在这个DNA粗提取过程中，用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开，用冷酒精处理进一步将DNA与RNA、蛋白质分开。一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA，最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA，所以此时用甲基绿鉴定DNA、RNA都被染成绿色，所以不能说绿色一定是DNA拍卖公司而改用二苯胺就不一样了，DNA和二苯胺反应的产物成蓝色，RNA则没有这种颜色反应。所以用二苯胺鉴定呈蓝色的一定是DNA，并且蓝色深浅与DNA含量高低有关。

1、二苯胺与甲基绿能否混用

这是用于鉴定DNA的存在的两种试剂，二苯胺加热法中，呈现蓝色反应。用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上，呈蓝绿色反应。只用一种即可，不混合用。前者要加热，后者不加热。

2、两者都可以和DNA反应，应该怎样区分它们呢

甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色

3、DNA的鉴定→DNA的鉴定可用二苯胺法，DNA遇到二苯胺变为蓝色;还可以用“甲基绿”法，“甲基绿”使DNA变为蓝绿色。

用“甲基绿”法鉴别DNA时，可将“甲基绿”直接滴到玻璃棒的丝状物上后，要用水充分冲洗掉浮色后再观察。