伪狂犬病活疫苗质量标准（通用5篇）
篇1：伪狂犬病活疫苗质量标准
伪狂犬病活疫苗质量标准
本品系用伪狂犬病弱毒株接种鸡胚成纤维细胞培养 ,收获细胞培养物 ,加适当稳定剂 ,经冷冻真空干燥制成 ,用于预防猪、牛及绵羊伪狂犬病。
【物理性状】本品为微黄色海绵状疏松团块。加P B S液后迅速 溶解呈均匀的混悬液。
【无菌检验】按9 2版兽用生物制品规程附录2页进行 ,应无菌 生长。
【支原体检验】按9 2版兽用生物制品规程附录4页进行 ,应无 支原体生长。
【外源病毒检验】按9 2版兽用生物制品规程附录6页第2.2进 行 ,应符合规定。
【病毒含量测定】每批疫苗任抽样1瓶 ,按瓶签注明头份稀释测毒价 ,每头份不低于5000个T C I D _(50)(半数细胞感染量)。
【安全检验】每批疫苗任抽样1瓶 ,按瓶签注明头份稀释 ,肌肉接种6～ 18月龄无伪狂犬病毒中和抗体的绵羊2头,每头5m l(含10头剂),观察14天 ,应无临床反应。
【效力检验】每批疫苗任抽样1瓶 ,按瓶签注明头份稀释成每毫升含1/50头剂 ,肌肉接种6～ 18月龄绵羊4头,每头1m l , 14天 1
后连同条件相同的无伪狂犬病毒中和抗体对照羊3头 ,每头肌肉注射强毒1m l(含1000L D_(50))观察14天 ,免疫羊应4/4保护 ,对照羊至少2/3发病死亡 ,为合格。
【剩余水分测定】按9 2版曾用生物制品规程附录12页进行 , 应符合规定。
【真空度测定】按9 2版兽用生物制品规程附录13页进行 ,应符 合规定。
【作用与用途】用于预防猪、牛和绵羊伪狂犬病。注苗后第6天产生免疫力 ,免疫期为1年。
【作法与用量】按瓶签注明的头剂 ,用PB S稀释 ,每一头剂为 1m l ,肌肉注射。
猪 :妊娠母猪及成年猪注2头剂。3月龄以上仔猪及架子猪注1头剂。乳猪每一次注1/2头剂 ,断乳后再注1头剂。
牛1岁以上牛3头剂
5～ 12月龄牛2头剂
2～ 4月龄犊牛第1次1头剂 ,断乳后再注2头剂。
绵羊4月龄以上者1头剂。
【注意事项】
1.本疫苗用于疫区及受到疫病威胁的地区。在疫区点内 ,除已发 2
病的家畜外 ,对无临床表现的家畜亦可进行紧急预防注射。
2.妊娠母猪于分娩前3～ 4周注苗为宜。其所生仔猪的母原抗体可持续3～ 4周 ,此后的乳猪或断乳猪仍需注射疫苗;未用本疫苗免疫的母猪 ,其所生仔猪 ,可在生后1周内注苗 ,并在断乳后再注苗1次。
3.稀释后的疫苗须当日用完。
【贮藏】在-20℃以下保存 ,有效期为18个月;在2～为9个月;在10～ 30℃阴暗处 ,应不超过1个月。’
【规格】 70头份 /瓶℃ , 8
篇2：伪狂犬病活疫苗质量标准
点击次数：654 日期：2014-01-02 09:16 编辑：admin 来源：养猪信息网 评论
目前国际上及国内大多数伪狂犬疫苗生产厂家都用经典毒株Bartha株，如哈尔滨维科、广东永顺、硕腾、勃林格、海博莱等都是以Bartha株疫苗为主打，而以HB-98株为主打的厂家为数不多，武汉科前生物制品有限公司是其中比较典型的一家企业。
为了解“HB-98株”伪狂犬疫苗的销售情况，以及所反映的问题，养猪信息网记者联系了武汉科前相关负责人，以探知一二。
“HB-98株伪狂犬疫苗使用群体在增加”
据科前内部人士透露，“目前，武汉科前的伪狂犬疫苗目前在全国销量第一，2012年我们公司猪伪狂犬活疫苗HB-98株在全国销量达到8千万销售额，加上返赠给经销商的二千多万，实际销售了一个多亿的猪伪狂犬活疫苗HB-98，在而全国第二的厂家是3千万销售额。”据称，相比较去年，科前公司的销售额基本都是按照30-40%的增长比例增加。科前内部人士继续解释道，“今年销量的增加，一方面是使用伪狂犬活疫苗免疫的客户群增加，这点和去年开始全国各地普遍发生猪伪狂犬病有一定关系；另一方面也反映出使用猪伪狂犬活疫苗HB98株进行治疗的客户群在增加。”
“当前流行的猪伪狂犬毒株存在一定的变异”？
据记者了解，实际上武汉科前并非只生产HB-98猪伪狂犬疫苗。科前的伪狂犬产品一共有三种，分别是猪伪狂犬活疫苗HB-98株、伪狂犬活疫苗和猪伪狂犬灭活疫苗。那为何猪伪狂犬活疫苗HB98株最受欢迎？
受访者告诉记者，原因有：1）该疫苗的种毒为我国地方流行毒株，免疫原性强；2）该毒株定向缺失了伪狂犬主要毒力基因TK，因此不存在毒力返强，对种猪和仔猪均是安全、有效的；3）该毒株定向缺失了gG基因，强化VP22蛋白和免疫趋化因子双效作用，增强体液及非特异性免疫反应；可激发机体产生很好的α和β两种干扰素及细胞免疫因子，不仅对伪狂犬病具有很好的特异性免疫，而且对其它病毒性疾病具有很好的非特异性免疫，可以显
著提高猪群对疫病的抵抗力；4）自然缺失了gE基因，可用于伪狂犬病的鉴别诊断和猪群伪狂犬病的根除与净化。
“当然，对于一些小规模的养殖户和散户，武汉科前的猪伪狂犬灭活疫苗和伪狂犬活疫苗由于价格低廉和保护效果好也受到不少养殖户的青睐。”
在采访中，科前相关人士还告诉养猪信息网记者，“近年猪伪狂犬病的确有抬头趋势，通过华中农业大学动物传染性诊断中心2012年检测结果发现，阳性率有所升高，而且通过华中农大动物传染病诊断中心共分离到8株猪伪狂犬病毒，通过将这8株病毒与疫苗株鄂A株和Bartha株进行gB、gC、TK和RR基因比对，发现当前流行的猪伪狂犬毒株存在一定的变异，但是和科前公司分离到的鄂A株亲缘关系最近，而和Bartha株亲缘关系较远。”受访者表示，“这就解释了为什么科前公司的猪伪狂犬疫苗能对当前流行的猪伪狂犬疾病起到防控作用。”
其随后又补充道，“当然近年猪伪狂犬病的抬头和多种因素有关系，比如猪群处于亚健康状态或者猪群处于免疫抑制等情况下造成免疫疫苗失败都是有可能的。”
安全的基因工程疫苗必须缺失TK基因？
目前科前公司不生产Bartha株伪狂犬疫苗。针对这个问题，科前受访者解释，“80年代末我国发生大规模新生仔猪死亡和母猪流产的伪狂犬疾病，当时国内没有伪狂犬疫苗，而在国外传统疫苗主要使用的Bartha K-61株，于是将该毒株引进回国，陈焕春院士也就在当时从湖北的流产母猪体内分离到鄂A株，并制备灭活疫苗控制了当时伪狂犬的大规模爆发，而Bartha株也一直延用至今。
但是Bartha株是1961年分离于匈牙利的牛源毒株，但是这些毒株是通过在鸡胚上自然盲传获得的，没有缺失主要毒力基因，存在毒力返强的可能，且对仔猪不安全；同时在盲传的过程中，可能导致某些免疫原性基因的缺失，对免疫原性有一定的影响。”
受访者建议养殖户选择猪伪狂犬疫苗时须考虑以下几个因素：
一、毒株是否是猪源分离株，抗原针对性要好；
二、是否缺失毒力基因TK，缺失毒力基因后，不存在毒力返强，对于种猪和仔猪都是安全的；
三、是否保留免疫原性基因，免疫原性好毕竟是评价疫苗好坏的一个标准之一；
四、是否缺失gE基因，能够用于鉴别诊断。
受访者随后强调：由于伪狂犬病毒属于疱疹病毒科，多种与毒力和免疫原性相关的基因均已被定位和测序，如TK、gG、gE、gB、gC、gD、gI等，其中TK为致命的凶手，是该病毒主要的毒力基因，控制病毒在神经组织内的复制。
TK基因的存在加强了伪狂犬病毒的潜伏性，犹如一颗定时炸弹，增加了毒力返强和野毒重组的可能性。
篇3：伪狂犬病活疫苗质量标准
伪狂犬病 (Pseudorabies, PR;又名Aujeszky's disease, AD) 是由伪狂犬病病毒 (Pseudorabies Virus, PRV) 引起的、可导致多种家畜和野生动物以发热、奇痒 (猪除外) 及脑髓炎为主要症状的急性传染病。猪伪狂犬病活疫苗的免疫接种作为防治猪伪狂犬病的关键技术, 在生产中得到了广泛应用。
根据《中华人民共和国兽药典》2005年版的规定, 按瓶签注明头份, 将疫苗用PBS做10倍系列稀释, 取适宜稀释度, 每个稀释度各接种鸡胚成纤维细胞4小瓶, 每瓶0.1 mL, 补充维持液0.9 mL。观察并记录CPE, 计算出TCID50。但在实验室操作中, 我们也经常使用细胞培养板来测定病毒含量。试验采用细胞板和细胞瓶在不同条件下培养病毒, 来检测疫苗中该病毒的实际含量。通过对细胞板培养和细胞瓶培养的结果对比, 来验证它们之间的相关性。
1 试验材料
1.1 疫苗
福州大北农生物技术有限公司生产的伪狂犬病活疫苗2010004-2010013, 共10批。
1.2 细胞瓶
10 mL玻璃细胞瓶, 24孔细胞板。
1.3 细胞
由济南斯帕法斯公司购买的SPF种蛋孵化的11日龄鸡胚制备而成。
2 试验方法
2.1 细胞
由本公司禽细胞苗组制作的细胞液, 分装到24孔细胞板, 每孔1 mL, 制作3个细胞板;同时将细胞液分装到10 mL玻璃细胞瓶, 每瓶1 mL, 共制备38个细胞瓶, 均放入37℃温箱培养24 h, 使细胞长成均匀单层。
2.2 疫苗稀释
先将疫苗稀释到1头份/mL后, 作10倍系列稀释至10-6。
2.3 接种细胞板
将已长成单层细胞的细胞板生长液倒掉, 取10-4、10-5、10-6三个稀释度, 每个稀释度接种细胞板的4个孔, 每孔各0.1 mL。用同样方法接3个细胞板, 37℃吸附1 h后, 加入维持液0.9 mL, 并随机将细胞板分为A、B、C三组。
2.4 接种细胞瓶
将原细胞瓶的生长液倒掉, 取10-4、10-5、10-6三个稀释度, 每个稀释度接种12个细胞小瓶, 每瓶各0.1 mL, 共接种36个小瓶, 置37℃吸附1 h, 加入维持液0.9 mL, 并将每个稀释度每4瓶一组随机分为D、E、F三组。
2.5 培养条件
细胞板的A组放37℃温室培养, B组放37℃CO2培养箱培养, C组放37℃培养箱培养;细胞瓶的D组放37℃温室培养, E组放37℃CO2培养箱培养, F组放37℃培养箱培养。
3 观察结果
以细胞产生病变为判断标准, 根据Karber法计算TCID50。结果见表1。
4 讨论与小结
1) 按照《中华人民共和国兽药典》2005年版的规定, 伪狂犬病活疫苗的病毒含量测定要用细胞瓶。但细胞瓶检验比较麻烦, 瓶口小, 不容易清洗干净, 而且加液时容易碰瓶口造成污染。而用细胞板相对于细胞瓶进行病毒含量测定更为简便, 因是一次性的, 故不受细胞瓶清洁度的影响。
2) 细胞瓶放37℃温室、37℃CO2培养箱和37℃培养箱培养差异不明显。细胞板放37℃温室培养和放37℃培养箱培养差异也不明显, 但放37℃CO2培养箱培养的结果与另两组差异较明显。二者的差异可能与伪狂犬病毒特性有关系。伪狂犬病毒比较适宜的培养环境为pH7.2~7.5, 在过酸或过碱的环境下都不适合生长。由于维持液本身含有比较高的缓冲盐, 细胞瓶密闭性比较好, 可以比较好地控制小环境的pH值, 而细胞板密闭性相对不够, 细胞孔之间也存在空隙, 容易受外界环境的影响而改变pH值, 从而影响病毒的繁殖。
3) 对本公司而言, 温室培养与培养箱培养效果一样, 故细胞培养可以与生产使用的温室共用, 以节约另开培养箱的费用。
4) 本试验用细胞板测出的病毒含量结果明显比用细胞瓶测的结果低, 用细胞瓶与细胞板不论在什么环境下培养差异都明显。所以, 不能用细胞板代替细胞瓶来检测伪狂犬活疫苗的病毒含量。
篇4：伪狂犬病活疫苗质量标准
2015年7月开始,我们选择哈尔滨维科生物技术开发公司生产的“伪狂犬病活疫苗”疫苗(批准文号:兽药生字(2014)080017018),我们连续在9个生(种)猪养殖场2.063万头生猪中使用,取得了较好的效果,现将有关使用情况报告如下。
1材料与方法
1.1试验猪场选择
选择2014年发生过猪伪狂犬病的9个猪场作为疫苗试验猪场,其中种猪场2个,商品猪场7个。试验猪场猪存栏量见表1。
1.2疫苗选择
选择哈尔滨维科生物技术开发公司生产的“伪狂犬病活疫苗”(批准文号:兽药生字(2014)080017018),获得国家“新兽药证书”,接种后6日产生免疫力,免疫持续期为12个月。
1.3免疫程序
1.3.1妊娠母猪产前21~28日:2头份,肌肉注射。
1.3.2成年猪2头份,肌肉注射。
1.3.3 3月龄以上仔猪及架子猪1头份,肌肉注射。
1.3.4乳猪第一次7日龄0.5头份,肌肉注射,断奶后在接种1头份。
1.4用法与用量
1.4.1取PBS加入疫苗瓶内,充分溶解疫苗。
1.4.2按瓶签注明头份。用PBS稀释为1头份/m L。
1.4.3用注射器吸取疫苗,肌肉注射。
2结果与分析
2015年7~12月期间,我们连续在9个生(种)猪养殖场2.063万头猪中使用,跟踪统计各猪场的发病率、死亡率及流产死胎数量情况(见表2)。
从下表看,9个场的发病率,死亡率及流产死胎,远远低于以前没有应用伪狂犬病活疫苗时的发病率,死亡率及流产死胎数量,控制效果显著。
3讨论
3.1妊娠母猪于分娩前注射免疫的,其所生仔猪的免疫抗体可持续21~28日龄,建议此后的乳猪或断奶仔猪仍需注射接种,提高免疫效果。
3.2未用伪狂犬病活疫苗接种的母猪,其所生仔猪建议在7日龄内接种,并在断奶后再接种一次。
3.3在疫区、疫点内,除已发病的生猪外,建议对无临床表现的生猪可用此疫苗进行紧急接种。
篇5：伪狂犬病活疫苗质量标准
对于该病的防控最为有效的方法是疫苗免疫。目前临床上使用较多时是PRV基因缺失疫苗。PRV基因缺失疫苗是利用基因工程技术,在基因组中缺失或插入一段或几段序列使PRV的某些基因不能表达,从而致弱PRV,同时又保持其较强的免疫原性而制成的疫苗。随着研究的不断深入。目前已构建出了多种单基因、双基因及多基因缺失疫苗。
1猪伪狂犬基因缺失疫苗研究进展
1.1单基因缺失疫苗株
(1)TK基因缺失株:第一代基因缺失疫苗PRV的主要缺失的毒力基因是TK基因。TK基因缺失疫苗不存在毒力返强,使用安全。Kit等[1]以PRVVBUK为起始材料,并以BUK疫苗株为亲本通过缺失TK基因序列中的148bp片段,构建出PRV的TK缺失株PRV BUK-d13株。试验证明,该疫苗对猪是安全的,并能提供有效的保护。1986年该毒株被美国批准为上市的第一个基因工程疫苗毒株。华中农业大学陈焕春[2]通过构建转移质粒p U EKPZ,将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK-15细胞,构建了PRV Ea株TK基因缺失株。苏鑫铭等[3]构建了PRV上海株TK基因缺失株,并对其生物学特性有部分的研究。PRV上海株缺失TK基因后不影响病毒的增殖,同时,对小鼠的致死能力很低,甚至失去对小鼠的毒力,但是对猪仍然具有感染力。陈瑞爱等[4]利用PCR构建猪伪狂犬病毒容A株(PRV-Ra)TK基因缺失重组病毒,该重组病毒在体外传代30代后仍其有良好的遗传稳定性。
(2)g E基因缺失疫苗株:张松林等[5]将中间转移载体pl ESE和伪狂犬病毒Ea株基因组共转染构建了Ea株g E基因缺失突变株,并证明该缺失突变株在体外能够稳定遗传。目前市面上流通的商品苗大多都是g E基因缺失苗Bartha株。Bartha株是一株弱毒活疫苗,是国外从牛身上分离的伪狂犬病毒g E基因缺失Bartha株为基础研制的疫苗。
(3)g D基因缺失疫苗株:华中农业大学石德时[6]采用真核表达质粒介导的方法与逆转录病毒介导的方法构建了一种新型PRV g D基因缺失株。1994年Peeters等[7]构建一株g D基因缺失株。病毒能够直接在细胞和细胞间转移,但是感染细胞释放的子代病毒无感染性,缺失g D的毒株将失去从免疫动物向非免疫动物传染的能力,对接种猪能产生明显的保护性,证明g D缺失突变株是一种安全、不散毒的活疫苗。
(4)g G基因缺失株:河南农业大学王鑫等[8]利用脂质体介导的方法,将转移载体质粒PUSG与PRV基因组DNA共转染PK-15细胞,构建出含GFP报告基因的伪狂犬病病毒Ea株g G基因缺失重组病毒。
1.2双基因缺失株
第二代基因缺失疫苗除了缺失了主要的毒力TK基因外,还缺失了一个编码非必需糖蛋白的基因,有些同时在缺失双基因的基础上插入一个报告基因Lac Z+或GFP(报告基因编码绿色荧光蛋白,能自身催化形成发光结构并在蓝光激发下发出绿色荧光。
(1)TK/g C双基因缺失活疫苗:1987年Kit等[9]在PRV BUK-d13株的基础上,通过缺失g C基因序列的l 100bp,构建了PRV TK/g C一双基因缺失疫苗株。动物试验表明,用该缺失疫苗接种的动物不能产生抗g C的抗体,用g C-ELISA可将接种动物与自然感染动物区分开,有利于检疫工作的开展。
(2)TK/g G双基因缺失活疫苗:在我国,陈焕春、刘正飞等[10]以国内地方分离株鄂A株为亲本,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切,构建了缺失主要毒力TK基因重组质粒p STK1-4,经过转移质粒改造,用Ecol R1消化PRV鄂A株TK/Lac Z+突变株基因组DNA,然后转染PK-15细胞构建了TK-/Lac Z+突变株重组病毒,进一步提取TK缺失突变株基因组DNA,通过磷酸钙法与含g G-Lac Z转移质粒共转染PK-15细胞建立了PRV Ea TK/g G一疫苗株。测定结果表明:该毒株具有较好的安全性,良好的遗传稳定性,很强的免疫原性,可以作为候选毒株用于伪狂犬病基因工程疫苗的研制。目前,由陈焕春主持构建的PRV Ea TK/g G一疫苗株已按新兽药证书的要求完成了中试与区域试验,经动物实验和中试应用证明该产品在产生抗体的时间和保护效果优于目前的国内外同类产品,命名为该疫苗株为PRV HB-98突变株,经过8年实验室试验和临床试验,于2006年获得国家新兽药注册证书和生产许可证[11]。
(3)TK/g E双基因缺失活疫苗:梁苑燕等[12]以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,以Cre/lox P系统,可先构建出带有lox P位点的r PRV-g E-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的g E单缺失株r PRV-g E一;再以r PRV-g E一为母本,以相同方法构建g E/TK双基因缺失株r PRV-g E/TK一株。刘正飞等用g E转移质粒p SPFZ与PRV Ea TK一基因组DNA共转染猪肾传代细胞IBRS-2,在X-gal存在下进行蓝斑筛选,挑取蓝班进行空班纯化,空班纯化三次后获得重组病毒PRV Ea TK/g E一/Lac Z+突变株。
1.3三基因缺失活疫苗
2003年由郭万柱主持陈陆等[13]通过对其PRV闽A株TK基因缺失株改造构建了g E/g I/TK/Lac Z+三基因缺失疫苗株(SA215),通过对该株致细胞病变效应、安全性、免疫原性和接种动物抗体消长规律等生物学特性测定及田间试验结果显示,SA215株是一株安全、免疫原性好的疫苗株。目前,SA215株正式获得国家新兽药证书。
1.4四基因缺失活疫苗
Mettenleiter等构建了含g G、g D、g E、g I缺失的4基因缺失疫苗株。1994年,Mettenleiter等[14]利用已整合PRV g D的细胞系,构建了g G/g E/g I/g D四基因缺失疫苗,该疫苗不会散毒,非常安全,对猪失去毒性,能刺激机体产生对PRV的保护性免疫。
2国内外主要商品化猪伪狂犬基因缺失苗
随着猪伪狂犬基因缺失疫苗技术的研究成功,商品化的猪伪狂犬疫苗也随着出现。目前,市场上主要流通的毒株是Bartha毒株和Bucharest毒株。同时,市面主要流通的疫苗种类是:弱毒活疫苗,是以国外引进的分离自牛的伪狂犬病毒g E基因缺失的Bartha株为基础研制的基因缺失疫苗、华中农业大学陈焕春研究的TK/g G一双基因缺失(HB-98株)疫苗毒株疫苗和美国辉瑞林肯厂使用的Bucharest毒株疫苗。
目前,国内已获得批文的猪伪狂犬基因缺失疫苗生产厂家有15家,部分生产厂家具体信息见表1。国内流通的进口猪伪狂犬基因缺失疫苗的生产厂家有6家,具体信息见表2。
3小结与展望
随着猪伪狂犬基因缺失疫苗在生产实践中的广泛使用,该基因缺失疫苗与传统灭活苗相比,其优势也越来越明显。猪伪狂犬基因缺失疫苗的优势主要表现在:1基因缺失疫苗稳定,不易发生毒力返祖增强;2PRV基因缺失株毒力低,但免疫原性强,保护时间长;3可用于疫苗免疫动物与自然感染动物的鉴别诊断。当然,猪伪狂犬基因缺失疫苗也存在引起潜伏感染和排毒等方面的危险性。但随着基因缺失疫苗的研究和应用,通过对免疫程序、免疫方式、免疫佐剂等的改变,结合血清学抗体检测技术和野毒鉴别技术,最终通过整体的猪伪狂犬净化方案,从而根除猪伪狂犬病。
摘要：猪伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的多种家畜以发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染病,给养殖业带来很大的危害。而对该病最有效的预防措施是采取疫苗免疫,疫苗免疫是预防该病的主要手段,临床上使用的疫苗又以猪伪狂犬基因缺失疫苗为主。文章就目前猪伪狂犬基因缺失疫苗的研究现状及主要的商品化基因缺失疫苗做一简要综述。